用於水產養殖驅蟲/抑蟲的植物源複合製劑及其製備方法與流程
2023-05-02 21:39:25 2
1.本發明屬於水產養殖技術領域，具體涉及一種用於水產養殖驅蟲/抑蟲的植物源複合製劑及其製備方法。
背景技術：
2.我國是世界第一的水產養殖大國，水產養殖產量已連續33年位居全球第一，為人類生活提供了大量的蛋白質資源。近年來，隨著養殖生態環境的不斷變化及養殖品種的不斷更新，水產養殖病害發生日趨複雜，防控壓力越來越大，養殖用藥量日益加劇，影響了水產品的質量安全和水產養殖業的健康發展。
3.水產養殖的病害主要包括細菌性、真菌性、病毒性和寄生蟲性病害，其中寄生蟲病的防治比較棘手，難以達到理想效果。目前，常規採用的是用重金屬鹽類(硫酸銅、硫酸鋅)、農藥(辛硫磷、氯氰菊酯等)和化學藥物(甲苯咪唑等)來殺滅寄生蟲進行防治。但此類藥物使用效果受水體環境、氣候等因素影響比較大，且本身具有一定的毒性，對養殖環境和養殖生物具有風險性。若使用劑量控制不好，不但沒有殺滅寄生蟲，反而會殺死水體中的藻類，引起水體缺氧，同時造成養殖生物死亡，引起養殖事故。每年因藥物使用不當而引發的死魚事件不勝枚舉，漁業損失嚴重。因此人們在寄生蟲病的防治上開始將目光轉向中草藥。經相應的探索，百部、印楝、苦參等中藥材開始應用，並取得了一定的效果。但中草藥存在主要成份不明，使用量大，效果不穩定，使用不方便等諸多問題，直接影響使用前景。因此，在水產養殖上急需開發一種新的植物源複合製劑。
技術實現要素：
4.本發明的目的在於克服現有技術中的不足，提供一種用於水產養殖驅蟲/ 抑蟲的植物源複合製劑及其製備方法，所述複合製劑以抑制寄生蟲繁殖、驅避寄生蟲在水產動物上的附著來替代現有的殺滅寄生蟲的防治理念，具有驅避效果好且穩定，驅蟲/抑蟲譜廣，使用量小，使用方便，安全性高的特點，可保證水產品質量安全，滿足生態健康綠色養殖的要求。
5.為實現本發明的上述目的，本發明採用以下技術方案：
6.本發明提供一種用於水產養殖驅蟲/抑蟲的植物源複合製劑，包括以下原料組分：複合植物提取液80.1-114.5份、青皮桔油0.1-1.5份、增稠劑0.1-1.0份、乳化穩定劑0.2-2.5份；所述複合植物提取液為桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉和辛夷的混合提取液。所述桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷的質量比優選 9-13.5:3-10:0.5-2.5:2.5-4:3-8:4-10:0.5-2.5；所述增稠劑優選黃原膠；所述乳化穩定劑優選聚山梨酯-60或聚山梨酯-80。
7.所述複合植物提取液的製備方法包括如下步驟：
8.(1)取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷，將各原料分別洗淨、乾燥後粉碎，得各植物粉，備用；優選的，所述乾燥的溫度為45-60℃，乾燥至水分
含量小於3％，所述粉碎至過20-60目；
9.(2)分別取各植物粉，混合均勻後加水進行水蒸汽蒸餾提取，收集餾出液，得第一提取液；優選的，所述混合後的植物粉與水的質量比為1:4-6；所述水蒸汽蒸餾的時間為30-250min，水蒸汽蒸餾至水的質量減少至初始添加量的 5-10％wt；
10.(3)向步驟(2)水蒸汽蒸餾後的植物殘渣中加入乙醇浸提，收集浸提液，得第二提取液；優選的，所述植物殘渣與乙醇的質量比為45-60:40-55，所述乙醇的濃度為95-100％v/v；所述浸提的溫度為30-32℃，所述浸提的時間為 60-120min；
11.(4)將第一提取液和第二提取液合併，即得所述複合植物提取液；優選的，所述第一提取液和第二提取液的質量比為80-99.5:0.1-15。
12.本發明中各組分的作用如下：
13.桉樹葉：桃金孃科植物藍桉的葉，幼嫩葉對生，葉片卵形，基部心形，無柄，有白粉；成熟葉片革質，披針形，鐮狀，兩面有腺點，氣味芳香而苦涼。桉樹葉中含揮髮油，為無色或淡黃色的液體，有特殊的香味，略似樟腦，性質辛涼，具抗菌、驅避等作用。目前使用的都是桉樹葉精油，價格高，驅蟲效果有限。
