一種陽離子膜化修飾劑及其防脫玻片的製備方法與流程
2023-05-01 15:03:51
本發明涉及是一種醫學臨床檢驗時的細胞承載體的細胞玻片，具體為一種陽離子膜化修飾劑及其防脫玻片的製備方法。
背景技術：
防脫玻片又叫離子修飾玻片和細胞捕獲玻片等，是用化學或物理方法對載玻片或蓋玻片的表面進行修飾，以防止操作過程中細胞或組織掉片現象的發生。防脫玻片應用非常廣泛：如病理學組織切片、脫落細胞製片，以及細胞培養、特別是宮頸刮片過程中的液基細胞薄層製片等。防脫玻片的使用品種也繁多：如陽離子防脫玻片、陰離子防脫玻片、醛化防脫玻片以及矽化防脫玻片等矽玻璃表面處理產品等。防脫玻片表面的處理方法也有多種：如物理方法的超聲波，化學方法的洗潔劑或化學修飾劑，或者物理方法和化學方法聯用。其中，使用的化學修飾劑(粘合劑)也有不同，如：多聚左旋賴氨酸(Poly-L-lysine)、矽烷處理劑(3-氨丙基-乙氧基甲矽烷)。
在生物及病理組織學切片製備，如石蠟切片、冰凍切片或細胞塗片及常規染色中，組織掉片或脫片現象較普遍存在，特別在實驗步驟較多的免疫組織化學及原位雜交時尤其嚴重，對臨床病理診斷工作造成困難，延誤診斷時間，甚至導致漏診、誤診等不利影響，因多聚-L-賴氨酸防脫片劑是水溶性溶液，故載玻片上雜質油脂不去除乾淨會成為載玻片表面與多聚-L-賴氨酸防脫片劑間的接觸障礙，這樣很難保證後續玻片塗膠質量。
免疫組織化學染色過程中，因步驟多、微波高溫修復、37℃孵育等因素，常出現脫片問題，造成染色的失敗，浪費人工及試劑，同時在一般的製作過程中，常會剩餘很多試劑而浪費。
技術實現要素：
針對以上問題，本發明提供了一種陽離子膜化修飾劑及其防脫玻片的製備方法，採用了載玻片、多聚-L-賴氨酸、載玻片的疊加製備方法，能使防脫片劑在載玻片有效貼片表面形成一種較長時間的瀦留，有利於防脫片劑與乾淨載玻片有效貼片表面的緊密接觸和延長其互相作用的時間，與經典浸泡式塗膠法相比，不但操作方法簡便易學，而且既有效保證了塗膠質量又節約了試劑，達到了市售防脫片載玻片的優良效果，可以有效解決背景技術中的問題。
為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種陽離子膜化修飾劑，按重量份數計包括以下成分：
優選的，按重量份數計包括以下成分：
優選的，該陽離子膜化修飾劑的製備方法為：首先稱取L-賴氨酸，適量蒸餾水加熱使之溶解，然後加入硫酸銅，回流2h，然後冰浴條件下，分批加入氯甲酸苄酯，在此過程中，通過加入碳酸氫鈉保證溶液的pH在8～9之間，攪拌過濾，沉澱，用蒸餾水、乙醇洗滌，乾燥後得到藍色的N-苄氧羰基-L-賴氨酸銅鹽絡合物，將其溶於二惡烷和氯仿的混合溶劑中，通入無水氯化氫一段時間後，通入無水溴化氫，溶液產生沉澱.氮氣保護下，室溫攪拌2h，將反應好的溶液倒入冰乙醚中萃取，水相用鹽酸調pH到3左右，然後用透析袋純化24h，後進行冷凍乾燥，得到白色的陽離子膜化修飾劑多聚-L-賴氨酸。
本發明還提供了一種利用上述陽離子膜化修飾劑製備防脫玻片的方法，包括以下步驟：
(1)將清潔液溶於自來水中，然後把載玻片浸泡一夜，自來水衝洗4小時，最後放入95％的酒精中浸泡1h，取出乾燥；
(2)取陽離子膜化修飾劑0.4ml，蒸餾水3.6ml，放入培養皿中混勻，配成1∶9的溶液；
