芒果苷的製備方法
2023-07-15 12:25:21
專利名稱：：芒果苷的製備方法
技術領域：
：本發明涉及一種化合物的提取工藝，特別是涉及一種芒果苷的製備方法，尤其涉及一種用生物活性酶法提取芒果葉中芒果苷的方法。
背景技術：
：芒果苷(mmg^n'")，又稱芒果素、莞知母寧；主要存在於漆樹科植物芒果(Mawgz/era/m//ca丄.)的果實、葉、樹皮，百合科植物知母(v4wemarWzewaos^/zode/o/csfes)的才艮莖、J4上部分,禽尾考牛才直物射幹[Se/awca"c^c/n'"era^>>DC.]的花、葉等植物中。芒果苷的藥理功能具有抑制中樞神經系統、抗炎、抑菌、抗單純皰疹病毒，利膽和免疫作用，對模擬高原急性低氧肝損傷有保護作用。藥理實驗表明，用於治療慢性支氣管炎有較好療效，是藏茵陳治療肝炎的主要有效成分，是知母根莖中抗病毒的活性成分。研究發現芒果苷還具有降糖、降脂、保肝、保護腎功能等作用。而作為功能性食品添加劑，芒果苷的功能主要為治療糖尿病、抑制脂肪吸收和加速脂肪分解。在國外，芒果苷是被大量應用於糖尿病食物和減肥食物中一種新型的、安全型的食品添加劑。目前，國內對於芒果苷的研究，僅僅停留在藥用總黃酮的提取方面，產品主要有芒果止咳片中成藥，功效主要為止咳作用，同時，對於芒果苷的提取大多數採用從知母等植物中提取，並沒有從環境資源再利用方面進行考慮再回收，雖然國內也有一些廠家對芒果葉進^f了研究，但他們皆是以芒果苷粗提物作為化工原料進行銷售，一則產品科技含量低，二則產品的深度加工不夠，三則忽視了芒果香的高度安全性，未考慮其開發功能性食品添加劑，四則製備工藝繁瑣，成本較高，五則在純化精製工藝中有機溶劑用量較大。而芒果樹是南方沿海城市的優勢植物資源，芒果作為一種熱帶水果很受人們歡迎，而芒果葉作為廢棄物大量的被棄置不用，所以迫切需要研發如何從大量廢棄的芒果葉中，提取出高純度的芒果苷，進而合理利用資源，變廢為寶，開發新型的安全性的食品添加劑，廣泛應用於糖尿病食物和減肥食物中。
發明內容針對於此，本發明的目的在於，提供一種採用生物活性酶法進行芒果苷的提取純化工藝，既提高了產品的得率，又提高了產品的純度，同時大大降低了生產成本，其生產工藝簡單可行，符合大生產條件。為解決上述技術問題，本發明提供的技術方案為一種芒果香的製備方法，該製備方法包括以下步驟(1)、取原料芒果葉，經乾燥、粉碎處理，用610倍原料重量的酶溶液進行浸泡O.lhr~l.Ohr,在pH4.0~7.0和40°C~55。C下水浴酶解lhr4hr,並充分攪拌；(2)、濾過，取藥渣各用6~IO倍重量的石油醚進行脫脂處理2~3次；(3)、步驟(2)脫脂處理後的藥渣用相當於6~10倍原料重量的60%~80%的乙醇水溶液提取2~3次，合併提取液，回收乙醇；(4)、步驟(3)的提取液經噴霧乾燥得乾粉末，再將該乾粉末用10%~30%乙醇水溶液進行溶解，離心過濾；(5)、取步驟(4)離心過濾後的濾液，水浴減壓濃縮乾燥，得芒果苷。優選的，步驟⑤得到的芒果芬，用20%~50%乙醇溶液進行重結晶兩次，即得到芒果苷純品。優選的，步驟(l)中的酶溶液選自纖維素酶溶液、果膠酶溶液和木瓜蛋白酶溶液中的一種或多種。優選的，步驟(l)中的酶解溫度為50°C。優選的，步驟(l)中的酶;容液pH值為4.0-5.0。優選的，所述酶;容液pH^f直為4.5。優選的，步驟(3)中的乙醇水溶液的濃度為75%。優選的，步驟(4)中的乙醇水溶液的濃度為20%。優選的，所述乙醇;容液的濃度為40%。優選的，每克原料中加入酶的量分別為纖維素酶4(Vg140pg、果膠酶20(ig~120|ig、木瓜蛋白酶1.5%~7.5%。與現有技術相比，本發明採用酶法從芒果葉中提取芒果苦，進行廢物利用，大大降低生產成本，既提高了產品的得率，又提高了產品的純度，整個生產工藝條件溫和，筒單易行。