一種酶解活性肽納米硒的製備工藝的製作方法

2023-05-07 21:34:46 2

一種酶解活性肽納米硒的製備工藝的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1）酶解動物腸黏膜提取肝素後的副產品，滅酶，得到酶解液；所加複合酶與所述豬腸黏膜液的質量比為5~7:100；（2）將殼聚糖、硒化合物和維生素C或檸檬酸按一定比例混合，水相中製備納米硒溶液；（3）將納米硒溶液加入溫度為55~65℃的酶解液中，得到混合液，將混合液加熱至45~60℃反應1~2h，得到成液；（4）將所述成液濃縮、乾燥得到成品。本發明充分利用蛋白資源，同時還避免了對環境的汙染，同時以殼聚糖作為介質，吸附納米硒與多肽，形成一個多功能的富含納米硒和短肽鏈以及平衡胺基酸的活性肽蛋白粉，營養價值高、易吸收，亦能預防多種疾病。
【專利說明】一種酶解活性肽納米硒的製備工藝 【技術領域】
[〇〇〇1] 本發明涉及一種生產蛋白粉的方法，具體涉及一種酶解活性肽納米硒的製備工 藝。 【背景技術】
[0002] 腸黏膜含有很豐富的蛋白資源，但卻沒有被充分開發利用，國內腸黏膜主要用於 提取肝素，而後被當做廢棄物，造成汙染與浪費。專利號為CN101209082的中國專利於2011 年8月31日公開了一種功能性飼料蛋白腸膜蛋白粉的製備方法，以豬腸黏膜或其提取肝素 後的下腳料為原料，利用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶分步酶解後，加入大豆皮或小麥麩皮等載 體最後乾燥而製得所述蛋白粉。該方法能有效利用廢棄的腸黏膜，降低了汙染與浪費，同時 也解決了我國蛋白飼料短缺的現狀。但是該方法由於要分步酶解，工藝複雜，操作難度大， 成本高，製得的蛋白粉口感不佳，僅能作為飼料，沒有將腸黏膜內的蛋白的利用發揮到最 佳。而且所得蛋白粉的功能性單一。
【發明內容】

[0003] 本發明的目的是公開一種可將腸黏膜內的蛋白利用發揮到最佳的酶解活性肽納 米硒的製備工藝。為了達到上述目的，本發明採用如下的技術方案：一種酶解活性肽納米硒 的製備工藝，步驟如下：（1)選用複合酶酶解動物腸黏膜提取肝素後的副產品，然後滅酶， 得到酶解液；所加複合酶與所述豬腸黏膜液的質量比為5~7:100 ;所述複合酶為木瓜蛋白 酶、中性蛋白酶和風味酶的混合物；（2)將殼聚糖、硒化合物和維生素 C或檸檬酸按一定比 例混合，水相中製備納米硒溶液；（3)將納米硒溶液加入溫度為55飛5°C的酶解液中，得到 混合液，將混合液加熱至45飛0°C反應廣2h，得到成液；（4)將所述成液濃縮、乾燥得到成 品。
[0004] 通過本發明的製備工藝： 1.硒是人體生命活動中必需的微量元素之一，是人體內的抗氧化劑，能提高人體免疫 力，具有多種生物功能。與無機硒相比，有機硒的利用價值好、易於吸收、毒性小等優勢，逐 漸代替無機硒，納米硒則在許多方面更優於有機硒，低毒高效：其體外清除自由基效率為有 機硒的2. 5倍，為無機硒的5倍；而且納米硒在是它在人體內的營養計量和毒性計量之間 的範圍較無機硒和有機硒要寬很多。殼聚糖是一種直鏈型高分子聚合物，具有良好的生 物兼容性，在藥用載體、醫藥等方面有廣泛的應用，在人體內吸收率近1〇〇 %，具有提高免 疫，抑制癌腫細胞生長，促進肝脾抗體形成，促進鈣及礦物質的吸收，增殖雙岐桿菌、乳酸菌 等人體有益菌群，能預防多種疾病。將具有生物學意義的納米硒與殼聚糖結合起來，納米態 的硒被殼聚糖吸附包裹成穩定的粒子，在與高生物活性的胺基酸螯合，產物兼有納米硒和 殼聚糖免疫調節，養顏抗衰，預防癌症及心血管疾病等功效，結合生物體極易消化利用的蛋 白質，用於人們營養保健或者疾病治療或輔助治療，具有廣泛的應用前景。
[0005] 2.利用動物腸黏膜提取肝素後的副產品酶解製備高性能的生物活性肽，其免疫 球蛋白的含量高，僅次於血漿蛋白；然後利用酶解獲得的該活性肽與由殼聚糖、硒化合物混 合，由於殼聚糖大分子中有活潑的羥基和氨基，活性肽可以很好的反應結合在殼聚糖上，從 而製得納米硒並螯合成活性肽納米硒，螯合的溫度過高或過低，影響活性肽的活性，而且溶 液的粘度減弱，殼聚糖對納米硒以及活性肽的包裹吸附作用減弱，通過本發明的具體條件 控制得到高活性、易吸收，富含納米硒和短肽鏈以及平衡胺基酸的活性肽蛋白粉，易於消化 吸收，提高機體免疫力，預防多種疾病，改善健康狀況。
[0006] 3.木瓜蛋白酶和中性蛋白酶都是多功能蛋白酶，其特異性低，可以水解大部分蛋 白質，木瓜蛋白酶對pH的要求低，在酸性、中性、鹼性環境下均能分解蛋白質，對工藝要求 低，中性蛋白酶水解度高，同時能夠優化所得多肽的口感，再結合用於出去多肽苦味的風味 酶，如此，在保證活性肽的活性和長度以及量的同時，所得產品的口感更好；本發明利用三 種酶的協同增效作用從而可以有效提取動物腸黏膜提取肝素後的副產品中的活性肽； 4.維生素 C可以促成納米硒的形成，同時還為反應體系提供一個酸性環境；殼聚糖分 子上的氨基性質活潑，具有很好的吸附能力，而且殼聚糖在酸性環境中所構成的微環境具 有良好的懸浮、乳化、穩定作用，可以很好的穩定納米硒的作用，殼聚糖還是一個很好的緩 釋載體，可以逐步將硒釋放出來，起到持久補硒作用。
