用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒的製作方法
2023-07-30 18:54:01 1
用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒的製作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒，包括盒體、盒蓋和設置在盒體內的襯墊，所述襯墊上設有小孔，裝有螢光標記的單克隆抗體CD45的試劑管、裝有螢光標記的單克隆抗體CD9的試劑管、裝有螢光標記的單克隆抗體CD81的試劑管、裝有螢光標記的單克隆抗體CD56的試劑管、裝有紅細胞裂解液的試劑管和裝有PBS緩衝液的試劑管被設置在所述小孔內。該試劑盒結構簡單、設計合理，在使用時檢測速度快、操作方法簡單，檢測靈敏度高，適於在臨床廣泛推廣應用。
【專利說明】用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒
【技術領域】
[0001]本實用新型屬於生物【技術領域】，涉及一種用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒。
【背景技術】
[0002]神經母細胞瘤(neuroblastoma, NB)是兒童最常見的頡外腫瘤，是嬰幼兒最常見的腫瘤。有將近一半的神經母細胞瘤發生在2歲以內的嬰幼兒。神經母細胞瘤屬於神經內分泌性腫瘤，可以起源於交感神經系統的任意神經脊部位。其最常見的發生部位是腎上腺，但也可以發生在頸部、胸部、腹部以及盆腔的神經組織。對於神經母細胞瘤的發病原因尚不清楚。一些遺傳易感因素被發現與神經母細胞瘤的發病相關。家族型神經母細胞瘤被證明與間變淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)的體細胞突變(somaticmutation)所導致。此外,在神經母細胞瘤還發現有許多分子突變。N_myc基因的擴增突變在神經母細胞瘤也很常見。其擴增類型呈雙向分布:在一個極端為3-10倍擴增，在另一個極端為100-300倍擴增。N-myc基因的擴增突變往往與腫瘤的擴散相關。LMOl基因被證明與腫瘤的惡性程度相關。目前認為神經母細胞瘤的病因是以上因素互相作用導致的。
[0003]目前，神經母細胞瘤的診斷及檢測方法主要有影像學檢測法、骨髓形態學檢測法、檢測尿VMA/AVA，VMA及HVA、骨髓或組織活檢；這些診斷、檢測方法的優缺點如下:
[0004]影像學檢測法:間位腆代苄胍與放射性物質如碘-131或者是碘-123耦聯後，即可作為放射性藥物而用於神經母細胞瘤的診斷以及療效監測。但不能判斷腫瘤病理類型，而且碘-131、碘-123耦聯有放射性對身體有害。
[0005]骨髓形態學檢測法:能見到密集成巢或小葉性分布，成菊花狀、環狀，其細胞成分不一，分化程度不等，但單個彌散分布的NB細胞體積形態與急淋、急粒細胞相似，不仔細觀察極易誤診。而且通常只看200-500個細胞，檢測靈敏度低。
[0006]檢測尿VMA/AVA，VMA及HVA:神經母細胞瘤時兒茶酚胺合成增加，故其代謝物尿VMA/HVA增加。可用分光光度法、層析法檢測，但尿液中有大量的化合物，尤其是苯酣類、酸性酣和芳香環化合物的代謝物。能干擾結果，而且分光光度法特異性較差。
[0007]骨髓或組織活檢:免疫組化學檢查顯微鏡下，神經母細胞瘤呈現為藍染的小圓形細胞，菊花形排列。腫瘤細胞圍繞神經氈(neuropil)呈菊花形排列，其他還有一些神經母細胞瘤所特異的免疫組化染色，用以與其他腫瘤(尤因肉瘤，淋巴瘤等)進行鑑別診斷。但操作複雜，對患者損傷較大。
[0008]臨床急需一種檢測速度快，而且靈敏度高的檢測技術的出現，更有利於患者的及時診治。
實用新型內容
[0009]為了解決上述技術問題，本實用新型的目的在於提供一種用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒，可以快速、簡便、高靈敏度地檢測神經母細胞瘤微小殘留。[0010]為實現上述目的，本實用新型採取的技術方案是:一種用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒，包括盒體(I)、盒蓋(2)和設置在盒體(I)內的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設有小孔，裝有螢光標記的單克隆抗體CD45的試劑管(4)、裝有螢光標記的單克隆抗體CD9的試劑管(5)、裝有螢光標記的單克隆抗體CD81的試劑管(6)、裝有螢光標記的單克隆抗體CD56的試劑管(7)、裝有紅細胞裂解液的試劑管(8)和裝有PBS緩衝液的試劑管(9)被設置在所述小孔內。
[0011]其中，上述單克隆抗體使用不同的螢光標記；優選地，單克隆抗體⑶45使用PerCP標記，單克隆抗體CD9使用FITC標記，單克隆抗體CD81使用PE標記，單克隆抗體CD56使用APC標記。
[0012]其中，所述紅細胞裂解液和所述PBS緩衝液均為本領域常規試劑。
[0013]其中，所述襯墊(3)上設有6個小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成兩排平行排列。
[0014]通過以上技術方案，本實用新型的有益效果如下:
[0015](I)本實用新型的試劑盒結構簡單、設計合理，方便攜帶、保存，不易受汙染。
[0016](2)本實用新型的試劑盒在使用時，檢測速度快、操作方法簡單，檢測靈敏度高，檢測中受檢測者主觀因素的影響小，特別是可以準確檢測已經確診並經過治療之後殘留的神經母細胞瘤病灶，適於在臨床廣泛推廣應用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0017]圖1為本實用新型的結構示意圖；
