一種榛子素及其提取方法和藥物用途的製作方法

2023-05-23 13:37:06 1

專利名稱：一種榛子素及其提取方法和藥物用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及榛子素A及其提取方法，和其在製備治療高血脂症藥物 中的應用。
背景技術：
平斷Cc^/w51 /^m _p/7>"〃a Fisch)是斷C07/ws A故ro/ /^〃a Fish, ex Bess.)屬中的一種植物。
榛(C077/ws /zeterap/^〃a Fish.ex Bess.)為樺木禾鬥CSefw/aceae)榛屬 (Cor/^0植物，原產我國，據考證迄今己有6000多年的歷史。由於榛的野 生資源豐富，多年來我國較多的是利用野生資源，隨著栽培學的迅速發展， 市場的不斷開拓，近些年來在我國部分地區已有少量的栽培。目前，在我 國栽培的榛有平榛(C07/ws/zefera/ /^〃a Fisch)、毛榛(CoWws ma"<is7zwn'ca Batal)、刺榛(Cwy/ws Batal)等12種，其中以平榛分布較多而且
普遍，在遼寧、吉林、黑龍江、山西、山東、河南等地均有分布。榛是果 材兼用的優良樹種，不僅可生產十分珍貴的木材，而且能生產上等的堅果 和以其種仁為原料的高檔食品。榛的木材堅硬，紋理、色澤美觀，可做小 型細木工的材料，它的種仁油芳香可食，又是製作肥皂、蠟燭和化妝品的 原料。
榛的植物學特徵及生長分布榛為多年生喬木或灌木，樹高一般為 1.5-2m，樹皮灰褐色，有光澤，1年生枝褐色，密生茸毛；芽鱗暗褐色， 邊緣有毛；葉互生，託葉小，早落；葉片圓形、廣卵形或倒卵形，尖端近 截形或圓形，淺裂，中央裂片較長，漸尖，基部心形或截形，邊緣有不規則重鋸齒；頂端平截，中央有突出的葉尖；葉上面深綠色，下面淺綠色， 側脈3-5對，多為羽狀葉脈；單性花，雌雄同株，無花瓣，先葉開放，雄 花序為圓柱形，下垂的棻荑花序，具多數、覆瓦狀排列的苞片，每一苞片 內有叉狀的雄蕊4-8枚，花葯黃色，雌花著生於雄花序附近，包藏於一總 苞內，僅紅色柱頭突出，開放時露出芽頂；堅果l-6個，淺褐色，簇生或 單生，較大，球形或卵圓形，徑約1.5cm，有總苞片2個，淺裂，鍾狀， 外面密生短柔毛和刺毛狀腺體。花期4-5月，果熟期9月。榛生於向陽幹 燥的山坡、崗地、路邊荒地和林緣等處。分布於中國東北、華北。
榛的主要成分榛樹的葉含鞣質，並有黃酮反應，樹皮含有鞣質；果 仁含碳水化合物、蛋白質、脂肪；果實含有澱粉；葉尚含有生物鹼。油的 脂肪酸組成有棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞麻油酸等。
榛具有廣泛的藥用價值種仁可以益氣、開胃、明目。用於病後體虛， 食少疲倦。水煎服，用量30-60g。榛的雄花具有消炎、消腫、止痛作用。 可用於皮膚炎症、凍傷等。
目前國內外學者對榛屬植物研究主要集中在高極性的鞣質化合物，對 榛屬植物中含有的較低極性的化學成分研究較少，主要化學成分為酮 類化合物。
鞣質類化合物是該屬植物的主要成分之一。目前，針對該屬植物所含 的鞣質類化合物的研究較多，對該屬植物的其他化學成分研究較少。
金哲雄，等從榛葉中分離提取出8個化合物，分別為quercetin-3-O-" 隱D畫glucuronide; 3,4，6-penta-(9-galloyl-D-glucose; 1,2,3，6-tetra-々-D-glucose; casuarictin; rugosin C; degalloylrugosin F; heterophylliin A禾口 tellimagrandin II (金哲雄，張秀鵑.榛子葉鞣質類化學成分研究[J].中草藥,2001， 32(3): 193-195)。王力，等從榛葉中分離提取出4個化合物，分別為榛葉素B(heterophylliin B)， tellinagrandin, casuarictin禾口 casuarinin。其中榛葉素B
為一種新的鞣花二聚體成分(王力，金哲雄.榛子葉鞣質類化學成分研究 (n )[J].中草藥，2004， 35(6): 606-608.)。