[0007] 作為優選，所述木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶的質量混合比為 100?150:50?100:10。
[0008] 作為優選，所述殼聚糖、硒化合物和維生素C或檸檬酸的質量比為 80?100:1:10?15。
[0009] 作為優選，步驟（2)中所述殼聚糖質量分數為2ΧΚΓ4飛Χ10Λ所述硒化合物的濃 度為2~3mmol/L，所述維生素 C或檸檬酸的濃度為5~7 g/L。
[0010] 作為優選，所述殼聚糖為羧甲基殼聚糖、水溶性殼聚糖和殼寡糖中的一種或多種 混合物。
[0011] 作為優選，步驟（2)中將得到的所述納米硒溶液進行超聲波處理3(T60min。
[0012] 超聲波處理有利於粒子分散，使其粒度減小，降低聚合度，易於下一步的吸附。
[0013] 作為優選，所述超聲波功率為10(Tl50w、頻率為15?20kHz，連續處理5?lOmin後間 歇 5min。
[0014] 超聲波可以一定程度上降低殼聚糖的分子量，而低分子量殼聚糖同超高分子量殼 聚糖相比具有很強的殺菌和優越的生物活性，但是超聲波功率過大、頻率過快則會導致殼 聚糖降解，間歇性的使用超聲波處理，效果更顯著。
[0015] 作為優選，步驟（3)中向所述酶解液中再加入所述酶解液質量0. 1~0. 3%的半胱氨 酸或甲硫氨酸。
[0016] 納米硒可以跟半胱氨酸或甲硫氨酸中的巰基相互作用，半胱氨酸或甲硫氨酸作為 軟介質，更加穩定了殼聚糖、胺基酸和納米硒之間的吸附效果。
[0017] 作為優選，所述動物腸黏膜為豬腸黏膜，所述硒化合物為亞硒酸鈉。
[0018] 作為優選，步驟（4)中所述乾燥方式為噴霧乾燥，所述噴霧乾燥進風口溫度為 19(T210°C，出風口溫度為70?80°C。
[0019] 通過實施上述的技術方案，本發明具有如下的有益效果：本發明利用豬腸黏膜提 取肝素後的副產品，充分利用蛋白資源，同時還避免了對環境的汙染，工藝中以酶解的方式 得到多肽，其酶解徹底，得到的生物活性多肽含量高，而且免疫蛋白含量高，利於提高機體 的免疫力，同時以殼聚糖作為介質，吸附納米硒與多肽，形成一個多功能的富含納米硒和短 肽鏈以及平衡胺基酸的活性肽蛋白粉，營養價值高、易吸收，亦能預防多種疾病。 【具體實施方式】
[0020] 實施例1 : 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至65°C，加入複合酶，用小蘇 打調pH至7. 0,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至90°C滅酶半小時，得到酶解液， 保溫在60°C ;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為100:50:10的混合物， 其總質量與所述溶解液的質量比為6:100 ; (2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和維生素 C按質 量比為80:1:10混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在60°C，溶液中殼聚糖質量分數 為2X 10Λ硒化合物的濃度為2mmol/L，維生素 C的濃度為5 g/L ; (3)將納米硒溶液加入 溫度為60°C的酶解液中，得到混合液，混合液在60°C螯合2h，得到成液；（4)將所述成液濃 縮、噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為200°C、出風口溫度為80°C。
[0021] 實施例2: 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其6倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至60°C，加入複合酶，用小蘇 打調pH至7. 8,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至90°C滅酶半小時，得到酶解液， 保溫在55°C ;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為150:100:10的混合 物，其總質量與所述溶解液的質量比為7:100 ; (2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和維生素 C按 質量比為100:1:15混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在60°C，溶液中殼聚糖質量 分數為5X 10Λ硒化合物的濃度為3mmol/L，維生素 C的濃度為7g/L ; (3)將納米硒溶液加 入溫度為55°C的酶解液中，再加入酶解液質量0. 1%的半胱氨酸或甲硫氨酸，得到混合液， 混合液在60°C螯合2h，得到成液；（4)將所述成液濃縮、噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥 時進風口溫度為190°C、出風口溫度為75°C。