本發明中對於芒果葉先進行調pH值，然後再向其中加入活性酶，而沒有釆用先加入酶再調節pH值，能有效防止在加入酶製劑的溶液中，滴加強酸性溶液，造成溶液局部酸性太強，z使得溶液中實際酶含量降低。具體實施例方式下面結合附圖對本發明進行詳細描述，本部分的描述僅是示範性和解釋性，不應對本發明的保護範圍有任何的限制作用。實施例1取漆樹科植物芒果Mfl"^/era/m/z'c^L.的乾燥葉100g,粉碎，用800mlpH=4.5的纖維素酶水溶液(每g生藥加入140嗎纖維素酶)進行浸泡0.5hr,然後50。C水浴酶解2hr,並充分攪拌，濾過，取藥渣各用600ml的石油醚進4亍脫脂處理兩次，濾過，回收石油醚，藥渣用相當於原藥材6倍量的75%乙醇才是取兩次，合併4是取液，回收乙醇，噴霧乾燥得乾粉末，再將此4分末用20%乙醇進行溶解，離心過濾15min,轉速6000轉/min,取濾液，濃縮至幹得芒果苦粗品，再用40%乙醇進行重結晶兩次，最終得到芒果苦精品。實施例2取漆樹科植物芒果M""g^ra/"Aca丄.的乾燥葉100g,粉碎，用1000mlpH二5.5的纖維素酶(每g生藥加入140嗎纖維素酶)與果膠酶(每g生藥加入80嗎果膠酶)1:1水溶液進行浸泡0.5hr，然後50。C水浴酶解4hr,並充分攪拌，離心濾過30min,轉速10000轉/min,取藥渣各用1OOOml的石油醚進4亍脫脂處理兩次，濾過，回收石油醚，藥渣用相當於原藥材10倍量的75%乙醇提取三次，合併提取液，回收乙醇，噴霧乾燥得乾粉末，再將此粉末用20%乙醇進行溶解，離心過濾，取濾液，濃縮至幹得芒果苷粗品，再用40%乙醇進行重結晶三次，最終得到芒果苷精品。實施例3取芒果葉100g,用800mlpH=4.5的纖維素酶水溶液(每g生藥加入140jig纖維素酶)進行浸泡0.5hr,然後50。C水浴酶解2hr,並充分攪拌，濾過，耳又藥渣各用600ml的石油醚進行脫脂處理兩次，濾過，回收石油醚，藥渣用相當於原藥材6倍量的75%乙醇提取兩次，合併提取液，回收乙醇，噴霧乾燥得乾粉末，再將此粉末用20%乙醇進行溶解，過濾，取濾液，濃縮至幹得芒果苷粗品，再用40%乙醇進行重結晶兩次，最終得到芒果苦精品。結果檢測根據以上工藝試製三批樣品，按含量測定方法依法測定芒果香精品含量。結果見下表_表l樣品中芒果普含量測定結果樣品批號芒果苦含量(％)RSD(%)實施例198.42實施例298.160.27實施例3____^_含量測定方法學考察色譜條件以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；色譜柱迪馬C18(20pm,4.6mmx250mm);柱溫30°C;曱醇~0.1%磷酸溶液(23:77)為流動相；檢測波長為258nm;理論塔板數按芒果香峰計算不低於8000。對照品溶液的製備精密稱取芒果苦對照品適量，加曱醇製成每lml含O.lmg的溶液，即得。供試品溶液的製備取本品約10mg，精密稱定，加40%甲醇50ml,稱重，超聲提取30min,放冷，補重，濾過，取續濾液，即得。標準曲線製備分別量取上述對照品溶液1、2、3、4、5ml,置10ml量瓶中，加曱醇稀釋至刻度，搖勻備用，在上述色譜條件下，分別進樣20iu1,記錄色i普圖，以峰面積對進樣量進行回歸，求得回歸方程為Y=90650X+27.034，r=0.99969。精密度實驗取芒果苷對照品溶液20pl，連續進樣5次，分別測定其峰面積，RSD為0.47。/。，結果表明儀器精密度符合要求。穩定性實-驗取供試品溶液，分別在O、4、8、12、24h進樣，進行了24h考察，峰面積的RSD為0.25%,表明供試品溶液在24h內穩定。重複性實驗取同一批供試品，精密稱取約10mg,共6份，按供試品溶液製備方法製備，測定峰面積，結果表明重複性良好。