用於預測血管事件和診斷急性冠狀動脈症候群的方法

2023-08-01 09:35:16

專利名稱：：用於預測血管事件和診斷急性冠狀動脈症候群的方法
技術領域：
：本發明涉及在被懷疑處於血管事件危險中的患者的血管事件發生的方法。
背景技術：
：每年，到醫院就醫的數百萬患者具有諸如胸痛的症狀，顯示患有急性冠狀動脈症候群(ACS)。ACS是指由急性心肌缺血引起的各種臨床症狀。ACS患者的確認具有巨大的重要性，是由於它們具有較高的心臟死亡或缺血性併發症的危險。用於評價被懷疑患有ACS的患者狀態的當前流程通常包括使用心電圖(ECG)和測定壞死標誌物的血液水平，所述標誌物特別是心肌壞死標誌物，通常是心臟肌鈣蛋白I或T(cTnI或cTnT)或肌酸激酶(CK)。簡而言之，如Grech等人(2003)BMJ326:1259-1261所定義的，將呈現急性胸痛並且經過上述檢驗的患者如下進行分類-沒有ST段上升並且心肌壞死標誌物未升高不穩定型心絞痛；-沒有ST段上升，心肌壞死標誌物水平升高非ST型心肌梗塞；-ST段上升，心肌壞死標誌物水平升高ST型心肌梗塞。不穩定型心絞痛、非ST型心肌梗塞和ST型心肌梗塞都是ACS的組成。在試驗的患者中，在心電圖記錄上沒有ST段上升並且壞死標誌物(特別是心肌壞死標誌物)為正常水平的那些是特別難以處理的。一方面，這些患者的入院大多數經常是不必要的，因為他們發生不利的血管事件的危險有限，不必要的入院使衛生保健體系承受高成本。另一方面，不是所有這些患者都是無風險的，特別是因為ACS的存在通常是非典型的，並且據估計有1_2%的被送回家中的患者後來發生不利的血管事件例如心肌梗塞(Apple等人(2005)ClinicalChemistry51:810-824)。因而，在被懷疑處於血管事件的危險中並且呈現ST段沒有上升和壞死標誌物(特別是心肌壞死標誌物)水平正常的患者中，非常需要能夠幫助對無風險的患者和實際上處於發生不利的血管事件的危險中的患者加以區別的方法。因此，本發明的目的是提供用於呈現ST段沒有上升和壞死標誌物(特別是心肌壞死標誌物)正常水平的患者的血管事件預後的方法。本發明的另一個目的是提供診斷這些患者中的ACS的可靠的方法。'本發明的又一個目的是提供測定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法。本發明的另一個目的是提供用於實施上述方法的試劑盒。本發明來自於本發明人證明了被懷疑處於血管事件危險中的患者中的未來的血管事件的可能性可以如下測定測量選自以下標誌物類別的至少兩種不同生物化學標誌物的存在和/或水平-動脈粥樣硬化斑塊不穩定'性標誌物，-動脈粥樣硬化斑塊;皮裂標誌物，-冠狀動樂^炎症標誌物，-血栓形成前狀態標誌物，-血栓形成標誌物，-缺血標誌物，-壞死標誌物和-心肌功能障礙標誌物，從測量的所述生物化學標誌物的存在和/或水平推斷患者發生血管事件的可能性。
發明內容本發明涉及被懷疑處於血管事件危險中的患者的血管事件預後的方法，所述患者特別是呈現-在心電圖上未見ST段上升和/或-至少一種壞死(特別是心肌壞死)的標誌物水平正常，其中在所述患者的生物樣品中測量至少兩種不同的生物化學標誌物的存在和/或水平，特別是三種、四種、五種、六種、七種或八種不同的生物化學標誌物的存在和/或水平，所述生物化學標誌物選自以下標誌物類別-動脈粥樣硬化斑塊不穩定性標誌物，-動脈粥樣硬化斑塊破裂標誌物，-冠狀動脈炎症標誌物，-血栓形成前狀態標誌物，-血栓形成標誌物，-缺血標誌物,-壞死標誌物和-心肌功能障礙標誌物，從而從測量的生物化學標誌物的存在和/或水平推斷患者發生血管事件的可能性。本發明還涉及診斷患者的急性冠狀動脈症候群的方法，所述患者特別是呈現-在心電圖上未見ST段上升和/或-至少一種壞死標誌物(特別是心肌壞死標誌物)的水平正常，包括在所述患者的生物樣品中測量至少兩種不同的生物化學標誌物的存在和/或水平，特別是至少三種、更特別至少四種、甚至更特別至少五種不同的生物化學標誌物的存在和/或水平，所述生物化學標誌物選自以下標誌物類別-動脈粥樣硬化斑塊不穩定'l"生標誌物，-動脈粥樣硬化斑塊破裂標誌物，-冠狀動#"炎症標誌物，-血栓形成前狀態標誌物，-血栓形成標誌物，-缺血標誌物，-壞死標誌物，特別是心肌壞死標誌物和-心肌功能障礙標誌物，從而測定所述患者是否患有ACS。在上述定義的預後和診斷方法的實施方案中，患者呈現-在心電圖上未見ST段上升和-至少一種壞死標誌物(特別是心肌壞死標誌物)的水平正常。在上述定義的預後和診斷方法的另一個實施方案中，患者另外表現出胸痛。在上述定義的預後和診斷方法的另一個實施方案中，壞死標誌物(特別是心肌壞死標誌物，其在所述預後或診斷方法所適用的所述患者中的水平正常)的存在或水平被用於推斷患者發生血管事件的可能性或用於測定所述患者是否患有ACS。在上述定義的預後和診斷方法的又一個實施方案中，患者呈現正常的心臟肌鉤蛋白水平，特別是正常的心臟肌鈣蛋白I(cTnI)或心臟肌鈣蛋白T(cTnT)水平和/或正常的CK水平。在上述定義的預後和診斷方法的另一個實施方案中，患者呈現沒有心肌壞死。本發明還涉及測定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法，包括測量所述患者的生物樣品中的至少兩種不同生物化學標誌物的存在和/或水平，所述生物化學標誌物選自以下的標誌物組合-proBNP和PAPP-A和任選的選自CRP、IL-6、MP0、sCD40L、D-二聚體和BNP的標誌物；-proBNP，IL-6和選自CRP、sCD40L和BNP的標誌物；-proBNP和BNP和任選的選自CRP、sCD40L和MP0的標誌物；-BNP或proBNP(特別是BNP)和CRP，以及任選的選自IL-6、MPO、PAPP-A和D-二聚體的標誌物；-proBNP或BNP(特別是proBNP)，sCD40L和任選的選自CRP和MPO的標誌物；-CRP和IL-6;-BNP或proBNP(特別是BNP)和IL-6，以及任選的CRP和MPO;-proBNP、PAPP-A、CRP、BNP、D-二聚體、IL-6、sC歸L和MPO;從而測定個體的狀況。在上述定義的用於測定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法的實施方案中，所述狀況選自-沒有ACS和-不穩定型心絞痛。在上述定義的用於測定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法的另一個實施方案中，測定(i)個體的至少一種壞死標誌物(特別是心肌壞死標誌物)的水平和(ii)在患者的心電圖上看見的ST段上升的存在或不存在。在上述定義的用於測定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法的又一個實施方案中，壞死標誌物可以是心臟肌鈣蛋白I或心臟肌鈣蛋白T。本發明還涉及計劃用於診斷ACS或用於患者的血管事件預後的試劑盒，所述試劑盒包括分別用於選自以下標誌物類別的至少三種，特別是至少三種、四種、五種、六種、七種或八種不同的生物化學標誌物的至少三種，特別是至少四種、五種、六種、七種或八種特異性配體-動脈粥樣硬化斑塊不穩定性標誌物，-動脈粥樣>硬化斑塊>皮裂標誌物，-冠狀動^"炎症糹示志物，-血栓形成前狀態標誌物，-血栓形成標誌物，-缺血標誌物，-壞死標誌物，特別是心肌壞死標誌物，-心肌功能障礙標誌物。