[0022] 實施例3 : 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至60°C，加入複合酶，用小蘇 打調pH至6. 5,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至95°C滅酶20分鐘，得到酶解液， 保溫在55°C ;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為120:80:10的混合物， 其總質量與所述溶解液的質量比為5:100 ; (2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和維生素 C按質 量比為90:1:12混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在65°C保溫2小時，再超聲波 100W、15kHz處理30分鐘，處理6分鐘間歇7分鐘，溶液中殼聚糖質量分數為5X 10_4,硒化 合物的濃度為3mmol/L，維生素 C的濃度為6g/L ; (3)將納米硒溶液加入溫度為60°C的酶 解液中，再加入酶解液質量〇. 1%的半胱氨酸，得到混合液，混合液在45°C螯合1. 5h，得到成 液；（4)將所述成液濃縮、噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為210°C、出風口 溫度為70°C。
[0023] 實施例4 : 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至60°C，加入複合酶，用小 蘇打調pH至6. 5,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至95°C滅酶20分鐘，得到酶解 液，保溫在55°C;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為120:80:10的混合 物，其總質量與所述溶解液的質量比為5:100 ;(2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和檸檬酸按 質量比為90:1:12混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在65°C保溫2小時，再超聲波 150W、20kHz處理60分鐘，處理10分鐘間歇10分鐘，溶液中殼聚糖質量分數為5X 10_4,硒 化合物的濃度為3mmol/L，檸檬酸的濃度為6g/L ; (3)將納米硒溶液加入溫度為60°C的酶 解液中，再加入酶解液質量〇. 3%的半胱氨酸，得到混合液，混合液在45°C螯合1. 5h，得到成 液；（4)將所述成液濃縮、噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為210°C、出風口 溫度為70V。
[0024] 實施例5 : 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至60°C，加入複合酶，用小 蘇打調pH至6. 5,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至95°C滅酶20分鐘，得到酶解 液，保溫在55°C;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為120:80:10的混合 物，其總質量與所述溶解液的質量比為5:100 ;(2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和檸檬酸按 質量比為90:1:12混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在65°C保溫2小時，再超聲波 120W、18kHz處理50分鐘，處理5分鐘間歇5分鐘，溶液中殼聚糖質量分數為5X 10Λ硒化 合物的濃度為3mmol/L，檸檬酸的濃度為7g/L ; (3)將納米硒溶液加入溫度為60°C的酶解液 中，再加入酶解液質量〇. 2%的甲硫氨酸，得到混合液，混合液在45°C螯合1. 5h，得到成液； (4)將所述成液濃縮、噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為210°C、出風口溫度 為 7QV。