[0018]在該圖中，1-盒體，2-盒蓋，3-襯墊，4-裝有螢光標記的單克隆抗體⑶45的試劑管，5-裝有螢光標記的單克隆抗體CD9的試劑管，6-裝有螢光標記的單克隆抗體CD81的試劑管，7-裝有螢光標記的單克隆抗體CD56的試劑管，8-裝有紅細胞裂解液的試劑管，9-裝有PBS緩衝液的試劑管。
[0019]圖2是是正常人⑶56、⑶9、⑶81表達情況的示意圖；
[0020]圖3是神經母細胞瘤患者治療之後⑶56、⑶9、⑶81表達情況的示意圖。
【具體實施方式】
[0021]下面結合實施例對本實用新型的【具體實施方式】作進一步描述，本實用新型的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是範例性的，並不對本實用新型的範圍構成任何限制。
[0022]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0023]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0024]如圖1所示，本實用新型提供了一種用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒，包括盒體1、盒蓋2和設置在盒體I內的襯墊3，所述襯墊3上設有6個小孔，所述小孔在所述襯墊3上分成兩排平行排列,裝有螢光標記的單克隆抗體CD45的試劑管4、裝有螢光標記的單克隆抗體CD9的試劑管5、裝有螢光標記的單克隆抗體CD81的試劑管6、裝有螢光標記的單克隆抗體CD56的試劑管7、裝有紅細胞裂解液的試劑管8和裝有PBS緩衝液的試劑管9被設置在所述小孔內。[0025]其中，單克隆抗體⑶45使用PerCP標記，單克隆抗體⑶9使用FITC標記，單克隆抗體⑶81使用PE標記，單克隆抗體⑶56使用APC標記；優選的，上述螢光標記的單克隆抗體均購自BD公司。
[0026]其中，所述紅細胞裂解液購自美國BD公司，所述PBS緩衝液購自北京中杉金橋生物技術有限公司。
[0027]檢測步驟如下:
[0028](I)取兩支流式專用管，分別編號為I號管和2號管，向I號管加入CD45-PerCP20 ii 1，向 2 號管加入 CD45_PerCP20 y 1、CD9-FITC20 y 1、CD81_PE20ii 1、CD56-APC5 uI ；
[0029](2)對待檢測的骨髓標本進行白細胞計數，將細胞濃度調至3X107/ml，向每個管內分別加入待檢測的骨髓標本70iU，低速渦旋混勻，2°C至8°C避光孵育20分鐘；
[0030](3)向每個管內分別加入紅細胞裂解液1ml，低速渦旋混勻，在2°C至8°C避光裂解紅細胞10分鐘；
[0031](4)裂解結束後立即以1500轉/分鐘離心5分鐘，離心結束後棄上清，然後向各管內加入Iml PBS，低速渦旋混勻，以1500轉/分鐘離心5分鐘；離心結束後棄上清，向各管內加入0.5ml PBS重懸，低速渦旋混勻，24h內使用流式細胞儀上機檢測；
[0032](5)在檢測時，調節好個通道電壓，使淋巴細胞平均螢光強度在104，收集Pl門內細胞100萬，應用BD FACSDive軟體分析數據。
[0033]檢測結果如下:
[0034]數據以散點圖形式顯示，如出現成群⑶45陰性⑶56陽/強陽的細胞群，表明有神經母細胞殘留細胞。
[0035]如圖2和圖3所示，圖2是是正常人⑶56、CD9、CD81表達情況，未見CD45陰性⑶56陽/強陽的細胞，圖3是神經母細胞瘤患者治療之後⑶56、⑶9、⑶81表達情況，見大量CD45陰性CD56陽/強陽的細胞。
[0036]上面已經舉例說明了本實用新型的實施例，本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本實用新型的精神和範圍下可以對本實用新型技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本實用新型的保護範圍內。
【權利要求】
1.一種用於檢測神經母細胞瘤微小殘留的試劑盒，其特徵在於:包括盒體(I)、盒蓋(2)和設置在盒體(I)內的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設有小孔，裝有螢光標記的單克隆抗體CD45的試劑管(4)、裝有螢光標記的單克隆抗體CD9的試劑管(5)、裝有螢光標記的單克隆抗體CD81的試劑管(6)、裝有螢光標記的單克隆抗體CD56的試劑管(7)、裝有紅細胞裂解液的試劑管(8)和裝有PBS緩衝液的試劑管(9)被設置在所述小孔內。
2.按照權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於:所述單克隆抗體使用不同的螢光標記，其中，單克隆抗體CD45使用PerCP標記，單克隆抗體CD9使用FITC標記，單克隆抗體CD81使用PE標記，單克隆抗體⑶56使用APC標記。
3.按照權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於:所述襯墊(3)上設有6個小孔，所述小孔在所述襯墊(3 )上分成兩排平行排列。
【文檔編號】G01N33/577GK203535054SQ201320688913
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年11月4日 優先權日:2013年11月4日
【發明者】王顯鳳, 秦曉明, 吳純斌, 劉麗媛, 王緒華, 梁超, 方國偉, 黃士昂, 陳忠 申請人:北京海思特臨床檢驗所有限公司