一種快速檢測髓過氧化物酶的試紙的製作方法

2023-07-21 23:50:01 1

專利名稱：一種快速檢測髓過氧化物酶的試紙的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及臨床免疫學檢測技術領域，具體涉及ー種快速檢測髓過氧化物酶的試紙。
背景技術：
急性冠脈症候群(ACS)是ー組由急性心肌缺血引起的臨床症候群，包括急性心肌梗死(AMI)及不穩定型心絞痛(UA)。心肌梗死是全球範圍內致死和致殘的主要疾病之一。在中國，冠心病患者超過2千萬人，而每年有超過100萬人被急性心肌梗死奪去生命。因此，預測及識別出早期急性心肌梗死患者並及時治療是提高其存活率的關鍵。髓過氧化物酶(MPO)存在於嗜中性粒細胞和巨噬細胞中。有文獻報導在AMI和UA患者的動脈損傷處可大量發現嗜中性粒細胞和巨噬細胞，並釋放ΜΡ0。已有ー些用MPO 作為急性冠脈症候群(ACS)危險性分層標誌物的研究。並有研究顯示在傳統心血管危險因素髮出疾病信號之前，血漿中MPO水平就已經升高了，標誌著損傷斑塊的形成。目前的研究表明，MPO是ACS患者發生心血管不良事件的預測因子，特別是在肌鈣蛋白T水平較低的患者，MPO能夠識別心血管事件危險性較高的患者。近來，有關胸痛和心臟病患者的早期研究也顯示，心臟病患者血中MPO的平均水平明顯高於健康人。另有研究顯示MPO與心肌梗死和胸痛患者30天和6個月發生心血管事件的指標有較高的相關性。檢測MPO意味著在更早的階段發現並及時幹預冠心病的發展成為可能。目前髓過氧化物酶檢測主要採用酶聯免疫方法，操作繁瑣且耗時。免疫層析法標本用量少，操作簡便快捷。將免疫層析法引入髓過氧化物酶的檢測中將會大大縮短檢測時間，為臨床帶來更多的便捷。

實用新型內容(一 )要解決的技術問題本實用新型要解決的技術問題是提供一種可以方便快捷地進行髓過氧化物酶檢測的試紙。( ニ )技術方案為了解決上述技術問題，本實用新型提供ー種快速檢測髓過氧化物酶的試紙，該試紙包括包被膜、抗體墊；所述抗體墊位於包被膜的ー側，抗體墊上具有經過標記的抗髓過氧化物酶抗體；所述包被膜上具有檢測線和質控線；所述包被膜上的檢測線位置具有抗髓過氧化物酶抗體；所述包被膜上的質控線位置具有兔抗鼠抗體。其中，抗體墊上具有膠體金標記的抗髓過氧化物酶抗體，膠體金的粒徑為IOnm IOOnm0其中，抗體墊上具有螢光微球標記的抗髓過氧化物酶抗體，螢光微球的粒徑為90nm 300nm。其中，抗體墊部分與包被膜重疊、粘貼在包被膜的一端；還包括樣品墊，所述樣品墊部分與抗體墊重疊，粘貼在抗體墊上。其中，包被膜的另一端連接有吸水墊；所述吸水墊部分與包被膜重疊、粘貼在包被膜上。[0013]其中，包被膜為硝酸纖維素膜。其中，快速檢測髓過氧化物酶的試紙整體粘貼在底板上。其中，底板為PVC材料。(三)有益效果上述技術方案具有如下優點使用本實用新型檢測試紙進行髓過氧化物酶的檢測，簡化了檢測步驟，縮短了髓過氧化酶的檢測時間。

圖I是本實用新型試紙的正面示意圖；圖2是本實用新型試紙的側面示意圖；圖3至圖5是採用本實用新型試紙進行髓過氧化物酶檢測結果示意圖。其中，圖3中T、C兩條線顯色為陽性；圖4中C 一條線顯色為陰性；圖5中T、C兩條線均未顯色為無效。其中，I :樣品墊；2 :抗體墊；3 :包被膜；4 :吸水墊；5 :底板；T :塗覆抗髓過氧化物酶抗體測試線；(塗覆兔抗鼠抗體質控線。