在一個實施方案中，上述定義的試劑盒包括用於心臟肌鈣蛋白的一種特異性配體，特別是用於心臟肌鉤蛋白I或心臟肌鈣蛋白T的特異性配體。發明詳述如本文中所用的，"預後"是指預測病理學結果或預測患者發生不利事件的概率或可能性的方法。如本文中使用的，"血管事件，，是指患病生物的與血管有關的、特別是與心血管有關的威脅健康的事件或病理學事件。本發明的血管事件特別地選自與血管有關的死亡、心肌梗塞、充血性心力衰竭和與血管有關的住院治療、再血管化過程。如本文中使用的，"診斷"是指測定患者所患有的病理學的方法。如本文中使用的，急性冠狀動脈症候群(ACS)是指尤其是由急性心肌缺血引起的各種臨床症狀。其特別地定義在Apple等人(2005)ClinicalChem51:810-824中。優選地，如本文中使用的，如果個體是健康的和/或如果該個體呈現壞死標誌物(特別是心肌壞死因子)的正常水平、ST段沒有上升和非病理學的心電圖，則可以說該患者不存在ACS。如本文中使用的，"在心電圖上未見ST段上升"或"ST段沒有上升"是指患者的心電圖呈現ST段的降低或呈現正常的ST段。如本文中使用的，標誌物的"正常水平"是指生物樣品中的標誌物濃度處於該標誌物的標準切分點範圍內。所述標準依賴於生物樣品類型和用於測量生物樣品中標誌物濃度的方法。對於給定標誌物的標準是本領域技術人員公知的。特別地，給定標誌物的正常水平是指該標誌物基本上不存在，也就是，對於該標誌物測量的水平低於限定被認為是顯著存在的該標誌物最低水平的切分點。如本文中使用的，"壞死標誌物"、特別是"心肌壞死標誌物"是指在心肌壞死時、特別是在例如心肌缺血時從心肌組織釋放的大分子。壞死標誌物特別地包括心臟肌釣蛋白，特別是心臟肌鉤蛋白I和T(cTnI和cTnT)、肌紅蛋白、以及肌酸激酶(CK)。對於CK，優選測量MB同工型。優選地，在被認為是正常時，在至少24小時期間的心臟肌4丐蛋白I的測量水平不應超過參照組的值的第99百分位。還優選地，在^皮認為是正常時，兩個連續樣本的CK的MB同工型的測量水平不應超過性別特異性參照對照組的值的第99百分位。如本文中使用的，使用可以得到生物樣品中標誌物濃度的任何方法來測量標誌物的水平。這種方法特別地包括質譜學(特別是對於測量CK-MB水平)，但是還包括基於配體的方法，例如免疫方法。特別地，使用對於所述生物化學標誌物為特異性的配體測量生物化學標誌物的水平。"配體"是指對標誌物具有結合親合力的分子。特別地，優選配體以特異性的方式結合於標誌物，也就是，與生物樣品的其它組分相比，配體優選結合於對其為特異性的標誌物。特異性配體特別地選自以下組-多克隆的、單克隆的和重組的抗體、或其片段，例如Fab片段、F(abO2片段和scFv片段，-噬菌體抗體(PhAbs),-美洲駝和駱乾抗體(llamaandcamelantibody),-適配體。-優選地，特異性配體是單克隆抗體。如本文中使用的，"生物樣品"包括可以得自患者的所有樣本，例如組織活體檢查或體液樣本。然而，在本發明中優選樣品是基於血液的樣本，例如全血樣本、血清或血漿樣本。在基於血液的樣本的情況中，可以加入任何抗凝血劑，例如EDTA、檸檬酸鹽或肝素。此外，可以從同一患者取得的不同樣本或者從唯一的樣本測量標誌物水平。此外，樣品中標誌物的存在或水平可以分別測定、在單純的試驗中測定、或者任選地可以在多重試驗中同時測定一些或所有標誌物的水平。標誌物的存在或水平可以測定一次或者重複測定，特別是根據預定的時間-進程重複測定。優選使用自動試驗系統測定標誌物的存在或水平。如本文中使用的動脈粥樣硬化斑塊不穩定性標誌物是指其存在或水平在不穩定性動脈粥樣硬化斑塊的情況中發生改變的標誌物。特別地，這種標誌物存在於不穩定性動脈粥樣硬化斑塊的情況中或者在這種情況中水平升高；-動脈粥樣硬化斑塊破裂標誌物是指其存在或水平在動脈粥樣硬化斑塊破裂的情況中發生改變的標誌物。特別地，這種標誌物存在於動脈粥樣硬化斑塊破裂的情況中或者在這種情況中水平升高；-冠狀動脈炎症標誌物是指其存在或水平在冠狀動脈炎症的情況中發生改變的標誌物。特別地，這種標誌物存在於冠狀動脈炎症的情況中或者在這種情況中水平升高；-血栓形成前狀態標誌物是指其存在或水平在血栓形成前的情況中發生改變的標誌物。特別地，這種標誌物存在於血栓形成前的情況中或者在這種情況中水平升高；-血栓形成標誌物是指其存在或水平在血栓形成的情況中發生改變的標誌物。特別地，這種標誌物存在於血栓形成的情況中或者在這種情況中水平升高；-缺血標誌物是指其存在或水平在心肌缺血的情況中發生改變的標誌物。特別地，這種標誌物存在於心肌缺血的情況中或者在這種情況中水平升高；-壞死標誌物，特別是心肌壞死標誌物，是指其存在或水平在心肌壞死的情況中發生改變的標誌物。特別地，這種標誌物存在於心肌壞死的情況中或者在這種情況中水平升高；-心肌功能障礙性標誌物是指其存在或水平在心肌功能障礙的情況中發生改變的標誌物。特別地，這種標誌物存在於心肌功能障礙的情況中或者在這種情況中水平升高。這種標誌物特別地描述在Apple等人(2005)Clin.Chem.51:810-824中。如本文中使用的，兩種或更多種標誌物可以屬於相同的標誌物類別。然而，在上述定義的預後和診斷方法的優選實施方案中，生物化學標誌物不屬於相同的標誌物類別在上述定義的預後和診斷方法的另一個優選實施方案中，使用以下的標誌物組合tableseeoriginaldocumentpage15tableseeoriginaldocumentpage16根據上述定義的預後和診斷方法的特別優選的實施方案，-動脈粥樣硬化斑塊不穩定性標誌物選自MP0、sCD40L、IL-6、PAPP-A和膽鹼，特別是全血膽鹼；-動脈粥樣硬化斑塊破裂標誌物選自MPO、sCD40L、MMPs、膽鹼(特別是全血膽鹼)和PAPP-A;-冠狀動脈炎症標誌物選自MPO、sCD40L、CRP和IL-6;-血栓形成前狀態標誌物選自sCD40L和纖維蛋白原；-血栓形成標誌物選自D-二聚體s;-缺血標誌物選自IMA、cTnl、cTnT和FABP;-壞死標誌物(特別是心肌壞死標誌物)選自cTnl、cTnT、CK、肌紅蛋白和FABP;-心肌功能障礙標誌物選自BNP、NT-proBNP和proBNP。MPO(髓過氧物酶)特別地描述在Baldus等人，Circ.2003;108:1440-1445,Brennan等人,NEnglJMed2003;349:1595-604，Brerman等人,Currentopinioninlipidology2003;14:353-359，Nambi等人,CurrAtherReports2005，7:127-131，Nicholls等人，ArteriosclerThrombVaseBiol.2005;25:l-9andZhang等人JAMA2001;286:2136-2142中。MMPs(基質金屬蛋白酶)，特別是MMP-9特別地描述在Jones等人，CardiovascRes2003;59:812-23中。膽鹼特別地描述在Apple等人，Clin.Chem.2005;51:810-824中。sCDML(CD40配體的可溶解形式)特別地描述在Aukrust等人，Circ.1999;100:614-620;Heeschen等人，NEnglJMed2003;348:1104-11;Peng等人，ClinChimActa.2002;319:19-26;Tayebjee等人，AmJCardiol2005;96:339-345;Varo等人，Circ.2003;108:1049-1052中。