[0025] 實施例6 : 同實施例3,不同之處在於步驟（2)中沒有進行超聲波處理。
[0026] 實施例7 : 同實施例3,不同之處在於步驟（3)中沒有加入半胱氨酸或甲硫氨酸。
[0027] 實施例8 : 同實施例3,不同之處在於步驟（3)中加入1%的半胱氨酸或甲硫氨酸。
[0028] 對比例1 : 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至65°C，加入複合酶，用小蘇 打調pH至7. 0,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至90°C滅酶半小時，得到酶解液， 保溫在60°C ;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為50:150:10的混合物， 其總質量與所述溶解液的質量比為6:100 ; (2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和維生素 C按質 量比為80:1:10混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在60°C，溶液中殼聚糖質量分數 為2X 10Λ硒化合物的濃度為2mmol/L，維生素 C的濃度為5 g/L ; (3)將納米硒溶液加入 溫度為60°C的酶解液中，得到混合液，混合液在60°C螯合2h，得到成液；（4)將所述成液濃 縮、噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為200°C、出風口溫度為80°C。
[0029] 對比例2 : 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至65°C，加入複合酶，用小蘇 打調pH至7. 0,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至90°C滅酶半小時，得到酶解液， 保溫在60°C ;複合酶為木瓜蛋白酶、鹼性蛋白酶和風味酶以質量比為100:50:10的混合物， 其總質量與所述溶解液的質量比為6:100 ; (2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和維生素 C按質 量比為80:1:10混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在60°C，溶液中殼聚糖質量分數 為2 X 10Λ硒化合物的濃度為2mmol/L，維生素 C的濃度為5 g/L ; (3)將納米硒溶液加入 溫度為60°C的酶解液中，得到混合液，混合液在60°C螯合2h，得到成液；（4)將所述成液濃 縮、噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為200°C、出風口溫度為80°C。
[0030] 對比例3 : 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至65°C，加入複合酶，用小蘇 打調pH至7. 0,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至90°C滅酶半小時，得到酶解液， 保溫在60°C ;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為100:50:10的混合物， 其總質量與所述溶解液的質量比為6:100 ; (2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和維生素 C按質 量比為60:1:30混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在60°C，溶液中殼聚糖質量分數 為1 X 10Λ硒化合物的濃度為4mmol/L，維生素 C的濃度為8g/L ; (3)將納米硒溶液加入溫 度為60°C的酶解液中，得到混合液，混合液在60°C螯合2h，得到成液；（4)將所述成液濃縮、 噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為200°C、出風口溫度為80°C。
