一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法和應用的製作方法

2023-07-07 21:34:01 2

一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種巰基鍵合銀離子色譜柱及其製備方法，所述的巰基鍵合銀離子色譜柱，即利用液相色譜儀，使用巰丙基三甲氧基矽烷在溶劑環己烷的作用下與空白矽膠色譜柱在柱內發生原位反應，得到巰基鍵合矽膠柱，然後利用液相色譜儀直接將銀離子原位結合到巰基鍵合矽膠柱上，即得巰基鍵合銀離子柱。該巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法簡便、且可通過製備過程中調整空白矽膠色譜柱的粒徑最終得到不同的小粒徑的巰基鍵合銀離子色譜柱，該巰基鍵合銀離子色譜柱可用於超高效液相色譜或液質聯用的儀器中中對食用油，特別是玉米油和大豆油中不飽和有機物即不同類型的甘油三酯的分離分析。
【專利說明】一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法和應用

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種有效的色譜柱的製備方法，特別涉及一種巰基鍵合銀離子色譜柱 的製備方法，該巰基鍵合銀離子色譜柱在超高效液相色譜或其與質譜聯用中用於分離食用 油中不同類型的甘油三酯。

【背景技術】
[0002] 銀離子色譜法是基於獨特的不飽和有機化合物屬性的，也就是與過渡金屬絡合的 能力，不飽和化合物充當電子供體，銀離子作電子受體，而形成烯鍵分子絡合物，進而有效 的分離含不同烯鍵的甘油三酯 [1]。
[0003] 目前使用銀離子柱來分離含不同烯鍵的甘油三酯，主要包括使用單根銀離子柱
[2]，或者串聯2根銀離子柱[3]，甚至是串聯3根銀離子柱 [4]來達到分離分析的作用。使用 一根銀離子柱進行分離比較常規，但不能完全分離出所有的不飽和有機物，因而部分學者 採用多根串聯的技術來進行分離，從而達到更好的分離效果。
[0004] 在使用銀離子柱的時候，有直接採用商品化的銀離子柱，也有採用自製的銀離子 柱，自製的銀離子柱更加方便。自製銀離子柱主要是使用高效液相色譜儀在陽離子交換柱 灌注硝酸銀溶液，硝酸銀吸附在交換柱上，從而達到製備的效果。但是自製的銀離子柱，一 般不僅需要使用多根銀離子柱串聯才能很好的分離，並且使用壽命不長，重現性較差。
[0005] 為了使得銀離子柱更有效的達到分離的作用，有學者採用巰基鍵合銀離子柱[5'6'7] 的方法來自製銀離子柱，這種方法可以使得鍵合的銀離子更穩定，使用時間更長，更加有益 於不飽和有機化合物的分離。 、'0 '? SH
[0006]Y-巰丙基三甲氧基矽烷結構 目前這種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法由於需要先合成相應的鍵合矽膠後，通過 柱填料填裝的方法製備出所需的色譜柱。因此該製備方法存在製備過程過於複雜，條件苛 亥IJ，人工操作繁瑣，得到的結果準確度和重現性受到實驗技術的限制，且通常用於製備較大 粒徑的巰基鍵合銀離子固定相等技術問題。
[0007] 參考文獻：
[1] >http://Iipidlibrary.aocs.org/Silver/silver,html.
[2]、楊芹，石先哲，單圓鴻，等.銀離子高效液相色譜-質譜法分析血清中甘油 三酯類化合物的組成[J].色譜，2012, 30 (9) : 876?882.
[3] 、魏婷婷，楊虹，楊天奎，串聯銀離子色譜柱分析結構甘油三酯同分異構體的研究 [J]，中國油脂，2012, 37 (7):79?81.
[4] λMiroslavLisa,HanaVelinska，MichalHolcapek.Regioisomeric CharacterizationofTriacylglycerolsUsingSilver-IonHPLC/MSandRandomization SynthesisofStandards[J].Anal.Chem. , 2009, 81 (10): 3903^3910.
[5]、JamesT.Dillon,JoseC.Aponte,RafaelTarozojetal.Efficientliquid chromatographicanalysisofmono-,di_，andtriglycerolsusingsilverthiolate stationaryphase[J]·J.ChromatogrA， 2012， 1240:90?95.
[6] λJoseC.Aponte,JamesT.Dillon,RafaelTarozojetal.Separation ofunsaturatedorganiccompoundsusingsilver-thiolatechromatographic material[J].J.ChromatogrAj 2012, 1240:83^89.
[7] λY.Huang,JoseC.Aponte,JamesT.Dillon,RafaelTarozojPCTInt. Appl. 9February2012，W0/2012/019134。


