一種全血檢測式免疫層析裝置的製作方法
2023-07-29 16:28:06 2
專利名稱：一種全血檢測式免疫層析裝置的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種全血檢測式免疫層析裝置。
背景技術：
免疫層析技術是在酶聯免疫結合試驗的基礎上發展起來的一種固相 標記免疫測定新技術。檢測全過程僅需數分鐘，但敏感度卻與需數小時完
成的ELISA相仿。其原因在於ELISA樣品中的待檢抗原需緩慢地擴散才能 與吸附於固相表面的抗體反應，而在免疫層析試紙中，待檢液體層滲濾時 抗原抗體緊密接觸形成免疫濃縮，從而提高了反應效率，可應用於免疫學 檢測的所有方面，主要用於檢測正常體液中不存在的抗原性物質以及正常 含量極低而在特殊情況下異常升高的物質。因其具有單份測定、簡便、決 速、不需任何儀器設備、數分鐘即可用肉眼觀察結果的特點而成為臨床快 速診斷的手段之一，如應用於檢測心梗標誌物、變態反應、應激反應、 毒理學等。
可以直接用於檢測全血或指血的免疫層析裝置將省去採血後分離血 漿或血清的繁瑣程序，從而真正實現一步法快速檢測，順應了臨床快速診 斷的需求。目前用於全血檢測的免疫層析裝置多採用全血分離膜分離紅細 胞，即在樣品墊上加全血分離膜，當全血樣本滴入加樣孔後，通過全血分 離膜分離了紅細胞後的液體經樣品墊通過毛細擴散作用向吸水墊湧動的 過程中發生反應。其缺點在於若加樣區和全血分離膜壓合太緊，則全血樣 本難以濾過；若壓合過松，則部分血液通過全血分離膜表面直接湧動至檢 測區膜，使得檢測區背景太深而影響結果判讀。因此，如果測試卡的厚度
或者加樣孔的尺寸稍有變化，將會影響全血分離的速度和分離效果，使得 檢測效果差異較大。即使加樣區和全血分離膜吻合較好，由於全血分離時
間較長，此類裝置判讀結果的時間在15分鐘以上。因此，本實用新型針
對目前全血檢測式免疫層析裝置全血分離效果不穩定、檢測時間偏長的缺
點，發明人經過精心研究完成了本發明的內容。 發明內容
本實用新型的目的在於提供一種通過全血分離膜和快速促凝血液相 結合的方法的全血檢測式免疫層析裝置，達到穩定快速分離血細胞的目 的，從而縮短檢測時間並提高檢測的穩定性。
本實用新型的上述目的是通過以下的技術方案實現的-
一種全血檢測式免疫層析裝置，如圖l， 2所示，該裝置由上下扣合 的卡盒和置於其間的測試卡5組成，所述的上卡盒1上依次設置有加樣孔 3和檢測窗4，下卡盒2中間為放置測試卡5的卡槽6，卡槽6的尺寸與測 試卡5的尺寸相契合，測試卡5可置於卡槽6中並固定，卡槽6—側為U 型樣品處理區7，其對應著上卡盒l的加樣孔3，測試卡5上的檢測區膜 IO正對應上卡盒1的長方形檢測窗4，使測試卡5上的檢測區顯露。
一種優選的技術方案，其特徵在於所述的卡槽6與下卡盒1之間以固 定結構連接。
一種優選的技術方案，其特徵在於所述的上下卡盒可為任意形狀，例 如長方形、正方形，圓形或其他不規則形狀；卡盒的材料可以是塑料、樹 脂等適合應用的材料，並沒有特別的限定。
一種優選的技術方案，其特徵在於所述的加樣孔3為方形或圓形，其 長度或直徑大小為4 8mm。
所述的上下卡盒的接口可以是通常的卡口，也可以是特殊的卡口，只 要能使上下卡盒緊密卡緊即可，並沒有特別限定。