14.生薑：為姜科、姜屬的多年生草本植物(高40～100cm)的新鮮根莖。生薑含有辛辣和芳香成分，辛辣成分為一種芳香性揮髮油脂中的「姜油酮」，其中主要為姜油萜、水茴香、樟腦萜、姜酚、桉葉油精、澱粉、粘液等。生薑具解表散寒、溫中止嘔、溫肺止咳和解毒等功效。生薑中國各地均有種植，採收方便。
15.佩蘭：菊科，澤蘭屬多年生草本植物，高可達100cm。根莖橫走，淡紅褐色。全草供藥用，味辛，性平。利溼、健胃、清暑熱。有清熱利溼、解毒消腫、消炎、止渴、利尿的作用。
16.香茅草：是禾本科、香茅屬的多年生密叢型具香味草本，主要生長在熱帶和亞熱帶地區，適應性極強，喜溫暖溼潤環境，不耐寒，喜光照，對土壤的要求不高，以較為疏鬆、肥沃而排水良好的砂質壤土為佳。在我國主要分布在南方地域。全草含酸性皂甙類物質、鞣質、蛋白質、粘液質、苦味質、糖類、酚性物質和揮髮油，如檸檬烯、茴香醛和α-松油醇等，有消毒、殺菌與治療神經痛、肌肉痛的效果。
17.碎米薺：為十字花科植物曲枝碎米薺cardamine flexuosawith.的全草。全草長15-33cm，主根細長，側根呈鬚根狀。莖由基部分枝，多且近等長，表面有細溝稜。奇數羽狀複葉，小葉3-7對，小葉長卵形，邊緣1-3齒裂。長角果長 1.2-2cm，寬約1mm。種子長圓形而扁，長約1mm，邊緣或先端有極狹的翅，黃褐色，氣微清香。多分布於長江以南各地。味甘，性平。清熱利溼、安神、止血。常用於溼熱瀉痢、熱淋、白帶、心悸、失眠、虛火牙痛、小兒疳積、吐血、便血、疔瘡。
18.互葉白千層：是桃金孃科白千層屬植物，灌木。樹皮灰白色，厚而鬆軟，呈薄層片狀剝落；小枝圓柱形；葉互生，披針形，綠；花無梗，密集成頂生的穗狀花序；蒴果半球形，直徑3～4mm；種子倒卵或近三角形，長約1mm；花期每年多次，中國海南、廣東、廣西、重慶等地有栽培。其新鮮枝葉可提取精油，可以高效、無毒、無刺激地去除皮膚表面的真菌與細菌。
19.辛夷：木蘭科植物望春花、玉蘭或武當玉蘭的乾燥花蕾。冬末春初花未開放時採收，除去枝梗，陰乾。其生長於較溫暖地區，主要分布湖北、安徽、浙江、福建一帶，含揮髮油，如檸檬醛、丁香油酚，1,8-桉葉素等，味辛，溫。具收斂、抗病毒、祛風、通竅作用。
20.青皮桔油：也叫橙皮桔油，屬於植物精油，是從鮮甜橙皮、桔皮、柚皮中提取的一種
物質，主要成份是d-檸檬烯。青皮桔油是一種純天然的物質，安全有效，能夠溶解害蟲體表蠟質層，封閉蟲卵。
21.水產寄生蟲病主要由纖毛蟲、指環蟲、孢子蟲、車輪蟲、小瓜蟲、錨頭鰠等引起，單一驅避組分只能針對其中一種或幾種有效，並不能達到全面有效。本發明提供的複合製劑，以桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷的混合提取液為主要成分，輔以青皮桔油並進行適合的重量配比。其中，1)桉樹葉富含天然活性物質1,8-桉葉素和單萜烯、倍半萜烯、醇、酯、醛以及酮的天然混合物，易於穿透寄生蟲蟲體的生物膜結構，導致細胞膜和細胞核膜的液化和擴張，細胞膜和核膜的穩定性喪失、滲透性增強，細胞內和細胞核內的內容物和細胞液滲出，寄生蟲機體機能的紊亂。2)互葉白千層富含萜品烯-4-醇、對松油精、檸檬油精、桉油酚、香油腦、茴香素等，可驅散蟲體，殺滅蟲卵，收斂動物表皮，減少蟲叮咬後真菌的侵入，與碎米薺復配作用加強。 3)生薑含揮髮油2％～3.5％，油中主要含姜烯、姜醇、β-倍半水芹烯、莰烯、薑黃烯等，還有姜辣醇、6-姜醇、姜烯酚、薑酮；香茅草含酸性皂甙類物質、鞣質、蛋白質、粘液質、苦味質、糖類、酚性物質和揮髮油，如檸檬烯、茴香醛和α-松油醇等，二者能在一定的程度上進一步加強驅散蟲體作用，使遠離動物機體，同時緩解蟲體叮咬後產生的疼痛、瘙癢等不適，減輕動物機體應激反應。4)佩蘭含揮髮油0.5％～2％，包括聚傘花素(對異丙基甲苯)、乙酸橙花醇酯，葉含香豆精、鄰香豆酸，麝香草氫醌，以及其他三萜類化合物，可體內殺蟲，修復動物機體被蟲體損傷部位，減輕蟲體叮咬以後的炎症。5)辛夷含揮髮油、黃酮、木脂素、生物鹼等，能夠影響蟲體攝食，加強對蟲體的產卵驅避，同時在抑制蟲體正常發育方面起到增效劑的作用。6)青皮桔油能促進複合製劑在水產動物體表和組織的滲透而提高附著性。以上各組分共同作用，協同達到驅蟲/抑蟲，以及增強水產動物抵抗蟲體侵擾的效果。本發明集驅散、抑制繁殖、觸殺以及促進損傷恢復多種功效於一體，防治效果顯著、驅蟲抑蟲譜廣。