IL-6(白細胞介素6)特別地描述在Aggarwal等人JournalofThrombosisandThrombolysis2003;15:25-31，2003;Biasucci等人Circ.1999;99:855-860;Ikeda等人Clin.Cardiol.2001;24:701-704;Lubrano等人，JofCIinLabAnal2005;19:110-114;Ridker等人，NEnglJMed.2000;342:836-43中。PAPP-A(妊娠相關血漿蛋白A)特別地描述在Bayes-Genis等人，NEnglJMed2001;345:1022-9;Heeschen等人,JAmCollCardiol2005;45:229-37;Khosravi等人，ClinicalBiochemistry2002;35:531-538;Laterza等人，ClinChimActa2004;348:163-169;Liu等人，Chinmedj.2005;118:1827-1829，Lund等人，Circulation2003;108:1924-1926.Qin等人，ScandCardiovascJ36;358-361，2002;Qin等人，ClinChem.2005;51:75-83;Qin等人，ClinChem2006;52:398-404中。D-二聚體特別地描述在Bayes-Genis等人，AmHeartJ2000;140:379-84.Danesh等人，Circ.2001;103:2323-2327;Heim等人，ClinicalChemistry2004;50:1136-1147;Keeling等人BritishJournalofHaematology,2004;124:15-25;Shitrit等人，AmericanJournalofHematology2004;77:147-150;Shitrit等人AmericanJournalofHematology2004;76:121-125中。CRP(C反應蛋白)特另'J地描述在Be函dez等人ArteriosclerThrombVaseBiol.2002;22:1668-1673;Body等人，InternationalJournalofCardiology2005;98:277-283;Ferreiro等人，Circ.1999;100:1958-1963;Haverkate等人，Lancet1997;349:462-66;Lowe等人,JournalofThrombosisandHemostasis2003;1:2312-2316;Luc等人，ArteriosclerThrombVaseBiol.2003;23:1255-1261;Maier等人Circ.2005;111:1355-1361;Pepys等人，J.Clin.Invest.2003111:1805-1812;Ridker等人，AmHeartJ2004;148:S19-26;Roberts等人ClinChem2001;47:418-425;Tanaka等人，JAmCollCardiol2005;45:1594-9;Tzoulaki等人Circ.2005;112:976—983中。纖維蛋白原特別地描述在Saigo等人，ProgressinCardiovascularDiseases2004;46:524-538中。IMA(缺血改變的白蛋白，ischemiamodifiedalbumin)特別地描述在JaffeCardiolClin200523:453—465中。FABP(脂肪酸結合蛋白)特別地描述在Suzuki等人Int.HeartJ200546:601-606中。肌紅蛋白特別地描述在JaffeCardiolClin200523:453-465中。cTnl特別地描述在Babuin等人，CMAJ2005;173:1191-1202;Bodi等人，InternationaljournalofCardiology2005;98:277-283;Colli勵n等人，Armclinbiochem2001;38:423-449;Heeschen等人，ClinBiochem2000;33:359-368;Kamineni等人，Progressincardiovasculardiseases2004;46:379-392;Maier等人，Clinchimacta1996;45:19-38;McDonough等人，Progressincardiovasculardiseases2004;47:207—216;Mockel等人，Clinchimacta2000;293:139-155;Newby等人，Progressincardiovasculardiseases2004;46:404-416;Panteghini等人，ClinChemLabMed.2001;39:175-179.Rao等人AmJcardiol2003;91:936-940;Ritter等人ClinChem.2004;50:112-119;Rosalki等人ClinChem2004;50:2205-2213;Scirica等人Progressincardiovasculardiseases2004;47:177-188中。cTnT特別地描述在Collinson等人，MedPrincPract2007;16:247-61;A,ruddin等人,JAmCol1Cardiol2007;49:279-89;Eise謹n，ExpertRevCardiovascTher2006;4:509-14;Engel等人，MolDiagnTher2007;11:109-16;Ca阻on等人，ClinChemAcU2007;376:168-73;Goodacre等人，BMCEmergMed2005;5:6;Heeschen等人，Circulation2004;110:3206-12;Kaul等人，JAmCollCardiol2003;41:371-80中。BNP(B利鈉肽)、proBNP和NT-proBNP特別地描述在Alehagen等人InternationalJournalofCardiology2005;100:125-133;Bassan等人，EuropeanHeartJournal2005;26:234-240;Delemos等人，NEnglJMed2001;345:1014-21;deLemos等人，RevCardiovascMed2003;4:S37-S46;Fona面等人，RevCardiovascMed2003;4:S20-S28;Galvani等人，TheEuropeanJournalofHeartFailure2004;6:327-333;Gibler等人，RevCardiovascMed2003;4:S47-S55;Jernberg等人，EuropeanHeartJournal2004;25:1486-1493;Mega等人，JAmCollCardiol2004;44:335-9;NaHong等人,CircJ2005;69:1472-1476;Sabatine等人，JAmCol1Cardiol2004;44:1988-95;Sokoll等人ClinChemLabMed2004;42:965-972;Wiviott等人,ClinChimActa2004;346:119-128;Giuliani等人，ClinicalChemistry2006;52:1054-1061;Seferianetal，CIinicalChemistry2007;53,86673;Lametal，JACC2007;49;1193-202;Liangetal,JACC2007;49;1071-8中。