一種優選的技術方案，其特徵在於所述的測試卡5為在塑料底板支架 上依次粘貼如下部分(如圖2， 3所示)樣品墊8、顯色劑墊9、檢測區 膜10、吸水墊11，以上各部份首尾互相銜接，所述的測試卡寬度為3 4mrn， 長度根據卡槽的長度而定。
一種優選的技術方案，其特徵在於所述的檢測區膜IO上有可被結合 含顯色劑橋聯物的物質點樣形成的檢測線12和質控線13，檢測線和質控 線之間的寬度為3 6mrn。
所述的樣品墊8為吸水濾紙或玻璃纖維膜，其上為一層全血分離膜； 所述的顯色劑墊9為聚酯纖維或玻璃纖維膜；所述的檢測區膜10為硝酸 纖維素膜；所述的吸水墊11為吸水濾紙；以上各組份首尾互相銜接，組 裝成複合大卡，將複合大卡切成預定寬度即為測試卡5。
一種全血檢測式免疫層析裝置的製作方法
1、製作卡盒上卡盒l的加樣孔3的2/3區域正對應下卡盒2中的 U型樣品處理區7的凹型區域，該凹型區域的底部和槽壁表面粗糙不平， 另1/3區域對應的樣品處理區7的邊緣與測試卡樣品墊8區的全血分離膜 相接(如圖2， 3所示)，全血分離膜在樣品處理區7的U型開口處的長度 為2 3mm。卡槽6位於下卡盒2的中間部分， 一側為U型，另一側為長方 形，卡槽6的尺寸與測試卡5的尺寸相契合，測試卡5可置於卡槽6中 並固定。測試卡5上的檢測區正對應上卡盒1的檢測窗4，使測試卡5上 的檢測區顯露。
2、製作測試卡
2. 1標記抗體或抗原用顯色劑顆粒標記血液中待檢測物質所相應的 抗體或者抗原，形成含顯色劑的橋聯物。所述顯色劑為膠體金、彩色微球 或磁珠。
2.2固定受體將含顯色劑的橋聯物固定到聚酯纖維或玻璃纖維膜上 形成顯色劑墊；將可特異性結合含顯色劑橋聯物的物質(如可特異性結合 待檢物質的抗體或者抗原)線狀點樣到硝酸纖維素膜上形成檢測線；將可 非特異性結合含顯色劑橋聯物的物質(如羊或兔抗鼠IgG)線狀點樣到硝 酸纖維素膜上形成質控線，點樣寬度0. 5-1. 5mm。
2.3製作測試卡在塑料底板支架上依次粘貼如下部分(如圖2， 3所 示)樣品墊8、顯色劑墊9、檢測區膜IO、吸水墊ll，以上各部份首尾 互相銜接，組裝成複合大卡，將複合大卡切成預定寬度的測試卡。
3、 噴塗血液促凝劑，組裝試劑盒在U型的樣品處理區7的凹型區 域底部和槽壁噴塗血液促凝劑，將測試卡5裝入卡槽6，扣合上下卡盒， 即製作完成一種全血檢測式免疫層析裝置。
在加樣孔3處滴加全血樣品時，血液在樣品處理區7處被促凝析出血 清，血清通過樣品墊8上的全血分離膜和吸水濾紙，經毛細擴散作用流向 吸水墊11處，當液體經過顯色劑墊9時，吸附在其上的橋聯物即被溶解， 與樣品中的待測物發生反應而結合，並隨液流一起前移至檢測線12時，被 檢測線中的物質捕獲，顯色劑在檢測線上聚集而出現肉眼可見的線條；當 液流前移至質控線13時，質控線中的物質非特異性結合含顯色劑的橋聯 物，顯色劑在質控線上聚集而出現肉眼可見的線條。未結合的顯色劑橋聯
物繼續前移至吸水墊11處被吸收。
結果判定如圖4所示，以檢測區膜10出現2條肉眼可見的線為陽 性結果；若檢測線不顯色，而質控線顯色則為陰性；若兩條線均不顯色則 為該檢測裝置失效。
