一種受體介導量子點示蹤靶向給藥系統及其製備方法和應用的製作方法

2023-05-15 18:51:21 3

專利名稱：一種受體介導量子點示蹤靶向給藥系統及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥品領域，具體涉及一種受體介導量子點示蹤靶向給藥系統及其製備方法和應用。
背景技術：
惡性腫瘤已經成為威脅人類健康和生命最主要的疾病之一。目前對惡性腫瘤多採用手術與化療相結合的綜合治療為主，其中化療是必須使用的治療手段，因其藥力強大、可快速殺傷或殺死腫瘤細胞，在臨床治療中發揮著重要作用。但化療藥物普遍存在細胞選擇性差、毒副作用大、不良反應嚴重、易產生嚴重不良反應和多藥耐藥(Multi-drugresistance，MDR)，致使化療效果不理想。因此，如何提高藥物的組織或細胞選擇性，將藥物 準確輸送到腫瘤組織或細胞並在靶部位定向釋放發揮治療作用，已成為腫瘤治療亟待解決的關鍵問題之一。隨著醫學和材料科學新的研究成果不斷湧現，藥物製劑理論與實踐獲得了迅速發展，為提高腫瘤的治療效果、降低毒副作用、逆轉MDR等發揮了重要作用。尤其是「靶向給藥」理論與實踐研究的成果，將化療藥物選擇性導向特定腫瘤細胞、解決化療藥物製劑普遍存在的選擇性差等共性問題提供了新的思路，化療藥物的靶向給藥有望成為治療惡性腫瘤的新途徑。革巴向給藥系統(Targeting Drug Delivery System, TDDS)能將藥物準確送到病灶部位，提高病灶部位的藥物濃度，從而提高藥物治療效果，避免或減輕藥物毒副作用。靶向性分為主動靶向性和被動靶向性。主動靶向性是指該系統具有主動識別靶細胞並進入靶細胞的能力，如受體靶向給藥系統等。被動靶向能力與系統的尺寸大小有關，100納米以下的顆粒易透過腫瘤組織的血管，使藥物或基因等效應分子濃集於腫瘤細胞周圍並產生作用。0)44是一種跨膜受體糖蛋白，能與透明質酸(Hyaluronan acid, HA)等多種配體結合，最近的研究表明，HA與其特異性受體CD44之間的相互作用可以作為HA靶向治療惡性瘤的研究基礎，CD44在多種惡性瘤細胞表面都有過表達，所以利用HA作為載體，將小分子藥物搭載其上，可以在增強藥物選擇性的同時降低藥物對於正常細胞的殺傷作用，並且，與HA連接後藥物的溶解性和穩定性會大大提高。因此利用HA作為藥物的靶向基團連接到藥物或其載體表面，可以通過受體介導作用將藥物導入細胞中殺傷或抑制腫瘤細胞，達到靶向治療的目的。但HA易溶於水，易被吸收，在組織中停留時間短，降解速度快，這就限制了他在醫學領域的應用。聚乙二醇(PEG)為低毒性線性分子，無抗原性，具有水溶性、免疫學惰性，其生物相容性已得到美國食品和藥物管理局FDA認證。PEG末端的羥基是化學反應的功能基團，但化學性質不活潑，須在較激烈的條件下才能與其它基團發生反應，為使HA能在較溫和條件下以較高速率與PEG鍵合，只有通過特定的活化劑與PEG反應使之活化，用活化的PEG羧基與HA乙醯化處理的氨基發生反應形成酯鏈或醚鏈連接的二元共軛物。在作為藥物傳輸用途時，酯鏈型連接在體內適宜條件下，能被逐漸水解打開。透明質酸(Hyaluronan acid, HA)是由重複二糖結構單元0-D-葡萄糖醒酸和N-乙醯氨基葡萄糖相互交替連接構成的線性黏多糖，具有低免疫原性、生物可降解性，是一種理想的生物醫用高分子材料。有文獻報導，以HA作為藥物載體的前藥具有良好的主動及被動靶向性，將抗腫瘤藥物與HA偶合能提高藥物的溶解性、穩定性、控釋性；並使藥物的毒性降低，達到靶向治療腫瘤的目的。