在上述定義的預後和診斷方法的特別優選的實施方案中，使用以下的生物化學標誌物組合tableseeoriginaldocumentpage20tableseeoriginaldocumentpage21在上述定義的預後和診斷方法的另一個優選實施方案中，使用以下的生物化學標誌物組合-proBNP和PAPP-A和任選的選自CRP、IL-6、MP0、sCD40L、D-二聚體和BNP的標誌物；-proBNP,IL-6和選自CRP、sCD40L和BNP的標誌物;-proBNP和BNP和任選的選自CRP、sCD40L和MPO的標誌物；-BNP或proBNP(特別是BNP)和CRP，以及^f壬選的選自IL-6、MPO、PAPP-A和D-二聚體的標誌物；-proBNP或BNP(特別是proBNP),sCD40L和任選的選自CRP和MPO的標誌物；-CRP和IL-6;-BNP或proBNP(特別是BNP)和IL-6和任選的CRP和MPO;-proBNP、PAPP-A、CRP、BNP、D-二聚體、IL-6、sCD40L和MPO。從而測定個體的狀況。特別地，優選以下組合tableseeoriginaldocumentpage22-BNP、IL-6、CRP和MPO;-proBNP、PAPP-A、CRP、BNP、D-二聚體、IL-6、sCD40L和MPO此外，在上述定義的預後方法中，更特別地優選使用以下組合tableseeoriginaldocumentpage23實際上，在應用於無症狀群體(即，具有正常的cTnl水平和正常心電圖的群體)時，這些組合能夠將健康個體與呈現作為血管事件提示的胸痛的個體加以區分。呈現作為血管事件的提示的胸痛的個體被認為更傾向於呈現未來的血管事件。因此，上述組合在檢驗無症狀群體出現未來血管事件的可能性方面具有高的預後價值。特別地，在使用組合al時，如果無症狀個體有以下情況，則可以說該無症狀個體相對於健康個體具有增加的未來血管事件可能性a!)0.109BNP-0.019CRP-O.022proBNP>0.116，同樣地，以下方程式適用於bl到ml:b!)0.108BNP-0.022proBNP>0.126d)0.031BNP+0.079CRP>0.37山)0.109BNP-0.022proBNP-0.003PAPP-A>0.007e:)0.031BNP+0.102CRP-0.004MPO>0.016f)0.107BNP-0.022proBNP+0.074sCD40L>0.215g。0.031BNP+0.041IL-6+0.078CRP-O.004MPO>0.112h!)0.115BNP-0.092IL-6—0.023proBNP>0.118U-O.002MP0+0.110BNP-O.023proBNP>0.1jj0.156sCD40L+0.112CRP-O.001proBNP>0.151t)0.12sCD40L+0.054IL-6+0.001proBNP>0.23l,)0.107sCD40L+0.001MPO+0.001proBNP>0.216m)0.105sCD40L+0.001proBNP>0.107其中各種標誌物的濃度適用以下單位BNP，pg/ml;proBNP，pg/ml;MPO，ng/ml;D-二聚體,ng/ml;CRP,mg/l;IL-6,pg/ml;PAPP-A，ng/ml;sCD40L，ng/ml。還優選的是，在上述定義的診斷方法中，以下組合用於將具有正常cTnl水平並且沒有ST段上升的群體中的患有不穩定型心絞痛)與沒有ACS的個體加以區分和/或tableseeoriginaldocumentpage24更特別地，組合&2到k2可用於將不穩定型心絞痛個體與健康個體加以區分，組合&3到J3可用於區分具有正常cTnl水平並且沒有ST段上升但是出現作為血管事件的提示的胸痛的不穩定型心絞痛個體。因此，如果滿足以下方程式，則認為具有正常cTnl水平並且沒有ST段上升的個體患有不穩定型心絞痛formulaseeoriginaldocumentpage25其中各種標誌物的濃度適用以下單位formulaseeoriginaldocumentpage25pg/ml;MPO，ng/ml;D-二聚體，ng/ml;CRP，mg/l;IL-6，pg/ml;PAPP-A,ng/ml;sC歸L,ng/ml相反地，如果方程式不適用，則可以說該個體不患有ACS。如本文中使用的，優選使用基於計算機的系統執行用於從測量的標誌物的存在或水平推斷患者發生血管事件的可能性、確定患者是否患有ACS、或確定患者的狀況的上述定義的預後、診斷和測定方法。更優選地，基於計算機的系統包括在自動試驗系統中。憑藉推斷的患者發生血管事件的可能性，本發明的範圍內還包括使用本發明的方法為醫師提供若干治療決定，例如住院治療或藥物療法。特別地，如果認為推斷的患者發生血管事件的可能性是可以忽略的，則建議患者回家，相反地，如果推斷的患者發生血管事件的可能性高，則建議患者住院。可以使用本領域技術人員公知的評分系統評價患者發生血管事件的可能性。這種評分系統特別地描述在Sabatine等人(2002)Circ.105:1760-1763中。例如，取決於用於本發明方法的標誌物組合的每種標誌物分別是存在或不存在或這種標誌物的水平分別是低於或高於標準狀態的預定切分點，為用於本發明方法的標誌物組合的每種標誌物打分Q或1，並且對標誌物組合計算分數總和。或者，使用例如在WO2004/059293中所述的若干切分點，可以使用0和1之間的數值。此外，可以對標誌物水平的某些特定組合釆用加權係數，其反映了特定的生理學情況。然後將該總和與預定值相比較，所述預定值與該患者發生血管事件的可能性有關。這些預定值可以根據本領域技術人員公知的統計方法得到，例如在US2006/0105419(參見Example3)或在EP1666881(參見-)中描述的那些。特別地，這些預定值可以通過使用臨床研究來得到，在所述臨床研究中將在確定的跟蹤期間內或在臨床終點時患者的血管事件的發生與在所述跟蹤期間開始時所述患者的一種或多種生物化學標誌物的水平相關。根據相對於各種示差分析方法的統計顯著性對用於本發明方法的生物化學標誌物進行選擇，所述示差分析方法例如T-Student檢驗、AN0VA、或克-瓦二氏檢驗。標誌物可以另外通過本領域技術人員公知的接受者工作特徵(ReceiverOperatingCharacteristic,ROC)曲線分析根椐它們的區分能力進行選擇(Griner等人AnnalsofInternalMedicine1981;94:555-600)。最後，可以例如通過由Kramar等人Revued'Epid6miologieetSant6PubHque1999;47:376-383描述的一般的mR0C方法或用無監督學習算法例如決策樹、SupportVectorMachines(SVMs)或神經網絡，將最好的標誌物組合，以增加它們的靈敏性(Se)和它們的特異性(Sp)。