一種靈芝多糖的高效純化技術的製作方法
2023-05-08 09:42:01 1
專利名稱：一種靈芝多糖的高效純化技術的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種靈芝多糖的濃縮分離方法，得到的靈芝多糖純度>60%，產品可廣泛應用與保健品、功能食品、生物醫藥等領域。
二、背景技術
靈芝(Ganoderma I ucidum)是一種營養、保健價值極高的大型擔子菌。自古以來，靈芝就被認為是吉祥、富貴、美好和長壽的象徵，有「仙草」和「瑞草」之稱，中華傳統醫學長期以來一直視之為滋補強身、固本扶正的珍貴中草藥。迄今為止，我們已從靈芝中分離得到150多種化合物，可分為多糖類、三萜類、核苷類、呋喃類、生物鹼類、胺基酸蛋白質類、甾醇類、無機離子、有機鍺等十幾類物質，多糖具有抗腫瘤生長，減少化療毒副作用，鎮靜安神，提高機體免疫力，強心，降血脂血壓，保護肝臟，降血糖，抗氧化及抗衰老等作用。大量研究報告顯示靈芝多糖是靈芝主要生物活性成分，靈芝的各種藥效與靈芝多糖的活性和含量密切相關，而且靈芝多糖已經成為衡量靈芝產品質量優劣的最重要指標之一。靈芝多糖是由肽多糖、葡萄糖、雜多糖等多糖均一體組成的混合物，是靈芝中的主要有效成分。現代醫學研究表明靈芝多糖有許多重要的生理功能(I)免疫調節功能；(2)抗腫瘤作用；⑶防止衰老；⑷降低血糖、血脂作用；(6)抗血栓抗血凝作用；(5)消除自由基等，在醫藥保健品開發等許多領域都具有廣闊的開發前景，而且靈芝多糖的保健功能已經成為目前保健食品及藥品的研究焦點。靈芝多糖的純化可以按分子大小和形狀進行分級(如分級沉澱，分子篩等)，也可按分子所帶電荷的性質進行分級(如電泳，離子交換層析等)。分級沉澱只能用來初步純化，所製備樣品純度較低，而分子篩、電泳、離子交換層析等一般處理量少、濃縮時間長、成本高、不適合大規模工業化生產。自20世紀60年代研製成功高滲透性的膜後，超濾技術迅速發展起來並已成功的從實驗室應用到大規模工業化生產，其目標物質收率高、生物活性保護好、能耗低，適於工業化生產。
發明內容
技術問題本發明的目的是提供一種靈芝多糖的濃縮分離方法，該方法克服了蒸發濃縮和大量乙醇沉澱對多糖活性和大量有機溶劑引入的缺點。同時該方法簡便，易得，靈芝多糖無毒、安全和高活性。所提取的靈芝多糖得率、純度較高，可廣泛應用與保健品、功能食品、生物醫藥等領域。技術方案靈芝多糖的濃縮分離方法，步驟如下①稱取靈芝子實體粉，加入28倍純水混勻，利用超聲波細胞粉碎機，功率為680W提取17min，抽濾去除靈芝殘渣；②提取液經0. 2 i! m微濾除去包含有機膠體、機械顆粒的雜質；
③微濾後的透過液進行超濾處理，料液用蠕動泵輸送到超濾膜，膜的截留分子量為50kDa，膜面積為0. lm2，表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當料液濃縮至四分之一體積時，結束超濾過程；超濾時，溫度為35 V ;操作壓力進口壓力為0. 82bar,出口壓力為 0. 68bar。跨膜壓差AP 為 0. 75bar ；④濃縮液用4倍體積乙醇沉澱，乙醇濃度為95%，凍幹後稱重，得一種靈芝多糖粗品，該靈芝多糖粗品的純度為61. 32%。多糖含量的測定方法採用硫酸苯酚法，精密稱取靈芝子實體粉2g，分別採用熱水浸提和超聲波提取工藝，抽濾去除濾渣，將濾液定溶到250ml容量瓶中，搖勻。精密吸取樣液0. 5ml，置15ml試管中，並用蒸懼水補至2ml,分別加入1111161%苯酹和5ml濃硫酸,搖勻，30°C水浴20min,冷卻後在490nm處測定吸光值A。以105°C下烘乾至恆重的葡萄糖為標準品，製作標準曲線。有益效果 本發明與傳統的蒸發濃縮方法相比得到的靈芝多糖純度高、時間短，並且有利於簡化後續的純化工藝，同時起到了濃縮和初步分離的作用。在靈芝多糖的開發應用中，分離提取是最關鍵的步驟之一，它不僅影響著產品的純度，還與產品的活性價值有著密切的相關性。目前多糖在製備過程中，大多通過蒸發方式對提取液進行濃縮，即便是採用真空濃縮，溫度也要超過60°C，非真空蒸發方式溫度更高，長時間加熱不僅對產品感官品質有影響，而且對多糖生物活性也有影響。針對上述情況，本發明採用了對多糖提取液採用微濾結合超濾的濃縮分離技術。提取液經0. 2 y m微濾除去有機膠體、機械顆粒等雜質。料液用蠕動泵輸送到膜表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當料液濃縮至至四分之一左右，結束超濾過程。料液先過截流分子量為IOOkD的超濾膜，透過液再依次過50kDa、30kDa、10kDa、3kDa、IkDa(膜面積為0.1m2)的超濾膜，如錯誤！未找到引用源。所示。濃縮液用四倍體積乙醇沉澱，用4500r/min離心15min,棄去上清液,沉澱分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗漆三次後，冷凍乾燥。