一種貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法
2023-05-23 21:43:31 3
一種貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法，它是以毛蕊異黃酮苷對照品為對照，以甲醇:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=30～70:70～30或者乙腈:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=20～50:80～50為流動相的高效液相色譜法。所述方法的專屬性強、精密度高、重複性好、回收率高、穩定性高、測量結果準確，達到了有效控制藥物質量的目的，確保了產品質量的穩定以及臨床用藥的安全、有效。
【專利說明】一種貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法，屬於中藥質量檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002]貞芪製劑有補氣養陰、扶正固本之功效。現代藥理實驗證明能提高人體免疫功能，保護骨髓和腎上腺皮質功能，促進幹擾素產生；配合腫瘤患者放、化療，減輕病人放、化療期間的毒副作用，促進正常功能的恢復的作用。其處方由黃芪、女貞子組成。目前，貞芪製劑供臨床選擇的劑型有片劑、膠囊劑、顆粒劑及滴丸劑等。
[0003]而黃芪中的主要有效成分為皂苷和黃酮類化合物，研究證實黃芪中的黃酮類成分具有多種藥理活性、可以清除氧自由基、抑制脂質過氧化和維持血中NO濃度，保護缺血再灌注損傷。因此，黃芪黃酮類成分是貞芪扶正製劑的主要藥物有效成分之一，而毛蕊異黃酮苷是黃芪黃酮類成分中重要的一種，對毛蕊異黃酮苷的含量進行測定也顯得尤為重要。
[0004]但是，現有的貞芪扶正製劑的質量檢測方法並沒有對毛蕊異黃酮苷成分的含量進行測定，為進一步完善貞芪扶正製劑的質量檢測標準，以確保其藥品質量，建立貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定項目非常必要。
【發明內容】
[0005]本發明的目 的在於，提供一種貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法，該方法專屬性強、精密度高、重複性好、回收率高、穩定性高、測量結果準確，達到了有效控制藥物質量的目的，確保了產品質量的穩定以及臨床用藥的安全、有效。
[0006]本發明所述的貞芪扶正製劑包括現有技術中的任意貞芪扶正製劑產品(顆粒、膠囊、片劑等)，例如按照發明專利200310122216.7,200610051146.4所述的方法製備得到的製劑。
[0007]為解決上述技術問題，本發明採用如下的技術方案:
[0008]一種貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法，它是以毛蕊異黃酮苷對照品為對照，以甲醇:水/0.01%~5%磷酸水溶液/0.01%~5%冰醋酸/0.01%~0.5%甲酸水溶液=30~70:70~30或者乙腈:水/0.01%~5%磷酸水溶液/0.01%~5%冰醋酸/0.01%~
0.5%甲酸水溶液=20~50:80~50為流動相的高效液相色譜法。
[0009]具體的含量測定方法為:照高效液相色譜法、按下述步驟進行測定:
[0010](I)色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇:水/0.01%~5%磷酸水溶液/0.01%~5%冰醋酸/0.01%~0.5%甲酸水溶液=30~70:70~30或者乙腈:水/0.01%~5%磷酸水溶液/0.01%~5%冰醋酸/0.01%~0.5%甲酸水溶液=20~50:80~50為流動相(乙腈較甲醇的優點更明顯，如產生鬼峰少；壓力小等);柱溫為20~40°C ;檢測波長為215~275nm ;流速為0.5~1.5mL ? min^1 ;理論板數按毛蕊異黃酮苷峰計算應不低於3000 ；[0011](2)對照品溶液的製備:精密稱取毛蕊異黃酮苷對照品適量，加甲醇製成0.1mg/HiL的溶液，備用；
[0012](3)供試品溶液的製備:採用下述方法①-⑤中的任一種:
[0013]①精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲或回流提取30?60min，待冷卻後，用甲醇補足重量；過濾，取續濾液，即得；
[0014]②精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g，用適量石油醚索氏提取30min，殘渣揮幹後，精密加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲或回流提取30?60min，待冷卻後，用甲醇補足重量；過濾，取續濾液，即得；
[0015]③精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g，精密加入70%?80%的乙醇IOOmL,稱定重量，超聲提取lh，用乙醇補足重量，濾過；精密量取續濾液50mL，減壓濃縮至幹，殘渣加適量水使溶解，上大孔吸附樹脂柱，靜置吸附30min，依次用水、40%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮至幹，用甲醇溶解並轉移至50mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得;
[0016]④精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲或回流提取lh，用甲醇補足重量，濾過；精密量取續濾液50mL，濃縮至幹，殘留物用0.3%氫氧化鈉溶液溶解後，加稀鹽酸調至PH5?6，然後用乙酸乙酯或水飽和的正丁醇萃取四次，合併有機層，減壓蒸乾，殘渣用甲醇定容至50mL，搖勻，即得；
