一種海洋微藻的養殖方法與流程

2023-05-07 16:22:41 1

本發明涉及海洋微藻技術領域，尤其涉及一種實驗室與生產實踐相結合的海洋微藻快速養殖方法。

背景技術：

海洋微藻中含有蛋白質、胺基酸、色素、dha和epa等豐富的營養物質。目前廣泛被應用於水產育苗方面，是魚、蝦等高檔海鮮良好的優質餌料。但在生產實踐應用當中，由實驗室基礎養藻到池塘生產實踐應用過程當中仍然存在諸多問題，例如：藻類生長緩慢、轉移到池塘中出現藻類停止生長或者死亡現象，以及藻類的諸多應激反應等。

技術實現要素：

有鑑於此，本發明創造旨在提出一種海洋微藻的養殖方法，能夠解決實驗室到生產實踐過度不穩定的情況，不但實現了海洋微藻生長緩慢的問題，且同時保證微藻親本的活性，本發明也適合在大的養殖場所保證微藻的穩定快速增長。

本發明創造提供的海洋微藻的養殖方法，為適應環境轉變提供三個階段的培養，具體分為一級培養、二級培養和三級培養，每個階段培養時間優選為5天。

其中，所述一級培養的培養基包括：fecl31.6～3mg、(nh4)6mo7o240.08～0.2mg、hcl2～3mg；所述二級培養的培養基包括：mgso411～13mg、cacl20.5～2mg、h2so40.2～0.35ml；所述三級培養的培養基包括：檸檬酸鐵0.01～0.1mg、mgcl12～14mg、葡萄糖0.05～0.2mg。在每個階段提供不同的主要營養成分，能夠幫助海洋微藻逐步適應實驗室環境至生產實踐環境的轉變，提高微藻抗環境幹擾能力，維持生長的穩定性。

優選的，所述一級培養的培養基包括：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；所述二級培養的培養基包括：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；所述三級培養的培養基包括：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。

進一步，所述一級培養的海水經過高溫高壓滅菌，優選的滅菌條件為120℃，30min；所述二級培養的海水經過中高溫滅菌，優選的滅菌條件為90℃，10min；所述三級培養的海水經過曝氣和日曬處理，優選的曝氣和日曬時間為2h以上。海水是微藻直接接觸和存貨的直接環境因素，經不同級別的處理，使得海水環境逐級接近於生產實踐的養殖環境，避免海水微藻在養殖環境驟變造成的適應不良。

進一步，所述一級培養、二級培養和三級培養的接種密度均優選為106個細胞/ml。

進一步，所述一級培養和二級培養的外部環境為，光照時間：黑暗時間＝12：12，光照強度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，溼度為20％；所述三級培養的外部環境為，自然條件下，定期潑灑尿素追肥。

優選的，所述三級培養的外部環境下，追肥潑灑時間每次間隔7天，濃度為0.03g/l至0.08g/l，優選為0.05g/l。

優選的，所述海水鹽度為30。

本發明的方法能夠解決海洋微藻的實驗室與實際生產的對接關係，直接從實驗室到自然條件下的微藻轉移過程中，容易使海洋微藻發生不適，產生停止生長及死亡的現象。本發明分為三級培養過程，通過改變培養條件及培養基配方從而解決藻類的應激反應。一級培養貼近實驗室全程無菌操作過程，為海洋微藻提供微量生長環境保證下一步的接種量；二級培養為開放式培養過程，保證微藻的活性以及在逐漸提高微藻的適應能力；三級培養為開放式貼近自然條件下的培養過程，此階段為藻大量培養過程以及海洋微藻的批量產出，在這個過程中海洋微藻基本能夠實現在自然條件下的良好生長。

具體實施方式

本發明創造的示意性實施例及其說明用於解釋本發明創造，並不構成對本發明創造的不當限定。

實施例一

一級培養的海水為經過高溫高壓滅菌(120℃，30min)，海水用量200～500ml，藻的接種量為100ml(密度為106個細胞/ml)，培養基為：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；二級培養的海水為經過(90℃，10min)處理，海水量為500～5000ml，藻的接種量為300ml(密度為106個細胞/ml),培養基為：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；三級培養的海水經過曝氣和日曬兩個小時以上，海水量為5000ml以上，藻的接種量為500ml(密度為106個細胞/ml),培養基為：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。一級培養和二級培養的外部環境為：光照：黑暗時間＝12：12，光照強度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，溼度為20％；三級培養為自然條件下，定期潑灑尿素追肥，潑灑時間每次間隔7天，濃度為0.05g/l。

採用的藻種為海鏈藻，藻的增長率為50.7％。

實施例二

一級培養的海水為經過高溫高壓滅菌(120℃，30min)，海水用量200～500ml，藻的接種量為100ml(密度為106個細胞/ml)，培養基為：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；二級培養的海水為經過(90℃，10min)處理，海水量為500～5000ml，藻的接種量為300ml(密度為106個細胞/ml),培養基為：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；三級培養的海水經過曝氣和日曬兩個小時以上，海水量為5000ml以上，藻的接種量為500ml(密度為106個細胞/ml),培養基為：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。一級培養和二級培養的外部環境為：光照：黑暗時間＝12：12，光照強度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，溼度為20％；三級培養為自然條件下，定期潑灑尿素追肥，潑灑時間每次間隔7天，濃度為0.06g/l。

採用的藻種為叉邊金藻，藻的增長率為41.％。

實施例三

一級培養的海水為經過高溫高壓滅菌(120℃，30min)，海水用量200～500ml，藻的接種量為100ml(密度為106個細胞/ml)，培養基為：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；二級培養的海水為經過(90℃，10min)處理，海水量為500～5000ml，藻的接種量為300ml(密度為106個細胞/ml),培養基為：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；三級培養的海水經過曝氣和日曬兩個小時以上，海水量為5000ml以上，藻的接種量為500ml(密度為106個細胞/ml),培養基為：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。一級培養和二級培養的外部環境為：光照：黑暗時間＝12：12，光照強度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，溼度為20％；三級培養為自然條件下，定期潑灑尿素追肥，潑灑時間每次間隔7天，濃度為0.05g/l。

採用的藻種為赤潮異彎藻，藻的增長率為38％。

實施例四

一級培養的海水為經過高溫高壓滅菌(120℃，30min)，海水用量200～500ml，藻的接種量為100ml(密度為106個細胞/ml)，培養基為：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；二級培養的海水為經過(90℃，10min)處理，海水量為500～5000ml，藻的接種量為300ml(密度為106個細胞/ml),培養基為：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；三級培養的海水經過曝氣和日曬兩個小時以上，海水量為5000ml以上，藻的接種量為500ml(密度為106個細胞/ml),培養基為：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。一級培養和二級培養的外部環境為：光照：黑暗時間＝12：12，光照強度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，溼度為20％；三級培養為自然條件下，定期潑灑尿素追肥，潑灑時間每次間隔7天，濃度為0.03g/l。

採用的藻種為扁藻，藻的增長率為22.2％。

以上所述僅為本發明創造的較佳實施例而已，並不用以限制本發明創造，凡在本發明創造的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明創造的保護範圍之內。