一種假單胞菌及其製備方法、應用的製作方法
2023-07-13 02:28:01 2
專利名稱：一種假單胞菌及其製備方法、應用的製作方法
技術領域：
本發明屬細菌類，具體說是一種假單胞菌(Pseudomonnas sp)及其製備方法以及高濃度有機氮化合物廢水治理中，特別在硝基、胺基類有機廢水處理中的應用。
假單胞菌的應用，以往只是在生化處理系統中發現有假單胞菌屬存在，但不是單一的培養、馴化並應用。目前已有個別假單胞菌株應用於氯化芳香化合物、含硫化合物脫硫、甲醇廢水處理中。但其應用範圍比較窄，專一性強，而在高濃度有機氮化合物(染料及中間體)廢水治理中，特別在硝基、胺基類有機廢水處理中，應用高效專一性菌株在該廢水處理領域內應用尚屬空白。
國內外廢水處理專用菌種的生產應用、廢水處理用菌種，國內外有幾家公司出售，經查實，都沒有有機氮化合物產品廢水處理高效專用菌一假單胞菌屬的產品。
經降解有機氮化合物能力的測試實驗，獲得一株降解能力較高菌種為假單胞菌，命名為FD126，24小時內對苯胺、硝基苯、硝基酚、硝基氯苯，2，4-二硝基氯苯等多種含氮系列有機物去除率達64％～71％，工程應用中，以上各種有機氮化合物去除率達99.9％，出水都優於GB8978-1996一級標準。
細胞特徵細胞呈杆狀，革蘭氏陰性，具有一根極性鞭毛能運動，最適生長的溫度為30～35℃，3℃和41℃時代謝活動較弱，47～50℃不生長，最適生長PH6.5～9.0，PH4以下不能生長。
在肉湯培養基平板中，16小時後可見不規則灰狀白色菌落，24小時後菌落大小為0.2×0.5----1cm，該菌種細胞單個，細杆狀，有時近似球形，革蘭氏染色呈陰性，具有一根鞭毛，能運動。
目前該假單胞菌菌種保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，本保藏中心登記入冊編號是CGMCC No.0914，菌種的拉丁學名是Pseudomonas sp，參據的微生物(株)FD126，保藏日期是2003年3月27日。
一種假單胞菌製備方法1、增菌培養採用普通的細菌用肉湯培養基
加入一定量的經含硝基苯、苯胺、硝基氯苯、氨基(硝基)酚、2，4二硝基氯苯等多種有機氮化合物混分廢水，按培養基∶廢水＝1∶4的比例混合製成增菌培養液，取假單胞菌的活性汙泥(假單胞菌菌液)，接種於盛培養液的三角瓶中，於20℃-32℃下振蕩培養16-26小時。
2、純化分離採用平板劃線法，將純化分離出來的單菌種，再進行增菌培養，經過反覆試驗，取得對上述廢水去除率較高的菌種，通過菌種形態觀察與生化特性測定(《常用的一般細菌常用鑑定方法》)可確定活菌種屬假單胞菌屬。
3、誘變處理，定向培育菌溶液濃度107個/ml，採用生理鹽水，緩衝溶液培育。
採用紫外線與亞硝基胍先後替使用進行誘變。取上述菌懸浮液15ml放在90ml培養皿中，放在裝有紫外燈的暗室中，在磁力攪拌器上邊攪拌邊照射100-140秒，後加入亞硝基胍(NTG)處理20-35分鐘，經過多次反覆處理，最終分離出一組上述有機物成分廢水的高去除率、高活性專一性菌種，即製成假單胞菌。
4、優勢高效菌種的培養採用上述混合廢水收肉湯培養基，按廢水∶培養液＝8∶1的比例混合成增菌培養液，加入5ml專性菌(假單胞菌)懸液與盛有195ml的培養液的三角瓶中，在28℃振蕩培養24小時。
5、菌種生產及應用50L的間歇式菌種培養反應器100L的間歇式菌種培養反應器投加聚合氧化鋁和50％容器體積的原系統中的活性汙泥，投加廢水CODer1500mg/L培養36小時，沉降分離。
