一種生物發光試劑的熱穩定劑的製作方法
2023-07-20 22:05:46 1
專利名稱：一種生物發光試劑的熱穩定劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及微生物快速檢測技術領域，是一種生物發光試劑的熱穩定劑。
背景技術：
三磷酸腺苷(ATP)生物發光法基於螢火蟲發光原理，在螢光素酶的催化作用下， ATP與螢光素反應釋放螢光，通過測試發光強度來實現微生物的快速檢測。因無需進行微生物培養、操作簡單、檢測速度快，是目前國內外研究較多的一種微生物檢測方法。但由於生物發光試劑中的螢光素酶很不穩定，對溫度極為敏感，即使在室溫下也很快失活，導致生物發光試劑必須現配現用，從而限制了 ATP生物發光法的應用範圍，不利於現場檢測研究。因此開發一種生物發光試劑的熱穩定劑，延長其在4°C下的保存時間，使用時更為方便快捷，具有極其重要的應用價值。
發明內容
本發明的目的是提供一種生物發光試劑的熱穩定劑配方，減弱生物發光試劑對溫度的敏感性，克服現有生物發光試劑不穩定的缺點，延長生物發光試劑的保存時間，改變現配現用的狀況，從而適用於微生物現場快速檢測。為實現上述目的，本發明的技術解決方案是一種生物發光試劑的熱穩定劑，其包括緩衝液，至少一種多羥基化合物或糖類，和至少一種抗氧化劑。所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其所述多羥基化合物或糖類，是從山梨醇、丙三醇、甘露醇、木糖醇、核糖醇、蔗糖、木聚糖或海藻糖中至少選取一種。所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其所述抗氧化劑，是從還原性穀胱甘肽、抗壞血酸或水溶性維生素E中至少選取一種。所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其所述緩衝液，為含有15 150mmol/L三羥甲基氨基甲烷(Tris) (pH 7. 8)，0. 1 8mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)的水溶液。所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其所述多羥基化合物或糖類，其濃度在 0. 01mol/L 5mol/L 之間。所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其所述抗氧化劑，濃度在0. lmmol/L 20mmol/ L之間選取。本發明的一種生物發光試劑的熱穩定劑，大大延長了生物發光試劑的保存時間， 並不局限於ATP生物發光法的應用，還可應用於提高其他含酶試劑的熱穩定性。
圖1是根據Arrhenius公式推算的添加本發明熱穩定劑後溫度與失效時間的關係曲線圖。
具體實施例方式本發明的一種生物發光試劑的熱穩定劑，所使用的生物發光試劑的製備方法，請參照申請號為200610112410.0的已申請專利。其包括緩衝液，至少一種多羥基化合物或糖類，和至少一種抗氧化劑。下面結合具體實施例對本發明進行描述實施例1生物發光試劑的熱穩定劑，優選了一套組分所述多羥基化合物或糖類，是從山梨醇、丙三醇、甘露醇、木糖醇、核糖醇、蔗糖、木聚糖或海藻糖中至少選取一種。實施例中優選海藻糖。所述抗氧化劑，是從還原性穀胱甘肽、抗壞血酸或水溶性維生素E中至少選取一種。實施例中優選還原性穀胱甘肽。所述緩衝液，為含有三羥甲基氨基甲烷(Tris) (pH 7.8)、乙二胺四乙酸(EDTA)的水溶液。具體包含以下組分海藻糖0. 3mol/L還原性穀胱甘肽2mmol/L三羥甲基氨基甲烷(Tris) 25謹ol/L乙二胺四乙酸(EDTA)0. lmmol/L將配製好的穩定劑與生物發光試劑(申請號200610112410. 0)按體積比為1 2 的比例混合，分成5份，分別放置在觀1、321、371、401、451下測試失效時間，根據 Arrhenius公式推算在4°C下的保存時間，關係曲線如圖1所示。經推算，當發光效率>80% 時，添加熱穩定劑的生物發光試劑在4°C下的保存時間T > 1年。而未添加熱穩定劑的生物發光試劑的保存時間僅為7天。以上實施例只是為了說明本發明，而不是對本發明的限制。在上述說明的基礎上， 可以對本發明作許多改進和改變。本發明可以有不同於上述的其它實現方式，選用其它試齊U、改變試劑濃度等，均應在本發明權利要求書的保護範圍之內。
權利要求
1.一種生物發光試劑的熱穩定劑，其特徵在於，包括緩衝液，至少一種多羥基化合物或糖類，和至少一種抗氧化劑。
2.如權利要求1所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其特徵在於，所述多羥基化合物或糖類，是從山梨醇、丙三醇、甘露醇、木糖醇、核糖醇、蔗糖、木聚糖或海藻糖中至少選取一種。
3.如權利要求1所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其特徵在於，所述抗氧化劑，是從還原性穀胱甘肽、抗壞血酸或水溶性維生素E中至少選取一種。
4.如權利要求1所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其特徵在於，所述緩衝液，為含有 15 150mM、pH值7. 8的三羥甲基氨基甲烷，0. 1 8mM乙二胺四乙酸的水溶液。
5.如權利要求1或2所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其特徵在於，所述多羥基化合物或糖類，其濃度在O.Olmol/L 5mol/L之間。
6.如權利要求1或3所述的生物發光試劑的熱穩定劑，其特徵在於，所述抗氧化劑，濃度在0. Immol/L 20mmol/L之間選取。
全文摘要
本發明公開了一種生物發光試劑的熱穩定劑，包含緩衝液、至少一種多羥基化合物或糖類和至少一種抗氧化劑，其中生物發光試劑的製備方法參見申請號為200610112410.0的已申請專利。該熱穩定劑可減弱生物發光試劑對溫度的敏感性，保護其活性，尤其是其中螢光素酶的活性，延長試劑在4℃下的保存時間，減少現配現用的繁瑣，可拓展其應用範圍，適用於微生物快速檢測領域。
文檔編號C12Q1/66GK102559847SQ201010612028
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月29日 優先權日2010年12月29日
發明者劉春秀, 劉曉紅, 羅金平, 蔡新霞 申請人:中國科學院電子學研究所