加樣回收實驗精密稱取已知含量的同一供試品約10mg,分別精密加入一定量的芒果苦對照品溶液，按供試品溶液製備方法製備，進樣20jlU,記錄色譜圖，計算回收率。結果平均回收率為99.82%,RSD為0.19%。在本發明中突出優勢體現在以下幾點(1)本發明中我們採用長期被廢置的芒果葉作為原料進行芒果苦的提取，其含量較高，且變廢為寶，對芒果苷在不同植物中的含量進行研究，如下表所示表2不同產地、不同植物中芒果苷含量的對比研究tableseeoriginaldocumentpage8山西內蒙古安徽0.98%~1.96%1.12%~1.60%1.00%~1.63%中藥龍膽東北.1.04%~1.41%從以上整體研究得到結論海南芒果葉中芒果香含量的平均含量為1.79%~3.38%,知母為1.12%~1.77%,獐芽菜為1.19%~1.50%,龍膽為1.04%~1.41%，綜合比較，海南芒果葉中芒果苦含量最高。(2)本發明採用酶法處理藥材，使芒果葉中細胞壁纖維組織結構破壞，最大程度的提高了芒果苷的提取率，數據見對比實驗中的資料。(3)本發明中採用75%以上的乙醇作提取溶劑而非採用低濃度的曱醇或乙醇水溶液作提取溶劑，因為低濃度的曱醇或者乙醇，其提取物中雜質太多，精製過程步驟多、而且使用普通方法很難得到芒果苷結晶；而用75%乙醇作溶劑，回收溶劑後可以得到雜質相對較少的芒果苷粗結晶，增加了生產操作中的安全性，減少了動力資源及純化工序中試劑的浪費，同時也減少了有機試劑的使用量，從而降低了生產成本。對比實-驗兩種提取方法對於芒果葉中芒果苷轉移率的影響l.供試樣品的製備(1)本發明的纖維素酶法取芒果葉10g,粉碎，用80mlpH=4.5的纖維素酶水溶液(每克生藥加入140pg纖維素酶)進行浸泡0.5hr,然後50。C水浴酶解2hr，並充分攪拌，濾過，取藥渣各用60ml的石油醚進行脫脂處理兩次，濾過，回收石油醚，藥渣用相當於原藥材6倍量的75%乙醇提取兩次，合併提取液，回收乙醇，噴霧乾燥得乾粉末，再將此粉末用20%乙醇進行溶解兩次，離心過濾15min,轉速6000轉/min,取濾液，濃縮至中藥獐芽菜0.82%~0.11%0.09%~0.22%0.05%~0.10%3.68%~4.48%1.32%~2.57%西東直度東川川苦印山幹得芒果苷粗品，再用40%乙醇進行重結晶兩次，最終得到芒果苷精品。重複工藝操作製備平行樣品5份，計算芒果苷轉移率的平均值。(2)普通方法取芒果葉10g，粉碎，用60ml的石油醚進行脫脂處理兩次，濾過，回收石油醚，藥渣用相當於原藥材6倍量的75%乙醇提取兩次，合併提取液，回收乙醇，噴霧乾燥得乾粉末，再將此粉末用20%乙醇進行溶解兩次，離心過濾15min,轉速6000轉/min,取濾液，濃縮至幹得芒果苦粗品，再用40%乙醇進行重結晶兩次，最終得到芒果苷精品。重複工藝操作製備平行樣品5份，計算芒果苷轉移率的平均值。專利200610079234.5"高純度芒果苦的製備方法，，中，以芒果葉或扁桃葉為原料，採用樹脂法脫色，雖含量和純度較高，但轉移率僅為46.33%,不足我方專利芒果苷轉移率的50%,而且成本較高，工藝較複雜。2.檢測方法具體方法請見上述的結果檢測步驟。3.實—瞼結果(1)實驗所選用芒果葉原料中芒果苷含量為2.23%,根據結果表明採用纖維素酶法處理的樣品最終芒果苦轉移率為95.87%;而普通法處理的樣品最終芒果苷轉移率僅為78.78%，可見採用纖維素酶法工藝對於芒果苷的轉移率有較大的影響。具體試驗數據見下表表3兩種提取方法對於芒果葉中芒果苷轉移率的影響("=5)製備方法芒果苷轉移率(％)(n=5)平均轉移率12345(%)纖維素酶法95.25%93.95%97.89%95.11%97.17%95.87%普通法79.01%81.66%79.28%75.96%通過釆用5P5^73力統計軟體進行數據處理，對平均轉移率進行統計學分析，結果表明纖維素酶法同普通法在芒果苷轉移率方面有顯著差異(屍<0.05),說明纖維素酶法處理之後，能明顯提高藥材中芒果苷的轉移率。