一種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素及其製備方法

2023-07-14 06:49:11 1

專利名稱：一種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素及其製備方法
技術領域：
本發明涉及ー種可用於皮膚美容保健及延緩皮膚衰老的組合精華素及其製備方法。它是用從新鮮鹿茸中提取分離的、具有天然生物活性的鹿茸多肽及其保護劑為主要功效成分的複合鹿茸多肽凍乾粉、與具有促進功效成分透皮吸收的納米級緩衝微乳按一定比例配成的組合美容精華素，具體涉及ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素及其製備方法。
背景技術：
一、美容精華素的技術背景:精華素是將從某些動物臟器或組織、天然植物或中草藥、海洋生物、微生物等中提取、分離、純化出來的天然功效成分或生物活性物質或皮膚營養素等，按照一定的比例添加到某些高品質液體化妝品中即可製備成具有不同美容功效和皮膚抗衰老作用的美容精華素，這是當今美容化妝品和皮膚抗衰老外用製劑中最受消費者青睞和歡迎的劑型之一。目前國際上無論是哪個國家的精華素產品、也無論是哪個品牌的精華素，無論其中含有什麼成分、或者具有何種功能的精華素，無非有兩種劑型，即水劑型精華素和油劑型精華素兩種。在中國，目前，用於面部美容的精華素之中大都含有某些皮膚組織及其細胞生存和生長所需要的營養素、細胞生長因子、抗氧化生物酶、保溼因子、生物活性物、天然植物及中草藥提取物和植物揮髮油、以及膠原蛋白水解液、胎牛血漿或血清等，因此誕生了諸如皮膚抗衰老精華素、皮膚營養精華素、皮膚美白精華素、皮膚抗皺精華素、皮膚保溼精華素、皮膚祛斑精華素、豐胸美體精華素、纖體瘦身精華素、香薰精華素等。人們習慣地認為，只要平時經常使用它就有一定的皮膚抗衰、防老、抗皺、保溼、美白、去斑等作用。當皮膚自然衰老而出現較多皺紋、或因季節變化皮膚變得乾燥粗糙、因不良習慣變得面部灰暗無光、因長時間光照皮膚色素加深時，都會選擇使用不同類型的精華素。ニ、鹿茸多肽的
背景技術：
近年來，相關領域的研究人員已經對鹿茸、特別是新鮮鹿茸中ー些具有高度生物的活性物質和功效成分進行研究、開發和應用，如對鹿茸多肽及鹿茸生長因子應用性研究工作正陸續展開。由於鹿茸自我生長和再生修復速度很快，因此人們推測鹿茸中可能存在某種與一般組織不同或者種類更多、含量更加豐富的鹿茸活性多肽因子(主要包括鹿茸多肽和生長因子)，從而有序控制、有效刺激著鹿茸的快速生長，並促進鹿茸骨質和表皮層的迅速增生。目前，鹿茸多肽正在被相關醫學領域研究和應用:(I)用於創傷癒合:鹿茸多肽能加速實驗性骨折大鼠骨痂的形成和骨折的癒合，改善骨折部位的生物力學性能，對骨痂內骨膠原的積累和鈣鹽沉積有促進作用；鹿茸多肽還是一種促細胞有絲分裂劑，能刺激軟骨細胞和成骨樣細胞増殖；且鹿茸多肽對大鼠背部皮膚缺損有修復作用，對表皮細胞和成纖維細胞增殖也有明顯的促進作用，能加速皮膚創傷癒合。(2)用於神經損傷修復:鹿茸總多肽在體外可促進神經幹細胞向神經元分化。它能促進大鼠坐骨神經損傷後神經再生、カロ快其神經軸突生長速度，有助於坐骨神經功能的恢復。鹿茸多肽還能促進周圍神經生長，主要是通過擴張神經外周及內部血管，改善損傷神經的微環境，提高微動脈血流量等作用實現；同時,還具有加快損傷神經變性壞死物質的清除,增加對神經再生物質的供給,加快軸漿的恢復，進而防止神經元壞死，促進神經損傷早期的再生功能。(3)用於免疫功能提升:鹿茸混合多肽有對抗環磷醯胺所誘導的小鼠白細胞和骨髄有核細胞減少，能提高血清總蛋白、白蛋白及球蛋白含量以及吞噬細胞的吞噬功能；對紅細胞免疫功能、特異或非特異性免疫功能具有一定的提升作用。(4)用於抗炎作用:鹿茸多肽可對各種急、慢性炎症發揮明顯的抑制作用，並可使腎上腺皮質的興奮性和刺激作用增強。而鹿茸多肽的有明顯抗炎作用。提高抗氧化作用:鹿茸多肽可提高小鼠清除自由基的能力，降低動物組織腦和肝組織中丙ニ醛(MDA)含量，抑制細胞脂質過氧化水平和生物膜受損程度；且在體外能抑制大鼠腦、肝、腎微粒體脂質過氧化反應及還原型細胞色素C形成，提高機體的抗氧化作用。(6)用於腫瘤抑制:鹿茸多肽對大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤株有顯著的促分化作用，井能抑制腫瘤細胞的増殖。同時，能使腫瘤模型 動物的生存時間顯著延長，抗腫瘤作用顯現。(7)對性功能影響:鹿茸多肽使腺垂體細胞培養液中黃體生成素含量增多，睪丸精原細胞數目增多，生精細胞層數增多，睪酮素分泌增多。然而，人們過去對新鮮鹿茸的提取多採用傳統的煎、煮、熬或烘烤、風乾、粉碎、酒泡等古老方式，在很大程度上破壞了不耐熱、易變性的多肽、蛋白質等活性成分，其中可用於皮膚外用方面的生物活性物質及其功效成分少之又少，加上過去對新鮮鹿茸功效成分的測定和分析多集中在一般組成成分和普通生化組分等方面，因此，鹿茸生物活性物質和功效成分在皮膚方面鮮少應用，在化妝品美容保健和皮膚抗衰老方面的應用更加稀少。近年來，國內外學者相繼發現和報導了新鮮鹿茸中不僅具有能促進細胞核糖體及蛋白質合成的鹿茸多肽，而且還從新鮮鹿茸中提取分離了具有多肽類活性物質的細胞生長因子，並證明該鹿茸活性多肽及其細胞因子大約由68個胺基酸組成，其分子量月7200道爾頓，純品鹿茸多肽的性狀為淡黃色粉末，屬於水溶性物質，易溶於水。同時還證實，在提取分離的鹿茸多肽中，還含有其它能促進細胞分裂和増殖的多種細胞生長因子，如角質形成細胞因子(KGF)、表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、胰島素樣生長因子(IGF)、血小板衍生因子(TOGF)、血管內皮細胞生長因子(VEGF)、神經生長因子(NGF)、轉化生長因子(TGF)等，真正是ー個鹿茸多肽及細胞生長因子庫。而這些具有天然生物活性的鹿茸多肽及細胞生長因子，是目前公認的皮膚美容保健、延緩皮膚衰老和皮膚屏障功能重建的重要功效成分和生物活性物質。因此，鹿茸多肽及其細胞生長因子的發現和提取分離，為其在皮膚美容保健之中的應用奠定了基礎。三、微乳的
背景技術：
