一種固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法
2023-07-15 01:35:16 1
專利名稱：：一種固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法
技術領域：
：本發明屬於製藥
技術領域：
，尤其是涉及一種固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的新工藝。
背景技術：
：亮丙瑞林，製劑中文名稱為醋酸亮丙瑞林、抑那通或者簡稱亮丙瑞林，英文名稱為Leuprorelinacetate、Enanton，Lucrin等，其結構為pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NtiEt分子式116012分子量1209.41CAS登錄號53714-56-0亮丙瑞林屬於GnRH類似物，作用同布舍瑞林。重複給予大劑量的促黃體生成釋放激素(LH-RH)或其高活性衍生物醋酸亮丙瑞林，在首次給藥後能立即產生一過性的垂體-性腺系統興奮作用(急性作用)，然後抑制垂體生成和釋放促性腺激素。它還進一步抑制卵巢和睪丸對促性腺激素的反應，從而降低雌二醇和睪丸酮的生成(慢性作用)。醋酸亮丙瑞林的促黃體生成激素(LH)釋放活性約為LH-RH的100倍，它的抑制垂體-性腺系統功能的作用也強於LH-RH。o、醋酸亮丙瑞林是高活性的LH-RH衍生物，由於它對蛋白分解酶的抵抗力和對LH-RH受體的親和力都比LH-RH強，所以能有效地抑制垂體-性腺系統的功能。此外，醋酸亮丙瑞林又是一種緩釋製劑，它恆定地向血液中釋放醋酸亮丙瑞林，故能有效地降低卵巢和睪丸的反應，產生高度有利的垂體-性腺系統的抑制作用。對子宮內膜異位症、子宮肌瘤或絕經前乳腺癌患者，每4周1次皮下注射醋酸亮丙瑞林，使血清中雌二醇下降到接近絕經期的水平。因此本品有卵巢功能抑制作用，可抑制正常排卵和使月經停止。對前列腺癌患者皮下注射醋酸亮丙瑞林，每4周1次，使血清睪丸酮濃度降至去勢水平之下，表明本品有藥理學的去勢作用。對患有中樞性性早熟的男孩和女孩每4周1次，皮下注射醋酸亮丙瑞林後，血清中促性腺激素的水平降至青春期前的水平，表明對第二性徵有進行性抑制作用。亮丙瑞林的適應症為子宮內膜異位症;伴有月經過多、下腹痛、腰痛及貧血等的子宮肌瘤；絕經前乳腺癌，且雌激素受體陽性患者；前列腺癌；中樞性性早熟症。臨床主要用於前列腺癌及子宮內膜異位症。亮丙瑞林是1974年由日本武田化工的FujinoMasahiko等人首先發現促黃體激素釋放激素的九肽醯胺類似物具有很好的活性，並且發明合成工藝。其先後在日本、德國、美國等國家申請專利，專利號分別為JP19740027442、DE2446005、US4008209等。隨後，又有一些研究機構和個人發表了一些合成工藝，專利號為EP1088555、EP1777232、US5480868、CN1865280等。目前已經公布的亮丙瑞林製備工藝都有著一定的缺陷，不能在操作複雜性、危險性、生產周期、產品總收率、產品成本和汙染環境等方面達到一種較好的結合；應用價值不高。
發明內容6本發明的目的是提供了一種高收率、低成本、反應條件溫和、環境汙染小、有利於實現產業化的亮丙瑞林的固-液結合的合成工藝，解決現有技術存在的缺陷。為實現上述目的，本發明採取以下技術方案一種固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法，其特徵是，包括如下步驟1)由Fmoc-Pro-OH和替代度為0.2mmol/g1.2mmol/g的HMPB-AM樹脂為起始原料，得到Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂；2)將Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂採用Fmoc/tBu固相法逐一偶聯的方式依次連接具有保護基團的胺基酸，合成得到側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂；3)對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂進行切割，得到側鏈全保護亮丙瑞林前體肽；4)對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽經過乙胺化，得到側鏈全保護亮丙瑞林；5)對側鏈全保護亮丙瑞林經過脫側鏈保護基團的反應，獲得亮丙瑞林粗肽；6)對亮丙瑞林粗肽經過高壓液相柱分離純化、凍幹機凍幹得到亮丙瑞林精肽。