一種從沙棘籽中提取生物鹼的方法及其活性成分抗心血管疾病的應用的製作方法
2023-05-08 12:59:06 1
專利名稱：：一種從沙棘籽中提取生物鹼的方法及其活性成分抗心血管疾病的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及提取分離沙棘籽生物鹼有效成分的方法及其抗心血管疾病活性的應用。屬於沙棘屬植物資源的開發利用
技術領域：
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背景技術：
：沙棘籽為胡頹子科(Elaeanaeeae)沙棘屬(Hippophae)植物果實的籽。沙棘具有抗氧化、提高免疫力的功能。據報導沙棘籽乙醇提取物可提高小鼠紅細胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和小鼠全血穀胱甘肽過氧化物酶(GSH—Px)活性，並能降低小鼠肝臟過氧化脂質含量；沙棘籽乙醇提取物可以清除HO*,抑制HO所致的丙二醛的產生，減少HO所致的紅細胞溶血，降低HO所致線粒體腫脹程度，具有抗HO，所致的氧化損傷的作用；同時沙棘籽乙醇提取物能顯著提高小鼠(雌，雄)的碳廓清能力，增強小鼠T淋巴細胞活性，促進溶血素的形成，具有提高小鼠免疫力的功能。有關沙棘籽乙醇提取物抗心肌缺血損傷的研究國內尚未見報導，國外有關的研究也很少。我們在對不同種沙棘籽粕提取物進行研究時，發現其不但有較好的抗氧化活性，也具有很好的抗心肌缺血活性。為充分利用沙棘資源、為缺血性心臟病患者提供更多的治療途徑，進一步開發沙棘果實中的籽，生產抗心肌缺血損傷產品很有必要。參考文獻1.廉永善，陳學林.沙棘屬植物的系統分類.沙棘，1996,9(1):15-24.2.黃輇，史玲芳，王士坤，等.沙棘種植技術與開發利用[M].北京:金盾出版社，1998，1-17,113-123.3.李根前，唐德瑞，趙一慶.沙棘屬植物資源與開發利用.沙棘，2000,(6):22-25.4.於倬德，敖復，廉永善.中國沙棘屬植物的起源、分類、群落和資源.沙棘，1993,(3):19-24.5.廉永善等.沙棘屬植物生物學和化學[M].蘭州:甘肅科學技術出版社,2001:80115.6.BeveridgeT，LiTSC，OomahBD.Seabuckthornproducts:manufactureandcomposition.JAgricFoodGhem，1999,47，3480-3488.7.R6schD,BergmannM，KnorrD,"a/.Structure-antioxidantefficiencyrelationshipsofphenoliccompoundsandtheircontributiontoantioxidantactivityofseabuckthornjuice.JAgricFoodChem,2003，51，4233-4329.8.GaoX，OhlanderM,JeppssonN，etal.Changesinantioxidanteffectsandtheirrelationshiptophytonutrientsinfruitsofseabuckthorn(HippophaerhamnoidesL)duringmaturation.JAgricFoodChem，2000,48:1485—90.9.廉永善.沙棘屬植物天然產物及其主要生理藥理功能.沙棘，2005,18(3):5-16.
發明內容本發明的目的是針對上述現狀，提供一種從沙棘籽中提取生物鹼的方法及其活性成分抗心血管疾病的應用。為達上述目的，本發明採用如下的技術方案依次包括如下內容1、材料沙棘果實中脫油後的籽粕，包括柳葉沙棘、江孜沙棘、肋果沙棘、西藏沙棘、沙棘、稜果沙棘6個種和中國沙棘、雲南沙棘、中亞沙棘、蒙古沙棘4個亞種之任意一種沙棘果實中的籽。2、有效成分的提取A、製備沙棘籽提取物濃縮液以沙棘籽粕為原料，按料液質量比沙棘籽粕乙醇溶液為1:6加入質量濃度10%~70%的乙醇溶液，在3070。