微乳(microemulsion，ME)是ー種由水相、油相、表面活性劑及助表面活性劑所組成的外觀澄清透明的、液滴粒徑小於IOOnm的、且熱力學和動力學均十分穩定的液態體系。微乳以極小微粒著稱，它的乳滴可自由分散在另ー種液體之中而形成膠體分散系統，其乳滴形狀多為球形，且大小基本均勻一致，流動性良好，即使經過一定溫度下的長時間放置、加熱或高壓滅菌或離心分離也不會使之分層。即使在相組成臨界點上，由於溫度發生變化而被破壞，但當恢復到正常溫度吋，此系統又可自主恢復到微乳狀態。微乳和普通乳狀液具有三個根本點:第一，普通乳液的形成一般需要外界提供能量，而微乳則是自發形成的;第ニ，普通乳液是熱力學不穩定體系，在存放過程中將發生聚結而最終分為油、水兩相。而微乳則是熱力學和動力學均穩定體系，不會發生聚結。第三，普通乳液的粒徑通常在微米級，而微乳的粒徑基本控制在lO-lOOnm，並可作為脂溶性和水溶性營養物質與功效成分的載體。微乳中的營養物質與功效成分根據其親脂性和親水性的差異，可能主要存在於油相、水相、油水界面膜相，或在各相之間進行分布。營養物質與功效成分的解離性質、脂水分配係數可能有所變化，這樣，營養物質與功效成分在微乳系統中就可能呈現出不同的穩定性及其分布特徵等。微乳作為功效成分載體和促進透皮吸收滲透劑，與普通乳劑相比，微乳粒徑微小至納米級、且分布非常均勻，因此，更加有利幹與生物活性物質和功效成分相融合和均勻分布，使其透皮作用更佳，生物利用度更高；而且，與脂質體等其它相比，微乳性質更加穩定，且製備更易エ業化或產業化。當前同類技術或產品的不足之處目前美容精華素應用的不足之處:美容精華素的生產簡便、操作容易、使用方便、且在實際應用及其作用功效上確有很多優點和優勢，然而，其明顯的缺陷和不足也有不少。目前美容精華素應用的不足之處主要有如下方面:第一，大多數用於皮膚美容的精華素中含有不同濃度的こ醇，使用時具有一定的嗅覺刺激性和皮膚刺激性，特別是某些對こ醇敏感的膚質很容易引起皮膚過敏和皮膚乾燥，而且對眼睛也有不同程度的刺激性；第二，美容精華素的作用和功效主要依賴於其中所含有或添加的功效成分及其生物活性，但很多功效成分及其生物活性在液體或溶劑之中很容易降解或水解，以至於很多功效成分的分子結構破壞、生物活性喪失、生理功能降低；第三，美容精華素的頻繁開啟容易揮發和丟失部分溶齊U，使其中功效成分的溶解性和穩定性降低，不僅影響產品的感官和質量，而且也影響到產品的穩定性和實際效果，因此，精華素通常較難保存、且貯存期不太長；第四，美容精華素在經常使用過程中如未注意衛生，很容易使其造成汙染、滋生大量有害或致病性微生物，從而影響皮膚健康、甚至造成交叉感染；第五，為促進功效成分和生物活性物質透皮吸收，某些美容精華素中添加了一定濃度的促透皮滲透劑，而有些促透皮滲透劑較易引起皮膚過敏或刺激、過多使用甚至有一定的生物毒性(如DMSO等)；第六，美容精華素中大多數是水溶性物質、即使其中添加了某些油溶性物質，需要添加ー些乳化劑或助乳化劑才能使其均勻分散、完全溶解，但即使添加ー些乳`化劑或助乳化劑也很難維持精華素的長久穩定性、且某些乳化劑或助乳化劑使用曾有引起皮膚過敏的報導；第七，更重要的是，精華素中的溶劑本身並不具備促進功效成分經皮滲透和吸收的作用，即使目前人們在精華素中人為添加ー些所謂促皮膚滲透劑，但其實際促透皮滲透作用又非常有限，特別是由於皮膚屏障結構的組織學特點，嚴格限制了一些外源性物質，包括蛋白質、水、糖、脂質、維生素、無機離子或化妝品功效成分等物質通過，絕大多數功效成分均無法或很難通過完整的皮膚角質層屏障發揮應有的生物學作用，因此，添加到精華素中的功效成分和生物活性物質的生物利用度較小、生物學作用和使用效果有限。目前鹿茸多肽應用的不足之處:鹿茸多肽作為具有生物活性的功效成分具有廣泛的生物學作用和應用領域，但鹿茸多肽目前主要在醫學研究和部分臨床領域中應用，尚未見在皮膚美容保健和延緩皮膚衰老中應用的正式產品。而且，如果採用現有方法製備的鹿茸多肽在皮膚美容保健和延緩皮膚老化產品中應用仍然存在一定局限性和不足之處。主要表現在:(I)採用傳統加熱、強酸或酶蛋白水解新鮮鹿茸所得到的鹿茸多肽雖多肽含量較高、且得率較高，但加熱、強酸或酶蛋白水解方法不僅較多浪費能源和汙染環境，而且所得鹿茸多肽在很大程度上失去了天然生物活性，實際應用時其生物學作用和生理學功能有限，也難以最大限度發揮和達到鹿茸多肽本應具有的應用效果；(2)採用目前常規的酸醇法提取分離所得鹿茸多肽，其分子構象、天然特性等較傳統方法較多保留、生物學活性也有所提高，但酸醇法所得鹿茸多肽較為粗糙、純度不高、且含有較多不溶性雜質和皮質類固醇激素及性激素，這些直接用在皮膚美容保健和延緩皮膚老化方面可能存在著皮膚刺激及過敏風險和副作用等；(3)採用柱層析法或高效液相進ー步純化，雖能得到分子量分布均ー性較好、純度較高、生物活性較好的鹿茸多肽，但採用此法所得鹿茸多肽不僅得率很低、操作繁瑣、需要特殊儀器設備、應用成本高、價格貴等，而且該法難以產業化擴試和規模生產，也無法普及應用；加上該法完全剔除其它成分、包括具有協同增效的功效成分，故實際應用效果也很有限；(4)鹿茸多肽在液體中不易保存、且易於降解、生物活性也大大降低，而採用凍乾粉並輔以保護劑和增效劑才是最佳方案。目前微乳應用的不足之處:雖然目前已有微乳產品，有些也許其粒徑也能達到納米級，但目前配製的微乳，儘管其組方及其比例不盡相同，特別是其水相均用去離子水或蒸餾水，這雖對整個微乳形成至關重要，但·採用蒸餾水作為水相配製微乳對其PH值無緩衝和穩定作用，特別是ー些用於皮膚美容、抗衰老、再生修復、促進皮膚細胞増殖等功能性的美容化妝品對PH值的穩定性具有更高要求，特別是用於促進表皮和真皮細胞増殖的活性多肽和細胞因子類美容化妝品，不僅需要最佳的PH值環境，而且，還需要穩定的pH條件才能更加有利於皮膚細胞生長和増殖；不僅如此，皮膚細胞生存、生長和分裂、增殖還需要一定的離子濃度和滲透壓，而這些，僅採用原來所用的水相(蒸餾水)是無法具備的、也是其應用的缺陷和不足。本發明的納米級微乳配方中的水相棄用蒸餾水而採用的0.01mol/LPH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水目前檢索尚未發現有人在微乳製備時使用，利用此微乳配方及製備方法不僅為皮膚細胞生長和増殖提供了良好的微環境，而且，還為其提供了較為穩定而合適的PH條件以及優越的離子濃度和滲透壓；同時，還可緩衝或中和該產品在實際應用於面部皮膚之後因為面部皮膚的PH值較低而出現整個微乳系統pH值的波動或下降，從而更加有利於皮膚組織細胞的生長和增殖以及新生細胞生理功能的充分發揮。

發明內容