CD44是細胞表面最重要的HA受體，其N端與HA非共價結合，結合部位可以延伸至HA的數個重複二糖單位，且其在惡性腫瘤細胞表面高度表達，因而HA適合用作惡性腫瘤靶向給藥系統的主動靶向因子。量子點(quantum dots, QDs,又稱為半導體納米晶)作為一種具有獨特光學和化學性質的新型螢光探針，在細胞、活體的螢光成像以及生物活性物質的定性、定量方面都有較好的應用前景，與傳統的有機螢光原料相比，具有不可比擬的優點激發光譜寬，可用單一激發波長同時激發不同顏色的量子點；發射光譜窄而對稱，可減少檢測中的光譜重疊，提高檢測的靈敏度；螢光發射波長可由量子點大小和組成元素調控；發光強度比傳統螢光物質強10倍以上，螢光壽命強。雖然組成量子點的化學成分Cd和Se等元素對 細胞和組織是有毒害的，但經親水性和功能化處理的量子點則表現出良好的生物相容性(biocompatibility)。對標記了量子點的培養細胞和注射了量子點的活體動物的長期跟蹤觀察表明，量子點對實驗細胞和動物體未造成生理損害並能夠保持量子點理化性質。迄今為止，已有國內外學者將不同材料的QDs與生物分子偶聯代替傳統的有機螢光染料分子，廣泛用於生物活性分子檢測，腫瘤細胞檢測與腫瘤影像以及生物活體成像等方面。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種受體介導量子點示蹤靶向給藥系統及其製備方法和應用。該給藥系統用於淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、精原細胞瘤、多發性骨髓瘤和甲狀腺癌化療具有明顯的優勢，特別在殺傷高表達CD44受體的乳腺癌，卵巢癌，宮頸癌腫瘤細胞，對正常組織的毒性較低，且該靶向給藥系統在活體內實時閱讀藥物與細胞以及細胞的多生物分子相互作用的信息，可研究藥物的轉運過程及動態監測藥物多靶點過程。本發明解決上述技術問題所採用的技術方案一種受體介導量子點示蹤美法侖靶向給藥系統，它是聚乙二醇-透明質酸-量子點-美法侖複合物，簡寫為PEG-HA-QDs-MEL，由PEG與HA醯胺脫水縮合連接，並且在HA接入水溶性CdTe/CdS量子點，最後與藥物MEL醯胺脫水縮合製備得到，其中，PEG-HA-QDs-MEL的組分含量按重量份數計如下，每一重量份為I毫克美法侖(MEL)30-100 份，聚乙二醇(PEG) 600-1500 份，透明質酸(HA) 200-500 份，CdTe/CdS量子點5-50份，N，N』 二環己基碳二亞胺(DCC)20_50份，4- 二甲氨基吡啶(DMAP)1-10份，丁二酸酐100-500份，N-羥基硫代琥珀醯亞胺(NHS) 20-50份，1_ (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC) 20-50份，亞硫酸氫鈉10-100份，苯甲醇(BA) 50-200份。本發明的受體介導量子點示蹤美法侖靶向給藥系統的製備方法，包括以下步驟，下述每一重量份為I毫克I)端羧基聚乙二醇的合成及純化將600-1500重量份聚乙二醇(PEG)置於帶有冷凝管、攪拌器和溫度計的三口燒瓶中，加入氯仿溶解，待溶解完畢後加入100-500重量份丁二酸酐，加熱溶解，同時加入乾燥的吡啶，攪拌下回流反應2-10小時，停止反應後冷卻至室溫，反應所得混合物減壓蒸發至呈粘稠狀，再加入無水乙醚沉澱得到白色產物，抽濾，再用二氯甲烷溶解產物，濾去不溶物，加入無水乙醚沉澱得到白色產物，重複2次以上，抽濾後真空乾燥至恆重，得到純化的端羧
