一種毛冬青凍乾粉針劑及其製備方法

2023-05-08 11:59:21

專利名稱：一種毛冬青凍乾粉針劑及其製備方法
技術領域：
本發明屬中藥製藥技術領域，具體涉及一種毛冬青凍乾粉針劑及其製備方法。
背景技術：
毛冬青為冬青科植物毛冬青的乾燥根，是我國南方常用中藥，具有活血通脈、消腫止痛、清熱解毒之功效，臨床上廣泛用於治療冠心病、心絞痛和脈管炎等疾病。文獻報導，毛冬青中所含的黃酮類化合物是主要有效成分。已上市的有毛冬青片、毛冬青膠囊和毛冬青注射液，其中所含的主要有效成分均為黃酮類化合物。片劑、膠囊劑、注射液(WS3-B-3786-98)和複方毛冬青注射液(CN93114604，用於治療各種病毒性疾病)製備方法中對毛冬青均採用水提醇沉方法進行提取，除雜的各步由於沉澱的吸附、包裹，對於有效成分的損失很大。申請號為CN00127593的專利申請文獻中雖然經過處理使得製成的提取物中總黃酮和總皂苷的含量大於或等於50％，但是用於治療勃起功能障礙等症。對於心血管疾病的治療來說，其中所含的總皂苷為非活性成分，應該除去不要。而且大量皂苷的存在，限制了藥物不能用於靜脈注射，因為皂苷可以使紅細胞破裂，造成溶血或紅細胞凝聚(即凝血)的現象，給機體帶來嚴重的危害。注射液對穩定性要求高，在攜帶、儲藏、運輸時容易破碎，帶來許多麻煩。
在資料檢索中未發現有關毛冬青凍乾粉針劑的任何報導。

發明內容
本發明的目的是公開一種富含活性成分、療效好、副作用小、方便使用的可用於肌內注射或靜脈注射的毛冬青凍乾粉針製劑。
本發明的另一個目的是提供上述凍乾粉針製劑的製備方法。
毛冬青中除含有有效成分總黃酮外，還含有大量的鞣質。鞣質若不去除，會在注射時使患者有疼痛的感覺，使病人難於接受。但是鞣質和黃酮都含有羥基，性質相似，若用普通的除去鞣質的方法，在除去鞣質的同時，使黃酮類有效成分損失很多。鞣質的分子量普遍較大，而黃酮類化合物的分子量較小，利用超濾法，選擇合適的分子篩可以除去大部分的鞣質而對黃酮類化合物幾乎沒有損失。毛冬青提取物經聚醯胺柱吸附，用水洗脫後，柱上吸附的主要是黃酮類化合物和皂苷類化合物，利用聚醯胺對黃酮類化合物和皂苷類化合物的吸附能力的不同，選用合適的洗脫溶劑可以除去大量的皂苷類成分。然後再用鹼液洗脫，最終得到以總黃酮為有效部位的提取物。
本發明通過以下技術方案實現。
一、製備方法(1)原料藥的處方為毛冬青1.2-2.0重量份；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用6-12倍量的水提取1-3次，每次1-2小時，合併提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000-20000轉/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚醯胺柱，先用4-6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用乙醇溶液洗脫至Molisch反應為陰性，棄去稀乙醇洗脫液，再換用鹼性水溶液洗脫，收集鹼洗脫液，用酸調pH值為中性，減壓濃縮，乾燥，粉碎，得到毛冬青水提物2.0-4.5重量份。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入凍幹賦型劑2.5-5.0重量份，加注射用水至規定量，調節pH值至5.0-6.5，灌裝，冷凍乾燥，即得。
二、製劑含量測定含量測定方法採用毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)質量標準中含量測定項下的方法進行測定。編號1毛冬青注射液(廣東省博羅先鋒藥業集團有限公司)；編號2毛冬青注射液(按照CN00127593的專利申請文獻方法製備)；編號3本發明毛冬青凍乾粉針劑，由北京乾露春科技有限公司提供。結果見表1。
表1 製劑中總黃酮(以無水蘆丁計)含量測定編號樣品含量(mg/支)批次1231 41.3 53.7 60.52 40.6 50.2 57.73 38.7 52.8 59.6以上含量測定結果說明，本發明的毛冬青凍乾粉針劑的有效成分總黃酮的含量明顯高於編號1的毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)的含量，也高於編號2的毛冬青注射液(按照CN00127593的專利申請文獻方法製備)。說明本發明的製備方法更加合理，更加科學，更具有實用性。
三、提取物含量測定含量測定方法採用毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)質量標準中含量測定項下的方法進行測定。1號提取物(按照毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)中的製法所得)；2號提取物(按照CN00127593的專利申請文獻方法製備)；3號提取物(按照本發明的方法製備)，由北京乾露春科技有限公司提供。結果見表2。
