一種甘草黃酮的提取方法及其在製備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物中的應用的製作方法
2023-05-23 10:14:51
一種甘草黃酮的提取方法及其在製備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了從甘草中分離得到的甘草黃酮的方法及在治療糖尿病引起的肝腎損傷的應用，屬於中草藥的提取應用領域。本發明將甘草飲片浸入95%乙醇回流提取3次，每次1.5~2.5h，合併濾液，回收溶劑，得浸膏；再將所得浸膏通過30~60目聚醯胺柱層析，依次用水、95%乙醇洗脫；層析液以鹽酸-鎂粉反應檢測，合併鑑別反應顯紅色或橙紅色的層析液，經濃縮和冷凍乾燥，得甘草黃酮。動物實驗和細胞學實驗表明，本發明方法得到的甘草黃酮對糖尿病引起的肝腎臟損傷均具有較好的保護和修復作用，基於此，本發明以甘草黃酮為活性成分，按藥劑學的常規工藝和輔料製備成內服或注射製劑，為傳統中藥治療肝腎損傷開闢了一條新途徑。
【專利說明】一種甘草黃酮的提取方法及其在製備治療糖尿病引起的肝 腎損傷藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種甘草黃酮的提取方法；本發明同時還涉及以所提取的甘草黃酮為 活性成分製備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物的應用，屬於中草藥的提取應用領域。
【背景技術】
[0002] 中藥甘草為豆科植物甘草Fisch.)，脹果甘草 Bat.)或光果甘草L.)的乾燥根及根莖。 我國是世界上認識和研究甘草最早的國家，東漢的《神農本草經》中即有記載。其味甘，性 平，入心、肺、脾、胃經。用於治療脾胃虛弱、中氣不足、咳嗽氣喘、癰疽瘡毒、腹中攣及作痛 等病症和緩和藥物烈性、解藥毒。科學研究實驗表明：甘草中富含甘草酸、甘草次酸、黃酮、 皂苷、生物鹼和胺基酸等成分，具有抗病毒、抗菌、抗潰瘍、抗氧化、抗腫瘤、解毒、保肝等功 效。近年來，隨著對甘草藥理作用的深入研究，表明甘草中的黃酮類成分具有抗病毒、抗菌、 抗潰瘍、抗炎、降血脂、鎮痛等作用，是一類非常有效的活性成分，已成為中藥甘草研究的熱 點。對甘草黃酮類成分，常用的方法是甘草用乙醇提取，濃縮至幹，用熱水溶解後依次用石 油醚、乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取液用鹼液萃取，再將鹼水提取液酸化，乙酸乙酯萃取 後減壓濃縮而得總黃酮提取物。該方法的不足之處是提取步驟複雜繁瑣，成本較高。
[0003] 文獻報導，甘草中的活性物質對四氯化碳及化學致癌劑甲基偶氮苯所致的肝損傷 和肝癌有明顯的保護作用。馬濤等(瀋陽藥科大學學報，2002, 19 (4) : 275-277.)通過對大 鼠實驗發現，甘草的水提取物對農藥五氯硝基苯造成的肝損傷具有保護作用。王根生等(藥 學學報，1993，28(8) :572-576.)報導甘草黃酮可以明顯抑制小鼠肝臟MDA增高和穀胱甘 肽的消耗，並能抑制肝臟組織脂質過氧化、提高小鼠肝臟SOD活性，並推測其保肝作用可能 與其抗脂質過氧化的作用有關。但是，目前並未見甘草黃酮對糖尿病造成的肝腎損傷具有 保護作用的文獻報導。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種工藝簡單、成本低的提取活性甘草黃酮的方法； 本發明的另一目的是提供一種甘草黃酮新的醫藥活性--對糖尿病造成的肝腎損傷 具有保護作用； 本發明還有一個目的，提供一種用於治療糖尿病造成的肝腎損傷的製劑。