根據各組分質量選擇超濾膜孔徑大小。實驗條件為溫度35°C;操作壓力進口壓力為 0. 82bar,出口壓力為 0. 68bar。跨膜壓差AP = (0. 82+0. 68)/2 = 0. 75bar。在對超濾膜孔徑選擇的基礎上，確定了靈芝多糖超濾分離的最佳條件摸的孔徑50KDa，操作溫度35°C;操作壓力進口壓力為0. 82bar，出口壓力為0. 68bar。跨膜壓差AP=(0. 82+0. 68)/2 = 0. 75bar。經過超濾後靈芝多糖的純度達到了 61. 32% (圖2、表I)。此外，IL提取液用微濾結合超濾的方法比真空旋轉蒸發濃縮節約50%時間，大大簡化了靈芝多糖的濃縮、純化過程。表I蒸發濃縮和超濾濃縮製備多糖純度比較
濃縮方式多糖純度(％)
_]真空旋轉蒸52.6
0.2 微濾+50KD 超濾_69A1_本發明克服了傳統加熱濃縮時間長，多糖純度低，產品品質差等缺點，本工藝具有選擇性高、操作時間短、溶劑消耗量少、有效成分純度高等優點，所得到了靈芝多糖純度高，安全、無毒，產品可廣泛應用於食品、化妝品、生物醫學等領域。
四
圖I是超濾分離工藝流程圖2是靈芝多糖的超濾膜選擇
五具體實施例方式靈芝購於江蘇南通安惠生物科技有限公司實施例I :真空旋轉蒸發濃縮靈芝多糖①稱取20克靈芝子實體粉，加入560ML純水混勻，用超聲波細胞粉碎機(浙江寧波新芝公司；型號JY98-III超聲波細胞粉碎機)680W提取17min，抽濾去除靈芝殘渣②使用旋轉蒸發設備將濾液濃縮至140ML ；③邊攪拌邊緩緩向濃縮液中加入560ML的95%乙醇，4°C下醇沉12h，用4500rpm離心15min，棄去上清液，沉澱分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌三次，冷凍乾燥得靈芝粗多糖粉末，粗多糖純度為52.6%。實施例2 :超濾濃縮分離靈芝粗多糖①稱取20克靈芝子實體粉，加入560ML純水混勻，用超聲波細胞粉碎機(浙江寧波新芝公司；型號JY98-III超聲波細胞粉碎機)680W提取17min，抽濾去除靈芝殘渣；②提取液經0. 2 y m微濾除去有機膠體、機械顆粒等雜質。③微濾後的透過液進行超濾處理，料液用蠕動泵輸送到膜(50kDa，膜面積為
0.Im2)表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當料液濃縮至四分之一體積左右，結束超濾過程。濃縮液用4倍體積乙醇沉澱(95%)，凍幹後稱重，得一種靈芝多糖粗品，純度為69. 11%。
採用本發明與傳統熱水提取方法相比，靈芝多糖的純度提高31%。
權利要求
1.一種靈芝多糖粗品，其特徵如下 它是由靈芝子實體粉末採用超聲波提取，提取液微濾、超濾、濃縮、乙醇沉澱、冷凍乾燥得到一種靈芝多糖粗品，其純度為61. 32%。
2.一種製備權利要求I所述的靈芝多糖粗品的方法，其特徵是由下列步驟組成 ①稱取靈芝子實體粉，加入28倍純水混勻，利用超聲波細胞粉碎機，功率為680W提取17min,抽濾去除靈芝殘洛； ②提取液經0.2 y m微濾除去包含有機膠體、機械顆粒的雜質； ③微濾後的透過液進行超濾處理，料液用蠕動泵輸送到超濾膜，膜的截留分子量為50kDa，膜面積為0. lm2，表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當料液濃縮至四分之一體積時，結束超濾過程；超濾時，溫度為35°C ;操作壓力進口壓力為0. 82bar,出口壓力為0. 68bar。跨膜壓差A P為0. 75bar ； ④濃縮液用4倍體積乙醇沉澱，乙醇濃度為95%，凍幹後稱重，得一種靈芝多糖粗品。
全文摘要
本發明公開了一種靈芝多糖微濾結合超濾的高效綠色純化技術。以超聲波提取的靈芝多糖溶液為實驗材料，提取液經0.2μm微濾除去有機膠體、機械顆粒等雜質。微濾後的透過液進行超濾處理，料液用蠕動泵輸送到膜(50kDa，膜面積為0.1m2)表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當料液濃縮至四分之一體積左右，結束超濾過程，4倍體積乙醇沉澱(95％)，凍幹後稱重。實驗條件為溫度35℃；操作壓力進口壓力為0.82bar，出口壓力為0.68bar。跨膜壓差ΔP＝(0.82+0.68)/2＝0.75bar。經過超濾後靈芝多糖的純度達到了61.32％，大大簡化了靈芝多糖的濃縮及進一步的純化過程。所得的靈芝多糖可廣泛用於藥品和保健食品的基料。
文檔編號A61P3/10GK102718881SQ20121021973
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月29日 優先權日2012年6月29日
發明者安辛欣, 方勇, 楊文建, 林德祥, 胡秋輝, 董豔紅, 趙立豔, 辛志宏, 鄭惠華, 陳坤, 陳貴堂 申請人:南京農業大學, 南京財經大學