【發明內容】

[0008] 本發明的目的是為了解決上述的巰基鍵合銀離子色譜柱製備過程複雜，條件苛 亥IJ，人工操作繁瑣，得到的結果準確度和重現性受到實驗技術的限制，及通常製備較大粒徑 固定相等技術問題而提供一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，該製備方法操作簡便、 且可以製備小粒徑固定相的巰基鍵合銀離子色譜柱，該色譜柱可以用於超高效液相色譜或 高效液相色譜與質譜聯用中對食用油中不飽和有機物即不同類型的甘油三酯進行了分離。
[0009] 本發明的技術方案 一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，具體包括如下兩個步驟： (1) 、矽膠柱鍵合巰丙基 利用超高效液相色譜儀，以流速0. 5-lmL/min的環己烷衝洗矽膠柱lh，取4mL巰丙基 三甲氧基娃燒溶於IOOmL環己燒中，在40-80°C柱溫條件下以0. 2-0. 5mL/min的流速衝洗娃 膠柱6-12h，結束後在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用環己烷衝洗矽膠柱l-2h， 然後在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用乙醇衝洗矽膠柱l-2h，然後維持40-80°C 柱溫不變，保持12-24h; 所述的矽膠柱長度為100_250mm，優選為100-150mm，矽膠柱中所用的矽膠粒徑為 1. 3-20μπι，優選為 1. 8-5μπι; 所述的超高效液相色譜儀為日本島津公司LC-30AD型超高效液相色譜儀； (2) 、巰基鍵合銀離子 配製0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液，蒸餾水做為流動相； 以10-50μL/min的進樣量進樣0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，結束後使用 蒸饋水以0. 5-lmL/min的流速衝洗娃膠柱l-2h，結束後改用甲醇以0. 5-lmL/min的流速衝 洗矽膠柱l_2h，再用正己烷-乙醇7:3以0. 5-lmL/min的流速衝洗矽膠柱l-2h，最後用正 己烷以0. 5-lmL/min的流速衝洗矽膠柱l-2h，即得到巰基鍵合銀離子色譜柱。
[0010] 上述所得的巰基鍵合銀離子色譜柱可以用於超高效液相色譜或液質聯用的儀器 中用於分離食用油，如玉米油或大豆油中不飽和有機物即不同類型的甘油三酯。
[0011] 本發明的有益效果 本發明的一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，由於以商品化矽膠柱為原料，直接 在柱內合成目標固定相，即製備過程中採用原位製備法，因此具有簡便、不需要柱填充儀 器、便於實驗室製備、重現性好等特點，最終所得的巰基鍵合銀離子色譜柱相比較於普通的 陽離子交換固定相製備所得的銀離子柱更加的靈敏以及耐久。使用普通的陽離子交換柱在 實驗室中製備所得的銀離子柱在實驗過程中對不飽和物的分離往往得不到完美的效果，而 且經多次實驗後結果也存在著很大的差異，甚至經過幾次實驗後就開始出現無法出峰的現 象，必須通過再鍵合才能確保繼續實驗。
[0012] 進一步，本發明的巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法所得的一種巰基鍵合銀離子 色譜柱，使用時，只需使用超液相色譜儀或液質聯用的儀器對樣品進行儀器操作，無任何人 為影響，重現性好，分析時間短。而現有技術中的巰基鍵合銀離子薄層色譜法對不飽和物進 行分析的過程手動操作較多，人為影響因素大，重現性不好，耗時長。
[0013] 進一步，本發明的巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，彌補了現有技術中銀離子 柱製備過程複雜、難以製備小粒徑柱的不足之處，製備過程中調整空白矽膠色譜柱的粒徑 最終得到不同的小粒徑的巰基鍵合銀離子色譜柱。
[0014] 進一步，本發明的一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備過程簡單，易於操作，使用其 對不飽和物進行分析也同樣簡單易操作，相比較巰基鍵合銀離子薄層色譜的方法來說，更 加的簡便。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1、應用實施例1中，利用實施例1所得的巰基鍵合銀離子色譜柱進行色譜分析 玉米油樣品的總離子流圖； 圖2、應用實施例2中，利用實施例1所得巰基鍵合銀離子色譜柱與實施例2所得巰基 鍵合銀離子色譜柱串聯進行色譜分析大豆油樣品的總離子流圖。

