一種脂肪酸合酶的抑制劑及其製備方法和應用的製作方法
2023-05-27 14:47:36 1
專利名稱：一種脂肪酸合酶的抑制劑及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物工程領域，尤其是一種脂肪酸合酶(FAS)的抑制劑及其應用。
背景技術：
脂肪酸合酶(FAS)是體內脂肪酸合成的關鍵酶，在體內的能量代謝中起關鍵的作用。2000年Loftus等人在「Reduced food intake and bodyweight in mice treated with fatty acid synthase inhibitors」(《Science》2000，288(5475)2379-2381.)中的研究發現，抑制FAS可以導致底物丙二酸單醯輔酶A濃度的升高，後者抑制下丘腦中的進食激素神經信號肽Y(NPY)的表達，從而抑制食慾，顯著降低了肥胖小鼠的攝食量和體重。田維熙等在「不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關係」(生物化學雜誌，1996，12(2)234-236.)中的研究也表明家禽的體脂水平和肝臟FAS活性存在正相關關係，提出抑制FAS可能成為有效的減肥降脂方法。
隨後的Kuhajda.F.P等在「Fatty acid synthesisA potential selectivetarget for antineoplastic therapy」(《Proc Natl Acad Sci》USA，1994，91(14)6379-6383.)中研究表明FAS極有可能成為治療癌症和肥胖症的雙重靶點。
FAS是治療肥胖症和癌症等多種人類重大疾病的潛在靶點。低毒性、高活性的FAS抑制劑還有可能用於預防這些疾病。因此若要獲得應用，尋找開發高活性的FAS抑制劑是非常必要的。但是關於FAS抑制劑的研究還處於初始階段，FAS的抑制劑還非常稀缺，因此尋找新的有效的抑制劑有著極高的理論研究意義和實際應用潛力。
發明內容
本發明提供一種高活性的肪酸合酶的抑制劑及其製備方法和應用。
一種脂肪酸合酶的抑制劑，包括油茶殼或油茶餅的提取物及其他藥學上可接受的輔料。
所述的油茶殼或油茶餅的提取物的製備方法將油茶殼或油茶餅粉碎，加入提取劑在35～70℃下超聲波提取30～90min，趁熱減壓抽濾得到油茶殼或油茶餅的提取物溶液或進一步將油茶殼或油茶餅的提取物溶液濃縮、乾燥得到油茶殼或油茶餅的提取物，所述的提取劑為質量百分比濃度40～70％的乙醇水溶液、石油醚、乙醇或水，提取劑的質量為油茶殼或油茶餅質量的20～40倍。
所述的製備方法中，也可以根據需要不對濾液濃縮、乾燥，而直接使用濾液，濾液以及將濾液濃縮、乾燥得到油茶殼或油茶餅的提取物可以單獨使用也可以添加其他藥學上可接受的輔料製成各種劑型。
所述的製備方法中，提取條件優選在50℃下超聲波提取45min。
所述的製備方法中，當原料為油茶殼時，所述的提取劑優選質量百分比濃度40％的乙醇水溶液。
所述的製備方法中，當原料為油茶餅時，所述的提取劑優選質量百分比濃度70％的乙醇水溶液。
所述的製備方法中，提取劑的質量優選為油茶殼或油茶餅質量的30倍。
本發明還提供了所述的抑制劑在抑制脂肪酸合酶中的應用。
本發明還提供了所述的抑制劑在製備用於抑制肥胖的藥品或保健品中的應用。
本發明還提供了一種含有所述的抑制劑的用於抑制肥胖的藥品或保健品。
油茶籽是山茶科(camellia)油茶(camellia oleifera)的果實，其生長周期長，從開花到採摘，歷經冬、春、夏、秋四季十三個月。茶果中，茶蒲佔60.0％～61.3％，茶籽佔38.7％～40％，茶籽中殼(油茶殼)佔30.6％～34％，茶仁佔66.0％～69.4％。油茶籽多用於榨油，榨油後留下的殘渣即油茶餅。本發明對油茶殼與油茶餅的提取物進行了測定研究，發現其中存在新的能力很強的FAS抑制劑，其抑制活性強於已報導的FAS抑制劑，如淺藍菌素、J.Hopkins大學開發的淺藍菌素類抑制劑C75、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)以及綠茶和紅茶的提取物。
本發明油茶殼與油茶餅的提取物進行了測定研究，發現可以作為FAS抑制劑，其抑制活性強於已報導的FAS抑制劑，如淺藍菌素、C75、EGCG以及綠茶和紅茶的提取物。油茶殼提取物對FAS有很強的快結合抑制作用，和現有的FAS抑制劑相比，油茶殼提取物的抑制能力要強得多，它的IC50僅為2.02μg/ml，大大地低於EGCG的23.8μg/ml和淺藍菌素的20μg/ml。此外，我們還發現油茶餅的提取物對FAS有非常強的慢結合不可逆抑制作用。油茶籽提取物的這種FAS強抑制能力為它在藥物(抗癌藥和減肥藥)開發中打開了廣闊的前景。