表2 提取物中總黃酮(以無水蘆丁計)含量測定編號樣品含量(％)批次123124.2 43.5 55.7226.6 44.2 53.8325.3 41.8 52.4以上含量測定結果說明，本發明的製備方法得到的提取物中的有效成分總黃酮含量明顯高於1號提取物(按照毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)中的製法所得)和2號提取物(按照CN00127593的專利申請文獻方法製備)。說明本發明的製備方法更加合理，更加科學，更具有實用性。
四、溶血實驗編號1毛冬青注射液(按照CN00127593的專利申請文獻方法製備)；編號2本發明毛冬青凍乾粉針劑，由北京乾露春科技有限公司提供。
取編號1和編號2的相同濃度的生理鹽水稀釋液各0.3ml，加生理鹽水2.2ml與2％兔紅細胞生理鹽水混懸液2.5ml，搖勻，置於37℃的恆溫水浴中，觀察1小時。結果見表3。
表3 溶血實驗結果編號現象1 +2 -注+表示有溶血現象；-表示無溶血現象。
以上溶血實驗結果說明，本發明的凍乾粉針劑的製備方法去除了其中的非活性的皂苷類成分，不會對人體造成溶血和凝血現象。所用本發明不僅可用於肌內注射，還可用於靜脈注射。
五、藥理實施例以下藥理實驗所用陽性對照藥毛冬青注射液(按照CN00127593的專利申請文獻方法製備)和本發明毛冬青凍乾粉針劑均由北京乾露春科技有限公司提供。
1.對小鼠缺氧耐力的影響實驗實驗方法取健康昆明種小鼠30隻，體重20～24g。隨機分成對照組，毛冬青注射液組、本發明毛冬青凍乾粉針劑組。每組10隻，雌雄各半，分籠飼養。以人常規治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量＝已知動物給藥量×待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給生理鹽水，1次/天，連續7d。於末次給藥後1h，將小鼠分別置於體積為150ml磨口瓶中，內放15g鈉石灰，密閉觀察其存活時間。結果見表4。
表4 對小鼠常壓缺氧的影響(X±SD)組別鼠數(只) 平均存活時間(min)對照組 1015.61±3.76毛冬青注射液組 1029.77±3.26*本發明毛冬青凍乾粉針劑組1035.13±3.82*#注與對照組比較*P＜0.01；與毛冬青注射液組比較#P＜0.05。
本發明毛冬青凍乾粉針劑和毛冬青注射液均能提高小鼠常壓缺氧耐力，平均存活時間比對照組顯著延長(P＜0.01)；本發明毛冬青凍乾粉針劑和毛冬青注射液相比，平均存活時間也有差異(P＜0.05)。說明本發明毛冬青凍乾粉針劑的藥理作用強於毛冬青注射液。
2.對大鼠體內血栓形成的影響將大鼠隨機分成3組，每組10隻，分別為生理鹽水對照組、毛冬青注射液組、本發明凍乾粉針劑組。將各組動物給藥(生理鹽水組給予等體積的生理鹽水)，每日1次，連續給藥7天，末次給藥後1小時，將大鼠用10％水合氯醛，按0.3g/kg體重麻醉後固定，分離左頸總動脈，在血栓儀上以2mA電流刺激血管7min後，記錄血栓形成時間。結果見表5。
表5 對大鼠體內血栓形成的影響(X±SD)組別鼠數(只) 血栓形成時間(min)對照組 10640.78±95.22毛冬青注射液組 10774.24±82.16*本發明毛冬青凍乾粉針劑組10827.38±76.44*#注與對照組比較*P＜0.01；與毛冬青注射液組比較#P＜0.05本發明毛冬青凍乾粉針劑和毛冬青注射液都能延長大鼠體內血栓的形成(P＜0.01)；本發明毛冬青凍乾粉針劑和毛冬青注射液相比，延長時間也有差異(P＜0.05)。說明本發明毛冬青凍乾粉針劑的藥理作用強於毛冬青注射液。
3.對垂體後葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響取體重250～300g Wistar大鼠30隻，雌雄各半，隨機分為3組，每組10隻，連續ip.給藥7d。各組動物於末次給藥30min後，腹腔注射25％烏拉坦0.4ml/100g麻醉，仰臥固定，標準電壓1mv＝15mm，走紙速度50mm/s，記錄II導聯心電圖。舌下靜脈注射垂體後葉素0.75u/kg於5s內注射完。每30s記錄一次心電圖。大鼠靜脈注射垂體後葉素1min內，大多數表現為心率減慢，T波高聳，ST段抬高等變化。分別觀察用藥前後30s、1min及50min上T波增殖的變化。結果見表6。
表6 對垂體後葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響。
鼠數 T波增值(mV)組別(只) 30s1min 5min生理鹽水組 10 0.35±0.16 0.26±0.140.18±0.027毛冬青注射液組 10 0.23±0.08*0.16±0.07*0.087±0.016*本發明毛冬青凍乾粉針劑組10 0.20±0.07*# 0.12±0.06*#0.068±0.014*#注與對照組比較*P＜0.01與毛冬青注射液組比較#P＜0.05本發明毛冬青凍乾粉針劑和毛冬青注射液均能顯著降低30s、1min及5min時的T波增殖(P＜0.01)；本發明毛冬青凍乾粉針劑和毛冬青注射液相比，降低的程度也有差異(P＜0.05)。說明本發明毛冬青凍乾粉針劑的藥理作用強於毛冬青注射液。