[0031] 對比例4: 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至45°C，加入複合酶，調pH 至5. 0,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至90°C滅酶半小時，得到酶解液，保溫在 60°C ;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為100:50:10的混合物，其總質 量與所述溶解液的質量比為4:100 ; (2)將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和維生素 C按質量比 為80:1:10混合，在水相中製備納米硒溶液，溫度控制在60°C，溶液中殼聚糖質量分數為 5X 10Λ硒化合物的濃度為lmmol/L，維生素 C的濃度為2g/L ; (3)將納米硒溶液加入溫度 為70°C的酶解液中，得到混合液，混合液在40°C螯合半小時，得到成液；（4)將所述成液濃 縮、噴霧乾燥得到成品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為250°C、出風口溫度為100°C。
[0032] 對比例5 : 一種酶解活性肽納米硒的製備工藝，步驟如下：（1)在酶解灌中將豬腸黏膜提取肝素 後的副產品的粉末以其5倍質量的水溶解得到溶解液，溫度升至65°C，加入複合酶，用小蘇 打調pH至7. 0,酶解豬腸黏膜6小時後，將酶解灌溫度升至90°C滅酶半小時，得到酶解液， 保溫在60°C ;複合酶為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風味酶以質量比為100:50:10的混合物， 其總質量與所述溶解液的質量比為6:100 ; (2)將所述酶解液過濾濃縮、噴霧乾燥得到成 品，其中噴霧乾燥時進風口溫度為200°C、出風口溫度為80°C。
[0033] 對上述實施例和對比例的工藝將等量的腸黏膜提取肝素後的副產品製備所得到 的成品進行活性肽含量以及大小的檢測以及功效檢測。
[0034] 活性寡肽含量：取等量的成品溶於等量的水中，得到檢測液進行檢測；其中活性 肽含量檢測所用儀器為日立L-8800型胺基酸自動分析儀，活性肽的大小檢測儀器為高效 液相色譜儀；功效檢測是對抵抗力差的人進行臨床試驗。
[0035] 結果如表1 : 表1 :
【權利要求】
1. 一種複合胺基酸螯合納米硒葉面肥的製備方法，其特徵在於：包括以下步驟：（1) 將血球蛋白粉用複合酶酶解得到酶解液；（2)向所述酶解液中加入重量比為3-5%的糖醇， 在5(T70°C條件下反應l?2h，得到反應液；所述糖醇為甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇和丙三 糖醇混合所得到的混合糖醇；（3)向所述反應液中加入納米硒，在45飛5°C下反應l~2h， 得到初液；（4)向所述初液中加入所述初液重量5-6%的納米二氧化鈦，在45飛5°C下反應 0. 5?lh，然後升溫至90?95°C保溫l(T20min，形成終產品。
2. 根據權利要求1所述一種複合胺基酸螯合納米硒葉面肥的製備方法，其特徵在於： 所述甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇和丙三糖醇的混合比為廣3:2?5: f 3: f 3。
3. 根據權利要求1所述一種複合胺基酸螯合納米硒葉面肥的製備方法，其特徵在於： 所述納米硒為將亞硒酸鈉和檸檬酸混合製備所得；所述亞硒酸鈉和檸檬酸的混合重量比為 5?10:10?20。
4. 根據權利要求1所述一種複合胺基酸螯合納米硒葉面肥的製備方法，其特徵在於： 所述複合酶為胰酶、木瓜蛋白酶和風味酶，酶解條件為50-58°C，pH8. 0-8. 5,酶解4. 5-5. 5 小時。
5. 根據權利要求4所述一種複合胺基酸螯合納米硒葉面肥的製備方法，其特徵在於： 所述胰酶、木瓜蛋白酶和風味酶的質量混合比為1-3:1-2:0. 5-1。
6. 根據權利要求1所述一種複合胺基酸螯合納米硒葉面肥的製備方法，其特徵在於： 步驟（4)所述中向所述初液中還加入了佔所述初液重量0. 01-0. 06%的生物表面活性劑，所 述生物表面活性劑為糖脂類表面活性劑或脂肽類表面活性劑。
7. 根據權利要求6所述一種複合胺基酸螯合納米硒葉面肥的製備方法，其特徵在於： 所述生物表面活性劑為脂肽類表面活性劑，所述脂肽類表面活性劑為表面活性素類或伊枯 草菌素或桿菌黴素。
8. 根據權利要求1所述一種複合胺基酸螯合納米硒葉面肥的製備方法，其特徵在於： 步驟（3)中所述反應中還加入了螯合劑，所述螯合劑為檸檬酸、蘋果酸和乳酸中的一種或多 種。
【文檔編號】C12P21/06GK104095243SQ201410338733
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月17日 優先權日:2014年7月17日
【發明者】陸傑坤 申請人:湖州五福農業科技有限公司