【具體實施方式】
[0016] 下面通過具體實施例並結合附圖對本發明進一步闡述，但並不限制本發明。
[0017] 本發明各實施例或應用實施例中所用的試劑： 國藥集團化學試劑有限公司購買試劑乙腈（HPLC級）； 賽默飛世爾（中國）有限公司購買試劑正己烷（HPLC級）； 本發明的各實施例中所用的超高效液相色譜儀為日本島津公司LC-30AD型超高效液 相色譜儀； 液質聯用測定所用的儀器為LCMS-2020型液相色譜質譜儀（島津)，其中色譜分離部分 為LC-30AD型超效液相色譜儀。
[0018] 實施例1 一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，具體包括如下兩個步驟： (1)、矽膠柱鍵合巰丙基 利用日本島津公司LC-30AD型超高效液相色譜儀，使用環己烷以0. 5-lmL/min的流速 衝洗矽膠柱lh，取4mL巰丙基三甲氧基矽烷溶於IOOmL環己烷中，在40-80°C柱溫條件下 以0. 2-0. 5mL/min的流速衝洗矽膠柱6-12h，結束後在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流 速使用環己烷衝洗矽膠柱l_2h，然後在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速衝洗矽膠柱 l-2h，然後維持40-80°C柱溫不變，保持12-24h; 所述的矽膠柱為月旭材料科技(上海）有限公司的UltimateUHPLCSIO2矽膠柱，規格 為2.l*150mm,娃膠柱中所用的娃膠粒徑為3μm; (2)、巰基鍵合銀離子 配製0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液，蒸餾水做為流動相； 以10-50μL/min的進樣量進樣0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，結束後使用 蒸饋水以0. 5-lmL/min的流速衝洗娃膠柱l-2h，然後用甲醇以0. 5-lmL/min的流速衝洗娃 膠柱l-2h，然後再用正己烷-乙醇7:3以0. 5-lmL/min的流速衝洗矽膠柱l-2h，最後用正 己烷以0. 5-lmL/min的流速衝洗矽膠柱l-2h，即得巰基鍵合銀離子色譜柱。
[0019] 應用實施例1 利用實施例1所得的巰基鍵合銀離子色譜柱對玉米油進行液質聯用色譜分離，具體步 驟如下： 玉米油：益海嘉裡食品營銷有限公司金龍魚玉米胚芽油； 液質聯用測定所用的儀器：LCMS-2020型液相色譜質譜儀（島津)，其色譜分離部分為LC-30AD型超效液相色譜儀； 待測樣品的準備：ι〇μ?金龍魚玉米胚芽油溶於ιοοομ?正己烷中，濃度〇. 1% (v/v); 液相分離條件：流速為lmL/min，柱溫為室溫，以A:B的體積比為40 :60的比例組成流 動相，進樣量5yL; 所述的A為正己烷，B為由正己烷：乙腈按體積比為99:1組成的混合液； 液相分離後直接進入質譜進行分析； 質譜分離條件=APCI電離源，正離子電離模式，質荷比範圍300-1050,霧化氣流速I. 5L/min，乾燥氣流速10L/min，APCI溫度350°C，DL溫度200°C，檢測器電壓I. 05kV。
[0020] 上述液質聯用色譜分離所得的玉米油樣品的總離子流圖如圖1所示，從圖1中可 以看出通過巰基鍵合銀離子柱，玉米油樣品中的甘油三酯根據雙鍵數由2-6共分離出了 5 個峰，分別對應著不同的甘油三酯，由此表明了利用巰基鍵合銀離子柱可以對甘油三酯這 類不飽和化合物進行分離分析。
[0021] 實施例2 一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，具體包括如下兩個步驟： (1) 、矽膠柱鍵合巰丙基 利用超高效液相色譜儀（島津)，使用環己烷以0. 5-lmL/min的流速衝洗矽膠柱lh，取 4mL巰丙基三甲氧基矽烷溶於IOOmL環己烷中，在40-80°C柱溫條件下以0. 2-0. 5mL/min的 流速衝洗矽膠柱6-12h，結束後在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用環己烷衝洗矽 膠柱l-2h，然後在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用乙醇衝洗矽膠柱l-2h，然後維 持40-80°C柱溫不變，保持12-24h; 所述的矽膠柱為月旭材料科技(上海）有限公司的UltimateUHPLCSIO2矽膠柱，規格 為2.l*100mm,娃膠柱中所用的娃膠粒徑為1. 8μm; (2) 、巰基鍵合銀離子 配製0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液，蒸餾水做為流動相； 以10-50μL/min的進樣量進樣0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，結束後使用 蒸饋水以0. 5-lmL/min的流速衝洗娃膠柱l-2h，然後用甲醇以0. 5-lmL/min的流速衝洗娃 膠柱l-2h，然後再用正己烷-乙醇7:3以0. 5-lmL/min的流速衝洗矽膠柱l-2h，最後用正 己烷以0. 5-lmL/min的流速衝洗矽膠柱l-2h，即得到巰基鍵合銀離子色譜柱。