優選的方案是所述HMPB-AM樹脂替代度為0.6mmol/g。更為優選的方案是所述保護的Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂，是Fmoc-Pro-OH與HMPB-AM樹脂以有機溶劑作反應溶劑，在有機鹼的作用下生成「所述有機溶劑是N，N-二甲基甲醯胺(DMF)，或者是二氯甲烷(DCM)，或者是N-甲基吡咯烷酮(NMP)，或者是二甲基亞碸(DMSO);所述有機鹼是N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)，或者是三乙胺(TEA)，或者是N-甲基嗎啡啉(NMM),或者是2，4，6-三甲基吡啶(TMP)。更為優選的方案是所述有機溶劑是N，N-二甲基甲醯胺(DMF);所述有機鹼是N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)。更為優選的方案是所述的具有保護基團的胺基酸釆用Fmoc基團保護，各種胺基酸分別以Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc誦D-Leu-OH、Fmoc誦Tyr-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和pGlu的形式應用。更為優選的方案是所述的Fmoc保護基通過20%六氫哌啶的DMF溶液處理來除去。更為優選的方案是所述逐一偶聯時胺基酸相對於合成規模的投料比為1-6倍；所述逐一偶聯劑體系是DCC/HOBt，或者是EDC/HOBt，或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt，或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt;偶聯反應溶劑是四氫呋喃(THF)，或者是二氧六環、N，N-二甲基甲醯胺(DMF)，或者是二氯甲烷(DCM)，或者是N-甲基吡咯烷酮(NMP)，或者是二甲基亞碸(DMSO);偶聯反應的有機鹼是N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)，或者是三乙胺(TEA)，或者是N-甲基嗎啡啉(NMM)，或者是2，4，6-三甲基吡啶(TMP);偶聯反應時間為1-3小時。更為優選的方案是所述逐一偶聯時胺基酸相對於合成規模的投料比為2倍，偶聯劑體系是DCC/HOBt，偶聯反應溶劑是二氯甲垸(DCM)，偶聯反應的有機鹼是N,N-二異丙基乙胺(DIPEA),偶聯反應時間為2小時。更為優選的方案是所述的逐一偶聯時偶聯反應結束和脫去Fmoc保護後經過KaiserTest檢測。更為優選的方案是所述的裂解體系是三氟乙酸的二氯甲烷溶液，或者是三氟乙醇的二氯甲垸溶液。更為優選的方案是所述的裂解體系是1%三氟乙酸的二氯甲烷溶液。更為優選的方案是所述的對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽進行乙胺化反應，乙胺化試劑是乙胺/乙酸乙酯溶液，或者是乙胺/乙醇溶液，或者是乙胺/二氯甲烷溶液，或者是乙胺/四氫呋喃溶液和乙胺鹽酸鹽；偶聯試劑或者是DCC/HOBt，或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt，或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是EDC.HCl/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt;乙胺的用量是相對於亮丙瑞林的全保護肽摩爾數的l-10倍；乙胺化反應的溫度是0-40攝氏度；乙胺化反應的時間是12-24小時。更為優選的方案是所述的對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽進行乙胺化反應，乙胺化試劑是乙胺/乙酸乙酯溶液，偶聯試劑是DCC/HOBt，乙胺的用量是相對於亮丙瑞林的全保護肽摩爾數的8倍；乙胺化反應的溫度是30攝氏度；乙胺化反應的時間是18小時。更為優選的方案是所述在對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽進行乙胺化反應結束後，對反應液進行後處理時採用萃取方式，順序為1M鹽酸洗、水洗、10%碳酸氫鈉洗、水洗、飽和氯化鈉洗。