C的溫度中提取1~2小時，離心分離出提取液；渣再按料液比1:6加入10%~70%的乙醇，在5060'C的溫度中提取12小時，離心分離出提取液；渣再按料液比1:6加入10%70%的乙醇，在5060。C的溫度中提取12小時，共提取三次，合併提取液，濃縮至少量液體，得沙棘籽提取物濃縮液；B、製備沙棘籽生物鹼粗提物取沙棘籽提取物濃縮液，在攪拌下加入23倍體積的乙酸乙脂，然後靜止56小時，分餾出乙酸乙脂；再在攪拌下加入23倍體積的乙酸乙脂，然後靜止6~8小時，分餾出乙酸乙脂，反覆多次直至乙酸乙脂相無色時止；合併乙酸乙脂相在65'C以下減壓濃縮至無乙酸乙脂味，得沙棘籽生物鹼粗提物；3、有效成分的分離C、製備沙棘籽生物鹼取沙棘籽生物鹼粗提物上樣至AB—8型大孔樹脂柱，先用1倍柱體積水洗滌，再用3倍柱體積質量濃度10%~30%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮，得沙棘籽生物鹼組分。4、沙棘籽生物鹼活性成分的化學組成活性成分A:2-甲基-6-羥基-9-乙胺基色胺，分子式:CuN20,H"分子量:202;活性成分B:5-羥基-8-乙羥基色胺，分子式:Ch)1^02Hu分子量:177;活性成分C:5-羥基-8-乙胺基色胺，分子式:d。N20jHu分子量:176。5、從沙棘籽中提取的生物鹼的應用，其活性成分應用於抗心血管疾病，心肌細胞缺氧/復氧會導致缺血損傷，細胞存活率明顯下降，用沙棘籽生物鹼組分幹預後心肌細胞存活率顯著提高，從而減低心血管疾病的發生。表1.沙棘籽生物鹼活性成分對缺血心肌細胞的影響tableseeoriginaldocumentpage5表2沙棘籽生物鹼對缺血/再灌注損傷心肌細胞中LDH，CK含量的影響tableseeoriginaldocumentpage5*屍<0.05wcontrolgroup,**屍<0.01wcontrolgroup;#屍<0.05vsI/Rgroup,ffffP<0.05wI/Rgroup。本發明的有益效果提取的沙棘籽生物鹼其活性成分應用於抗心血管疾病，有較好的抗心肌缺血活性，對缺血心肌細胞損傷有很好的保護作用。圖1活性成分A的^-NMR圖。圖2活性成分A的13C-NMR圖。圖3活性成分A的DEPT圖。圖4活性成分A的MS圖。圖5活性成分B的^-NMR圖。圖6活性成分B的13C-NMR圖。圖7活性成分B的DEPT圖。圖8活性成分B的MS圖。圖9活性成分C的iH-NMR圖。圖IO活性成分C的"C-NMR圖。18.3和58.4為殘留的乙醇信號。圖11活性成分C的DEPT圖。圖12活性成分C的MS圖。具體實施例方式下面結合實施例及附圖對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限於此。實施例1:將1.0kg沙棘籽粕置於10升三角瓶中，用6升10%的乙醇，在70。C提取1小時，離心分離出提取液，渣再加入6升10%的乙醇，攪拌提取2小時，提取溫度為70°C，提取三次。離心分離除去殘渣，濃縮。濃縮液在攪拌下加入3倍體積的乙酸乙脂，然後靜止5小時，分餾出乙酸乙脂，再在攪拌下加入3倍體積的乙酸乙脂，然後靜止6小時，分餾出乙酸乙脂。反覆多次直至乙酸乙脂相無色時止。合併乙酸乙脂相在65。C以下減壓濃縮至無乙酸乙脂味，得沙棘籽生物鹼粗提物。將沙棘籽生物鹼粗提物上大孔樹脂(型號AB-8)層析柱(60X600mm)，先用水洗脫，再用10%乙醇洗脫，收集10%乙醇洗脫液，濃縮到無乙醇止。置於真空乾燥箱內，控制溫度50-60。C，乾燥3小時，得沙棘籽生物鹼成分。實施例2:將10kg沙棘籽粕置於100升提取罐中，用60升70%的乙醇，在30。C提取l小時，離心分離出提取液，渣再加入60升70%的乙醇，在30。C的溫度下攪拌提取2小時，離心分離除去殘渣，共提取三次。合併清液濃縮。濃縮液在攪拌下加入2倍體積的乙酸乙脂，然後靜止5小時，分餾出乙酸乙脂，再在攪拌下加入3倍體積的乙酸乙脂，然後靜止6小時，分餾出乙酸乙脂。反覆多次直至乙酸乙脂相無色時止。合併乙酸乙脂相在65t:以下減壓濃縮至無乙酸乙脂味，得沙棘籽生物鹼粗提物。將沙棘籽生物鹼粗提物上大孔樹脂(型號AB-8)層析柱(8X100cm)，先用水洗脫，再用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，濃縮到無乙醇止。