22.本發明所述複合植物提取液的製備方法，以桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷為複合植物源，先進行水蒸汽蒸餾提取揮發性和水溶性活性組分，然後以乙醇對所述提取後的植物殘渣浸提非揮發性且不溶於水的活性組分，並對各提取階段的提取工藝參數進行了反覆優化，最終形成的製備方法，經前期大量應用效果驗證，可以最大限度富集複合植物源的活性成分，從而保證最佳的驅蟲/抑蟲效果。
23.本發明所述複合製劑的製備方法，具體步驟為：分別取各原料，攪拌使混合均勻，即得。所述製備方法簡單易操作，在常溫下即可完成，設備要求低，適宜規模化生產應用。
24.本發明複合製劑的應用方法：1)外用：每畝水面每米水深潑灑100～150ml，連用2～5次；2)內服：每100kg飼料中添加0.5～1.0kg，根據寄生蟲爆發情況連用3～5天。
25.本發明的有益效果為：
26.本發明提供的複合製劑，1)可有效抑制養殖水體環境中的纖毛蟲、指環蟲、孢子蟲、車輪蟲、小瓜蟲、錨頭鰠等增殖，驅避其在水產動物體上的附著，快速修復蟲體附著組織，保護水產動物免受寄生蟲的侵害；2)可潑灑於養殖水體或直接添加於飼料中投喂，使用方便，使用量小，效果穩定，可從機體內外兩方面消除寄生蟲對水產動物的侵染，減少甚至不用殺蟲劑，促進消化，減輕病害的發生，達到提高養殖產量、質量和效益的目的；3)本發明為植物源殺蟲劑，易降解，殘效期短，對環境和食物無汙染，驅蟲/抑蟲的同時不會對水產動物造成毒害。
具體實施方式
27.為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明的技術方案進行詳細的描述。顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動的前提下所得到的所有其它實施方式，都屬於本發明所保護的範圍。其中，1份代表1g；本發明所採用的各原料均可通過市購獲得。青皮桔油的有效含量10％，黃原膠的有效含量99％，聚山梨酯-80的有效含量99％。
28.實施例1
29.一種用於水產養殖驅蟲/抑蟲的植物源複合製劑，原料組成為：複合植物提取液98份、青皮桔油0.9份、黃原膠0.3份、聚山梨酯-60 0.8份；製備方法為：分別取各原料，常溫下攪拌使混合均勻，分裝後，包裝入庫；
30.其中，複合植物提取液的製備方法為：
31.(1)取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷(桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷的質量比為13:10:2.5:4:6:7:2.5)，將各原料分別洗淨、45℃乾燥至水分含量小於3％，之後粉碎至過20目，得各植物粉，備用；
32.(2)分別取各植物粉，混合均勻後置於蒸餾器中，加入5倍質量的水，室溫下靜置80min，然後加熱蒸餾120min至水量蒸至剩餘8％wt，期間補充純淨水2次至原有水量，冷卻後收集餾出液，得第一提取液；
33.(3)向步驟(2)水蒸汽蒸餾後的植物殘渣中加入無水乙醇(植物殘渣與乙醇的質量比為60:40)，32℃浸提100min，2500r/min離心15min，收集上清液，得第二提取液；
34.(4)將第一提取液和第二提取液按質量比86.5:11.5混合均勻，即得。
35.實施例2
36.一種用於水產養殖驅蟲/抑蟲的植物源複合製劑，原料組成為：複合植物提取液98.2份、青皮桔油0.8份、黃原膠0.3份、聚山梨酯-80 0.7份；製備方法為：分別取各原料，常溫下攪拌使混合均勻，分裝後，包裝入庫；
37.其中，複合植物提取液的製備方法為：
38.(1)取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷(桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷的質量比為13.5:8:2:3.5:6.5:6:2)，將各原料分別洗淨、50℃乾燥至水分含量小於3％，之後粉碎至過40目，得各植物粉，備用；