更為優選的方案是所述側鏈全保護亮丙瑞林粗肽經過脫側鏈保護基團的反應，獲得亮丙瑞林粗品的實驗過程中，使用的裂解液體系是三氟乙酸:水(95:5v/v)，或者是三氟乙酸:水:三乙基矽烷(90:5:5v/v)，或者是三氟乙酸:苯甲硫醚:水:苯酚:l，2-乙二硫醇(82.5:5:5:5:2.5v/v)，或者是三氟乙酸:苯甲硫醚:水:苯酚:l，2-乙二硫醇:三異丙基矽烷(82.5:5:5:5:2.5:1v/v)，或者是三氟乙酸:苯甲硫醚:苯甲醚:l，2-乙二硫醇(90:5:3:2v/v);裂解反應時間是1-4小時。更為優選的方案是所述側鏈全保護亮丙瑞林粗肽脫側鏈保護基團的反應，使用的裂解液是三氟乙酸.'水:三乙基矽烷(90:5:5v/v)體系，裂解反應時間是2小時。更為優選的方案是所述亮丙瑞林粗肽經過高壓液相柱分離純化、凍幹機凍幹得到亮丙瑞林精肽，在使用高壓液相柱分離純化粗品的過程中填料採用C18反相填料。與已有技術相比，本發明具有如下優點和有益效果本發明提供了一種反應條件溫和、環境汙染小、有利於實現產業化的亮丙瑞林的固-液結合的合成工藝，具有反應操作簡單、後處理容易、原料投入少、成本低、收率髙等特點，具有可觀的經濟實用價值，同時在多肽藥物設計合成領域具有廣泛的應用前景。圖l是本發明總的工藝流程圖。具體實施例方式下面結合附圖和具體實施例對本發明做進一步詳細說明說明書和權利要求書中所使用的縮寫的含義列如表1所示表1縮略詞表Fmoc9-芴甲氧羰基HBTUO-苯並三唑-N，N,N，,N，-四甲基脲鑰六氟磷酸鹽HATU0-C7-偶氮苯並三氮唑-l-氧)-N,N，N，，N，-四甲基脲鎗六氟磷酸鹽TBTUO-(苯並三唑-1-氧)-N，N,N，，N，-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽PyBOP(苯並三唑-l—氧)三吡咯烷子基磷鎗六氟磷酸鹽DIC二異丙基碳二亞胺HOBt1-羥基苯並三唑10tableseeoriginaldocumentpage11具體實施例方式實施例lFmoc-Pro-HMPB-AM樹脂的製備採用替代度為0.2mmol/g的HMPB-AM樹脂進行反應，得到的Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂檢測替代度為0.15mmol/g，完成同樣摩爾量的生產過程耗費樹脂量大，溶劑量大，不經濟且不利於環保，不宜使用；採用替代度為1.2mmol/g的HMPB-AM樹脂進行反應，得到的Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂檢測替代度可達0.87mmol/g，雖然完成同樣摩爾量的生產過程耗費樹脂量小，但因得到的粗肽純度降低30%，使得下遊純化收率降低60-70%。本實施例更為優選的方案為將HMPB-AM樹脂lll.Og，替代度為0.9mmol/g，加入到固相反應柱中，用DMF洗滌1次，用DCM溶脹樹脂30分鐘後，將77.6gFmoc-Pro-OH，加入上述裝有樹脂的反應柱中反應2小時。反應結束，用DMF洗滌3次，DCM洗3次，用甲醇封閉30分鐘，後用甲醇收縮得到Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂，檢測替代度為0.6mmol/g。實施例2側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂的製備稱取100gFmoc-Pro-HMPB-AM樹脂(0.6mmol/g，60mmol)加入反應器中，用DMF洗滌一次，用DCM溶脹0.5小時。溶脹結束，用20%DBLK去除Fmoc保護，後用DMF洗滌4次，DCM洗2次。將77.76gFmoc-Arg(pbf)-OH(120mmol)，24.315gHOBt(180mmo1)，37.8gDCC溶於DCM中(可以加入少量DMF助溶)，加入固相反應器中，室溫反應2h(反應終點以茚三酮法檢測為準)。重複以上步驟，依次完成Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Tyr-OH、、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和pGlu等剩餘胺基酸的連接。當pGlu偶聯結束後，將樹脂用DMF洗滌3次，DCM洗3次，後用甲醇收縮，放置在真空乾燥器中乾燥過夜。第二天，稱重得到側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂201.082g(樹脂增重率99.1%)。