本實用新型的優點本實用新型將快速促凝血液和全血分離膜結合起 來對全血進行分離。本裝置樣品處理區7的U型卡槽壁及凹形的底部噴塗 促凝劑，可使血細胞在槽壁和底部凝集，血清成分析出表面，U型開口處 與測試卡5的樣品墊8區的全血分離膜相接，這樣在加入全血樣本時即使 少量血液接觸測試卡5的樣品墊區，也可以通過全血分離膜進行緩慢分離， 不會有紅細胞湧動至檢測區影響結果。當血清逐漸析出的時候，可以快速 通過全血分離膜至樣品墊，通過毛細擴散作用經過顯色劑墊，水化顯色劑 橋聯物，使待分析樣品與橋聯物相互作用結合，其複合物湧動至檢測區膜 上的檢測線時，被檢測線上固定的能結合待分析樣品的物質捕獲而形成肉 眼可見的線條；餘下的顯色劑複合物被質控線上的物質捕獲形成肉眼可見 的線條，表明測試完成。促凝劑使血液凝固析出血清的時間不超過4分鐘， 血清湧動至檢測區膜使對照線顯色的時間在3分鐘以內，因此該實用新型 用於全血檢測，檢測完成可控制在10分鐘內，與目前常規的全血檢測式 免疫層析裝置相比，檢測時間短且全血分離效果穩定，更符合該類產品簡 便快速的特點，並且該裝置具有單一試劑、 一步操作、全部試劑可在室溫 長期保存、簡便快速的優點。可被廣泛應用於臨床，也可用於病人的自我 檢測。
圖1為本實用新型裝置的主視圖。
圖2為打開上卡盒後本實用新型裝置的主視圖。
圖3為打開上卡盒後本實用新型裝置的剖視圖。
圖4為本實用新型裝置實際檢測後，顯示陽性結果、陰性結果和試 劑失效的示意圖。 附圖標記
1——上卡盒；2——下卡盒；3——加樣孔；4——檢測窗；5——測試卡； 6——卡槽；7——樣品處理區；8——樣品墊；9——顯色劑墊；10——檢 測區膜；11——吸水墊；12——檢測線；13——質控線
具體實施方式實施例1
待檢測物質為人血液中的心臟型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)。
1、 製作卡盒卡盒外形為長方形，為塑料材質，上下卡盒通過通常 接口扣緊，上卡盒的加樣孔為長方形，大小為4x8mm，在其2/3區域正對應 下部卡盒2的U型樣品處理區7的凹型區域，該凹型區域的底部和槽壁表 面粗糙的不平，另1/3區域對應的樣品處理區7的邊緣與測試卡5樣品墊 8區的全血分離膜相接，全血分離膜在樣品處理區U型開口處的長度約為 3腿，卡槽6位於下卡盒2的中間部位， 一側為U型，測試卡5置於卡槽6 中並固定，並且卡槽6固定在下卡盒2中，測試卡5上的檢測區正對應上 卡盒1的長方形檢測窗4，使測試卡5上的檢測區顯露(如圖3所示)。
2、 製作測試卡
2. l標記抗體用膠體金標記鼠抗人H-FABP的單克隆抗體1，形成膠 體金一H-FABP單克隆抗體1的橋聯物。
2. 2固定受體將膠體金一H-FABP單克隆抗體1的橋聯物固定到聚酯 纖維上形成顯色劑墊9;將H-FABP單克隆抗體2線狀點樣到硝酸纖維素膜 上形成檢測線12;將兔抗鼠IgG線狀點樣到硝酸纖維素膜上形成質控線 13，點樣寬度為l誦，檢測線與質控線的距離為5腦
2.3製作測試卡在塑料底板支架上依次粘貼如下部分吸水濾紙的
樣品墊8，其上為一層全血分離膜；顯色劑墊9為聚酯纖維；檢測區膜10
為硝酸纖維素膜；吸水墊11為吸水濾紙，以上各組份首尾互相銜接，切 成寬度為3mm的測試卡。
3、 噴塗血液促凝劑，組裝試劑盒在U型樣品處理區的凹型區域底 部和槽壁噴塗血液促凝劑，將測試卡5裝入卡槽6，扣合上下卡盒，即制 作完成一種全血檢測式免疫層析裝置。
結果判定在加樣10分鐘時，目測結果，如圖4所示，以檢測區膜
10出現2條肉眼可見的紅線為陽性結果；若檢測線不顯紅色，而質控線顯 紅色則為陰性；若兩條線均不顯示則為該檢測裝置失效。 實施例2:
待檢測物質為人血液中的HIV抗體1.