基聚乙二醇；2) PEG-HA 的製備將步驟I)得到的端羧基 聚乙二醇溶解於200 - 500重量份透明質酸的水解液中，倒入裝有分餾柱和攪拌器的三口燒瓶，加入催化劑I-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺10-50重量份和4-二甲氨基吡啶0. 5-5重量份，在60-140°C下反應2-10小時後，收集100°C餾分，反應結束後冷卻；加入無水乙醇至無沉澱生成，過濾收集沉澱，洗滌沉澱，乾燥沉澱物即得 PEG-HA ；3)水溶性CdTe/CdS量子點的製備將5-20重量份碲粉和2-10重量份硼氫化鈉加入水中，在氮氣保護條件下，常溫下磁力攪拌2-5h，得到暗紅色含Te的NaHTe前驅液；稱取2_10重量份CdCl2溶於蒸餾水中，加入2-10重量份巰基丙酸，用濃度lm0l/L-2m0l/L的NaOH溶液調節溶液的pH值到8_10 ；把溶液加入三頸瓶中，把新製備的NaHTe加入到氮氣保護下的CdCl2溶液中，溶液的顏色變成透明橙黃色，室溫攪拌，然後轉入到90°C的恆溫水浴中反應0.5-2h後，以0. lml/min速度滴入濃度I U mol/L-20 u mol/L Na2S的溶液lml_15ml，得到CdTe/CdS核殼量子點；全部反應在氮氣保護下完成，反應終止後，加入乙醇，在5000r/min下離心分離10_15min，棄去上層清液，加水使沉澱重新懸浮，重複此過程2次，得到的固體在室溫下自然晾乾，研磨得到CdTe/CdS量子點固體粉末，簡寫為QDs ；4) PEG-HA-QDs 的製備稱取5-50重量份QDs溶於水中，室溫避光磁力攪拌至QDs全部溶解，加入5_50重量份N-羥基硫代琥珀醯亞胺(NHS)與5-50重量份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)。在室溫避光磁力攪拌Ih後將步驟2)製備的0. I g/ml-I g/ml的PEG-HA的水溶液20ml，加入上述混合液中，室溫避光磁力攪拌12h，所得產物混合液在pH為7. 4的磷酸鹽緩衝液以透析袋透析，冷凍乾燥得PEG-HA-QDs複合物；5)美法倫苄酯(BA-MEL)的製備在裝有溫度計、分水器的三頸燒瓶中加入美法侖30-100重量份，亞硫酸氫鈉10-100重量份和過量苯甲醇在磁力攪拌下進行反應，將反應後所得的混合液依次用蒸餾水、飽和碳酸氫鈉和蒸餾水洗滌，得到油狀物，將洗滌後的油狀物用旋轉蒸發儀進行蒸發，除去未反應苯甲醇，設定旋轉蒸發的溫度為30-60°C，蒸發直到無餾出物為止，蒸發得到的物質用乙醇-乙醚進行重結晶，其乙醇與乙醚體積比為1:2，得到乳白色的固體BA-MEL ；6) PEG-HA-QDs-MEL 的製備將步驟4)得到的100-500重量份PEG-HA-QDs複合物、10-50重量份N，N』 二環己基碳二亞胺和0. 5-5重量份4- 二甲氨基吡啶溶於無水二甲基亞碸中，室溫避光磁力攪拌至PEG-HA-QDs全部溶解，加入步驟5)所得的pH4. 7的10-50重量份BA-MEL水溶液，室溫避光磁力攪拌12h,將其在叔丁醇中通過碳載鈕0. 5wt%一15wt%催化劑氫化脫除苯甲醇,然後用pH為7. 4的磷酸鹽緩衝液透析24-72h，再用雙蒸水透析24_72h，冷凍乾燥得反應物粉末，即PEG-HA-QDs-MEL 產物。本發明的的製備工藝如下