實施例3側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂的製備稱取1111.lgFmoc-Pro-HMPB-AM樹脂(0.45mmol/g,500mmol)加入反應器中，用DMF洗滌一次，用DCM溶脹0.5小時。溶脹結束，用20XDBLK去除Fmoc保護，後用DMF洗滌4次，DCM洗2次。將6化.8gFmoc-Arg(pbf)陽OH(lOOOmmol),202.7gHOBt(1500mmo1)，568.8gHBTU(1500mmol)溶於DCM中(可以加入少量DMF助溶)，加入固相反應器中，接著將523.0ml(3000mmol)DIPEA導入反應柱，室溫反應2h(反應終點以茚三酮法檢測為準)。重複以上步驟，依次完成Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Tyr-OH、、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和pGki等剩餘胺基酸的連接。當pGhi偶聯結束後，將樹脂用DMF洗滌3次，DCM洗3次，後用甲醇收縮，放置在真空乾燥器中乾燥過夜。第二天，稱重得到側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂1921.2g(樹脂增重率95.3%)。實施例4pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Trt)-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(pbf)-Pro-OH的製備(側鏈全保護亮丙瑞林前體肽的製備)將201.082g側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂(60mmo1)加入到3000ml圓底燒瓶中，配製裂解試劑2000ml(三氟乙醇1800ml，DCM200ml)，將裂解試劑倒入樹脂中，室溫反應1小時。反應結束，過濾樹脂，收集濾液。用少量DCM洗滌樹脂，合併濾液，將濾液減壓蒸乾，並且真空乾燥，得到側鏈全保護亮丙瑞林前體粗肽104.2g(HPLC純度86.5%，收率92.04%，MS1889)。實施例5pGlu-His(Trt)-T卬(Boc)-Ser(Trt)-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(pbf)-Pro-OH的製備(側鏈全保護亮丙瑞林前體肽的製備)將1921.2g側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂(500mmo1)加入到30L反應釜中，配製裂解試劑300L(三氟乙酸3L，DCM297L)，將裂解試劑倒入樹脂中，室溫反應4小時。反應結束，過濾樹脂，收集濾液。用少量DCM洗滌樹脂，合併濾液，將濾液減壓蒸乾，並且真空乾燥，得到側鏈全保護亮丙瑞林前體粗肽880.3g(HPLC純度89.7%，收率93.2%，MS1889)。實施例6pGlu-ffis(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Trt)-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(pbf)-Pro-NHCH2CH3的製備(側鏈全保護亮丙瑞林)將104.2g側鏈全保護亮丙瑞林前體粗肽(55.2mmol)加到2000ml的三口燒瓶中，加入500ml二氯甲烷使其完全溶解。稱取115.9gDCC和74.25gHOBt(552mmo1)加入到上述反應瓶中，劇烈攪拌反應30min。30min後再反應瓶中加入550mllmol/L乙胺的二氯甲烷溶液，室溫反應過夜。反應結束，用1M鹽酸洗、水洗、10%碳酸氫鈉洗、水洗、飽和氯化鈉洗，然後用無水硫酸鎂乾燥1小時。乾燥結束，過濾濾液濃縮蒸乾，減壓乾燥得側鏈全保護亮丙瑞林105.2g(HPLC純度80.5%，收率99.5%，MS1916)。實施例7pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Trt)-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(pbf)-Pro-NHCH2CH313的製備(側鏈全保護亮丙瑞林)將880.3g側鏈全保護亮丙瑞林前體粗肽(466.0mmol)加入到30L的反應釜中，加入10LDMF將固體完全溶解。