快速檢測有機磷農藥殘留的魚酯酶試劑的製作方法
2023-05-01 21:21:26
專利名稱：快速檢測有機磷農藥殘留的魚酯酶試劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及有機磷農藥檢測用的酯酶及其輔劑的製備。
目前農藥殘留檢測法主要是儀器分析法，雖然能準確測出殘留量，但需要貴重儀器，前處理操作繁瑣，需受過專門訓練的人員才可掌握，只能用於實驗室，很難適應現場簡單快速和大量樣品殘留分析的要求。當前我國農藥快速檢測法中以生物測定法、酶法應用較多。中國農業科學院植物保護研究所以實驗室飼育的敏感性家蠅為試驗材料，以這種家蠅接觸供試食品後的中毒程度來表示該種食品的含毒程度，用這種方法對食品中殺蟲劑、殺菌劑、除草劑以及其他汙染物進行測定，這種方法缺點是要有與該產品同時種植的未施農藥的產品作為對照方能保證結果的準確，而且耗時很長，不適宜現場檢測。近年來國內還出現快速檢測蔬菜中有毒農藥殘留的「速測袋」和「速測卡」，通過從豬肝、牛肝、馬血、羊血、蠅頭、植物組織等得來的膽鹼酯酶進行顯色比較進行檢測，由於這些來源的酶活性差，靈敏度低，所使用的顯色物質不穩定，受葉綠素等外界因素幹擾較大而顯色不明顯，結果判斷困難，經常出現漏檢現象，而且成本較高，應用中缺點較多。
本發明的目的是提供一種高靈敏度可在家庭、市場、生產地等現場快速檢測有機磷農藥的高活力高靈敏度的魚酯酶及其輔劑。
本發明包括魚酯酶、輔劑A和B，附標準比色卡。魚酯酶來源於草魚或鯽魚等的酯酶製劑，輔劑A為含醋酸膽鹼的物質，輔劑B為甲基紅和溴甲酚綠的混合顯色劑。
魚酯酶製備以草魚或鯽魚等為原料，去鱗及內臟，剔除粗骨，肉切成小塊，按魚肉與緩衝液重量1∶2的比例加入pH7.0-7.8、0.1moL/L的PBS緩衝液，打漿，離心，過濾上清以除去液面脂肪，冷凍乾燥即可。
輔劑A製備將醋酸膽鹼溶於有機溶劑，有機溶劑為丙酮或酒精，加入可溶性澱粉攪拌混勻，醋酸膽鹼與可溶性澱粉的重量比為1∶1000，最後自然揮發去除有機溶劑即可。
輔劑B製備用溴甲酚綠和甲基紅混合物與可溶性澱粉攪拌混勻即可，澳甲酚綠和甲基紅混合物與可溶性澱粉重量比為1∶1000，溴甲酚綠與甲基紅重量比為1∶1。
標準比色卡製作根據不同濃度的農藥在檢測時所顯示的顏色製備。
本發明的應用原理是酯酶將醋酸膽鹼分解為醋酸和膽鹼，顯色劑在酸性條件下顯紅色，隨pH值升高，顏色變淺，而有機磷類農藥可對酯酶造成抑制，使得醋酸膽鹼不能分解產生醋酸，進而不能使顯色劑顯紅色，所以根據最終顯色程度可判斷蔬菜中有機磷農藥是否超標。
檢測方法將待檢測的溶液倒入裝有魚酯酶的試管中，1-2分鐘後加入輔劑A和輔劑B，1-2分鐘後看待測液出現深紅色，說明農藥殘留未超標，如果與標準比色卡比較，則可概略知道農藥含量。使用形式除可用塑料管外，還可以採用試管、皿、袋的形式，配以比色計還可以速測計形式使用。
本發明既可檢測蔬菜中有機磷農藥殘留，也可以檢測水果、地下水、糧食中的有機磷農藥殘留。
本發明具有如下優點(1)穩定性好魚酯酶經冷凍乾燥後，常溫、避光條件下放置兩年活力仍很高；輔劑加入輔料後為固態形式，保存期比一般溶液形式有效期大大延長。
(2)靈敏度強對有機磷農藥氨基甲酸酯農藥檢測限極低，最低達0.5ppm。
(3)耗時短一般操作者一次可同時處理多個樣，從取樣到測定完成平均測定一個樣品只需3-5分鐘。
(4)操作便捷魚酯酶和輔劑製備簡單；應用時可在家庭、農貿市場、蔬菜基地等現場進行，不需任何儀器。
(5)成本低廉酶製劑原料來源非常廣泛，價格低廉，提取產率很高；輔劑費用幾乎可以忽略。