本發明針對目前相關技術及其製劑的某些缺陷和不足，發明ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素。該組合精華素中的複合鹿茸多肽凍乾粉中的鹿茸多肽不僅具有良好的天然構象、生物活性和分子量小等特點，且複合鹿茸多肽凍乾粉中還具有完全匹配的鹿茸多肽活性保護性和協同增效劑；該組合精華素中的納米級緩衝微乳不僅具有粒徑小、分布均勻、速溶複合鹿茸多肽凍乾粉、促進功效成分與生物活性物質滲透及透皮吸收好·等優點，還具有皮膚組織細胞生長和增殖最為有利和適宜的PH值、離子濃度和滲透壓等微環境。而且，複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，其透皮吸收性更好、穩定性更好、感觀良好、療效性更好、使用更安全和方便。而且，本發明的目的還在於提供ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素的製備方法。同時，針對上述相關技術及其製劑的某些缺陷和不足等問題，本發明提供解決這些缺陷問題的方案如下。
本發明的設計原則本發明總體設計原則是:利用鹿茸多肽高效天然生物活性及其與保護劑和增效劑複合後的共濟協同作用所具有的獨特皮膚抗衰老、表皮修復及皮膚屏障功能重建與美容保健生物學效應和生理學功效、以及鹿茸多肽生物活性不易在液體中長久保存而製備成凍乾粉等；同時，利用納米級緩衝微乳具有對鹿茸多肽及其保護劑和增效劑的良好溶解性和包容性以及活化效應，特別是納米級緩衝微乳作為良好經皮傳遞載體的促進鹿茸多肽及其保護劑和增效劑的透皮吸收作用等，發明ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素。本發明具體設計原則是:首先設計ー種能成功從新鮮鹿茸中提取分離具有天然生物活性、高效生理學作用的鹿茸多肽的エ藝技術和操作方法、並獲得品質優良的小分子鹿茸多肽；再將這種具有天然生物活性、高效生理學作用及促進皮膚組織細胞増殖和相關蛋白組合成、表達與分泌的小分子鹿茸多肽與不同種類的鹿茸多肽凍幹保護劑和協同增效劑按照合適的比例進行複合配製並製備出複合鹿茸多肽凍乾粉，使之具有更長作用效應、更好協同效果和更久保存期等；然後，設計並配製能與該複合鹿茸多肽凍乾粉完全匹配、相溶、且具有促進鹿茸多肽及其保護增效劑透皮吸收的納米級緩衝微乳，並將它作為複合鹿茸多肽凍乾粉的溶媒及經皮傳遞與透皮吸收載體；最後，試製並確定複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳最佳比例、並配製出具有皮膚抗衰老與美容保健作用的組合精華素。使本發明的這種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，在未混合前既能長久保留鹿茸多肽的天然構象及分子結構，又能持續發揮鹿茸多肽的高度生物活性和生理功能，還解決了鹿茸多肽在液體中長期保存易於分解或降解並不斷失去其生物活性等問題；同時，使納米級緩衝微乳既保留了美容精華素所具有的使用方便和舒適等特點和優勢，又具有高效經皮傳遞載體和促進透皮吸收的功能，還營造和提供了有利於皮膚組織細胞生長、發育、増殖和代謝最佳的細胞微環境，即合適的營養條件、生長因子、PH值、離子濃度、滲透壓等，使這種複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素在實際應用中具有更好的皮膚抗衰老和美容保健效果。本發明的技術方案(一 )本發明組合精華素的組方及其比例:1.ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，其特徵在於它是由具有皮膚抗衰老和美容保健作用的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳兩個部分所組成，其各自原料組成的百分比分別如下:(I)複合鹿茸多肽凍乾粉原料組成重量百分比是:鹿茸多肽:0.01 0.50 ;甘露醇:0.10 1.50 ;甘氨酸:0.10 1.50 ;脯氨酸:0.10 1.50 ;羥脯氨酸:0.10 1.50 ;白蛋白:0.20 2.50。(2)納米級緩衝微乳原料組成重量百分比是:pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.01mol/L):20.0 60.0 ;肉豆蘧酸異丙酯:5.0 25.0 ;辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯:
15.0 55.0 ;聚甘油脂肪酸酷:5.0 30.0。(3) 複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素組成重量百分比是:複合鹿茸多肽凍乾粉:0.01-10.0 ;納米級緩衝微乳:90.0-99.99。2.ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，其特徵是它由具有皮膚抗衰老和美容保健作用的複合鹿茸多肽凍乾粉各原料組成的優選百分比與納米級緩衝微乳各原料組成的優選百分比分別如下:(I)複合鹿茸多肽凍乾粉原料組成的優選重量百分比是:鹿茸多肽:0.02 ;甘露醇:0.50 ;甘氨酸:0.50 ;脯氨酸:0.50 ;羥脯氨酸:0.50 ;白蛋白:0.98。(2)納米級緩衝微乳原料組成的優選重量百分比:pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.01mol/L):36.0 ;肉豆蘧酸異丙酯:14.0 ;辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯:37.5 ;聚甘油脂肪酸酷:12.5。(3)複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素組成的重量百分比:複合鹿茸多肽凍乾粉:3.0 ;納米級緩衝微乳:97.0。3.ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，其特徵在於它們是由3%的複合鹿茸多肽凍乾粉和97%的納米級緩衝微乳所組成。3%的複合鹿茸多肽凍乾粉是由鹿茸多肽、甘露醇、甘氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸和白蛋白所組成；而97%的複合鹿茸多肽凍乾粉溶媒-納米級緩衝微乳則是由:水相(0.01mol/LpH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水)、油相(肉豆蘧酸異丙酷)、表面活性劑(辛酸癸酸聚こニ醇甘油酷)和助表面活性劑(聚甘油脂肪酸酷)所組成。( ニ)本發明組合精華素製備技術及操作方法:
1、複合鹿茸多肽凍乾粉的製備技術及操作方法:(I)準確稱取剛剛從雄性梅花鹿割據下來的含血新鮮鹿茸，並將其切成小塊後，直接放入高速電動勻漿器的容器之中。(2)配製pH4.0醋酸-醋酸鈉(HAc-NaAc)緩衝溶液作為新鮮鹿茸酸解勻漿液 』然後，按照新鮮鹿茸10倍的比例將事先預冷的該酸解勻漿液添加到內有新鮮鹿茸小塊的高速電動勻漿器之中，並立即進行酸解勻漿。(3)收集並合併上述新鮮鹿茸酸解勻漿液，立即放置於高速冷凍離心機中高速離心，留取高速離心後的上層清液(上清液)，並用量筒計量其體積。(4)將此上清液用粗濾器進行過濾後，再用超濾器和分子量為10萬道爾頓的聚碸中空纖維超濾膜進行超濾；小心收集分子量< 10萬道爾頓的全部透過液(首次超濾透過液)，並計量體積(ml)。(5)將分子量< 10萬道爾頓的全部透過液(首次超濾透過液)用超濾器和分子量為I萬道爾頓的聚碸中空纖維超濾膜再次進行超濾；小心收集分子量< I萬道爾頓的全部透過液(二次超濾透過液)，並計量體積(ml)。(6)將分子量< I萬道爾頓的全部透過液(二次超濾透過液)用納濾器和分子量為300道爾頓的納濾膜對上述體積過大的透過液進行濃縮，可得到被納濾膜截留的濃縮液(三次納濾截留液)，其中含有分子量在300-10000道爾頓之間的、與皮膚美容和抗衰老相關的鹿茸多肽及細胞因子。且經過該納濾膜後，可除去皮膚美容禁用的性激素和皮質類固醇激素，如睪酮素(分子量在288.42)、皮質醇(分子量在362.46)、雌醇(分子量在270)、雌ニ醇(分子量在272.38)、雌三醇(分子量在288)、黃體酮(分子量在314.47)等。(7)檢測並調整納濾膜截留液中鹿茸多肽含量，使其達到2mg/ml後，再取該調整液IOOml (鹿茸多肽總含量0.20g)，分別加入甘露醇5.0g、甘氨酸5.0g、脯氨酸5.0g、羥脯氨酸5.0g、白蛋白9.8g,充分混合均勻。(8)將上述含鹿茸多肽濃縮液及其保護劑和增效劑的鹿茸多肽複合液經0.45 y m濾菌器超濾後分裝至規格為IOml的西林瓶中，每支西林瓶中加入該複合液1.0ml，如此可分裝100支西林瓶中；然後，按照冷凍乾燥的規範化程序，放置到冷凍乾燥機中進行冷凍乾燥，即可得到每個西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羥脯氨酸50mg、白蛋白98mg的複合鹿茸多肽凍乾粉，加蓋後，立即進行壓蓋密封，並於_20°C低溫冰箱保存備用。2、納米級緩衝微乳的製備:(I)在室溫條件下，首先按照辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯:聚甘油脂肪酸酷=3: I的比例，準確吸取辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯375ml和聚甘油脂肪酸酷125ml，並放置在同一個潔淨的IOOOml容器之中；然後，再用JB-3A型定時恆溫磁力攪拌器進行充分攪拌，轉速200rpm/min,連續IOmin,使之完全混勻為辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯與聚甘油脂肪酸酯的混合液500ml。(2)分別量取360ml pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.01mol/L)和140ml肉豆蘧酸異丙酯，分別加至500ml辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯與聚甘油脂肪酸酷混合液中；用定時恆溫磁力攪拌器進行充分攪拌，轉速200rpm/min,連續30min,即可得到液體總量為IOOOml的無色透明的納米級緩衝微乳。(3)將此納米級緩衝微乳分別分裝至規格為IOml的無色透明的西林瓶中，每個西林瓶中加入該液IOml,如此可分裝到100支西林瓶中；加蓋後,立即進行壓蓋密封,並置於陰涼、乾燥、通風處保存備用。這樣，裝有納米級緩衝微乳的西林瓶數量與含有複合鹿茸多肽凍乾粉的西林瓶的數量相同。(4)此時，該納米級緩衝微乳原料組成的優選重量百分比正好是:pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.0lmol/L) 36.0、肉豆蘧酸異丙酯14.0 ;辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯37.5、聚甘油脂肪酸酷12.5。3、複合鹿茸多 肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素的製備與用法:(I)複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素的製備:各取I支裝有複合鹿茸多肽凍乾粉和納米級緩衝微乳的西林瓶、並開啟瓶蓋。立即將納米級緩衝微乳倒入至複合鹿茸多肽凍乾粉中，將其反覆顛倒輕輕混勻3min，直到複合鹿茸多肽凍乾粉完全被溶解為止；再用無色透明滴瓶上的滴管將此完全溶解液全部轉移到帶滴管的無色透明滴瓶中混勻、加蓋，即成為IOml複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，可直接將其進行皮膚或面部外用。由於每支有複合鹿茸多肽凍乾粉的西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、輕脯氨酸50mg、白蛋白98mg,而姆支凍乾粉需要添加IOml納米級緩衝微乳後才可配製成本發明組合精華素，亦即每IOml組合精華素中含有鹿鸞多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、輕脯氨酸50mg、白蛋白98mg。如以配製IOOml組合精華素計算，即將IOml組合精華素中各成分相應擴大10倍，則每IOOml組合精華素中複合鹿茸多肽凍乾粉中各物質的百分比含量正好是:鹿茸多肽:0.02 ;甘露醇:
0.50 ;甘氨酸:0.50 ;脯氨酸:0.50 ;羥脯氨酸:0.50 ;白蛋白:0.98。而複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素組成的重量百分比也正好是:複合鹿茸多肽凍乾粉3.0、納米級緩衝微乳97.0。(2)複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素的使用方法:正式使用前，先按照醫學美容規範化要求去除面部皮膚老化的角質(僅在首次使用吋)；以後使用吋，則按照常規潔面法清潔面部皮膚；待皮膚完全乾燥後，即可取本發明組合精華素10-20滴於手掌之中並使其均勻分散；然後，以此輕輕塗擦或拍打面部，直至其基本擦乾和吸收乾淨即可；如皮膚仍然乾燥，可按此法再重複一次；每天使用2-3次，連續使用30天為ー個使用周期。如某些面部老化較為明顯或嚴重者，可按照上述用法連續使用3個周期、直至獲得明顯效果為止。本發明的創新點和有益.效果1、目前鹿茸多肽作為主要功效成分多用於ロ服以提高機體免疫功能等用途，也有將鹿茸多肽作為注射液用於骨損傷修復及促進成骨細胞増殖等用途，但將鹿茸多肽作為主要功效成用於配製護膚化妝品及美容保健品和皮膚抗衰老產品目前國內外尚未見報導。本發明採用複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳合理應用和優勢互補結合模式現用現配組合精華素、並將其直接用於營養護膚、表皮細胞增殖及活化、以及抗皺、祛斑、雷射、磨削或果酸去死皮(無細胞結構的老化角質層)過度等引起的表皮損傷和皮膚角質層剝脫後修復、表皮屏障功能重建等皮膚美容保健和皮膚抗衰老領域此乃首次，而且在其組成體系及組方成分與比例設計、以及其製備方法和應用模式等方面具有創新性。或者說，目前國內外用於皮膚抗衰老和美容保健的所有精華素中尚未見以鹿茸多肽作為主要功效成分配製的產品，更無將複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳按照特定組方和比例現用現配的組合精華素。 2、目前製備和市售的鹿茸多肽多及其相關產品主要來源於傳統エ藝及酸醇法從鹿茸中提取分離的粗品鹿茸多肽，其中不僅含有較多不溶性雜質和美容化妝品產品中明令禁止添加的類固醇皮質激素和性激素(包括雌ニ醇、雌三醇、黃體酮、睪酮素、脫氫表雄酮、皮質醇等)，而且，這些鹿茸多肽的天然構象和分子結構及生物活性等在提取分離時均受到不同程度影響、甚至出現明顯改變，限制和影響了其應用範圍和使用效果。但是，採用本發明製備的複合鹿茸多肽不僅鹿茸多肽含量高、分子量較小，而且，含有多種與皮膚抗衰老和美容保健相關的細胞生長因子(如表皮細胞生長因子、成纖維細胞生長因子、轉化因子、胰島素樣生長因子)等具有天然生物活性的增效協同成分，尤其是採用本發明製備方法中採用分子量300道爾頓的納濾膜進行超濾後，不僅起到了對鹿茸多肽濃度的調控作用，且去除了新鮮鹿茸中所固有的類固醇皮質激素和性激素。3、本發明製備方法提取鹿茸多肽採用的原料是含血新鮮鹿茸，而傳統方法及酸醇法提取鹿茸多肽則是採用經過大量自來水衝洗和蒸餾水漂洗的不含血鹿茸。鹿茸血本身就來源稀少、非常稀缺和珍貴、且含有大量豐富的與皮膚美容保健和延緩皮膚衰老相關的生物活性物質。本發明所用含血鹿茸不僅可得鹿茸中更加優質的鹿茸多肽，而且，還同時可得鹿茸血中包括鹿茸多肽在內的生物活性物質；更重要的是，直接採用剛從雄性梅花鹿割據下來的新鮮鹿茸提取鹿茸多肽，還可大大筒化提取エ藝，提高工作效率，節省製備時間，提高多肽資源利用，減輕環境汙染，降低水源浪費，減少生產成本等。4、本發明製備方法提取鹿茸多肽所用醋酸-醋酸鈉緩衝系統的pH值較傳統酸醇法pH3.0-3.5的範圍提高到pH3.8-4.0範圍，使多肽生成條件更加溫和，大分子水解或降解反應更加合理，從而，既可提高鹿茸多肽得率，又能獲得更多優質鹿茸多肽，還能更好保持其天然構象和生物活性，而且，還能保留其中更多細胞生長因子等與皮膚美容保健和延緩皮膚衰老相關生物活性物質。
5、本發明製備方法提取鹿茸多肽時徹底摒棄了傳統酸醇法中添加高純度和高濃度こ醇等汙染環境、又不安全、還可使部分多肽變性的化學提取分離法，而改為通過不同分子量超濾膜等物理分離法，這些創新不僅可得到更高得率的鹿茸多肽，且能更好保持其天然構象和生物活性，而且還能保留其中更多細胞生長因子等與皮膚美容保健和延緩皮膚衰老相關生物活性物質。6、作為天然生物製劑在皮膚抗衰老和美容保健之中應用時，主要功效成分鹿茸多肽不僅需要較長時間保留其原有分子結構及其天然生物活性，而且，還需要復配其它保護劑和增效劑及其共濟協同劑，以增強和提高其生物學作用和生理學功能的近期和遠期效果。本發明的複合鹿茸多肽凍乾粉正是按皮膚抗衰老和美容保健作用效果合理設計了相應的保護劑和增效劑及其共濟協同成分，而複合鹿茸多肽凍乾粉中的整體配方與組合及其比例也與目前相關產品不同。7、本發明中複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳均適合於產業化、也易於大規模批量生產。按照本發明實施，相關領域的技術人員很容易實現。因此，有利於該發明的普及和推廣應用。8、複合鹿茸多肽凍乾粉為本發明重要功效成分和生物活性物質，將其設計為固態形式，不僅易於包裝和運輸，也不容易破碎和洩漏，還不容易受到汙染、病原性微生物也難以滋生和繁殖；而且，複合鹿茸多肽凍乾粉這種固態形式極易保存、低溫和常溫均可，大大延長該產品的保存期和使用期。同時，鹿茸多肽等功效成分和生物活性物質在固態時也不易分解或降解。因此，複合鹿茸多肽凍乾粉這種固態形式既能夠保留其功效成分的生物活性，又能夠保持其生物學作用和生理學功能，且使其作用更好、效果更明顯。9、複合鹿茸多肽凍乾粉中除了鹿茸多肽之外，還有多種細胞生長因子等，以及保護、活化、協同和增效其生物學作用和生理學功能的輔佐成分，使生物活性更高、組成成分更全、生物利用度更好、生物學效應更強，從而，更加有利於共濟協同和聯合增效作用的發揮，也更加有利於多方位、多層次、多靶點的發揮皮膚抗衰老和美容保健作用。