以上僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應詳見為本發明的保護範圍。權利要求1、一種芒果苷的製備方法，該製備方法包括以下步驟(1)、取原料芒果葉，經乾燥、粉碎處理，用6～10倍原料重量的酶溶液進行浸泡0.1hr～1.0hr，在pH4.0～7.0和40℃～55℃下水浴酶解1hr～4hr，並充分攪拌；(2)、濾過，取藥渣各用6～10倍重量的石油醚進行脫脂處理2～3次；(3)、步驟(2)脫脂處理後的藥渣用相當於6～10倍原料重量的60％～80％的乙醇水溶液提取2～3次，合併提取液，回收乙醇；(4)、步驟(3)的提取液經噴霧乾燥得乾粉末，再將該乾粉末用10％～30％乙醇水溶液進行溶解，離心過濾；(5)、取步驟(4)離心過濾後的濾液，水浴減壓濃縮乾燥，得芒果苷。2、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(5)得到的芒果苷，用20%~50%乙醇溶液進行重結晶兩次，即得到芒果苦純品。3、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(l)中的酶溶液選自纖維素酶溶液、果月交酶溶液和木瓜蛋白酶溶液中的一種或多種。4、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(l)中的酶解溫度為50°C。5、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(l)中的酶溶液pH值為4.0~5.0。6、根據權利要求5所述的製備方法，其特徵在於所述酶溶液pH值為4.5。7、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(3)中的乙醇水溶液的濃度為75%。8、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(4)中的乙醇水溶液的濃度為20%。9、根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於所述乙醇溶液的濃度為40%。10、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(l)中的酶解時間為2hr。11、根據權利要求3所述製備方法，其特徵在於每克原料中加入酶的量分別為纖維素酶40昭~140昭、果膠酶20嗎~120(ig、木瓜蛋白酶1.5%~7.5%。全文摘要本發明公開一種芒果苷的製備方法，該製備方法包括以下步驟(1)取原料芒果葉，經乾燥、粉碎處理，用6～10倍原料重量的酶溶液進行浸泡0.1hr～1.0hr，在pH4.0～7.0和35℃～55℃下水浴酶解1hr～4hr，並充分攪拌；(2)濾過，取藥渣各用6～10倍重量的石油醚進行脫脂處理2～3次；(3)步驟(2)脫脂處理後的藥渣用相當於6～10倍原料重量的60％～80％的乙醇水溶液提取2～3次，合併提取液，回收乙醇；(4)步驟(3)的提取液經噴霧乾燥得乾粉末，再將該乾粉末用10％～30％乙醇水溶液進行溶解，離心過濾；(5)取步驟(4)離心過濾後的濾液，水浴減壓濃縮乾燥，得芒果苷。本發明採用酶法從芒果葉中提取芒果苷，進行廢物利用，大大降低生產成本。文檔編號C07D407/00GK101671330SQ20091017578公開日2010年3月17日申請日期2009年10月13日優先權日2009年10月13日發明者伍曾利,劉全勝,展學孔申請人:劉全勝