優選地，上述定義的試劑盒包括分別對標誌物組合的標誌物為特異性的配體，所述標誌物組合選自-proBNP和PAPP-A和任選的選自CRP、IL-6、MP0、sCD40L、D-二聚體和BNP的標誌物；-proBNP，IL-6和選自CRP、sCD40L和BNP的標誌物；-proBNP和BNP和任選的選自CRP、sCD40L和MP0的標誌物；-BNP或proBNP(特別是BNP)和CRP和任選的選自IL-6、MPO、PAPP-A和D-二聚體的標誌物；-proBNP或BNP(特別是proBNP)，sCD40L和任選的選自CRP和MPO的標誌物；-CRP和IL-6;-proBNP或BNP(特別是BNP)和IL-6和任選的CRP和MPO;-proBNP、PAPP-A、CRP、BNP、D-二聚體、IL-6、sCD40L和MPO。實施例l一預期的臨床研究目的臨床研究的目的是要通過測定每種組合的靈敏性、特異性、積極的預測值和消極的預測值來對各種標誌物組合的預測值進行統計學評價。結果的驗證是通過跟蹤在第一次由於胸痛住院之後的3-6個月患者發生的血管事件(疼痛復發、患者的病況惡化為不穩定型心絞痛、非致命性心肌梗塞、致命性心肌梗塞)來進行的。這些標誌物組合的單一患者樣本的自動同時測定對於醫生特別有用，用以幫助醫生確定患有胸痛但是沒有心電圖(ECG)改變也沒有心臟標誌物上升的患者的危險程度。患者有至少300名患者參與這項研究，所述患者由於胸痛就醫但是在住院時沒有ST段上升也沒有心臟肌鉤蛋白I水平上升。釆用以下的招募標準-患者為18歲或更年長，並且呈現胸痛，而在住院時進行的ECG上沒有ST段上升；-患者在住院時進行的cTnl試驗為陰性。此外，為了驗證結果，還選擇了具有或沒有急性冠狀動脈症候群的病理學特徵的各類患者50名心肌梗塞患者具有典型的長期疼痛和ECG改變和/或生物化學標誌物(例如cTnl)上升。100名健康受試者，沒有特定的心血管危險；這一群體在年齡和性別方面是不均勻的。呈現危險因素的患者還包括-吸菸者，-動脈壓高的患者，-衝唐尿病患者，-老年患者，-甘油三酯水平高的患者。28然而，確認患有前述特徵但是疼痛12小時或更長時間的患者未被包括在本研究中。具有不能用於檢驗表明心肌梗塞的ST段缺血性改變的異常ECG的患者(例如具有起搏器的患者)或者在入院時具有cTnl水平升高的患者也未被包括在本研究內。此外，患有炎症性疾病(CRP>15mg/l)和腫瘤的受試者，以及在前一個月中經歷了手術或大的創傷的受試者不被包括在本研究內。此外，已知在入院前3周中患有血栓形成病症或心血管病理學、或者心肌梗塞的患者被排除在本研究之外。患有肝病或腎病的患者未被包括在本研究內，是由於在健康患者中具有快速腎清除率的標誌物出現水平顯著升高的危險。孕婦也被排除在該研究之外。收集關於招募的患者的以下信息年齡、性別、吸菸習慣、糖尿病狀況、疼痛特徵(疼痛位置和強度、持續時間、復發)、入院時的ECG特徵、入院時間、入院時的cTnl試驗結果、最終的診斷。還對絕經期婦女記錄激素替代治療情況。取樣對於每名患者，在標準的EDTA和乾燥管中收集2ml靜脈血。為每個管標記用於識別患者的編碼、取樣日期和時間和入院到取樣的時間間隔。試驗使用本領域中已知的方法對樣品進行關於cTnl、IL-6、hsCRP、MP0、PAPP-A、D-二聚體、sCD40L、BNP和proBNP的試驗。然後在取樣之後3-6個月，根據本領域技術人員公知的統計方法例如方差分析(AN0VA)將每名患者的各種標誌物的水平與所述患者的假定的一種或幾種血管事件的發生相關，例如疼痛復發、患者的病況惡化為不穩定型心絞痛、非致命性心肌梗塞或致命性心肌梗塞。同樣地，其可以確定研究變量(即研究的臨床標誌物)和血管事件之間是否存在有顯著性關係。實施例2—臨床研究材料和方法患者群體研究群體包括32名被懷疑患有急性冠狀動脈症候群(ACS)並且來自急診部的患者(排除沒有ACS的群體)、22名診斷為不穩定型心絞痛的患者、38名急性心肌梗塞患者和47名正常的健康志願者。所有招募的健康志願者和患者參與者都籤署了書面知情同意書。包括由急診部收治的被懷疑患有急性冠狀動脈症候群的具有例如急性胸痛症狀的患者來進行由BraboisHospita1(Centra1UniversityHospitalCHU，Nancy,France)的公共團體審查委員會(institutionalreviewboard)批准的研究流禾呈。在入院之後,進行心電圖(12-導線ECG)和心臟肌釣蛋白I血液水平的試驗(cTnI，StratusCS肌鉀蛋白檢驗，DadeBehring，USA)以便將被證明不穩定型患者與沒有ACS的患者(由於患有急性冠狀動脈症候群而被排除)加以區分。將ST段沒有上井和血漿肌鈣蛋白水平正常(〈0.04ng/ml)的患者包括在內並且分類為不穩定型患者。呈現胸痛和缺血型不適但是沒有被診斷為ACS(即呈現正常的心電圖)的患者定義為排除群體並且允許離開急診部。由^皮診斷為具有ST段上升和/或血漿心臟肌鈣蛋白I升高(>0.04ng/ml)的心肌梗塞患者組成的一個組也被包括在該研究內(留下EDTA血漿樣本的38名，得自HospitalofPoissy-SaintGermainenLaye,France)。為了進行比較，由TeragenixCorporation(US)提供得自健康志願者(25名男性和22名女性)的對照EDTA血漿。將得自所有組的EDTA血液樣本離心並且儲存在-80°C，用於多標誌物組測定。對於排除群體，不穩定組和心肌梗塞組，記錄人口統計學特徵和一系列心血管危險因素，例如吸菸狀況、糖尿病、高血壓、總膽固醇水平和腎功能障礙。所有患者的人口統計學特徵概述在表1中。分析方法生物標誌物測量選擇了8種生物標誌物(由於其涉及心肌損傷和功能障礙、炎症和斑塊破裂)並且在得自對照和確認患有包括心肌梗塞在內的提示性ACS的患者的血漿中進行評價。如下在所有的EDTA血漿中測量一系列8個生物化學變量。評價了心臟肌釣蛋白I(cTnl，AccessAccuTnI，BeckmanCou11er)以驗證最初的肌鈣蛋白I檢驗和急診入院時的招募標準、B型利鈉肽(BNP)(BiositeIncorporated,SanDiego，California)、proBNP(Bio-RadRU0ELISA測定，ClinChem2006;52(6):1054-1061)、白細胞介素-6(IL-6，RDsystems)、D-二聚體(HyphenBiomed,France)和通過比濁法(BNII,DadeBehringinc.,USA)測定的CRP。分別使用單克隆小鼠抗人PAPP-A和MPO抗體(HyTestLtd,Finland)通過雙位點夾層免疫測定法(two-sitesandwichimmunoassay)觀'J量人血漿中的妊娠相關血漿蛋白A(PAPP-A)和髓過氧物酶(MPO)。將cTnl水平高於0.04ng/ral的所有的EDTA血漿從分析中排除，屬於由於沒有ACS和不穩定型患者而被排除。所有的樣本分析由不知道臨床信息的操作者執行。統計分析標誌物診斷性能可以通過靈敏性和特異性來表徵，靈敏性表示檢測患病群體的能力，特異性表示其檢測對照群體的能力。診斷性試驗的評價結果可以概括在比較這兩個明確定義的群體的2x2列聯表中。通過形成切分點(cut-off),兩個群體可以根據試驗的結果分類為不同的種類，分類為陽性的或陰性的。因此，對於特定的標誌物，觀察在"病例"群體中的具有陽性試驗結果的a受試者("真陽性"TP)和在31"對照，，群體中的具有陽性試驗結果的b受試者("真陰性，，TN)。