39.(2)分別取各植物粉，混合均勻後置於蒸餾器中，加入5倍質量的水，室溫下靜置90min，然後加熱蒸餾180min至水量蒸至剩餘9％wt，期間補充純淨水4次至原有水量，冷卻後收集餾出液，得第一提取液；
40.(3)向步驟(2)水蒸汽蒸餾後的植物殘渣中加入無水乙醇(植物殘渣與乙醇的質量比為58:42)，30℃浸提105min，2800r/min離心12min，收集上清液，得第二提取液；
41.(4)將第一提取液和第二提取液按質量比87.5:10.7混合均勻，即得。
42.實施例3
43.一種用於水產養殖驅蟲/抑蟲的植物源複合製劑，原料組成為：複合植物提取液98份、青皮桔油0.8份、黃原膠0.5份、聚山梨酯-80 0.7份；製備方法為：分別取各原料，常溫下攪拌使混合均勻，分裝後，包裝入庫；
44.其中，複合植物提取液的製備方法為：
45.(1)取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷(桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷的質量比為13.2:8.5:2:3.5:6.5:5:2.3)，將各原料分別洗淨、52℃乾燥至水分含量小於3％，之後粉碎至過50目，得各植物粉，備用；
46.(2)分別取各植物粉，混合均勻後置於蒸餾器中，加入5倍質量的水，室溫下靜置88min，然後加熱蒸餾105min至水量蒸至剩餘6％wt，期間補充純淨水4次至原有水量，冷卻後收集餾出液，得第一提取液；
47.(3)向步驟(2)水蒸汽蒸餾後的植物殘渣中加入無水乙醇(植物殘渣與乙醇的質量比為55:45)，31℃浸提108min，3500r/min離心13min，收集上清液，得第二提取液；
48.(4)將第一提取液和第二提取液按質量比85.5:12.5混合均勻，即得。
49.實施例4
50.一種用於水產養殖驅蟲/抑蟲的植物源複合製劑，原料組成為：複合植物提取液80.1份、青皮桔油0.1份、黃原膠0.1份、聚山梨酯-60 0.2份；製備方法為：分別取各原料，常溫下攪拌使混合均勻，分裝後，包裝入庫；
51.其中，複合植物提取液的製備方法為：
52.(1)取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷(桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷的質量比為9:3:0.5:2.5:3:4:0.5)，將各原料分別洗淨、60℃乾燥至水分含量小於3％，之後粉碎至過20目，得各植物粉，備用；
53.(2)分別取各植物粉，混合均勻後置於蒸餾器中，加入4倍質量的水，室溫下靜置60min，然後加熱蒸餾30min至水量蒸至剩餘5％wt，期間補充純淨水 2次至原有水量，冷卻後收集餾出液，得第一提取液；
54.(3)向步驟(2)水蒸汽蒸餾後的植物殘渣中加入95％v/v乙醇(植物殘渣與乙醇的質量比為45:40)，30℃浸提120min，2500r/min離心15min，收集上清液，得第二提取液；
55.(4)將第一提取液和第二提取液按質量比80:0.1混合均勻，即得。
56.實施例5
57.一種用於水產養殖驅蟲/抑蟲的植物源複合製劑，原料組成為：複合植物提取液114.5份、青皮桔油1.5份、黃原膠1.0份、聚山梨酯-80 2.5份；製備方法為：分別取各原料，常溫下攪拌使混合均勻，分裝後，包裝入庫；
58.其中，複合植物提取液的製備方法為：
59.(1)取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷(桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷的質量比為13.5:10:2.5:4:8:10:2.5)，將各原料分別洗淨、45℃乾燥至水分含量小於3％，之後粉碎至過60目，得各植物粉，備用；
60.(2)分別取各植物粉，混合均勻後置於蒸餾器中，加入6倍質量的水，室溫下靜置90min，然後加熱蒸餾250min至水量蒸至剩餘10％wt，期間補充純淨水4次至原有水量，冷卻後收集餾出液，得第一提取液；