置於真空乾燥箱內，控制溫度50-60。C，乾燥3小時，得沙棘籽生物鹼成分。實施例3:將50kg沙棘籽粕置於500升提取罐中，用300升50%的乙醇，在50。C提取l小時，離心分離出提取液，渣再加入300升50%的乙醇，在5(TC的溫度下攪拌提取2小時，離心分離除去殘渣，共提取三次。合併清液濃縮到十分之一體積。濃縮液在攪拌下加入2倍體積的乙酸乙脂，然後靜止5小時，餾出乙酸乙脂，再在攪拌下加入3倍體積的乙酸乙脂，然後靜止6小時，分餾出乙酸乙脂。反覆多次直至乙酸乙脂相無色時止。合併乙酸乙脂相在65。C以下減壓濃縮至無乙酸乙脂味，得沙棘籽生物鹼粗提物。將沙棘籽生物鹼粗提物上大孔樹脂(型號AB-8)層析柱(20X180cm)，先用水洗脫，再用20%乙醇洗脫，收集20%乙醇洗脫液，濃縮到無乙醇止。置於真空乾燥箱內，控制溫度50-60。C,乾燥3小時，得沙棘籽生物鹼成分。權利要求1、從沙棘籽中提取生物鹼的方法，其特徵在於依次包括如下步驟A、製備沙棘籽提取物濃縮液以沙棘籽粕為原料，按料液質量比沙棘籽粕∶乙醇溶液為1∶6加入質量濃度10％～70％的乙醇溶液，在30～70℃的溫度中提取1～2小時，離心分離出提取液；渣再按料液比1∶6加入10％～70％的乙醇，在50～60℃的溫度中提取1～2小時，離心分離出提取液；渣再按料液比1∶6加入10％～70％的乙醇，在50-60℃的溫度中提取1～2小時，共提取三次，合併提取液，濃縮至少量液體，得沙棘籽提取物濃縮液；B、製備沙棘籽生物鹼粗提物取沙棘籽提取物濃縮液，在攪拌下加入2～3倍體積的乙酸乙脂，然後靜止5～6小時，分餾出乙酸乙脂；再在攪拌下加入2～3倍體積的乙酸乙脂，然後靜止6～8小時，分餾出乙酸乙脂，反覆多次直至乙酸乙脂相無色時止；合併乙酸乙脂相在65℃以下減壓濃縮至無乙酸乙脂味，得沙棘籽生物鹼粗提物；C、製備沙棘籽生物鹼取沙棘籽生物鹼粗提物上樣至AB-8型大孔樹脂柱，先用1倍柱體積水洗滌，再用3倍柱體積質量濃度10％～30％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮，得沙棘籽生物鹼組分。2、根據權利要求1所述的從沙棘籽中提取生物鹼的方法，其特徵在於所述A步驟中沙棘籽粕，選用柳葉沙棘、江孜沙棘、肋果沙棘、西藏沙棘、沙棘、稜果沙棘6個種及中國沙棘、雲南沙棘、中亞沙棘、蒙古沙棘4個亞種之任意一種沙棘果實中的籽。3、根據權利要求1所述的從沙棘籽中提取生物鹼的方法，其特徵在於所得沙棘籽生物鹼組分的活性成分包括活性成分A活性成分B活性成分C活性成分A:2-甲基-6-羥基-9-乙胺基色胺，活性成分B:5-羥基-8-乙羥基色胺，活性成分C:5-羥基-8-乙胺基色胺。4、權利要求l所述方法從沙棘籽中提取的生物鹼的應用，其特徵在於其活性成分應用於抗心血管疾病，心肌細胞缺氧/復氧會導致缺血損傷，細胞存活率明顯下降，用沙棘籽生物鹼組分千預後心肌細胞存活率顯著提高，從而減低心血管疾病的發生。全文摘要一種從沙棘籽中提取生物鹼的方法及其活性成分抗心血管疾病的應用，屬於沙棘屬植物資源的開發利用
技術領域：
。本發明包括A.以沙棘籽粕為原料，用乙醇溶液提取三次，合併提取液，濃縮，得沙棘籽提取物濃縮液；B.取沙棘籽提取物濃縮液，用乙酸乙酯萃取，分餾出乙酸乙酯，直至乙酸乙酯相無色時止；合併乙酸乙酯相減壓濃縮，得沙棘籽生物鹼粗提物；C.取沙棘籽生物鹼粗提物上樣至AB-8型大孔樹脂柱，先用1倍柱體積水洗滌，再用乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮，得沙棘籽生物鹼組分。提取的沙棘籽生物鹼的應用，其活性成分應用於抗心血管疾病，心肌細胞缺氧/復氧會導致缺血損傷，用沙棘籽生物鹼組分幹預後心肌細胞存活率顯著提高，從而減低心血管疾病的發生。文檔編號A61K36/185GK101612176SQ20091018142公開日2009年12月30日申請日期2009年6月29日優先權日2009年6月29日發明者唐年初,徐德平,梅金龍,胡長鷹,趙晨偉申請人:江南大學