"COOHCH2CH I「CCOhCH2OH I
微々_。轉L-。,，
HiMM
J 3 LJn
HA-MH2 COOHmfiH I「WOMOtOH m
\驗看、驗脅、I
prr^fKui.duc-iiMH#
M— 3 ,<w ^
f驗HA
COCHCH2CH I「CH2OH 祖
ifi CMtn；aucn~v,\QMm
_Tt-— ft
MCQDs
IS BAOC-CI !-Cl U- ( Vn(CI^CV% ^ Mt騰獅為
^iijHOOC-CH-CH,. ^^-N(CHaCH,Cfc
BA* MELfI
p-HH
CCOHCH-OH I 『[CH2CH
翁翁做脅、
PmWrWU-i}~mQMM
JaLJ
PEMA-Qft-MEL本靶向給藥系統，應用於製備抗腫瘤藥物。本發明的有益效果在於I)本系統有優良的主動靶向性和較好的逆轉耐藥作用CD44是一種高效內吞HA受體，該系統中的HA可特異識別受體並與之結合，使藥物高效主動靶向腫瘤細胞；同時通過控制粒子的粒徑，可實現系統的被動靶向性，有效提高腫瘤細胞內的藥物濃度，具有較好的逆轉耐藥作用。2)本系統有優良的血液穩定性。HA在體內主要被透明質酸酶降解，透明質酸酶為一種￠-1-4內切葡糖胺酸酶，其活性受環境酸鹼度影響較大，人血清、尿、肝臟及腫瘤組織中的透明質酸酶為酸性型透明質酸酶，其最適PH值為3. 5-4. O。在血液中，較高的pH值(7. 35-7. 45)使得酸性型透明質酸酶失活，HA不被降解，MEL、PEG與HA相連接的化學鍵均穩定，可保障給藥系統在血液循環過程中藥物不被釋放。3)有良好的隱形性、釋藥性和控釋性能。該系統偶聯了 PEG可避免網狀內皮系統的吞噬而具有較好的隱形性。酸性型透明質酸酶僅在腫瘤組織中或其周圍有活性。該系統進入腫瘤細胞後，在透明質酸酶作用下，HA被降解，同時，較低的PH值也使PEG-HA酯鍵被水解斷開，引發藥物釋放。4)有良好的體內示蹤功能。量子點具有腫瘤成像功能,能動態觀察藥物載體是否達到腫瘤細胞和發揮療效。該給藥系統有望解決氨基芳基氮芥類藥物製劑在治療腫瘤方面存在的細胞選擇性差、不良反應嚴重、有效治療濃度低和耐藥等問題。5)本系統的廣泛適用性本發明的靶向給藥系統通過HA活性基團連接含-NH2或-COOH反應基團的不同活性物質，如抗腫瘤單抗、抗腫瘤化療藥和吸附基因等，從而進一步擴大其運用範圍，具有廣泛適用性。
具體實施例方式為了更好地理解本發明，下面結合實施例進一步闡明本發明的內容，但本發明的內容不僅僅局限於下面的實施例。下述實施例中每一重量份為I毫克。實施例II. PEG-HA-QDs-MEL 組分的製備( I)端羧基聚乙二醇的合成及純化將IOg (5mmol)PEG-1500置於250mL帶有冷凝管、攪拌器和溫度計的三口燒瓶中，加入IOOmL氯仿(CaH2存在下蒸出)溶解，待溶解完畢後加入2. 5g (25mmol) 丁二酸酐，加熱溶解，同時加入2mL乾燥吡唆，攪拌下回流反應6小時，停止反應後冷卻至室溫，反應所得混合物減壓蒸發至呈粘稠狀，殘餘物加入大量無水乙醚，析出白色沉澱產物，抽濾得濾餅，濾餅用30mL 二氯甲烷溶解產物，濾去不溶物，再加入無水乙醚沉澱，析出白色沉澱產物，抽濾得濾餅，再用二氯甲烷溶解產物，重複上述操作3次，抽濾後真空乾燥至恆重，得端羧基聚乙二醇(PEG-SA-NHS)，稱重；(2) PEG-HA 的製備取3. Og透明質酸與15mL濃度20wt%的NaOH水溶液在常溫下機械攪拌反應12小時，脫去乙醯基；溶液在蒸餾水中透析2天，冷凍乾燥得到脫乙醯化的透明質酸凍乾粉末；將步驟(I)得到的0. 