61.(3)向步驟(2)水蒸汽蒸餾後的植物殘渣中加入無水乙醇(植物殘渣與乙醇的質量比為60:55)，32℃浸提60min，4000r/min離心10min，收集上清液，得第二提取液；
62.(4)將第一提取液和第二提取液按質量比99.5:15混合均勻，即得。
63.對比例1
64.與實施例1的區別僅在於複合植物提取液製備方法的步驟(1)中，取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、互葉白千層枝葉、辛夷(桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、互葉白千層枝葉、辛夷的質量比為13:10:2.5:4:13:2.5)。
65.對比例2
66.與實施例1的區別僅在於複合植物提取液製備方法的步驟(1)中，取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、辛夷(桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、辛夷的質量比為13:10:2.5:4:13:2.5)。
67.對比例3
68.與實施例1的區別僅在於複合製劑的原料組成為：複合植物提取液98份、黃原膠0.3份、聚山梨酯-60 0.8份。
69.對比例4
70.與實施例1的區別僅在於複合植物提取液的製備方法為：
71.(1)取新鮮桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷(桉樹葉、生薑、佩蘭、香茅草、碎米薺、互葉白千層枝葉、辛夷的質量比為13:10:2.5:4:6:7:2.5)，將各原料分別洗淨、45℃乾燥至水分含量小於3％，之後粉碎至過20目，得各植物粉，備用；
72.(2)分別取各植物粉，混合均勻後加入無水乙醇(植物粉與乙醇的質量比為60:40)，32℃浸提100min，2500r/min離心15min，收集上清液，得第一提取液；
73.(3)向步驟(2)提取後的植物殘渣中加入5倍質量的水，室溫下靜置80min，然後加熱蒸餾120min至水量蒸至剩餘8％wt，期間補充純淨水2次至原有水量，冷卻後收集餾出液，得第二提取液；
74.(4)將第一提取液和第二提取液按質量比86.5:11.5混合均勻，即得。
75.本發明用於水產養殖驅蟲/抑蟲效果試驗研究：
76.1、研究地點：江蘇南京地區的青蝦養殖試驗塘a1-a5、江蘇蘇州地區的加州鱸魚養殖試驗塘b1-b5，以及江蘇揚州地區的鯽魚養殖池塘試驗塘c1-c5。
77.2、使用方法：將本發明實施例1及對比例1-4各樣品以每畝每米水面100 ml的用量分別潑灑至各試驗塘，連續潑灑3天，同時按每100kg飼料中添加0.5kg的用量添加至飼料中，連續添加3天。
78.3、鏡檢觀測方法：取動物的鰓組織或體表組織(3個個體及以上)少量置於載玻片上，加3～4滴普通潔淨水或生理鹽水，然後蓋上蓋玻片，稍加壓平，於普通顯微鏡下進行觀察。先用低倍鏡(4
×
10～10
×
10倍)檢查，對寄生蟲具體種類定性分析(如小瓜蟲、孢子蟲、指環蟲等)，當發現有蟲體構造看不準時，再換中倍鏡或高倍鏡(10
×
40倍)檢查。然後在一個玻片上觀察3個視野並記數，算出平均每個視野中的數量。
79.4、使用效果：使用前，各池塘水產動物均存在攝食水平低，生長緩慢。使用後，水產動物吃食恢復，活動恢復正常。使用前後各池塘水產動物寄生蟲鏡檢結果見表1。
80.表1使用前後各池塘水產動物寄生蟲鏡檢結果
[0081][0082][0083]
從表1可以看出，使用樣品前，鏡檢可見青蝦附肢和鰓上有纖毛蟲附著，加州鱸魚體表和鰓上有錨頭鰠和小瓜蟲附著，鯽魚體表和鰓上有車輪蟲、指環蟲和孢子蟲附著，使用後，各試驗塘寄生蟲附著情況均得到不同程度改善，且以實施例1改善效果最好，說明其組方、製法最為合理，驅蟲效果顯著。
[0084]
以上所述，僅為本發明的具體實施方式，但本發明的保護範圍並不局限於此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明揭露的技術範圍內，可輕易想到變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護範圍之內。因此，本發明的保護範圍應以所述權利要求的保護範圍為準。