六、製備實施例實施例1(1)原料藥的處方為毛冬青20kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用12倍量的水提取3次，每次2小時，合併提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以20000轉/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚醯胺柱，先用4倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用60％乙醇溶液洗脫至Molisch反應為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為11.0的氫氧化鈉水溶液洗脫，收集鹼洗脫液，用鹽酸調pH值為中性，減壓濃縮，乾燥，粉碎，得到毛冬青水提物450g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖250g，加注射用水至規定量，調節pH值至6.5，灌裝，冷凍乾燥，即得毛冬青凍乾粉針劑1000支。
實施例2(1)原料藥的處方為毛冬青12kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用6倍量的水提取1次，每次1小時，合併提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000轉/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚醯胺柱，先用6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用40％乙醇溶液洗脫至Molisch反應為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為8.5的碳酸鈉水溶液洗脫，收集鹼洗脫液，用硫酸調pH值為中性，減壓濃縮，乾燥，粉碎，得到毛冬青水提物200g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇、果糖和乳糖500g，加注射用水至規定量，調節pH值至5.0，灌裝，冷凍乾燥，即得毛冬青凍乾粉針劑1000支。
實施例3(1)原料藥的處方為毛冬青16kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用10倍量的水提取2次，每次2小時，合併提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以15000轉/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚醯胺柱，先用5倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用50％乙醇溶液洗脫至Molisch反應為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為9.0的氫氧化鉀水溶液洗脫，收集鹼洗脫液，用醋酸調pH值為中性，減壓濃縮，乾燥，粉碎，得到毛冬青水提物350g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入聚乙烯吡咯烷酮350g，加注射用水至規定量，調節pH值至6.0，灌裝，冷凍乾燥，即得毛冬青凍乾粉針劑1000支。
實施例4(1)原料藥的處方為毛冬青14kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用8倍量的水提取3次，每次1小時，合併提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以12000轉/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚醯胺柱，先用4倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用45％乙醇溶液洗脫至Molisch反應為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為9.5的碳酸氫鈉水溶液洗脫，收集鹼洗脫液，用磷酸調pH值為中性，減壓濃縮，乾燥，粉碎，得到毛冬青水提物270g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入右旋果糖和乳糖430g，加注射用水至規定量，調節pH值至5.5，灌裝，冷凍乾燥，即得毛冬青凍乾粉針劑1000支。
實施例5(1)原料藥的處方為毛冬青18kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用9倍量的水提取2次，每次2小時，合併提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以18000轉份的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚醯胺柱，先用5倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用47％乙醇溶液洗脫至Molisch反應為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為10.5的碳酸鉀水溶液洗脫，收集鹼洗脫液，用冰醋酸調pH值為中性，減壓濃縮，乾燥，粉碎，得到毛冬青水提物410g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇和葡聚糖290g，加注射用水至規定量，調節pH值至6.2，灌裝，冷凍乾燥，即得毛冬青凍乾粉針劑1000支。