具體實施方式
以下結合附圖和實施例，對本實用新型的具體實施方式
作進ー步詳細描述。以下實施例用於說明本實用新型，但不用來限制本實用新型的範圍。實施例I髓過氧化物酶膠體金試紙及其製備方法(參見圖I)髓過氧化物酶抗體製備選用商品化的MPO抗體(Hytest公司，cat :4M43)，在IOmM PBS, pH7. 2，4°C條件下透析過夜。包被膜3 (硝酸纖維素膜2. 5cmX0. 6cm)的製備包被緩衝液的配製10mM pH7. 2的磷酸緩衝液，O. 22 μ m微孔濾膜過濾除菌後置
於4°C保存備用。用包被緩衝液將抗髓過氧化物酶抗體和兔抗鼠抗體分別稀釋到O. 5mg/mL和
O.5mg/mL,使用Biodot三維噴點平臺以I. 5 μ L/cm的量將兩者以I. 5cm的間隔均勻噴印於
3.5cm寬度的硝酸纖維素膜上，於25 40°C烘乾2小時，加入乾燥劑封存備用。膠體金標記抗髓過氧化物酶抗體金標墊的製備本實施例中的抗體墊2中的抗髓過氧化物酶抗體採用膠體金進行標記。用碳酸鉀調節顆粒粒徑40nm的膠體金溶液的pH值為7. 2，加入抗髓過氧化物酶抗體，室溫攪拌30min後，加入終濃度O. 8%的BSA溶液終止，離心後，用洗液清洗後再次離心，加入復溶液後，4°C保存備用。使用Biodot三維噴點平臺將金標記抗髓過氧化物酶抗體以3 μ L/cm的速度噴灑於聚酯膜(O. 8cmXO. 6cm)上，於25°C烘乾5小吋。加入乾燥劑封存備用；樣品墊I (聚酯膜2. 7cmX0. 6cm)的處理[0033]將樣品墊I放入樣品墊處理溶液(O. IM Tris緩衝液含O. 05% S9 (購自杭州隆基生物技術有限公司)，1% BSA)中浸泡I小時後取出於37°C烘乾5小時；試紙條的組裝及切割(下列所有操作必須在溼度小於38%，溫度18 26°C的房間內進行)按照要求手工將包被膜3、吸水墊4 (2. 8cmX O. 6cm)、抗體墊2和樣品墊I裝於PVC材質的底板5上，組裝成試紙板。使用Biodot CM4000型切條刀將組裝好的試紙板切成4mm寬的成品試紙條。將本實用新型所述的切割好的單人份試紙條置於塑料底卡上的卡槽內，蓋上上蓋，使用壓卡機將上下兩片塑料卡壓緊，加入乾燥封存於鋁箔袋即可。實施例2髓過氧化物酶膠體金試紙及其製備方法(參見圖I)包被膜3 (硝酸纖維素膜2. 5cmX O. 6cm)的製備包被緩衝液的配製10mM pH7. 2的磷酸緩衝液，O. 22 μ m微孔濾膜過濾除菌後置
於4°C保存備用。用包被緩衝液將實施例I製備的抗髓過氧化物酶抗體和兔抗鼠抗體分別稀釋到
I.Omg/mL和I. 5mg/mL,使用Biodot三維噴點平臺以I μ L/cm的量將兩者以Icm的間_均勻噴印於3. 5cm寬度的硝酸纖維素膜上，於37°C烘乾2小時，加入乾燥劑封存備用。採用膠體金標記抗髓過氧化物酶抗體的抗體墊2的製備用碳酸鉀調節顆粒粒徑IOOnm的膠體金溶液的pH值為7. 5，加入抗髓過氧化物酶抗體，室溫攪拌30min後，加入終濃度O. 05%的PEG20000溶液終止，離心後，用洗液清洗後再次離心，加入復溶液後，4°C保存備用。使用Biodot三維噴點平臺將復溶液以4 μ L/cm的速度噴灑於玻璃纖維素膜(O. 8cmX0. 6cm)上，於37°C烘乾I小吋。加入乾燥劑封存備用；樣品墊玻璃纖維素膜2. 