500g端羧基聚乙二醇溶解於透明質酸水解液中，倒入裝有分餾柱和攪拌器的IOOmL三口燒瓶中，加入EDC催化劑0. 250g、DMAPO. 020g, 100°C水浴下反應6小時，收集100°C餾分，反應結束，溶液呈棕色，冷卻，加入無水乙醇至無沉澱生成；過濾收集沉澱，洗滌，乾燥即得PEG-HA ；(3)水溶性CdTe/CdS量子點的製備水溶性CdTe/CdS核殼型納米量子點的合成主要分為兩個步驟首先合成CdTe核納米溶膠；然後再在CdTe外包覆CdS殼層。將0. 1200g碲粉和0. 0700g硼氫化鈉加入5mL的水溶液中，氮氣保護的條件下，常溫下磁力攪拌3h，得到暗紅色的含Te的前驅液。稱取CdCl2O. 040g,溶於15mL蒸餾水中，加入50 y L巰基丙酸，用濃度lmol/L的NaOH溶液調節溶液的pH值到8-10 ;將溶液加入IOOmL三頸瓶中，通氮氣20min後，把新製備的NaHTe加入到氮氣保護下的CdCl2溶液中，溶液的顏色變成透明橙黃色，室溫攪拌20min，然後轉入到90°C的恆溫水浴中，反應0. 5h後，以0. lmL/min的速度滴入5 u mol/L的Na2S溶液1ml，得到CdTe/CdS核殼量子點；全部反應在氮氣保護下完成，反應終止後，加入IOmL的乙醇，在5000r/min下離心分離IOmin,棄去上層清液，加IOmL水使沉澱重新懸浮，重複此過程2次，得到的固體在室溫下自然晾乾，並用坩堝研磨得到CdTe/CdS量子點(QDs)固體粉末；(4) PEG-HA-QDs 的製備稱取0. IOOg QDs溶於水中，室溫避光磁力攪拌至QDs全部溶解，加入0. 25g NHS與0. 15gEDC，在室溫避光磁力攪拌Ih後將步驟2)所製備的0. I g/ml的PEG-HA的水溶液20ml，室溫避光磁力攪拌12h，所得產物混合液在pH為7. 4的磷酸鹽緩衝液以透析袋透析，冷凍乾燥得PEG-HA-QDs複合物； (5) BA-MEL 的製備在裝有溫度計、分水器的三頸燒瓶中加入美法侖0.600g，苯甲醇10ml，亞硫酸氫鈉0. 394g在磁力攪拌下進行反應；將反應後的混合液依次用蒸餾水、飽和碳酸氫鈉、蒸餾水洗滌，得到油狀物；將洗滌後的油狀物用旋轉蒸發儀進行蒸發，除去混合物中未反應的苯甲醇，設定旋轉蒸發的溫度為60°C，蒸發直到無餾出物為止，得到的物質用乙醇-乙醚進行重結晶，其乙醇與乙醚體積比為1:2，得到乳白色的固體BA-MEL ；(6) PEG-HA-QDs-MEL 的製備將步驟(2)得到的PEG-HA-QDs300mg，取 260mg DCC，0. 05mmol4-二甲氨基吡啶(DMAP)溶於15mL無水二甲基亞碸中，室溫避光磁力攪拌至PEG-HA-QDs全部溶解(約I小時)，加入5mg/mL的BA-MEL水溶液(pH4. 7) 30mL，室溫避光磁力攪拌12h，將其於叔丁醇中通過碳載鈀5wt%氫催化劑脫除苯甲醇，pH為7. 4的磷酸鹽緩衝液透析3天，再用雙蒸水透析3天。冷凍乾燥得反應物粉末，即得產物PEG-HA-QDs-MEL。2.受體介導量子點示蹤靶向給藥系統的MTT實驗(卵巢癌SKOV3細胞)(I)將對數生長期的細胞用胰蛋白酶消化後配製成為濃度為2-10X104個/ml的細胞懸浮液，經過準確細胞技術後按500個細胞/孔接種於96孔板，每孔加100 ill。