[0005] 一、甘草黃酮的提取 本發明甘草黃酮的提取方法：取甘草飲片，浸入95%乙醇(甘草與95%乙醇的體積比為 1:4)回流提取3次，每次I. 5~2. 5h，合併濾液，回收溶劑，得浸膏；將所得浸膏通過3(Γ60目 聚醯胺柱層析，依次用水、95%乙醇洗脫；層析液以鹽酸-鎂粉反應檢測，合併鑑別反應顯紅 色或橙紅色的層析液，經濃縮和冷凍乾燥，得甘草黃酮。
[0006] 二、甘草黃酮對糖尿病造成的肝腎損傷的保護 1.甘草黃酮對糖尿病大鼠肝臟的保護 作為體內重要的糖代謝調節器官，肝臟在糖尿病狀態下的損害情況一直受到人們的重 視，糖尿病性肝損害是常見的糖尿病慢性併發症之一。血清中ALT、AST反映肝細胞變性、壞 死程度，也是檢查肝功能損害最常用、最敏感的指標。
[0007] 1. 1實驗性糖尿病大鼠動物模型的建立 取健康Wistar大鼠，體重18(T220g，雌雄各半，適應環境3天後，於實驗前禁食不 禁水12h，腹腔注射四氧嘧啶溶液200mg/kg，用生理鹽水新鮮配製，使四氧嘧啶的濃度為 2. 5%。注射後72h，禁食12h，斷尾取血，測定空腹血糖值，選取空腹血糖值 在16. 7mmol/L以上的為糖尿病大鼠。
[0008] 1.2分組與給藥 將糖尿病大鼠隨機分為3組，即模型對照組（Diabetic)，甘草黃酮組 (LFT+Acarbose)(70mg/kg)和拜糖蘋組（Diabetic+Acarbose)(劑量為 17. 5mg/kg)，每組 10 只，並設正常對照組10隻（Control)。各組大鼠均於早晨8時灌胃給藥，容量為lml/lOOg 體重，每日1次，共14天。正常對照組和模型對照組給等容量的蒸餾水。
[0009] 1.3實驗內容 按前述分組與給藥進行試驗，分別於給藥〇w、lw、2w的末次給藥Ih後（採血前禁食 12h)，乙醚麻醉大鼠，心臟採血，離心分離血清。於自動生化儀中分別測穀草轉氨酶（AST) 及谷丙轉氨酶（ALT);末次採血結束後，取肝臟和腎臟，臟器一半固定於4%甲醛溶液中，用 於病理形態學分析。
[0010] 1.4試驗結果 本實驗0天時糖尿病大鼠血清AST、ALT都顯著高於正常對照組，說明肝臟受到嚴重 損傷。表1和圖1顯示了大鼠血清ALT的含量：給藥後，LFT組的血清ALT含量顯著降低 (P〈〇. 05)，與糖尿病模型組比較，差異有顯著統計學意義（p〈0. 005);並且在給藥的第7天 和第14天，均有顯著性差異（P〈0. 005)，說明甘草黃酮對糖尿病大鼠具有較好的降低肝臟 ALT的作用。
【權利要求】
1. 一種甘草黃酮的提取方法，是將甘草飲片浸入95%乙醇回流提取3次，每次 1. 5~2. 5h，合併濾液，回收溶劑，得浸膏；再將所得浸膏通過3(Γ60目聚醯胺柱層析，依次用 水、95%乙醇洗脫；層析液以鹽酸-鎂粉反應檢測，合併鑑別反應顯紅色或橙紅色的層析液， 經濃縮和冷凍乾燥，得甘草黃酮。
2. 如權利要求1所述方法提取的甘草黃酮在製備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物中 的應用。
3. 如權利要求2所述甘草黃酮在製備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物的應用，其特徵 在於：以甘草黃酮為活性成分，按藥劑學的常規工藝和輔料製備成內服或注射製劑。
【文檔編號】A61P13/12GK104288218SQ201410595491
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月30日 優先權日:2014年10月30日
【發明者】王一傑, 倪京滿 申請人:王一傑, 倪京滿