以相同的方式，觀察在病例中具有陰性試驗結果的c受試者("假陽性"FP)和在對照中具有陰性試驗結果的d受試者("假陰性"FN)。靈敏性定義為TP/(TP+FN);我們將其稱為"真陽性率"。其在病例的樣本中計算。因此，試驗在特定切分點的靈敏性(Se)相當於病例中陽性結果的比例。特異性定義為TN/(TN+FP);我們將其稱為"真陰性率"。其在對照的樣本中計算。因此，試驗在特定切分點的特異性(Sp)相當於對照中陰性結果的比例。靈敏性和特異性是對於限定的切分點來計算的。選擇具有最高診斷準確性(最少的假陰性結果和假陽性結果)的標誌物濃度作為限定的切分點或閾值。AUC(曲線下面積)說明了各自的單一標誌物或標誌物組合的診斷性能的總的指標。在將排除的沒有ACS患者與不穩定型患者或心肌梗塞患者進行比較時，用由Kramar等人(Comput.MethodsProgramsBiomed.2001;66:199-207;Revued，Epid6miologieetSan"Publique1999;47:376-83)充分描述的mROC軟體對單一的生物標誌物和對多標誌物組合(多重R0C，mROC)進行接受者工作特徵(ROC)分析。mROC是計算線性組合的專用程序(Su等人JournaloftheAmericanStatisticalAssociation1993;88:1350-1355),用於使所選擇的所有標誌物以及對於所選擇的標誌物的所有兩種或三種標誌物組合的AUC(曲線下面積)R0C最大化(Staack等人BMCUrology2006;6:1-12)。提供了用於各個組合的方程式，並且可以將其用作新的實際的標誌物。對於標誌物組合和對於所選擇的樣本，切分點是相應的一次方程的結果值並且由mROC程序計算才示志物糹且合+刀分點=ax才示志物i+bx才示志物2+cx才示志物3，其中a，b，c為計算的係數和標誌物u,3為各個標誌物的切分點。數據為平均士標準偏差(SD)。所有的數據分布表示為每種生物標32志物的中位數和框圖。通過卡方檢驗評價患者組在人口統計學特徵和臨床特徵方面的差異。對於所有患者組的生物標誌物相關性適用Spearman檢驗相關性。在適當的情況下，還使用克-瓦二氏秩和檢驗在不同的組之間比較生物標誌物水平；在得到顯著性差異時，對成對的組間適用Wi1coxon非參數檢驗。所有的統計學檢驗使用"R"開放源軟體(opensourcesoftware)進行。p值小於0.05被認為是統計學顯著的。tableseeoriginaldocumentpage34表2:對照、排除(沒有急性冠狀動脈症候群)、不穩定型心絞痛和心肌梗塞(MI)患者的血漿生物標物水平tableseeoriginaldocumentpage35數據為平均土標準偏差。-沒有組間差異，*表示相對於一個其它組具有顯著性，**表示相對於兩個其它組具有顯著性，***表示相對於三個其它組具有顯著性。關於人口統計學特徵和臨床特徵的數據分析如表1中說明的，確認患有急性胸痛並且未診斷為ACS的患者在年齡、性別、吸菸者狀態、糖尿病和高膽固醇血症方面在統計學上可與證明為不穩定型的患者相比較。在將心肌梗塞組與被懷疑ACS的群體進行比較時，在年齡、性別、吸菸者狀態、代謝性特徵方面報告了顯著性差異。然而，在心肌梗塞組和被懷疑的ACS群體之間在糖尿病和高膽固醇血症特徵方面是統計學相似的(表1)。正常和患者組中的單一標誌物評價的數據分析使用用於多組比較的克-瓦二氏分析，對一系列生物標誌物，例如cTnl(p=2.216)、D-二聚體(p=5.04—")、BNP(p-2.2—16)、proBNP(p=0.003)、IL-6(p=7.8,、CRP(p=2.2—")和MPO(p=0.009)觀察高度顯著性組間差異。然而，在所有組中，對於作為單一標誌物的PAPP-A(p=0.12)和sCD40L(p=0.89)沒有觀察到顯著性差異。與對照、排除和不穩定型患者相比，心肌梗塞中的血漿cTnl(表示為ng/ml)顯著更高(P-6.15—9到2.2—16)，與臨床研究限定的招募標準完全一致。即使適用0.04ng/ml的cTnl切分點，在對照和排除群體之間(p=0.01)和對照和不穩定型患者之間(p=5.5—5)仍觀察到顯著性差異。如表2中說明的，與排除的患者(分別為p-7.8—n和4.8—12)、不穩定型患者(分別為P=6.3—9和1.49—7)或對照組(分別為p=5.8515和4.35—15)相比，心肌梗塞中的CRP和BNP水平都顯著更高。對照的CRP和BNP水平顯著低於排除的群體(分別為p-O.03和1.08—5)。如通過多重的r-二次方評價的，在對照組0:2-0.81，p=l.99_12)和患者組(r2=0.92，p=l.2—13)中BNP及其前體proBNP得到明確的線性關係。在對照、排除和不穩定型心絞痛群體之間具有類似的PAPP-A、MPO和sCD40L的血漿水平(表2)。在心肌梗塞組中，與對照和被懷疑患有ACS的患者相比，所有的8種生物標誌物顯著地高度升高(p<0.001，表2)，與心肌損傷和功能障礙、炎症和斑塊破裂的病理生理學組分的明顯活化相對應。可以通過CRP、IL-6、BNP、proBNP、D-二聚體、PAPP-A、36MP0、sCD40L和cTnl的血漿水平容易地跟蹤心臟不利事件的高風險(表2)。基於對臨床狀態的接受者工作特徵(ROC)分析和如表3、4、5和6中概括的，對於單獨的標誌物(例如BNP、proBNP、IL-6和CRP)的曲線下面積(AUC)成功地將診斷為心肌梗塞、或排除群體(沒有ACS)或不穩定型心絞痛的患者與健康受試者加以區分。在入院時，單一的標誌物評價，例如BNP、proBNP、sCD40L或IL-6沒有改善具有正常血漿cTnl的作為ACS提示的胸痛患者的危險水平，因為它沒有將沒有ST上升的不穩定型心絞痛患者與沒有ACS的出院患者加以區分(表4、5和6)。基於ROC分析，對包括負責心肌損傷(cTnl)和功能障礙(BNP和proBNP)、炎症(IL-6、CRP、MPO、sCD40L)和斑塊石皮裂(PAPP-A和D-二聚體)的標誌物的單一標誌物評價被證明不能獨自地幫助臨床醫師識別被懷疑ACS的患者為安全的和可以讓其迅速地從急診部離開的有價值的診斷和預後工具。用於診斷和預後的對多標誌物的數據分析在將對照與心肌梗塞、排除和不穩定型心絞痛患者相比較時，採用mROC(多重接受者工作特徵)方法的多標誌物分析顯著地改善AUC(表3、5和6)。由IL-6、CRP和cTnl或IL-6和CRP、或IL-6和BNP組成的標誌物組合對於不穩定型患者的心血管事件的較高危險具有預測值，如較高的靈敏性(分別為94.7%、100%和97.4%)和特異性(分別為100%、86.4%和86.4%)所報告的(表4)。在相同的應用中，由proBNP、CRP和PAPP-A,或proBNP、MP0和PAPP-A，或proBNP、IL-6和PAPP-A，以及proBNP、D-二聚體和PAPP-A組成的標誌物組合組也是使人感興趣的(靈敏性分別為簡、77.8%、88.9%和77.8%)(表6)。當前提議的多標誌物評價通過安全地和迅速地對不穩定型患者與心肌梗塞患者加以區分而在急診部入院時提供了改善ACS診斷的時機。同樣地，被懷疑患有ACS的患者中的其它標誌物組合組例如BNP、D-二聚體和CRP(AUC為0.739),BNP、IL-6和CRP(AUC為0.736)，PAPP-A、MP0和proBNP(AUC為0.919)，PAPP-A、CRP和proBNP(AUC為0.879)也可以幫助臨床醫師安全地診斷具有正常血漿cTnl水平的患者和區分沒有ACS的患者和沒有ST上升的不穩定型患者(表7)。