張麗華,等發現榛屬中含有紫杉醇類物質，含量為紫杉樹皮的1/10， 同時在鞍山科技大學分離技術中心參照Angela Hoffman的實驗條件和榛 樹中紫杉醇的圖譜，進行了大量的實驗研究，確認鞍山地區的山榛樹中也 含有紫杉醇，並對其進行了提取和純化，最終分離得到了目標物，初步鑑 定為紫杉醇(張麗華，高麗娟.鞍山地區山榛子樹皮中紫杉醇的提取[J]. 福建分析測試，2003, 12(2): 1765-1768.)。
該植物中含有大量酮類化合物。簡單異戊烯基酮是指酮母核上 僅含有一些結構簡單的羥基、甲氧基及直鏈的異戊烯結構單元取代基的化 合物，該類化合物有260餘種。
目前未見到有關榛子素A的提取方法及化合物的報導，該化合物屬 於新化合物，屬於首次分離得到；該化合物的新的藥物用途屬首次發現。

發明內容
本發明提供榛子素A及其提取方法和藥物用途。 一種如下式的榛子素A:formula see original document page 6
棕色針晶(MeOH)， mp 145 146°C。 TLC檢測，10%硫酸-乙醇為 顯色劑，105"C下加熱顯鮮綠色斑點。是從榛葉中分離得到的單體化合物， 故命名為榛子素A，化學名稱為7,8， 10-三甲氧基-4,5-二氫菲並[2， 3]二氧戊'烷(7,8,10-trimethoxy-4，5- dihydrophenanthro[2,3] dioxolane)。
本發明榛子素A的製備方法是，包括下列步驟
a、 提取取乾燥榛葉5.0kg，用3 5倍量的75% 95%乙醇室溫浸 泡24小時，濾過，回收溶劑，浸提3次，合併提取液，減壓回收溶劑至 相對密度1.12 1.15，濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、 正丁醇萃取，減壓回收溶劑至幹，得正丁醇部分25g 30g;
b、 分離將得到的正丁醇部分進行矽膠柱層析200 300目，三氯甲 垸-甲醇1:1 10洗脫，收集榛子素A部分洗脫液，回收溶劑得榛子素A 粗產品，收率0.010% 0.015%;
C、榛子素A的純化取粗榛子素A用甲醇進行重結晶，得純榛子 素A: 0.5g 0.7g。
本發明榛子素A在製備治療高血脂症藥物中的應用。 當本發明用於製備治療高血脂症的藥物時，其口服或胃腸外給藥， 均是安全的，在口服情況下，其可以任何常規形式給藥，如散劑、粒 劑、片劑、膠囊劑、丸劑、溶液劑、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下
含片等當該藥物腸胃外給藥時，可採取任何常規形式，例如注射劑 如靜脈內注射、軟膏劑、栓劑、經皮給藥、吸入劑等。
本發明製備治療高血脂症的藥物是由有效成分單體或有效成分與固 體或液體的賦形劑一起構成的，這裡使用的固體或液體的賦形劑在本領域 是眾所周知的，下面舉幾個具體例子，散劑是內服的粉末劑，它的賦形劑 有乳糖、澱粉、漿糊精、碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂， 碳酸氫鈉、乾燥酵母等；溶液劑的賦形劑有水、甘油、1， 2-丙二醇、單 糖漿、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可以使用 脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂臘、木臘、液體石臘、樹脂、高級臘等組合成的疏水劑或親水劑。
本發明的有益效果在於，新化合物榛子素A可用於製備降血脂的藥 物，具有療效顯著的特點。
有效物質的劑量可以根據服用方式，病人的年齡和體重及病情嚴重程 度和其它類似的因素而改變，口服量為100 300mg，每日二次服用； 注射10 30mg，每日一次。


圖1是榛子素A的HMBC譜主要相關信號圖。 圖2是榛子素A的'HNMR譜圖。 圖3是榛子素A的"CNMR譜圖。 圖4是榛子素A的HMBC譜圖。 圖5是榛子素A的HR-ESI-MS譜圖。
具體實施方式
實施例1:
a、 提取取乾燥榛葉5.0kg，用3倍量的85%乙醇室溫浸泡24小時， 濾過，回收溶劑，浸提3次，合併提取液，減壓回收溶劑至相對密度1.12， 濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收 溶劑至幹，得正丁醇部分25g，
b、 分離將得到的正丁醇部分進行矽膠柱層析200 300目，三氯甲 垸-甲醇1:1洗脫，收集洗脫液，回收溶劑得榛子素A粗產品，收率0.012%，
c、 榛子素A的純化取粗榛子素A用甲醇進行重結晶，得純榛子素 A: 0.6g。
鑑定採用波譜學方法進行結構鑑定。
HR-ESI-MS譜給出分子量為313.1147[M-l]"，結合DEPTQSP、11^11譜確定其分子式為C18H1805。
在111！^11 (500MHz， Pyridine-D5)譜中，給出36.10 (1H， s)、 6.86
(1H， s)和7.10 (1H， s) 3個芳香質子，根據其化學位移和單峰信號可 知為孤立的芳香質子信號，由(55.87 ( 2H， s)化學位移和單峰信號可知 -0CH20-片段的存在。另外在33.65 (3H， s)、 3.57 (3H， s)和3.50 (3H， s)處分別給出3個甲氧基的質子信號，在高場32.42 (2H， m)和2.40
(2H, m)的兩組信號，結合DEPTQSP譜歸屬為兩個相連的亞甲基質子 信號。
在DEPTQSP (125.8MHz， Pyridine-D5)譜中可見18個碳信號，其中 9個季碳信號，3個叔碳信號，3個伯碳信號和3個仲碳信號。結合'HNMR 譜可知，357.83、 57.01和56.25為3個甲氧基碳信號，<532.15和30.27為 兩個亞甲基碳信號，3102.44為-OCH20-基團的碳信號，及其餘12個芳香
碳信號。
在HMBC譜中，可見位於低場c5//7.10 (1H， s， H-9)質子信號分別 與& 147.22 (C-7)、 146.82 (C畫8)、 132.26 (C-5a)、 125.77 (C-9a)、 116.69
(C-10b)、 116.57 (C-6)、 159.02 (C畫10)和30.27 (C-5)存在相關信號， 而&6.86 (1H, s,H-6)質子信號分別與(5c 147.22 (C-7)、 146.82 (C-8)、 125.77 (C醒9a)、 116.69 (C-10b)、 114.36 (C-9)、 132.26 (C-5a)、 30.27
(C-5)和32.15 (C-4)存在相關信號，由此推斷兩個質子位於同一個苯 環上的對位；另外知6.10(1H， s， H-l)質子信號分別與(5c 159.02(010)、 116.69 (C-10b)、 102.44 (C-ll)、 147.88 (C-2)、 141.83 (C-3)和142.84
(C-4b)存在相關信號，推斷該質子與C-1相連。
在HMBC譜中，通過&3.50 (3H， s)質子信號與^100.29 (C-l)、 159.02 (C-IO)、 116.69 (C-10b)存在相關信號，推斷該甲氧基與C-10相連；(5//3.65 (3H， s)質子信號分別與^;116.57 (C-6)、 147.22 (C畫7) 和146.82 (C-8)存在相關信號，可知該甲氧基與C-7相連；另一 ^3.57
(3H， s)質子信號分別與^147.22 (C-7)、 146.82 (C-8)、 114.36 (C-9) 存在相關信號，確定該甲氧基與C-8相連。
畫BC譜中，&5.87(2H， s)與(5c跳29(C-l)、 147.88 (C-2)、 141.83
(C-3)、 142.84 (C-4b)存在相關信號，確定-00120-基團與C-2和C-3 相連。