10min後加入969.8gPyBOP(1864mmol)和251.6gHOBt(1864mmo1)，同時加入379.8g乙胺鹽酸鹽，反應過夜。反應結束，將反應液倒入IOL冰水中，過濾，乾燥，稱重得側鏈全保護亮丙瑞林878.6g(HPLC純度84.2%，收率98.4%，MS1916)。實施例8亮丙瑞林粗肽的製備將19.2g側鏈全保護亮丙瑞林(10mmo1，純度80.5%)加入到250ml反應瓶中，將配製好的裂解試劑200mL(三氟乙酸190ml，水10ml)倒入至上述反應瓶中，室溫反應2小時。反應結束，將反應液倒入至2000ml冰乙醚中，洗出大量白色沉澱，離心，洗滌，乾燥稱重得亮丙瑞林粗肽11.872g(HPLC純度85.7。/。，收率98.2%,MS1209)。實施例9亮丙瑞林精肽的製備將11.872g亮丙瑞林粗品使用高效液相製備色譜純化，流動相A相0.1。/o-0.30/o磷酸水溶液用三乙胺調pH至2.0-3.0;B相乙腈和甲醇(V乙腈V甲醇-4:1)混合液。流速70-80ml/min。.檢測波長280nm。梯度B%:12%43%(55min)，收集純度大於98.5%以上餾分，濃縮、凍幹得到7.242g亮丙瑞林的精肽(HPLC純度>98.5%，收率61.0%，MS1209)，總收率56.0%。以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限於這些說明。對於本發明所屬
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的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬於本發明的保護範圍。權利要求1.一種固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法，其特徵是，包括如下步驟1)由Fmoc-Pro-OH和替代度為0.2mmol/g～1.2mmol/g的HMPB-AM樹脂為起始原料，得到Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂；2)將Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂採用Fmoc/tBu固相法逐一偶聯的方式依次連接具有保護基團的胺基酸，合成得到側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂；3)對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂進行切割，得到側鏈全保護亮丙瑞林前體肽；4)對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽經過乙胺化，得到側鏈全保護亮丙瑞林；5)對側鏈全保護亮丙瑞林經過脫側鏈保護基團的反應，獲得亮丙瑞林粗肽；6)對亮丙瑞林粗肽經過高壓液相柱分離純化、凍幹機凍幹得到亮丙瑞林精肽。2.如權利要求1所述固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法方法，其特徵在於所述HMPB-AM樹脂替代度為0.6mmol/g，所述保護的Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂是Fmoc-Pro-OH與HMPB-AM樹脂以有機溶劑作反應溶劑，在有機鹼的作用下生成；所述有機溶劑是N，N-二甲基甲醯胺，或者是二氯甲烷，或者是N-甲基吡咯垸酮，或者是二甲基亞碸；所述有機鹼是N，N-二異丙基乙胺，或者是三乙胺，或者是N-甲基嗎啡啉，或者是2，4，6-三甲基吡啶。3.如權利要求1所述固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法方法，其特徵在於所述的具有保護基團的胺基酸採用Fmoc基團保護，各種胺基酸分別以Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Tyr隱OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc曙His(Trt)曙OH和pGlu的形式應用。