實施例6(1)原料藥的處方為毛冬青17kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用8倍量的水提取3次，每次1小時，合併提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以16000轉/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚醯胺柱，先用6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用55％乙醇溶液洗脫至Molisch反應為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為10.0的氫氧化鉀和碳酸氫鈉水溶液洗脫，收集鹼洗脫液，用鹽酸調pH值為中性，減壓濃縮，乾燥，粉碎，得到毛冬青水提物385g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入葡萄糖和果糖315g，加注射用水至規定量，調節pH值至5.7，灌裝，冷凍乾燥，即得毛冬青凍乾粉針劑1000支。
本發明一次1支，一日1-2次。
權利要求
1.一種毛冬青凍乾粉針劑，其特徵在於它是由毛冬青水提物2.0-4.5重量份和藥用輔料2.5-5.0重量份組成；其中毛冬青水提物中有效部位總黃酮的重量百分含量大於或等於50％。
2.根據權利要求1所述的毛冬青凍乾粉針劑，其中藥用輔料為凍幹賦型劑，它是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一種、兩種或幾種的混合物。
3.一種毛冬青凍乾粉針劑的製備方法，其特徵包括以下步驟(1)原料藥的處方為毛冬青1.2-2.0重量份；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用6-12倍量的水提取1-3次，每次1-2小時，合併提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000-20000轉/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚醯胺柱，先用4-6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用乙醇溶液洗脫至Molisch反應為陰性，棄去稀乙醇洗脫液，再換用鹼性水溶液洗脫，收集鹼洗脫液，用酸調pH值為中性，減壓濃縮，乾燥，粉碎，得到毛冬青水提物；(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入凍幹賦型劑，加注射用水至規定量，調節pH值至5.0-6.5，灌裝，冷凍乾燥，即得。
4.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，其中洗脫聚醯胺柱的乙醇溶液的濃度為40％-60％。
5.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，其中洗脫聚醯胺柱的乙醇溶液的濃度為45％-50％。
6.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於其中鹼性水溶液為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉中的一種或幾種的混合物的水溶液。
7.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，其中鹼性水溶液的pH值為8.5-11.0。
8.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，其中鹼性水溶液的pH值為9.0-10.0。
9.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於其中所述的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、醋酸、冰醋酸中的一種或幾種的混合物。
全文摘要
本發明公開了一種毛冬青凍乾粉針劑及其製備方法。它是由毛冬青中提取的總黃酮有效部位以及藥用輔料組成的。總黃酮有效部位採用水提、超濾、聚醯胺柱除雜的方法獲得，佔到了毛冬青提取物中的50％以上。本發明既可以用於肌內注射，也可用於靜脈注射。含量測定結果和藥理實驗結果說明，本發明有效成分含量更高，藥理作用更強，具有很好的預防和治療心血管疾病的作用。
文檔編號A61P9/14GK1628832SQ20041007408
公開日2005年6月22日 申請日期2004年9月3日 優先權日2004年9月3日
發明者張平 申請人:張平