(2)將平板置37°C、含體積濃度5%C02及飽和溼度條件下24小時後，加入各個細胞樣品對應的藥物血清、生理鹽水血清、以及已稀釋好的藥物，每個樣品濃度設平行的三個孔，對照組加不含樣品的培養液100 yl，再放入培養箱中孵育72小時。(3)每孔加入按5mg/ml新配製的MTT溶液50 iil，溫育4小時，使MTT還原為甲瓚，當在倒置顯微鏡下看到孔板內的細胞周圍出現絲狀紫色結晶體時倒掉上清液，每孔加二甲基亞碸220 iil，用平板搖床搖勻後，使用酶標儀測定光密度值(OD)(檢測波長570nm)，以溶劑對照處理細胞為對照組，按公式計算化合物對細胞的抑制率。MTT實驗結果
權利要求
1.受體介導量子點示蹤美法侖靶向給藥系統，其特徵在於，它是聚乙二醇-透明質酸-量子點-美法侖複合物，簡寫為PEG-HA-QDs-MEL，由PEG與HA醯胺脫水縮合連接，並且在HA接入水溶性CdTe/CdS量子點，最後與藥物MEL醯胺脫水縮合製備得到，其中，PEG-HA-QDs-MEL的組分含量按重量份數計如下，每一重量份為I暈克 美法侖 30-100 份，PEG 600-1500 份，HA 200-500 份，CdTe/CdS 量子點 5-50 份，N，N，二環己基碳二亞胺20-50份，4- 二甲氨基吡啶1-10份，丁二酸酐100-500份，N-羥基硫代琥珀醯亞胺20-50份，I- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺20-50份，亞硫酸氫鈉10-100份。
2.如權利要求I所述的受體介導量子點示蹤美法侖靶向給藥系統的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟，下述每一重量份為I毫克 1)端羧基聚乙二醇的合成及純化 將600-1500重量份聚乙二醇置於帶有冷凝管、攪拌器和溫度計的三口燒瓶中，加入氯仿溶解，待溶解完畢後加入100-500重量份丁二酸酐，加熱溶解，同時加入乾燥的吡啶，攪拌下回流反應2-10小時，停止反應後冷卻至室溫，反應所得混合物減壓蒸發至呈粘稠狀，再加入無水乙醚沉澱得到白色產物，抽濾得濾餅，再用二氯甲烷溶解濾餅，濾去不溶物，力口入無水乙醚沉澱得到白色產物，重複上述操作2次以上，抽濾後濾餅真空乾燥至恆重，得到純化的端羧基聚乙二醇； 2)PEG-HA的製備 將步驟I)得到的端羧基聚乙二醇溶解於200 - 500重量份透明質酸的水解液中，倒入裝有分餾柱和攪拌器的三口燒瓶，加入催化劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺10-50重量份和4-二甲氨基吡啶0. 5-5重量份，在60-140°C下反應2_10小時後，收集100°C餾分，反應結束後冷卻；加入無水乙醇至無沉澱生成，過濾收集沉澱，洗滌沉澱，乾燥沉澱物即得 PEG-HA ； 3)水溶性CdTe/CdS量子點的製備 將5-20重量份碲粉和2-10重量份硼氫化鈉加入水中，在氮氣保護條件下，常溫下磁力攪拌2-5h，得到暗紅色含Te的NaHTe前驅液；稱取2_10重量份CdCl2溶於蒸餾水中，加入2-10重量份巰基丙酸，用濃度lmol/L-2 mol/L的NaOH溶液調節溶液的pH值到8-10 ；把溶液加入三頸瓶中，把新製備的NaHTe加入到氮氣保護下的CdCl2溶液中，溶液的顏色變成透明橙黃色，室溫攪拌，然後轉入到90°C的恆溫水浴中反應0. 