HMBC譜中，亞甲基&2.42 (2H， m)信號分別與& 147.88 (C-2)、 141.83 (C-3)、 142.84 (C-4b)、 159.02 (C-IO)、 116.69 (C-10b)、 30.27 (C畫5)、 132.26 (C-5a)、 116.57 (C-6)和125.77 (C-9a)存在較強相關 信號，與&100.29 (C-l)存在較弱相關信號；而另一亞甲基&2.40 (2H， m)信號分別與& 141.83 (C-3)、 142.84 (C-4b)、 116.69 (C-10b)、 32.15 (C-4)、 132.26 (C-5a)、 116.57 (C-6)、 125.77 (C-9a)、 147.22 (C-7) 和114.36 (C-9)存在相關信號，推斷二者為二氫菲的兩個亞甲基。 榛子素A的HMBC譜主要相關信號見圖1。
根據、HNMR、 DEPTQSP和HMBC譜所提供的信息，對榛子素A的 碳氫核磁數據進行了歸屬，見表l。表1榛子素A的碳氫核磁數據No."CNMR'HNMR腹BC
1100.296.10 (1H， s)C-2,C-3,C-4b,C-10,C-11 ,C-1 Ob
2147.88
3141.83
432.152.42 (2H，m)C-2，C-3,C-5,C-6,C-10,C-4b,C-5a
4b142.84
5a132.26
30.272.40 (2H， m)C-3,C-4,C-6,C-7，C-9,C-4b,C-5a
6116.576.86 (1H， s)C-4,C-5,C-7,C-8，C-9,C-5a，C-9a
7147.22
8146.82
9114.367.10 (1H， s)C-5,C-6，C-7,C-8,C-10,C-5a，C-9a
9a125.77
10b116.69
10159.02
7-OCH356.253.65 (3H， s)C-6,C-7,C-8
8-OCH357.013.57 (3H， s)C-7,C-8,C-9
10-OCH357.843.50 (3H， s)C陽l,C-10,C-10b
-OCH20-102.442.42 (2H， m)C-l,C-2,C-3,C-4b
將榛子素A的波譜數據與文獻報導的2,7-二羥基-3,5-二甲氧基-9，10-二 氫菲比較(Chen FC， Lin YM， Hung JC. Phenolic compounds from the heartwood of ( ara'm》w函y ora[J]. Phytochemistry, 1975, 14: 300-304.)， 結 果發現，除2、3位連有的基團有差異外，其餘基本相同。'HNMR、DEPTQSP、 HMBC、 HRMS譜分別見圖2、圖3、圖4、圖5。
綜合分析，鑑定榛子素A，化學名稱為7,8， 10-三甲氧基-4，5-二氫菲 並[2， 3]二氧戊烷(7,8,10隱trimethoxy-4,5-dihydrophenanthro [2,3]dixole)， 是從平榛葉中得到的新化合物。
實施例2:a、 提取取乾燥榛葉5.0kg，用4倍量的75。/。乙醇室溫浸泡24小時， 濾過，回收溶劑，浸提3次，合併提取液，減壓回收溶劑至相對密度1.15， 濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收 溶劑至幹，得正丁醇部分28g。
b、 分離將得到的正丁醇部分進行矽膠柱層析200 300目，三氯甲 烷-甲醇l:5洗脫，收集榛子素A部分洗脫液，回收溶劑得榛子素A粗產 品，收率0.013%。
c、 榛子素A的純化取粗榛子素A用甲醇進行重結晶，得純榛子素 A: 0.64g。
實施例3:
a、 提取取乾燥榛葉5.0kg，用5倍量的95%乙醇室溫浸泡24小時， 濾過，回收溶劑，浸提3次，合併提取液，減壓回收溶劑至相對密度1.14， 濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收 溶劑至幹，得正丁醇部分30g。
b、 分離將得到的正丁醇部分進行矽膠柱層析200 300目，三氯甲 烷-甲醇1:10洗脫，收集榛子素A部分洗脫液，回收溶劑得榛子素A粗產 品， 收率0.015%。
c、 榛子素A的純化取粗榛子素A用甲醇進行重結晶，得純榛子素 A: 0.7g。
實驗例、榛子素A預防和治療高血脂症的藥效試驗 1、材料與方法
1.1動物SD大鼠，60隻，雄性，體重130g 150g，購自本校實驗動 物中心。