有趣的是，在將具有正常血漿cTnl水平的患者中的一系列標誌物(例如BNP、proBNP、D-二聚體、IL-6、CRP、PAPP-A和sCD40L)組合時，將急性冠狀動脈症候群與排除群體加以區分的能力得到改善(表7)。多標誌物評價的特徵在於具有高的靈敏性(IOOW和特異性(90.9%),以及為0.98的升高的AUC(表7)，這與對於在急診部入院時患有胸部不適和具有正常血漿cTnl的患者的ACS診斷的改善的預測值相對應。因此，負責病理生理學狀態的標誌物例如心肌損傷(cTnl)和功能障礙(BNP和proBNP)、炎症(CRP、MP0、IL-6和sCD4QL)和斑塊石皮裂(PAPP-A和D-二聚體)的組合用以將沒有ACS和允許離開急診部的患者與診斷為不穩定型心絞痛的患者加以區分的靈敏性和特異性得到高度改善，分別達到100%和90.9°/。(表7)。這一多標誌物組合具有0.98的AUC，與有效篩選入院時患有胸痛的患者和與增加安全地允許沒有ACS的患者離開相對應。表3:在與正常受試者相比較時對於心肌梗塞患者的單標誌物和多標誌物組合的接受者工作特徵分析數據標誌物閾值靈敏性(y。)特異性(%)AUCBNP，pg/ml3797.497.90.997MPO,ng/ml173.852.672,30.595D-二聚體，ng/ml694.386.81000.968CRP'mg/13.4210095,70.995IL-6,pg/ml594.793.60.99BNP和CRP80.08197.41000.999BNP和IL-6b0.Ill1001001BNP,IL-6和CRPc0.112100100138AUC是指曲線下面積。曲線是基於通過計算單一標誌物和組合組的靈敏性(％)和特異性(％)的冪預測心血管危險的模型。通過mROC程序計算的標誌物組合的方程式為a)Z=0.001BNP+0.011CRP，b)Z=0.001BNP+0.014IL-6，c)Z=0.001BNP+0.01IL-6+0.009CRP。使用這些方程式計算新的實際的標誌物(Z)。表4:在與不穩定型患者相比較時對於心肌梗塞患者的單一標誌物和多標誌物組合的接受者工作特徵分析數據tableseeoriginaldocumentpage39AUC是指曲線下面積。曲線是基於通過計算單一標誌物和組合組的靈敏性(W和特異性(％)的冪預測心血管危險的模型。通過mROC程序計算的標誌物組合的方程式為a)Z=0.015IL-6+0.008CRP+0.093Tnl,b)Z=0.014IL-6+0.01CRP，c)Z=0.015IL-6+0.001BNP。使用這些方程式計算新的實際的標誌物(Z)。表5:在與正常受試者相比較時對於排除(沒有ACS)群體的單一標誌物和多標誌物組合的接受者工作特徵分析數據tableseeoriginaldocumentpage40AUC是指曲線下面積。曲線是基於通過計算單一標誌物和組合組的靈敏性(％)和特異性(％)的冪預測心血管危險的模型。通過mROC程序計算的標誌物組合的方程式為a)Z=0.109BNP-0.019CRP-0.022proBNP,b)Z=0.108BNP-0.022proBNP，c)Z=0.031BNP+0.079CRP,d)Z=0.109BNP-0.022proBNP-0.003PAPP-A，e)Z=0.031BNP+0.102CRP-0.004MPO，f)Z=0.107BNP-O.022proBNP+0.074sCD40L，g)Z=0.031BNP+0.041IL-6+0.078CRP-0.004MPO，h)Z=0.115BNP—0.092IL-6—0.023proBNP,i)Z=-0.002MPO+0.110BNP-0.023proBNP,j)Z=0.156sCD40L+0.112CRP-0.001proBNP，k)Z=0.12sCD40L+0.054IL-6+0.001proBNP,1)Z=0.107sCD40L+0.001MPO+0.001proBNP，m)Z-0.105sCD40L+0.001proBNP。使用這些方程式計算新的實際的標誌物(Z)。表6:在與正常受試者相比較時對於診斷為不穩定型心絞痛的患者的單標誌物和多標誌物組合的接受者工作特徵分析數據tableseeoriginaldocumentpage410.79AUC是指曲線下面積。曲線是基於通過計算單一標誌物和組合組的靈敏性OO和特異性(％)的冪預測心血管危險的模型。通過mROC程序計算的標誌物組合的方程式為a)Z=0.002BNP+0.078CRP，b)Z=0.001proBNP+0.133CRP-0.07IL-6,c)Z=0.005BNP+0.137CRP-0.208IL-6，d)Z=0.003BNP+0.077CRP-0.002PAPP-A，e)Z=-0.01PAPP-A+0.146CRP+0.001proBNP，f)Z=-0.01PAPP-A+0.003MPO+0.001proBNP,g)Z--0.002BNP+0.130CRP+0.001proBNP，h)Z=-0.007PAPP-A+0.001D-二聚體+0.001proBNP,i)Z=—0.008PAPP—A+0.111IL—6+0.001proBNP,j)Z=—0.006PAPP-A+0.021sCD40L+0.001proBNP,k)Z=-0.006PAPP—A+0.001proBNP。使用這些方程式計算新的實際的標誌物(Z)。表7:在與排除群體相比較時對於診斷為不穩定型心絞痛的患者的單標誌物和多標誌物組合的接受者工作特徵分析數據tableseeoriginaldocumentpage42AUC是指曲線下面積。曲線是基於通過計算單一標誌物和組合組的靈敏性(％)和特異性(％)的冪預測心血管危險的模型。通過mROC程序計算的標誌物組合的方程式為a)Z=0.003BNP-0.001D-二聚體-O.007CRP,b)Z=0.004BNP+0.041CRP—0.127IL—6，c)Z=-0.027PAPP-A+0.005MPO+0.002proBNP，d)Z=-0.03PAPP-A+0.155CRP+0.002proBNP,e)Z=-0.016PAPP-A-0.156sCD40L+0.001proBNP,f)Z=-0.016PAPP-A-0.034IL-6+0.001proBNP,g)Z--0.016PAPP-A-0.001BNP+0.001proBNP,h)Z--0.015PAPP-A+0.001proBNP，i)Z=-0.G6IL-6+0.057CRP+0,001proBNPj)Z=0.016MPO-0.068PAPP-A-O.002D-二聚體+0.011BNP-0.721sC歸L-O.131IL-6+0.249CRP+0.002proBNP。使用這些方程式計算新的實際的標誌物(Z)。本文中所引用的所有參考文獻都被併入本文作為參考。權利要求1.用於被懷疑處於血管事件危險中的患者的血管事件預後的方法，所述患者呈現-在心電圖上未見ST段上升和/或-至少一種壞死標誌物的水平正常，其中測定所述患者的生物樣品中的至少兩種不同生物化學標誌物的存在和/或水平，所述生物化學標誌物選自以下的標誌物組-動脈粥樣硬化斑塊不穩定性標誌物，-動脈粥樣硬化斑塊破裂標誌物，-冠狀動脈炎症標誌物，-血栓形成前狀態標誌物，-血栓形成標誌物，-缺血標誌物，-壞死標誌物和-心肌功能障礙標誌物，從而從測量的生物化學標誌物的存在/水平推斷患者發生血管事件的可能性。