製作卡盒卡盒外形為長橢圓形，為ABS樹脂材質，上下卡盒通過通 常接口扣緊，上卡盒的加樣孔橢圓形，大小為4X6mm，其2/3區域正對應 下卡盒2的U型樣品處理區7的凹型區域，該凹型區域的底部和槽壁表面 粗糙的不平，另1/3區域的對應的樣品處理區7的邊緣與測試卡5樣品墊 8區的全血分離膜相接，全血分離膜在樣品處理區U型開口處的長度約為 2mm，卡槽6位於下部卡盒2的中間部位， 一側為U型樣品處理區7，測試卡5置於卡槽6中並固定，並且卡槽6固定在下卡盒2中，測試卡5上的 檢測區正對應上卡盒1的檢測窗4，使測試卡上的檢測區顯露(如圖3所 示)。
2、製作測試卡
2. 1標記抗體用膠體金標記人HIV的gp41、 gp36基因工程抗原和 p24合成肽，形成膠體金一HIV抗原的橋聯物。
2.2固定受體將含膠體金一HIV抗原的橋聯物固定到玻璃纖維膜上 形成顯色劑墊9;將人HIV的gp36、 gp41和p24基因工程抗原)線狀點樣 到硝酸纖維素膜上形成檢測線；將鼠抗人IgG線狀點樣到硝酸纖維素膜上 形成質控線。點樣寬度為0. 8mm，檢測線與質控線的距離為4mm.
2.3製作測試卡在塑料底板支架上依次粘貼如下部分玻璃纖維膜 的樣品墊8,其上為一層全血分離膜；顯色劑墊9為玻璃纖維膜；檢測區膜 10為硝酸纖維素膜；吸水墊11為吸水濾紙，以上各組份首尾互相銜接， 切成寬度為4mm的測試卡。
3、 噴塗血液促凝劑，組裝試劑盒在U型樣品處理區7的凹型區域 底部和槽壁噴塗血液促凝劑，將測試卡5裝入卡槽6，扣合上下卡盒，即 製作完成一種全血檢測式免疫層析裝置。結果判定在加樣10分鐘時，目測結果，如圖4所示，以檢測區膜 10出現2條肉眼可見的紅線為陽性結果；若檢測線不顯色，而質控線顯紅 色則為陰性；若兩條線均不顯示則為該檢測裝置失效。實施例3:
待檢測物質為人血液中的腦鈉肽(BNP)
1、 製作卡盒卡盒外形為不規則形，以塑料為材質，上下卡盒通過
通常接口扣緊，上卡盒的加樣孔為圓形，直徑大小為6mm，其2/3區域正對 應下部卡盒2的U型樣品處理區7的凹型區域，該凹型區域的底部和槽壁 表面粗糙的不平，另1/3區域對應的樣品處理區7的邊緣與測試卡5樣品 墊8區的全血分離膜相接，全血分離膜在樣品處理區7U型開口處的長度 約為2mm，卡槽6位於下卡盒2的中間部位， 一側為U型，測試卡5置於 卡槽6中並固定，測試卡5上的檢測區正對應上卡盒1的檢測窗4，使測 試卡5上的檢測區顯露(如圖3所示)。
2、 製作測試卡
2. 1標記抗體用彩色磁珠標記鼠抗人的BNP單克隆抗體1，形成磁 珠一BNP單克隆抗體1的橋聯物。
2.2固定受體將磁珠一BNP單克隆抗體1的橋聯物固定到玻璃纖維 上形成顯色劑墊9;將BNP單克隆抗體2線狀點樣到硝酸纖維素膜上形成 檢測線12;將羊抗鼠IgG線狀點樣到硝酸纖維素膜上形成質控線13。點 樣寬度為1. 5mm,檢測線與質控線的距離為6腿.