10、複合鹿茸多肽凍乾粉作為本發明最重要的功效成分、以及其相應的保護劑和增效劑及其共濟協同成分如無匹配、合適、穩定的溶媒系統包容和活化，將很難達到預期之目的、也很難最大限度發揮其高效生物學效應和最佳生理學作用。本發明的納米級緩衝微乳不僅具有能快速溶解和良好保護鹿茸多肽天然生物活性的特點和實效，而且，這種納米級緩衝微乳既能為原位皮膚組織細胞和新生細胞的生存、生長和増殖分化提供穩定和良好的生化微環境，而且，還能最大限度地促進複合鹿茸多肽及其保護劑、增效劑和共濟協同成分不斷滲透和透皮吸收，使本發明最重要的功效成分複合鹿茸多肽以及其相應保護劑、增效劑和共濟協同成分最大限度發揮其高效生物學效應和最佳生理學作用。11、複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素採用現用現配的方式，也是有別於常規美容精華素的不同之處。按照本發明實施，既能夠保持組合精華素的品質，又能夠防止鹿茸多肽等生物活性成分因在精華素基質及其溶媒中的水解或降解而失去其生物活性。特別是，採用納米級緩衝微乳作為精華素基質及溶媒，能使複合鹿茸多肽凍乾粉中各個成分更容易溶解和分散；而且，採用納米級緩衝微乳作為精華素基質及溶媒所配製的組合精華素，顆粒微小、分布均勻、使用更加舒適和宜人；同吋，採用納米級緩衝微乳作為精華素基質及溶媒所配製的組合精華素，能攜帶複合鹿茸多肽凍乾粉中更多生物活性物質，並有效促進這些生物活性物質和功效成分透皮吸收，使其生物利用度更好、使鹿茸多肽更加穩定，生物學作用和功能更強。12、本發明的納米級微乳配方中的水相棄用蒸餾水而採用的0.01mol/LpH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水目前檢索尚未發現有人在微乳製備時使用，也未見在美容精華素中直接應用。利用該磷酸鹽緩衝生理鹽水進行微乳配方及製備方法，不僅為皮膚細胞生長和増殖提供了良好的微環境，而且，還為其提供了較為穩定而合適的PH條件以及優越的離子濃度和滲透壓；同時，還可緩衝或中和該產品在實際應用於面部皮膚之後因為面部皮膚的PH值較低而出現整個微乳系統PH值的波動或下降，從而更加有利於皮膚組織細胞的生長和增殖以及新生細胞生理功能的充分發揮。


圖1.複合鹿茸多肽凍乾粉的製備エ藝流程及技術路線圖。圖2.納米級緩衝微乳的製備エ藝流程及技術路線圖。圖3.組合精華素的製備エ藝流程及技術路線圖。圖4.實驗例2中給藥側與對照側含水量的對比示意圖。圖5.實驗例3中自願者自評與研究者對使用本發明產品後不同時間皮膚水分情況評分對比示意圖。圖6.實驗例3中自願者自評與研究者對使用本發明產品後不同時間皮膚彈性情況評分對比示意圖。圖7.實驗例3中自願者自 評與研究者對使用本發明產品後不同時間皮膚膚色情況評分對比示意圖。 圖8.實驗例3中自願者自評與研究者對使用本發明產品後不同時間皮膚細紋情況評分對比示意圖。
具體實施例方式實施舉例1:複合鹿茸多肽凍乾粉的製備:(I)準確稱取剛從活體梅花鹿割據下來的含血新鮮鹿茸100g，使用鋒利的菜刀或鋼鋸將其切成大小約為0.5cm3左右的小塊，置於4°C冰箱中保存備用。(2)分別用已潔淨乾燥和消毒過的容量瓶配製0.2mol/L的醋酸鈉溶液和0.2mol/L的醋酸溶液；然後，分別準確量取醋酸鈉溶液80ml和醋酸溶液920ml，並置於同一容器中進行混合，調整該溶液PH值至4.0，再用蒸餾水定容至IOOOml，使之成為pH4.0的醋酸-醋酸鈉(HAc-NaAc)緩衝溶液，立即蓋好容量瓶塞，並馬上放置於4°C冰箱之中進行預冷備用。(3)立即將上述預冷的含血新鮮鹿茸小塊全部放置於FSH-1I型高速電動勻漿器的容器之中，並將已配製並預冷好的PH4.0的醋酸-醋酸鈉(HAc-NaAc)緩衝溶液作為新鮮鹿茸酸解勻漿液；然後按新鮮鹿茸10倍的比例將上述IOOOml預冷醋酸-醋酸鈉(HAc-NaAc)緩衝溶液分兩次添加到內有含血新鮮鹿茸小塊的高速電動勻漿器的容器之中，毎次啟動高速電動勻漿器20min進行酸解勻漿。(3)分次收集併合井鹿茸酸解勻漿液，並立即置於高速冷凍離心機中高速離心。高速冷凍離心機的離心溫度為4°C,轉速為8500rpm/min,離心時間20min。
(4)離心完成後，留取離心後的上層清液(上清液)，並用量筒準確計量其體積。然後，將此上清液用超濾裝置中連接的粗濾器先進行過濾後，再經過該超濾裝置中分子量為10萬道爾頓的聚碸中空纖維超濾膜進行首次超濾；小心收集分子量 10萬道爾頓的截留液用於本發明之外的其它用途。(5)將上述分子量< 10萬道爾頓的全部透過液(首次超濾透過液)再用超濾器和分子量為I萬道爾頓的聚碸中空纖維超濾膜進行第二次超濾；小心收集分子量< I萬道爾頓的全部透過液(二次超濾透過液)，並計量體積(ml)。同吋，棄除分子量 I萬道爾頓的截留液用於本發明之外的其它用途。(6)將收集分子量< I萬道爾頓的全部透過液(二次超濾透過液)再用納濾器和分子量為300道爾頓的納濾膜對上述體積過大的透過液進行濃縮，可得到被納濾膜截留的濃縮液(三次納濾截留液)，其中含有分子量在300-10000道爾頓之間的、與皮膚美容和抗衰老相關的鹿茸多肽及細胞因子。 研究發現，從新鮮鹿茸中分離提取得到的分子量在10000道爾頓及其以下的蛋白質肽類物質中含有多種細胞生長因子，如胰島素樣生長因子、表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、神經生長因子類物質、轉化生長因子等；且經過該納濾膜後，可除去皮膚美容禁用的性激素和皮質類固醇激素，如睪酮素(分子量在288.42)、皮質醇(分子量在362.46)、雌醇(分子量在270)、雌ニ醇(分子量在272.38)、雌三醇(分子量在288)、黃體酮(分子量在314.47)等。(7)檢測經過納濾器和300道爾頓納濾膜截留液中鹿茸多肽含量，然後，通過濃縮或稀釋的方式調整納濾膜截留液中鹿茸多肽含量，使其達到2mg/ml。(8)準確吸取經過調整為2mg/ml的鹿茸多肽液IOOml (鹿茸多肽總含量0.20g)；然後，各準確稱取甘露醇5.0g、甘氨酸5.0g、脯氨酸5.0g、輕脯氨酸5.0g、白蛋白9.8g,分別將它們加入到IOOml (鹿茸多肽總含量0.20g)鹿茸多肽液之中，最後用JB-3A型定時恆溫磁力攪拌器進行充分混勻，轉速200轉/分，連續10-20min，直到其中的固形物完全被溶解為止。(9)將上述含有鹿茸多肽濃縮液及其保護劑和增效劑的複合液，經過規格為
0.45um濾菌膜進行超濾除菌後即可得到無菌鹿茸多肽複合液，立即按照無菌操作要求在超淨工作檯中將其分別分裝至已消毒過的規格為IOml西林瓶之中。每支西林瓶中加入