(3)取潔淨的載玻片，磨砂面端向上，另一端放入多聚賴氨酸溶液中，傾靠在器皿壁上，然後疊加放入5-10張，上述步驟(2)製得的溶液緩慢在載玻片間滲透，此時，溶液在兩玻片之間均勻分布，無氣泡和空隙；
(4)於40℃烤箱內烘乾後，分開玻片，得到若干所述防脫玻片。
優選的，所述清潔液的組成為：重鉻酸鉀120g、濃硫酸200ml、蒸餾水1000ml。
與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明採用了載玻片、多聚-L-賴氨酸、載玻片的疊加製備方法，能使防脫片劑在載玻片有效貼片表面形成一種較長時間的瀦留，有利於防脫片劑與乾淨載玻片有效貼片表面的緊密接觸和延長其互相作用的時間，與經典浸泡式塗膠法相比，不但操作方法簡便易學，而且既有效保證了塗膠質量又節約了試劑，達到了市售防脫片載玻片的優良效果。
具體實施方式
下面將結合本發明實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。
實施例1：
一種陽離子膜化修飾劑，按重量份數計包括以下成分：
該陽離子膜化修飾劑的製備方法為：首先稱取L-賴氨酸，適量蒸餾水加熱使之溶解，然後加入硫酸銅，回流2h，然後冰浴條件下，分批加入氯甲酸苄酯，在此過程中，通過加入碳酸氫鈉保證溶液的pH在8～9之間，攪拌過濾，沉澱，用蒸餾水、乙醇洗滌，乾燥後得到藍色的N-苄氧羰基-L-賴氨酸銅鹽絡合物，將其溶於二惡烷和氯仿的混合溶劑中，通入無水氯化氫一段時間後，通入無水溴化氫，溶液產生沉澱.氮氣保護下，室溫攪拌2h，將反應好的溶液倒入冰乙醚中萃取，水相用鹽酸調pH到3左右，然後用透析袋純化24h，後進行冷凍乾燥，得到白色的陽離子膜化修飾劑多聚-L-賴氨酸。
一種利用上述陽離子膜化修飾劑製備防脫玻片的方法，包括以下步驟：
(1)將清潔液溶於自來水中，然後把載玻片浸泡一夜，自來水衝洗4小時，最後放入95％的酒精中浸泡1h，取出乾燥；
(2)取陽離子膜化修飾劑0.4ml，蒸餾水3.6ml，放入培養皿中混勻，配成1∶9的溶液；
(3)取潔淨的載玻片，磨砂面端向上，另一端放入多聚賴氨酸溶液中，傾靠在器皿壁上，然後疊加放入5-10張，上述步驟(2)製得的溶液緩慢在載玻片間滲透，此時，溶液在兩玻片之間均勻分布，無氣泡和空隙；
(4)於40℃烤箱內烘乾後，分開玻片，得到若干所述防脫玻片。
優選的，所述清潔液的組成為：重鉻酸鉀120g、濃硫酸200ml、蒸餾水1000ml。
所述清潔液的組成為：重鉻酸鉀120g、濃硫酸200ml、蒸餾水1000ml。
實施例2：
一種陽離子膜化修飾劑，按重量份數計包括以下成分：
其他步驟同實施例1。
實施例3：
一種陽離子膜化修飾劑，按重量份數計包括以下成分：
其他步驟同實施例1。
本發明採用了載玻片、多聚-L-賴氨酸、載玻片的疊加製備方法，能使防脫片劑在載玻片有效貼片表面形成一種較長時間的瀦留，有利於防脫片劑與乾淨載玻片有效貼片表面的緊密接觸和延長其互相作用的時間，與經典浸泡式塗膠法相比，不但操作方法簡便易學，而且既有效保證了塗膠質量又節約了試劑，達到了市售防脫片載玻片的優良效果。
以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。