2.權利要求1的用於血管事件預後的方法，其中患者呈現胸痛。3.權利要求1或2的用於血管事件預後的方法，其中患者呈現正常的心臟肌釣蛋白水平和/或正常的CK水平。4.權利要求1-3中任一項的用於血管事件預後的方法，其中患者呈現正常的心臟肌鈣蛋白I或心臟肌鉤蛋白T水平並且沒有ST段上升。5.權利要求1-4中任一項的用於血管事件預後的方法，其中-動脈粥樣硬化斑塊不穩定性標誌物選自MP0、sCD40L、IL-6、PAPP-A和膽鹼j-動脈粥樣硬化斑塊破裂標誌物選自MP0、sCD40L、MMPs、膽鹼和PAPP-A;-冠狀動脈炎症標誌物選自MP0、sCD40L、CRP和IL-6;-血栓形成前狀態標誌物是sCD40L或纖維蛋白原；-血栓形成標誌物選自D-二聚體；-缺血標誌物選白IMA、cTnl、cTnT和FABP;-壞死標誌物選自cTnl、cTnT、CK、肌紅蛋白和FABP;-心肌功能障礙標誌物選自BNP、NT-proBNP和proBNP。6.權利要求1-5中任一項的用於血管事件預後的方法，其中生物化學標誌物選自以下的組合-proBNP和PAPP-A和任選的選自CRP，IL-6,MPO,sCD40L,D-二聚體，和BNP的標誌物；-proBNP、IL-6和選自CRP、sCD40L和BNP的標誌物；-proBNP和BNP和任選的選自CRP、sCD40L和MP0的標誌物；-BNP或proBNP和CRP和任選的選自IL-6、MP0、PAPP-A和D-二聚體的標誌物；-proBNP或BNP和sCD40L和任選的選自CRP和MP0的標誌物；-CRP和IL-6;-BNP或proBNP和IL-6和任選的CRP和MP0;-proBNP、PAPP-A、CRP、BNP、D-二聚體、IL-6、sCD40L和MPO。7.權利要求1-6中任一項的用於血管事件預後的方法，其中血管事件選自與心肌血管相關的死亡、心肌梗塞、充血性心力衰竭、血管相關的住院治療和再血管化過程。8.診斷患者的急性冠狀動脈症候群的方法，所述患者呈現-在心電圖上未見ST段上升和/或-至少一種壞死標誌物的水平正常，所述方法包括測量所述患者的生物樣品中的至少兩種不同生物化學標誌物的存在和/或水平，所述生物化學標誌物選自以下的標誌物組-動脈粥樣硬化斑塊不穩定性標誌物，-動脈粥樣^更化斑塊;皮裂標誌物，-冠狀動脈炎症標誌物，-血栓形成前狀態標誌物，-血松形成標誌物，-缺血標誌物，-壞死標誌物和-心肌功能障礙標誌物，從而確定所述患者是否患有ACS。9.權利要求8的用於診斷ACS的方法，其中所述患者呈現胸痛。10.權利要求8或9的用於診斷ACS的方法，其中患者呈現正常的心臟肌釣蛋白水平和/或正常的CK水平。11.權利要求8-10中任一項的用於診斷ACS的方法，其中患者呈現正常的心臟肌鈣蛋白I或心臟肌鈣蛋白T水平並且沒有ST段上升。12.權利要求8-11中任一項的用於診斷ACS的方法，其中生物化學標誌物選自以下的標誌物組合-proBNP和PAPP-A和任選的選自CRP，IL-6，MP0，sCD40L，D-二聚體，和BNP的標誌物；-proBNP,IL-6和選自CRP、sCD40L和BNP的標誌物；-proBNP和BNP和任選的選自CRP、sCD40L和MPO的標誌物；-BNP或proBNP，和CRP和任選的選自IL-6、MP0、PAPP-A和D-二聚體的標誌物；-proBNP或BNP和sCD40L和任選的選自CRP和MPO的標誌物；-CRP和IL-6;-BNP或proBNP和IL-6和4壬選的CRP和MP0;-proBNP、PAPP-A、CRP、BNP、D-二聚體、IL-6、sCD40L和MPO。13.確定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法，包括測量所述患者的生物樣品中的至少兩種不同生物化學標誌物的存在/水平，所述生物化學標誌物選自以下的標誌物組合-proBNP和PAPP-A和任選的選自CRP、IL-6、MPO、sCD40L、D-二聚體和BNP的標誌物；-proBNP，IL-6和選自CRP、sCD40L和BNP的標誌物；-proBNP和BNP和任選的選自CRP、sCD40L和MPO的標誌物；-BNP或proBNP，和CRP和任選的選自IL-6、MPO、PAPP-A和D-二聚體的標誌物；-proBNP或BNP，和sCD40L和^f壬選的選自CRP和MPO的標誌物；-CRP和IL-6;-BNP或proBNP，和IL-6和任選的CRP和MPO;-proBNP、PAPP-A、CRP、BNP、D-二聚體、IL-6、sCD40L和MPO;從而確定個體的狀況。14.權利要求13的用於確定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法，其中所述狀況選自-沒有ACS和-不穩定型心絞痛。15.權利要求13或14的用於確定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法，其中確定(U個體的至少一種壞死標記物的水平，和(n)在患者的心電圖上看見的ST段上升的存在或不存在。16.權利要求15的用於確定被懷疑患有ACS個體的狀況的方法，其中壞死標誌物是心臟肌鈣蛋白I或心臟肌鈣蛋白T。17.設計用於患者的血管事件預後、用於診斷ACS、或用於確定被懷疑患有ACS的個體的狀況的試劑盒，所述試劑盒包括分別對選自以下的標誌物組合的標誌物為特異性的配體-proBNP和PAPP-A和任選的選自CRP,IL-6，MP0，sCD40L,D-二聚體，和BNP的標誌物；-proBNP,IL-6和選自CRP、sCD40L和BNP的標誌物；-proBNP和BNP和任選的選自CRP、sCD40L和MPO的標誌物；-BNP或proBNP和CRP和任選的選自IL-6、MPO、PAPP-A和D-二聚體的標誌物；-proBNP或BNP和sCD40L和^f壬選的選自CRP和MP0的標誌物；-CRP和IL-6;-BNPorproBNP和IL-6和任選的CRP和MP0;-proBNP、PAPP-A、CRP、BNP、D-二聚體、1"、sCD亂和MP0。18.權利要求17的試劑盒，包括一種對心臟肌鈣蛋白I或心臟肌鈣蛋白T為特異性的配體。19.權利要求17或18的試劑盒，其中所述特異性的配體選自-多克隆的、單克隆的和重組的抗體，或其片段，-噬菌體抗體(PhAbs)，-美洲駝和-格駝抗體，適配體。全文摘要本發明涉及被懷疑處於血管事件或病況危險中的患者的血管事件預後或ACS診斷的方法，所述患者呈現在心電圖上未見ST段上升和/或至少一種壞死標誌物的水平正常，其中測量所述患者的生物樣品中的至少兩種不同生物化學標誌物的存在和/或水平，從而從測量的生物化學標誌物MPO、sCD40L、IL-6、PAPP-A、CRP、D-二聚體、肌鈣蛋白和proBNP的存在和/或水平推斷該患者發生血管事件或血管相關病況的可能性。文檔編號G01N33/68GK101568837SQ200780036699公開日2009年10月28日申請日期2007年8月7日優先權日2006年8月7日發明者C·拉呂,E·勒莫阿爾,I·朱利亞尼,S·維拉爾-索西尼申請人:比奧-拉德巴斯德公司;國家科研中心