7cmXO. 6cm)的處理將樣品墊放入樣品墊處理溶液(O. IM Tris緩衝液含O. 05% S9,l% BSA)中浸泡I小時後取出於37°C烘乾5小時；試紙條的組裝及切割(下列所有操作必須在溼度小於38%，溫度18 26°C的房間內進行)按照要求手工將包被膜、吸水墊(2. 8cmX0. 6cm)、金標墊和樣品墊裝於PVC底板上，組裝成試紙板。使用Biodot CM4000型切條刀將組裝好的試紙板切成4mm寬的成品試紙條。將本實用新型所述的切割好的單人份試紙條置於塑料底卡上的卡槽內，蓋上上蓋，使用壓卡機將上下兩片塑料卡壓緊，加入乾燥封存於鋁箔袋即可。實施例3髓過氧化物酶膠體金試紙條靈敏度測試隨機抽取按照上述實施例I或2製作的新型髓過氧化物酶膠體金試紙30條。將髓過氧化物酶(8M80，購自Hytest公司)溶解於無髓過氧化物酶血清中，並使用該血清稀釋到 500ng/mL, 250ng/mL, 100ng/mL, 25ng/mL, lOng/mL,陰性血清，姆個樣品濃度測試 5 條,通過肉眼判讀結果，當血清中髓過氧化物酶含量低於10ng/mL，膠體金試紙條未能檢測。這ー實驗結果表明，膠體金試紙條的最低檢出限在10ng/mL。下表I本實用新型試紙條的靈敏度檢測
權利要求1.一種快速檢測髓過氧化物酶的試紙，其特徵在於，包括包被膜、抗體墊；所述抗體墊位於包被膜的一側，抗體墊上具有經過標記的抗髓過氧化物酶抗體；所述包被膜上具有檢測線和質控線；所述包被膜上的檢測線位置具有抗髓過氧化物酶抗體；所述包被膜上的質控線位置具有兔抗鼠抗體。
2.如權利要求I所述的快速檢測髓過氧化物酶的試紙，其特徵在於，所述抗體墊上具有膠體金標記的抗髓過氧化物酶抗體，膠體金的粒徑為IOnm lOOnm。
3.如權利要求I所述的快速檢測髓過氧化物酶的試紙，其特徵在於，所述抗體墊上具有突光微球標記的抗髓過氧化物酶抗體，突光微球的粒徑為90nm 300nm。
4.如權利要求I所述的快速檢測髓過氧化物酶的試紙，其特徵在於，所述抗體墊部分與包被膜重疊、粘貼在包被膜的一端；還包括樣品墊，所述樣品墊部分與抗體墊重疊，粘貼在抗體墊上。
5.如權利要求4所述的快速檢測髓過氧化物酶的試紙，其特徵在於，所述包被膜的另一端連接有吸水墊；所述吸水墊部分與包被膜重疊、粘貼在包被膜上。
6.如權利要求I所述的快速檢測髓過氧化物酶的試紙，其特徵在於，所述包被膜為硝酸纖維素膜。
7.如權利要求1-6任意一項所述的快速檢測髓過氧化物酶的試紙，其特徵在於，所述快速檢測髓過氧化物酶的試紙整體粘貼在底板上。
8.如權利要求7所述的快速檢測髓過氧化物酶的試紙，其特徵在於，所述底板為PVC材料。
專利摘要本實用新型涉及臨床免疫學檢測技術領域，具體涉及一種快速檢測髓過氧化物酶的試紙。本實用新型包括包被膜、抗體墊；所述抗體墊位於包被膜的一側，抗體墊上具有經過標記的抗髓過氧化物酶抗體；所述包被膜上具有檢測線和質控線；所述包被膜上的檢測線位置具有抗髓過氧化物酶抗體；所述包被膜上的質控線位置具有兔抗鼠抗體。使用本實用新型檢測試紙進行髓過氧化物酶的檢測，簡化了檢測步驟，縮短了髓過氧化酶的檢測時間。
文檔編號G01N33/573GK202404100SQ201120513019
公開日2012年8月29日 申請日期2011年12月9日 優先權日2011年12月9日
發明者侯建玲, 周軼, 張靜, 邱笑違, 黃莎 申請人:北京樂普醫療科技有限責任公司