[0017]⑤精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲或回流提取lh，用甲醇補足重量，濾過；精密量取續濾液50mL，濃縮至幹，殘渣加適量溫水溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，充分提取後，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，棄去氨試液，正丁醇液蒸乾，殘渣加水IOmL使溶解，通過大孔吸附樹脂柱，以水50mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸乾,殘渣用甲醇溶解並轉移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
[0018](4)測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0019]前述的貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法中，所述的流動相為乙腈:0.2%甲酸水溶液=20:80。
[0020]前述的貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法中，步驟(I)中的檢測波長為260nm,流速為0.8?1.0mL/min,柱溫為35°C。
[0021]為確保本發明含量測定方法科學、合理、可行， 申請人:進行了一系列試驗研究和考察。
[0022]一、儀器與試藥(見表I)
[0023]表I
[0024]
【權利要求】
1.一種貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法，其特徵在於:它是以毛蕊異黃酮苷對照品為對照，以甲醇:水/0.01%?5%磷酸水溶液/0.01%?5%冰醋酸/0.01%?0.5%甲酸水溶液=30?70:70?30或者乙腈:水/0.01%?5%磷酸水溶液/0.01%?5%冰醋酸/0.01%?0.5%甲酸水溶液=20?50:80?50為流動相的高效液相色譜法。
2.根據權利要求1所述的貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法，其特徵在於，照高效液相色譜法、按下述步驟進行測定: (1)色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇:水/0.01%?5%磷酸水溶液/0.01%?5%冰醋酸/0.01%?0.5%甲酸水溶液=30?70:70?30或者乙腈:水/0.01%?5%磷酸水溶液/0.01%?5%冰醋酸/0.01%?0.5%甲酸水溶液=20?50:80?50為流動相；柱溫為20?40°C ;檢測波長為215?275nm ;流速為0.5?1.5mL.rniiT1 ;理論板數按毛蕊異黃酮苷峰計算應不低於3000 ； (2)對照品溶液的製備:精密稱取毛蕊異黃酮苷對照品適量，加甲醇製成0.lmg/mL的溶液，備用； (3)供試品溶液的製備:採用下述方法①-⑤中的任一種: ①精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g,精密加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲或回流提取30?60min，待冷卻後，用甲醇補足重量；過濾，取續濾液，即得； ②精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g，用適量石油醚索氏提取30min，殘渣揮幹後，精密加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲或回流提取30?60min，待冷卻後，用甲醇補足重量；過濾，取續濾液，即得； ③精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g，精密加入70%?80%的乙醇IOOmL,稱定重量，超聲提取lh，用乙醇補足重量，濾過；精密量取續濾液50mL，減壓濃縮至幹，殘渣加適量水使溶解，上大孔吸附樹脂柱，靜置吸附30min，依次用水、40%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮至幹，用甲醇溶解並轉移至50mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； ④精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲或回流提取lh，用甲醇補足重量，濾過；精密量取續濾液50mL，濃縮至幹，殘留物用0.3%氫氧化鈉溶液溶解後，加稀鹽酸調至PH5?6，然後用乙酸乙酯或水飽和的正丁醇萃取四次，合併有機層，減壓蒸乾，殘渣用甲醇定容至50mL，搖勻，即得； ⑤精密稱取貞芪扶正製劑或其內容物2.0g,精密加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲或回流提取lh，用甲醇補足重量，濾過；精密量取續濾液50mL，濃縮至幹，殘渣加適量溫水溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，充分提取後，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，棄去氨試液，正丁醇液蒸乾，殘渣加水IOmL使溶解，通過大孔吸附樹脂柱，以水50mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸乾,殘渣用甲醇溶解並轉移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； (4)測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。
3.根據權利要求1或2所述的貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法，其特徵在於:所述的流動相為乙腈:0.2%甲酸水溶液=20:80。
4.根據權利要求2所述的貞芪扶正製劑中毛蕊異黃酮苷的含量測定方法，其特徵在於:步驟(I)中的檢測波長為260nm ;流速為0.8?1.0mL/min ;柱溫為35。。。
【文檔編號】G01N30/02GK103592384SQ201310561639
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月12日 優先權日:2013年11月12日
【發明者】張觀福 申請人:貴州信邦製藥股份有限公司