2.3製作測試卡在塑料底板上依次粘貼如下部分吸水濾紙的樣品 墊8,其上為一層全血分離膜；顯色劑墊9為玻璃纖維；檢測區膜10為硝 酸纖維素膜；吸水墊11為吸水濾紙，以上各組份首尾互相銜接，切成寬 度為3. 5鵬的測試卡。
3、 噴塗血液促凝劑，組裝試劑盒在U型樣品處理區7的凹型區域 底部和槽壁噴塗血液促凝劑，將測試卡5裝入卡槽6，扣合上下卡盒，即 製作完成一種全血檢測式免疫層析裝置。 結果判定在加樣10分鐘時，目測結果，如圖4所示，以檢測區膜 10出現2條肉眼可見的線條為陽性結果；若檢測線不顯色，而質控線顯色 則為陰性；若兩條線均不顯示則為該檢測裝置失效。
權利要求1、一種全血檢測式免疫層析裝置，該裝置由上下扣合的卡盒和置於其間的測試卡組成，所述的上卡盒上依次設置有加樣孔和檢測窗，其特徵在於下卡盒中間為放置測試卡的卡槽，卡槽的尺寸與測試卡的尺寸相契合，測試卡可置於卡槽中並固定，卡槽一側為U型的樣品處理區，其對應著上卡盒的加樣孔，測試卡上的檢測區膜正對應上卡盒的長方形的檢測窗，使測試卡上的檢測區顯露。
2、 根據權利要求1所述的一種全血檢測式免疫層析裝置，其特徵在 於上卡盒的加樣孔的2/3區域正對應下卡盒的U型樣品處理區的凹型區 域，該凹型區域的底部和槽壁表面粗糙不平，另1/3區域對應的樣品處理 區的邊緣與測試卡樣品墊區的全血分離膜相接，全血分離膜在樣品處理區 的U型開口處的長度為2~3mm。
3、 根據權利要求1或2所述一種全血檢測式免疫層析裝置，其特徵 在於所述的測試卡為在塑料底板支架上依次粘貼如下部分樣品墊、顯色 劑墊、檢測區膜、吸水墊，以上各部份首尾互相銜接，所述的測試卡寬度 為3 4mm,長度根據卡槽的長度而定。
4、 根據權利要求3所述一種全血檢測式免疫層析裝置，所述的樣品 墊為吸水濾紙或玻璃纖維膜，其上為一層全血分離膜；所述的顯色劑墊為 聚酯纖維或玻璃纖維膜；所述的檢測區膜為硝酸纖維素膜；所述的吸水墊 為吸水濾紙。
5、 根據權利要求1所述一種全血檢測式免疫層析裝置，其特徵在於 所述的加樣孔為方形或圓形，其長度或直徑大小為4~8mm。
6.根據權利要求1或2所述一種全血檢測式免疫層析裝置，其特徵 在於所述的檢測區膜10上有可被結合含顯色劑橋聯物的物質點樣形成的 檢測線12和質控線13，點樣寬度0. 5-1.5im,檢測線和質控線之間的寬 度為3~6mm。
專利摘要本實用新型涉及一種全血檢測式免疫層析裝置，該裝置由上下扣合的卡盒和置於其間的測試卡組成，所述的上卡盒上依次設置有加樣孔和檢測窗，下卡盒中間為放置測試卡的卡槽，卡槽的尺寸與測試卡的尺寸相楔合，測試卡可置於卡槽中並固定，卡槽一側為U型樣品處理區，其對應著上卡盒的加樣孔，測試卡上的檢測區膜正對應上卡盒的長方形檢測窗，使測試卡上的檢測區顯露。本實用新型的裝置檢測時間短且全血分離效果穩定，更符合該類產品簡便快速準確的特點。
文檔編號G01N33/558GK201177631SQ200820078900
公開日2009年1月7日 申請日期2008年2月1日 優先權日2008年2月1日
發明者莉 張, 穎 王, 陳莉莉 申請人:陳莉莉