所述逐一偶聯時胺基酸相對於合成規模的投料比為1-6倍；所述逐一偶聯劑體系是DCC/HOBt，或者是EDC/HOBt，或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt,或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt;偶聯反應溶劑是四氫呋喃，或者是二氧六環、N，N-二甲基甲醯胺，或者是二氯甲垸，或者是N-甲基吡咯烷酮，或者是二甲基亞碸；偶聯反應的有機鹼是N，N-二異丙基乙胺，或者是三乙胺，或者是N-甲基嗎啡啉，或者是2，4，6-三甲基吡啶；偶聯反應時間為1-3小時。4.根據權利要求1所述固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法，其特徵在於所述的對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂進行切割反應中，裂解體系是三氟乙酸的二氯甲烷溶液或三氟乙醇的二氯甲烷溶液。5.根據權利要求1所述固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法，其特徵在於所述的對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽進行乙胺化反應，乙胺化試劑是乙胺/乙酸乙酯溶液，或者是乙胺/乙醇溶液，或者是乙胺/二氯甲烷溶液，或者是乙胺/四氫呋喃溶液和乙胺鹽酸鹽；偶聯試劑或者是DCC/HOBt，或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt，或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是EDCHCl/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt;乙胺的用量是相對於亮丙瑞林的全保護肽摩爾數的1-10倍；乙胺化反應的溫度是0-40攝氏度；乙胺化反應的時間是12-24小時；所述在對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽進行乙胺化反應結束後，對反應液進行後處理時採用萃取方式，順序為1M鹽酸洗、水洗、10%碳酸氫鈉洗、水洗、飽和氯化鈉洗。6.根據權利要求1所述固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法，其特徵在於所述側鏈全保護亮丙瑞林粗肽經過脫側鏈保護基團的反應，獲得亮丙瑞林粗品的實驗過程中，使用的裂解液體系是三氟乙酸:水二95:5(v/v)，或者是三氟乙酸:水:三乙基矽垸-90:5:5(v/v)，或者是三氟乙酸:苯甲硫醚:水:苯酚:l，2-乙二硫醇=82.5:5:5:5:2.5(v/v)，或者是三氟乙酸:苯甲硫醚:水:苯酚:l,2-乙二硫醇:三異丙基矽烷=82.5:5:5:5:2.5:1(v/v),或者是三氟乙酸:苯甲硫醚:苯甲醚:l，2-乙二硫醇=90:5:3:2(v/v);裂解反應時間是1-4小時。7.如權利要求l-6任一所述固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法，其特徵在於所述的脫側鏈保護基團的反應中，Fmoc保護基通過20。/。六氫哌啶的DMF溶液處理來除去。8.如權利要求7所述固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法，其特徵在於所述的逐一偶聯時偶聯反應結束和脫去Fmoc保護後經過KaiserTest檢測。9.根據權利要求8所述固相法和液相法結合製備亮丙瑞林的方法，其特徵在於所述的高壓液相柱分離純化粗品的過程中填料採用C18反相填料。全文摘要本發明公開了一種固相法和液相法結合合成亮丙瑞林的新工藝，包括步驟1)由Fmoc-Pro-OH和HMPB-AM樹脂為起始原料，得到Fmoc-Pro-HMPB-AM樹脂；2)逐一偶聯合成側鏈全保護亮丙瑞林前體肽-HMPB-AM樹脂；3)對其進行切割，得到側鏈全保護亮丙瑞林前體肽；4)對側鏈全保護亮丙瑞林前體肽乙胺化，得到側鏈全保護亮丙瑞林；5)對側鏈全保護亮丙瑞林經脫側鏈保護基團反應，獲得亮丙瑞林的粗品；6)亮丙瑞林的粗品經過分離純化、凍幹得到亮丙瑞林精肽。本發明具備大規模化生產能力，操作簡易、工藝穩定、生產成本低，總收率超過50％，具有極為可觀的經濟實用價值和廣泛的應用前景。文檔編號C07K7/00GK101538315SQ20091010499公開日2009年9月23日申請日期2009年1月13日優先權日2009年1月13日發明者建劉,李紅玲,袁建成,馬亞平申請人:深圳市翰宇藥業有限公司