5-2 h後，以0. Iml/min速度滴入濃度I V- mol/L-20 u mol/L Na2S的溶液I ml-15 ml,得到CdTe/CdS核殼量子點；全部反應在氮氣保護下完成，反應終止後，加入乙醇，在5 000 r/min下離心分離10-15 min,棄去上層清液，加水使沉澱重新懸浮，重複此過程2次，得到的固體在室溫下自然晾乾，研磨得到CdTe/CdS量子點固體粉末，簡寫為QDs ; 4)PEG-HA-QDs 的製備 稱取5-50重量份QDs溶於水中，室溫避光磁力攪拌至QDs全部溶解，加入5_50重量份N-羥基硫代琥珀醯亞胺與5-50重量份I- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，Ih後加入步驟2)製備的0. I g/ml-I g/ml的PEG-HA的水溶液20ml，室溫避光磁力攪拌12 h，所得產物混合液在pH為7. 4的磷酸鹽緩衝液以透析袋透析，冷凍乾燥得PEG-HA-QDs複合物； 5)美法倫苄酯的製備在裝有溫度計、分水器的三頸燒瓶中加入美法侖30-100重量份，亞硫酸氫鈉10-100重量份和過量苯甲醇在磁力攪拌下進行反應，將反應後所得的混合液依次用蒸餾水、飽和碳酸氫鈉和蒸餾水洗滌，得到油狀物，將洗滌後的油狀物用旋轉蒸發儀進行蒸發，除去未反應苯甲醇，設定旋轉蒸發的溫度為30-60°C，蒸發直到無餾出物為止，蒸發得到的物質用乙醇-乙醚進行重結晶，其乙醇與乙醚體積比為1:2，得到乳白色的固體美法倫苄酯，簡寫為BA-MEL ； 6)PEG-HA-QDs-MEL 的製備 將步驟4)得到的100-500重量份PEG-HA-QDs複合物、10-50重量份N，N』 二環己基碳二亞胺和0. 5-5重量份4- 二甲氨基吡啶溶於無水二甲基亞碸中，室溫避光磁力攪拌至PEG-HA-QDs全部溶解，加入步驟5)所得的pH4. 7的10-50重量份BA-MEL水溶液，室溫避光磁力攪拌12 h,將其在叔丁醇中通過碳載鈕0. 5wt% — 15wt%催化劑氫化脫除苯甲醇,然後用pH為7. 4的磷酸鹽緩衝液透析24-72h，再用雙蒸水透析24_72h，冷凍乾燥得反應物粉末，即 PEG-HA-QDs-MEL 產物。·
3.如權利要求I所述的受體介導量子點示蹤美法侖靶向給藥系統的應用，其特徵在於，應用於製備抗腫瘤藥物。
全文摘要
一種受體介導量子點示蹤靶向給藥系統及其製備方法和應用。其靶向給藥系統是聚乙二醇-透明質酸-量子點-美法侖複合物，簡寫為PEG-HA-QDs-MEL，由PEG與HA醯胺脫水縮合連接，並在HA上接入水溶性CdTe/CdS量子點，最後與藥物MEL製備得到，其中，PEG-HA-QDs-MEL的組分含量按重量份數計為美法侖30-100份，PEG600-1500份，HA200-500份，CdTe/CdS量子點5-50份，DCC20-50份，DMAP1-10份，丁二酸酐100-500份，NHS20-50份,EDC20-50份，亞硫酸氫鈉10-100份。本靶向給藥系統，應用於製備抗腫瘤藥物。
文檔編號A61K31/196GK102743762SQ20121025020
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月19日 優先權日2012年7月19日
發明者劉慧 , 張喻, 徐海星, 徐金巧, 李映萱, 楊昭, 王玉, 王玲, 許沛虎, 黃志軍 申請人:武漢理工大學