實施例1.草魚酯酶製備以草魚為原料，去鱗及內臟，剔除粗骨，肉切成小塊，稱重，按魚肉與緩衝液重量1∶2的比例加入pH7.0-7.8的0.1moL/L的PBS緩衝液，打漿，離心，過濾上清去除液面脂肪，冷凍乾燥，按20mg/管分裝於透明或半透明塑料管，扣蓋密封備用。
2.輔劑A製備稱取醋酸膽鹼20mg溶於酒精，加入可溶性澱20g粉，混勻，酒精量必須淹沒可溶性澱粉，然後自然揮發掉酒精，按20mg/份分裝於小塑料管，扣蓋密封備用。
3.輔劑B製備稱溴甲酚綠和甲基紅各10mg，碾成粉狀，與20g可溶性澱粉攪拌混勻，按20mg/份分裝於小塑料管，扣蓋密封備用。
4.菜樣取少許青菜，切碎，混勻，取大約5g放置小容器中，加水約10mL，振搖幾下，靜置，往酯酶管加入樣液約4mL，2分鐘後加入輔劑A和輔劑B，2分鐘後若出現深紅色，則證明農藥殘留未超標；若出現淺紅色或無色，則農藥殘留超標。跟特製的比色卡比較，則可概略定量農藥殘留量。
5.水果取少許水果，切碎，混勻，取大約5g放置小容器中，加水約10mL，振搖幾下，靜置，往酯酶管加入樣液約4mL，2分鐘後加入輔劑A和輔劑B，2分鐘後若出現深紅色，則證明農藥殘留未超標；若出現淺紅色或無色，則農藥殘留超標。跟特製的比色卡比較，則可概略定量農藥殘留量。
6.地下水往酯酶管加入樣液約4mL，2分鐘後加入輔劑A和輔劑B，2分鐘後若出現深紅色，則證明農藥殘留未超標；若出現淺紅色或無色，則農藥殘留超標。跟特製的比色卡比較，則可概略定量農藥殘留量。
7.糧食取大約5g糧食放置小容器中，加水約10mL，振搖幾下，靜置，往酯酶管加入樣液約4mL，2分鐘後加入輔劑A和輔劑B，2分鐘後若出現深紅色，則證明農藥殘留未超標；若出現淺紅色或無色，則農藥殘留超標。跟特製的比色卡比較，則可概略定量農藥殘留量。
權利要求
1.快速檢測有機磷農藥殘留的魚酯酶試劑，其特徵在於由魚酯酶、輔劑A和輔劑B組成，魚酯酶為來源於草魚或鯽魚的酯酶製劑，輔劑A為含醋酸膽鹼的粉狀物，輔劑B為含溴甲酚綠和甲基紅的混合顯色劑。
2.根據權力要求1所的快速檢測有機磷農藥殘留的魚酯酶試劑，其特徵在於所述的魚酯酶的製備以草魚或鯽魚等魚類為原料，去鱗、剔除粗骨，肉切成小塊，稱重，按魚肉與緩衝液重量1∶2的比例加入pH7.0-7.8、0.1moL/L的PBS緩衝液，打漿，離心，過濾上清去除液面脂肪，冷凍乾燥而成。
3.根據權力要求1所述的快速檢測有機磷農藥殘留的魚酯酶試劑，其特徵在於所述的輔劑A為醋酸膽鹼與可溶性澱粉的混合物，醋酸膽鹼與可溶性澱粉的重量比為1∶1000。
4.根據權力要求1所的述快速檢測有機磷農藥殘留的魚酯酶試劑，其特徵在於所的輔劑B為含溴甲酚綠和甲基紅及可溶性澱粉的混合物，溴甲酚綠和甲基紅重量比為1∶1，溴甲酚綠和甲基紅混合物與可溶性澱粉重量比1∶1000。
全文摘要
本發明提供了一種快速檢測有機磷農藥殘留的魚酯酶試劑，包括魚酯酶、輔劑A、B，附帶一張標準比色卡。魚酯酶製備方法為以草魚或鯽魚等為原料，去鱗及內臟，剔除粗骨，肉切成小塊，稱重，按魚肉與緩衝液重量1∶2的比例加入pH7.0－7.8的0.1moL/L的PBS緩衝液，打漿，離心，過濾上清去除液面脂肪，冷凍乾燥即可。A輔劑為酯類物質，如醋酸膽鹼，B輔劑為顯色劑，如甲基紅和溴甲酚綠。本發明的優點是穩定性好，操作便捷，成本低廉，可在家庭、市場、蔬菜生產地等現場進行，不需任何儀器。
文檔編號C12Q1/44GK1396267SQ0211515
公開日2003年2月12日 申請日期2002年4月27日 優先權日2002年4月27日
發明者雷紅濤, 黃曉鈺 申請人:華南農業大學