培養條件接種量0.1～5.0％(體積)種齡24～36小時通氣0.3～1.5體積/體積.分攪拌從0到650轉/分溫度26～28℃PH6.5～8.5增菌培養基(牛肉湯、蛋白腖、NaPO40.75％(NH4)SO4，0.3％)∶廢水(有機氮化合物)＝1∶8在工程應用中，應針對不同水質成分調整上述配比，更有利於菌種對特種廢水的去除率的提高。
本發明的突出優點本發明與該領域內現有技術相比，具有1、該菌種對有機物去除率高，達99.9％，降解徹底。
2、易於培養，可長期使用，不易退化。
3、處理效率高，投資省。
4、使用範圍廣，廣泛使用於有機氮化物廢水領域。
具體實施例方式
一種假單胞菌製備方法1、菌培養採用普通的細菌用肉湯培養基牛肉膏0.5％，蛋白腖10％，Nacl0.5％，PH6.5～9.0，加入一定量的含硝基苯、苯胺、硝基氯苯、氨基(硝基)酚、2，4-二硝基氯苯等多種有機氮化合物混合廢水(CODcr為1500mg/L左右)，有機物含量合計560mg/L左右，按培養基廢水＝1∶4的比例混合製成增菌培養液，取假單胞菌的活性汙泥(假單胞菌菌液)10ml，接種於盛90ml的培養液的三角瓶中，於28℃下振蕩培養24小時。
2、純化分離採用平板劃線法，將純化分離出來的單菌種，再進行增菌培養，經過反覆試驗，取得對上述廢水去除率較高的菌種，通過菌種形態觀察與生化特性測定(《常用的一般細菌常用鑑定方法》)可確定活菌種屬假單胞菌屬。
3、誘變處理，定向培育菌溶液濃度107個/ml(生理鹽水，緩衝液)採用紫外線與亞硝基胍先後替使用。取上述菌懸浮液15ml放在90ml培養皿中，放在裝有15瓦紫外燈的暗室中，距燈管30cm處，在磁力攪拌器上邊攪拌邊照射120秒，後加入NTG(亞硝基胍)1000μg/ml處理30分鐘，經過多次反覆處理，最終分離出一組上述有機物成分廢水的高去除率、高活性專一性菌種，即製成假單胞菌。
4、優勢高效菌種的培養採用上述含硝基苯、苯胺、硝基氯苯、氨基(硝基)酚、2，4-二硝基氯苯多種有機氮化合物混合廢水收肉湯培養基，按廢水∶培養液＝8∶1的比例混合成增菌培養液，加入5ml假單胞菌懸液與盛有195ml的培養液的三角瓶中，在28℃振蕩培養24小時，培養出優勢高效假單胞菌菌種。
5、菌種生產及應用50L的間歇式菌種培養反應器100L的間歇式菌種培養反應器投加聚合氧化鋁和50％容器體積的原系統中的活性汙泥，投加廢水CODer1500mg/L培養36小時，沉降分離。
培養條件接種量0.1～5.0％(體積)種齡24～36小時通氣0.3～1.5體積/體積.分攪拌從0到650轉/分溫度26～28℃PH6.5～8.5增菌培養基(牛肉湯、蛋白腖、NaPO40.75％(NH4)SO4，0.3％)∶廢水(有機氮化合物)＝1∶8。
在工程應用中，應針對不同水質成分調整上述配比，更有利於菌種對特種廢水的去除率的提高。
應用實例目前，該發明假單胞菌已試應用於硝基類、胺類、氨基類廢水治理工程中，處理裝置運行穩定，處理後廢水優於國標一級標準要求。以下是假單胞菌種應用實例一、河南省某市染化一廠該廠主產2，4-二硝基氯苯，屬有機染料中間體產品，在生產過程中，每日水洗工藝排放300噸濃度含氮有機廢水，廢酸濃縮工藝排放250噸同種廢水，混合後，處理難度相當大。該廠採用本發明，建成一套生化處理裝置並投入試運行，系統運行穩定，成本較低，處理後系統出水優於GB8978-96一級標準。