1.2藥物榛子素A:自製；非諾貝特規格200mg/粒，批號89396，法國利博福尼製藥公司生產；膽固醇粉:購自北京雙旋生物培養基製品廠，
批號20050606。
1.3高脂兔飼料及各種含藥物高脂飼料的配製高脂飼料配製基礎飼
料100g中加入膽固醇0.4g，豬油2mL;在高脂飼料的基礎上加入不同含 量的藥物配製成含藥物的高脂飼料供實驗餵養。
2、 對正常大鼠血脂水平的影響取大鼠60隻，禁食給水12h，稱體 重，隨機分為6組(每組各10隻)正常對照組、高脂模型組(生理鹽水， 10ml/kg)、陽性對照組(非諾貝特20mg/kg)、榛子素A大劑量組(60mg/kg)、 中劑量組(30mg/kg)和小劑量組(15mg/kg)。上述藥物均灌胃(ig)給藥，每日 1次，共15d，實驗過程中每周稱體重1次，第16天摘除大鼠眼球，眼眶 取血2-3ml，送血生化檢査，測血清中TG和TC含量。
3、 榛子素A降血脂試驗結果見表2。
表2榛子素A降血脂試驗結果(S±s， n,
分組TC (mmol/L)TG (mmol/L)
正常對照組1.19±0.12
模型對照組3.35±1.001.24±0.17
陽性對照組2.96±0.491.18±0.15
棒大劑量組2.58±0.3廣U2±0.15
子中劑量組2.69士0.42'1.08±0.18
， 小劑量組 A2.81±0.59U3±0.27
*與正常對照組比較，p<0.05; **與正常對照組比較，p<0.01。
4、結論實驗結果表明榛子素A具有明顯的降血脂作用。
製備藥劑的實施例1:
榛子素A 20.0g，以1， 2-丙二醇1000ml溶解，過濾後分裝於1000
支安瓶中，每支lml，含榛子素A20mg。 製備藥劑的實施例2:榛子素A200.0g，藥用澱粉適量，二者充分混合，裝膠囊，製成IOOO 粒膠囊，每粒重0.25g，含榛子素A200mg。
權利要求
1、一種如下式的榛子素A其化學名稱為7，8，10-三甲氧基-4，5-二氫菲並[2，3]二氧戊烷(7，8，10-trimethoxy-4，5-dihydrophenanthro[2，3]dioxolane)。
2、 一種如權利要求1所述榛子素A的製備方法，其特徵在於，包括下列步驟a、 提取取乾燥榛葉5.0kg，用3-5倍量的75% 95%乙醇室溫浸泡 24小時，濾過，回收溶劑，浸提3次，合併提取液，減壓回收溶劑至相對 密度1.12 1.15，濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁 醇萃取，減壓回收溶劑至幹，得正丁醇部分25 30g;b、 分離將得到的正丁醇部分進行矽膠柱層析200 300目，三氯甲 烷-甲醇1:1 10洗脫，收集榛子素A部分洗脫液，回收溶劑得榛子素A 粗產品，收率0.010% 0.015%;C、榛子素A的純化取粗榛子素A用甲醇進行重結晶，得純榛子素 A: 0.5g 0.7g。
3、 根據權利要求2所述的榛子素A的製備方法，其特徵在於乙醇可 用甲醇、水代替。
4、 根據權利要求2所述的榛子素A的製備方法，其特徵在於分離柱層析填料還包括活性炭、硅藻土、大孔吸附樹脂或氧化鋁。
5、 如權利要求1所述的榛子素A在製備治療高血脂症藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種榛子素及其提取方法和其藥物用途。屬於新化合物及其藥物用途。以平榛葉為原料，經過醇提，有機溶劑萃取以及矽膠柱層析，重結晶方法，得到了一種新化合物，其化學名稱為7，8，10-三甲氧基-4，5-二氫菲並[2，3]二氧戊烷(7，8，10-trimethoxy-4，5-dihydrophenanthro[2，3]dioxolane)，簡稱榛子素A，產率達0.01％以上。榛子素A在製備治療高血脂症藥物中有著廣泛的藥物用途。
文檔編號C07D317/70GK101613340SQ200910066909
公開日2009年12月30日 申請日期2009年5月6日 優先權日2009年5月6日
發明者劉金平, 丹 盧, 李平亞, 薛健飛 申請人:吉林大學