1.0ml，如此可分裝100支西林瓶中；然後，再按照冷凍乾燥的規範化程序，放置到冷凍乾燥機中進行冷凍乾燥；迅速加蓋，並立即進行壓蓋密封，即可得到每個西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、輕脯氨酸50mg、白蛋白98mg的複合鹿鸞多肽凍乾粉；然後，將其迅速置於_20°C冰箱之中冷凍保存備用。實施舉例2:納米級緩衝微乳的製備:(I)將肉豆蘧酸異丙酯(IPM)作為油相，辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯⑶作為表面活性剤，聚甘油脂肪酸酷(C)為助表面活性剤，pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.0lmol/L)作
為水相。室溫下將IPM與水相分別以9.8: 0.2,9: 1、8: 2、7: 3.....2: 8、I: 9、
0.2: 9.8的比例混合，設定表面活性劑與助表面活性劑的質量比(S/C)即Km值分別為1、
2.3、4並配製S/C滴定液，將配製的滴定液用來滴定IPM與水相組成ニ元液。滴定過程中，當ニ元液變為澄清時，通過肉眼觀察有無乳光產生並結合Zeta粒徑測定判斷是否形成微乳，記錄形成微乳時S/C滴定液的消耗量並計算出油相，水相，表面活性劑和助表面活性劑各成份在微乳體系中的百分比，通過軟體計算分析即可知道形成微乳時各成分的比值。結果顯示Km = 3時，微乳區域最大，同時為了降低表明活性劑的用量等綜合考慮，因此在Km=3時我們選擇納米級緩衝微乳各成分比例為pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.01mol/L):肉豆蘧酸異丙酯(IPM): (S/C)為36%: 14%: 50%。(2)在無菌間之中，首先按照辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯:聚甘油脂肪酸酷=3: I的比例，分別用已潔淨、乾燥、消毒過的量筒準確量取辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯375ml和聚甘油脂肪酸酷125ml ;之後，在室溫中，將它們再倒入到同一個潔淨、乾燥、消毒過的IOOOml容器之中；然後，再用JB-3A型定時恆溫磁力攪拌器進行充分攪拌，轉速200轉/分，連續10-20min，使之充分攪拌、完全混勻為辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯與聚甘油脂肪酸酷的混合液 500ml。(3)分別量取360ml pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.01mol/L)和140ml肉豆蘧酸異丙酷，並將它們分別加到上述500ml辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯與聚甘油脂肪酸酷的混合液中；然後用JB-3A型定時恆溫磁力攪拌器充分攪拌，轉速200轉/分，連續30min，即可得到液體總量為IOOOml無色透明的納米級緩衝微乳。(4)將此納米級緩衝微乳經過規格為0.45 y m濾菌膜進行超濾除菌後，立即按照無菌操作要求在超淨工作檯中將其分別分裝至已消毒過的規格為IOml無色透明的西林瓶之中。每個西林瓶中加入該液10ml，如此分裝可得到100支西林瓶裝的無菌納米級緩衝微乳；立即加蓋，迅速進行壓蓋密封，井置於陰涼、乾燥、通風、避光處保存備用。這樣，裝有納米級緩衝微乳的西林瓶數量與含有複合鹿茸多肽凍乾粉的西林瓶的數量相同。(5)而且，該納米級緩衝微乳原料組成的優選重量百分比正好是:pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.0lmol/L) 36.0、肉豆蘧酸異丙酯14.0 ;辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯37.5、聚甘油脂肪酸酷12.5。實施舉例3:組合精華素的製備與用法:`
(I)複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素的製備:各取I支裝有複合鹿茸多肽凍乾粉和納米級緩衝微乳的西林瓶、並開啟瓶蓋。直接將納米級緩衝微乳倒入至複合鹿茸多肽凍乾粉中，加蓋反覆顛倒混勻，直到複合鹿茸多肽凍乾粉完全溶解為止；再用無色透明滴瓶上的滴管將此溶解液全部轉移到帶滴管的無色透明滴瓶中混勻、加蓋，即成為10毫升複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素。由於每支有複合鹿茸多肽凍乾粉的西林瓶中含鹿鸞多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、輕脯氨酸50mg、白蛋白98mg，而每支凍乾粉需要添加IOml納米級緩衝微乳後才可配製成本發明組合精華素，亦即每10毫升組合精華素中含有鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羥脯氨酸50mg、白蛋白98mg。如以配製IOOml組合精華素計算，即將IOml組合精華素中各成分相應擴大10倍，則每IOOml組合精華素中複合鹿茸多肽凍乾粉中各物質的百分比含量正好是:鹿茸多肽:0.02 ;甘露醇:0.50 ;甘氨酸:0.50 ;脯氨酸:0.50 ;羥脯氨酸:
0.50;白蛋白:0.98。而複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素組成的百分比(W/V)也正好是:複合鹿茸多肽凍乾粉3.0、納米級緩衝微乳97.0。(2)複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素的使用方法:正式使用前，先按照醫學美容規範化要求去除面部皮膚老化的角質(僅在首次使用吋)；以後使用吋，則按照常規潔面法清潔面部皮膚；待皮膚完全乾燥後，即可取本發明組合精華素10-20滴於手掌之中並使其均勻分散；然後，以此輕輕塗擦或拍打面部，直至其基本擦乾和吸收乾淨即可；如皮膚仍然乾燥，可按此法再重複一次；每天使用2-3次，連續使用30天為ー個使用周期。如某些面部老化較為明顯或嚴重者，可按照上述用法連續使用3個周期、直至獲得明顯效果為止。下面通過實驗例進ー步說明上述製備的本發明組合精華素的的有益效果。實驗例1:鹿茸多肽因子組合精華素的透皮滲透率實驗。本實驗主要研究鹿茸多肽因子組合精華素(複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素)與單純複合鹿茸多肽凍乾粉(用PH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.0lmol/L)稀釋)通過Franz體外透皮擴散儀對這兩個對象的透皮濾實驗進行比較。結果顯示鹿茸多肽因子組合精華素比單純用磷酸鹽緩衝生理鹽水溶解的複合鹿茸多肽凍乾粉単位面積累積透皮吸收量高，說明了採用納米級緩衝微乳作為精華素基質及溶媒所配製的組合精華素，能更有效促進這些生物活性物質和功效成分透皮吸收。實驗例2:鹿茸多肽因子組合精華素的皮膚修復效果:健康大鼠6隻，雌雄各半，在大鼠背部皮膚備皮24h後，用50%甘醇酸在脫毛區2cmX2cm範圍輕輕反覆塗抹10分鐘，用棉球吸除多餘液體，即為皮膚角質剝脫損傷模型。然後在大鼠皮膚損傷處ー側塗抹鹿茸多肽因子組合精華素，另ー側塗抹生理鹽水，每天塗抹兩次，連續15天，在實 驗過程中觀察動物皮膚以及動物整體，在使用後是否會出現刺激性和不良反應，並於15天時檢測損傷皮膚的含水量。實驗結果顯示皮膚損傷後塗抹鹿茸多肽能明顯改善大鼠剝脫損傷的皮膚，本實驗塗抹15天後，給藥側傷痕明顯少於對照側，且檢測出給藥側含水量明顯高於對照側(如圖4)，兩組差異有統計學意義(P < 0.05)。實驗例3:鹿茸多肽因子組合精華素的臨床試驗:隨機招募符合入選標準和排除標準的健康志願受試者30例健康中老年志願者，均為女性，年齡範圍為40 57歲，平均年齡(48.12±5.45)歲，職業為醫護人員26人、普通工人4人。按照美容醫學試驗及臨床觀察設計，每天面部塗搽兩次，毎次使用10滴(大約0.5ml左右)，連續不間斷使用天然鹿茸活性多肽因子凍乾粉與活化劑(液)配製的組合精華素，使用周期為4周。並且，在美容醫學及臨床試驗前、使用過程中、使用後的4周內，每周進行隨訪、並採用數碼照相拍照，然後，自願者自己和研究者再應用相關評價量表和photoshop cs5軟體進行臨床療效觀察和客觀評價。量表按I 4分進行評分。其中，I為使用後皮膚狀況最好，4為使用後皮膚狀況最差。結果:如圖天然鹿茸活性多肽因子凍乾粉組合精華素對中老年健康志願受試者面部皮膚水分、彈性、膚色、細紋等有明顯改善(如圖5 8)。圖5 8中*表示與試驗前相比，評分均值差異有統計學意義(P < 0.05)，* *表示與試驗前相比評分均值有顯著性差異(P < 0.01)。本發明所述的實施舉例僅僅是對本發明的優選實施方式所進行的具體描述，並非對本發明構思和範圍進行限定，在不脫離本發明設計思想的前提下，本領域中技術人員對本發明的技術方案做出的各種變型和改進，均應落入本發明的保護範圍，本發明請求保護的技術內容，已經全部記載在權利要求書中。
權利要求
1.ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，其特徵在於它是由具有皮膚抗衰老和美容保健作用的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳兩個部分所組成，其各自原料組成的百分比如下: (1)複合鹿茸多肽凍乾粉原料組成的重量百分比: 鹿茸多肽:0.01 0.50 甘露醇0.10 1.50 甘氨酸0.10 1.50 脯氨酸0.10 1.50 羥脯氨酸0.10 1.50 白蛋白0.20 2.50 (2)納米級緩衝微乳原料組成的重量百分比: pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水(0.01 mol/L): 20.0 60.0 肉豆蔻酸異丙酯:5.0 25.0 辛酸癸酸聚乙ニ醇甘油酷:15.0 55.0 聚甘油脂肪酸酷:5.0 30.0 (3)複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素組成的重量百分比: 複合鹿茸多肽凍乾粉:0 .01 10.0 納米級緩衝微乳:90.0 99.99。
2.根據權利要求1所述的ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，其中的複合鹿茸多肽凍乾粉各原料組成的優選百分比及納米級緩衝微乳各原料組成的優選重量百分比分別如下: (1)複合鹿茸多肽凍乾粉原料組成的優選重量百分比: 鹿茸多肽0.02 甘露醇0.50 甘氨酸0.50 脯氨酸0.50 羥脯氨酸0.50 白蛋白0.98 (2)納米級緩衝微乳原料組成的優選重量百分比:，0.01 mol/L pH7.2磷酸鹽緩衝生理鹽水:36.0 肉豆蔻酸異丙酷:14.0 辛酸癸酸聚乙ニ醇甘油酯:37.5 聚甘油脂肪酸酯:12.5 (3)複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素組成的重量百分比: 複合鹿茸多肽凍乾粉:3.0 納米級緩衝微乳:97.0。
3.根據權利要求2所述的ー種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素，其特徵在於:它們是由3%的複合鹿茸多肽凍乾粉和97%的納米級緩衝微 乳所組成 。
全文摘要
本發明涉及化妝品皮膚美容保健及延緩皮膚衰老等領域，具體是一種用於皮膚美容保健的複合鹿茸多肽凍乾粉與納米級緩衝微乳組合精華素及其製備方法。將從新鮮鹿茸中提取分離的具有高效天然生物活性的複合鹿茸多肽凍乾粉、與具有促進該功效成分透皮吸收的納米級緩衝微乳按一定比例配成組合美容精華素，能使其功效成分透皮吸收快、生物活性保存長、生物利用度高、作用效果好、使用更安全。另外，該組合精華素製備工藝簡練、技術操作簡單，既可節約能源和成本，又低碳環保不汙染環境，且適合產業化批量生產和普及應用。
文檔編號A61K8/06GK103110534SQ201310033710
公開日2013年5月22日 申請日期2013年1月29日 優先權日2013年1月29日
發明者莫壯宏, 丁克祥, 左夏林, 朱曉亮, 郝林琳, 梁虹 申請人:海南巨鹿堂保健美容品有限公司, 丁克祥