[0022]應用實施例2 利用實施例2所得的巰基鍵合銀離子色譜柱串聯實施例1所得的巰基鍵合銀離子色譜 柱對大豆油進行液質聯用色譜分離，具體步驟如下： 大豆油：益海嘉裡食品營銷有限公司金龍魚大豆油； 液質聯用測定所用的儀器：LCMS-2020型液相色譜質譜儀（島津)，其中色譜分離部分為LC-30AD型超效液相色譜儀。
[0023] 待測樣品的準備：ι〇μ?金龍魚大豆油溶於ιοοομ?正己烷中，濃度〇. 1% (v/v) 液相分離條件：流速為〇. 2mL/min，柱溫為室溫，以A:B的體積比為45 :55的比例組成 流動相，進樣量5yL; 所述的A為正己燒，B為由正己烷：乙腈按體積比為99:1組成的混合液； 液相分離後直接進入質譜進行分析； 質譜分離條件=APCI電離源，正離子電離模式，質荷比範圍300-1000,霧化氣流速 2. 5L/min，乾燥氣流速10L/min，APCI溫度240°C，DL溫度200°C，檢測器電壓I. 10kV。
[0024] 上述液質聯用色譜分離所得的大豆油樣品的總離子流圖如圖2所示，從圖2中可 以看出大豆油的樣品根據雙鍵數由1-8以及相當碳原子數(所述的相當碳原子數等於碳原 子個數減去兩倍雙鍵數，以下同）由38-48的不同共分離出了 11種不同的甘油三酯，表明本 發明製備方法所得的巰基鍵合銀離子柱可有效對甘油三酯這類不飽和物進行分析。
[0025] 綜上所述，本發明的巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法具有簡便、不需要柱填充 儀器、便於實驗室製備、重現性好等特點，所得的巰基鍵合銀離子色譜柱可以有效地對不飽 和物，如甘油三酯進行分離，其分離主要依據不同的雙鍵數，根據雙鍵數的不同，按由少到 多的順序進行了分離，同時對於擁有相同的雙鍵數，不同的相當碳原子數的化合物同樣可 以進行分離，分離效果明顯，重現性好。
[0026] 以上實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。此外，在閱讀了本發 明講授的內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣 落於本申請所附權利要求書所限定的範圍。
【權利要求】
1. 一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，其特徵在於包括如下兩個步驟： (1 )、矽膠柱原位鍵合製備巰丙基矽膠 利用超高效液相色譜儀，以流速0. 5-lmL/min的環己烷衝洗矽膠柱lh，取4mL巰丙基三 甲氧基娃燒溶於100mL環己燒中，在40-80°C柱溫條件下以0. 2-0. 5mL/min的流速衝洗娃膠 柱6-12h，結束後在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用環己烷衝洗矽膠柱l-2h，繼 續使用乙醇在同一條件下衝洗矽膠柱l-2h，維持40-80°C柱溫不變，保持12-24h; 所述的超高效液相色譜儀為日本島津公司LC-30AD型超高效液相色譜儀； (2)、巰基原位鍵合銀離子 配製0. 2-0. 5g/mL的AgN03水溶液，蒸餾水做為流動相； 以10-50 μ L/min的進樣量進樣0. 2-0. 5g/mL的AgN03水溶液40-100次，結束後使用 蒸饋水以0. 5-lmL/min的流速衝洗娃膠柱l-2h，然後用甲醇以0. 5-lmL/min的流速衝洗娃 膠柱l-2h，然後再用正己烷-乙醇7:3以0. 5-lmL/min的流速衝洗矽膠柱l-2h，最後用正 己烷以0. 5-lmL/min的流逝衝洗矽膠柱l-2h，即得到巰基鍵合銀離子色譜柱。
2. 如權利要求1所述一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，其特徵在於步驟（1)中 所述的矽膠柱長度為50-250mm，矽膠柱中所用的矽膠粒徑為1. 3-20 μ m。
3. 如權利要求2所述一種巰基鍵合銀離子色譜柱的製備方法，其特徵在於步驟（1)中 所述的矽膠柱長度為50-150mm，矽膠柱中所用的矽膠粒徑為1. 8-3 μ m。
4. 如權利要求1、2或3所述的製備方法所得的巰基鍵合銀離子色譜柱在超高效液相色 譜或液質聯用的儀器中分離食用油中不同類型的甘油三酯的應用。
5. 如權利要求4所述的巰基鍵合銀離子色譜柱在超高效液相色譜或液質聯用的儀器 中分離食用油中不同類型的甘油三酯的應用，其特徵在於所述的超高效液相色譜儀為日本 島津公司LC-30AD型超高效液相色譜儀； 所述的液質聯用的儀器為LCMS-2020型液相色譜質譜儀，其中色譜分離部分為 LC-30AD型超效液相色譜儀。
6. 如權利要求1、2或3所述的製備方法所得的巰基鍵合銀離子色譜柱在超高效液相色 譜或液質聯用的儀器中分離玉米油或大豆油中不同類型的甘油三酯的應用。
【文檔編號】G01N30/60GK104226284SQ201410463353
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月12日 優先權日:2014年9月12日
【發明者】許旭, 何榕, 山曉琳, 董方圓 申請人:上海應用技術學院