二、河南省某石油化工廠該廠主產對、鄰氨基苯甲醚，屬有機氨染料中間體產品，在生產過程中，每日水洗工藝排放100噸高濃度含氮有機廢水，該廢水含鹽濃度高，有機成分多而雜，處理難度相當大。該廠採用本發明，建成一套採用本發明假單胞菌生化處理裝置並投入試運行，系統運行穩定，成本較低，處理後系統出水各項指標優於GB8978-96一級標準。
三、江蘇省某市某公司該公司(外資公司)採用本發明建成一套採用本發明假單胞菌，日處理200噸含硝基苯、苯胺等有機化合物廢水處理裝置，經試運行，系統運行穩定，成本較低，處理後系統出水各項指標優於GB8978-96一級標準。
本發明在實際工程應用中取得比較好的效果，本發明假單胞菌在處理高濃度有機氮化合物廢水中應用，前景廣闊，社會效益和環境效益十分顯著。
權利要求
1.一種假單胞菌Pseudomonnas sp FD126，其在在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏編號是CGMCC No.0914。
2.一種假單胞菌的製備方法，其特徵在於(1)增菌培養採用普通的細菌用肉湯培養基，加入含硝基苯、苯胺、硝基氯苯、氨基(硝基)酚、2，4-二硝基氯苯多種有機氮化合物混分廢水，按培養基∶廢水＝1∶4的比例混合製成增菌培養液，取假單胞菌的活性汙泥(假單胞菌菌液)，接種於培養液的三角瓶中，於20℃-32℃下振蕩培養16-26小時；(2)純化分離採用平板劃線法，將純化分離出來的單菌種，再進行增菌培養，經過反覆試驗，取得對上述廢水去除率較高的菌種，通過菌種形態觀察與生化特性測定(《常用的一般細菌常用鑑定方法》)可確定活菌種屬假單胞菌屬；(3)誘變處理，定向培育菌溶液濃度107個/ml，採用生理鹽水，緩衝溶液培育，採用紫外線與亞硝基胍先後替使用，取上述菌懸浮液放在培養皿中，放在裝有紫外燈的暗室中，在磁力攪拌器上邊攪拌邊照射100-140秒，後加入亞硝基胍處理20-35分鐘，經過多次反覆處理，最終分離出一組上述有機物成分廢水的高去除率、高活性專一性菌種，即製成假單胞菌。
3.根據權利要求2所述的一種假單胞菌的製備方法，其特徵在於採用含硝基苯、苯胺、硝基氯苯、氨基(硝基)酚、2，4-二硝基氯苯多種有機氮化合物混合廢水收肉湯培養基，按廢水∶培養液＝8∶1的比例混合成增菌培養液，加入5ml假單胞菌懸液與盛有195ml的培養液的三角瓶中，在28℃振蕩培養24小時，培養出優勢高效假單胞菌菌種。
4.一種假單胞菌，在處理高濃度有機氮化合物廢水中應用。
全文摘要
本發明屬細菌類，具體說是一種假單胞菌(Pseudomonnas sp)及其製備方法以及高濃度有機氮化合物廢水治理中，特別在硝基、胺基類有機廢水處理中的應用。一種假單胞菌Pseudomonnas sp FD126，其在在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏編號是CGMCCNo.0914。本發明假單胞菌是從運行20多年來的生產裝置中篩選出(初始菌種)22種具有不同程度降解有機氮化合物能力的好養菌，後經分離、誘導變異、分離純化、馴化培育出來的假單胞菌株。在高濃度有機氮化合物廢水治理中，特別在硝基、胺基類有機廢水處理中應用，系統運行穩定，成本較低，處理後系統出水各項指標優於GB8978－96一級標準。
文檔編號C12N13/00GK1460712SQ0313194
公開日2003年12月10日 申請日期2003年6月20日 優先權日2003年6月20日
發明者符昌鋒 申請人:符昌鋒