圖1.實施例1製備的油茶殼提取物溶液對FAS的快結合抑制作用；圖2.實施例2製備的油茶殼提取物溶液對FAS的快結合抑制作用；圖3.實施例3製備的油茶殼提取物溶液對FAS的快結合抑制作用；圖4.實施例4製備的油茶殼提取物溶液對FAS的快結合抑制作用；圖5.實施例5製備的油茶餅提取物溶液對FAS的快結合抑制作用；圖6.不同提取劑製備的提取物對FAS的IC50值比較，圖中1實施例1製備的油茶殼提取物對FAS的IC50值；2實施例2製備的油茶殼提取物對FAS的IC50值；3實施例3製備的油茶殼提取物對FAS的IC50值；4實施例4製備的油茶殼提取物對FAS的IC50值；5實施例5製備的油茶餅提取物對FAS的IC50值；圖7.不同提取物對FAS的慢結合抑制作用，圖中◆實施例1製備的油茶殼石油醚提取物，0.91mg/ml；■實施例2製備的油茶殼乙醇提取物，0.2mg/ml；△實施例3製備的油茶殼水提取物，0.056mg/ml；□實施例4製備的油茶殼40％乙醇提取物，0.056mg/ml；◇C75，0.12mg/ml；▲實施例5製備的油茶餅70％乙醇提取物，0.31mg/ml。
具體實施例方式
實施例1 油茶殼提取物的製備將油茶殼曬乾、粉碎，加入30倍質量的石油醚，50℃下超聲波提取45min，趁熱減壓抽濾得到油茶殼提取物溶液，黃酮含量0.23％。
實施例2 油茶殼提取物的製備將油茶殼曬乾、粉碎，加入30倍質量的乙醇，50℃下超聲波提取45min，趁熱減壓抽濾得到油茶殼提取物溶液，黃酮含量0.42％。
實施例3 油茶殼提取物的製備將油茶殼曬乾、粉碎，加入30倍質量的水，50℃下超聲波提取45min，趁熱減壓抽濾得到油茶殼提取物溶液，0.52％。
實施例4 油茶殼提取物的製備將油茶殼曬乾、粉碎，加入30倍質量的質量百分比濃度40％的乙醇水溶液，50℃下超聲波提取45min，趁熱減壓抽濾得到油茶殼提取物溶液，黃酮含量1.09％實施例5 油茶餅提取物的製備將油茶餅曬乾、粉碎，加入30倍質量的質量百分比濃度70％的乙醇水溶液，50℃下超聲波提取45min，趁熱減壓抽濾得到油茶餅提取物溶液，黃酮含量0.74％。
FAS的全反應活性測定測活體系為100mmol/L KH2PO4-K2HPO4緩衝液，pH 7；含有1mmoL/L EDTA；3μmol/L AcCoA；10μmol/L MalCoA；35μmol/L NADPH，37℃恆溫，加入10μg FAS啟動反應，用Amersham Pharmacia Ultrospec4300 pro UV-Vis spectrophotometer紫外-可見分光光度計連續監測340nm光吸收變化。反應總體積為2ml。最初2分鐘吸收值的變化為直線代表該反應的初速度。
快結合(可逆)抑制的測定被測萃取液樣品加到測活系統中，再加FAS啟動反應，測定酶的活性為Ai，以萃取溶劑代替萃取液樣品的測活結果為Ao。Ai/Ao為剩餘活性，此值越低抑制能力越強，此抑制通常為可逆抑制。
半抑制濃度值的測定在不同的提取液加量下測定對FAS的快結合抑制，以剩餘活性對每毫升測活溶液含油茶籽提取物的乾重(μg/ml)作圖。由剩餘活性隨油茶籽提取物量增加而降低的曲線上活性被抑制一半處得到半抑制濃度值(IC50)。此參數值越小抑制能力越強。
慢結合(不可逆)抑制的速度常數測定抑制劑(油茶籽萃取液)加到FAS溶液中，混勻後25℃放置，在不同的時間間隔取混合溶液測定酶活性At，只加同樣量的萃取溶劑時的測活作為對照Ao。At/Ao為該時刻的剩餘活性(Remaining Activity，R.A.)。1-At/A0為該時刻的慢結合抑制程度。該抑制通常為抑制劑和酶共價反應所造成，是用較長時間完成的不可逆失活。
慢結合抑制過程的測定油茶殼提取物對FAS有快結合抑制作用。但在慢結合抑制過程的測定中，其作用並不明顯，而油茶餅的提取物對FAS卻顯示出了很強的慢結合不可逆抑制作用，見圖8。0.12mg/ml C75的慢結合抑制時間作為對照，見圖8。從圖8中可以看出，油茶殼40％乙醇提取物與水提取物在混合體系中的濃度較低，沒有顯示出對FAS的慢結合抑制作用；油茶殼石油醚提取物有一定的慢結合抑制作用；相比較於其他提取物及C75，油茶餅70％乙醇提取物顯示出很強的使FAS慢失活的作用，在酶與抑制劑混合體系中，油茶餅提取物0.31mg/ml濃度下，2min內FAS全反應不可逆失活超過85％，其對FAS的慢結合抑制作用顯著強於C75及其他油茶殼提取物。
權利要求
1.一種脂肪酸合酶的抑制劑，包括油茶殼或油茶餅的提取物及其他藥學上可接受的輔料。
2.如權利要求1所述的抑制劑的製備方法，其特徵在於將油茶殼或油茶餅粉碎，加入提取劑在35～70℃下超聲波提取30～90min，趁熱減壓抽濾得到油茶殼或油茶餅的提取物溶液或進一步將油茶殼或油茶餅的提取物溶液濃縮、乾燥得到油茶殼或油茶餅的提取物，所述的提取劑為質量百分比濃度為40～70％的乙醇水溶液、石油醚、乙醇或水，提取劑的質量為油茶殼或油茶餅質量的20～40倍。
3.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於提取劑提取條件為50℃下超聲波提取45min。
4.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於將油茶殼粉碎，加入質量百分比濃為40％的乙醇水溶液，在50℃下超聲波提取45min，趁熱減壓抽濾得到油茶殼的提取物溶液或進一步將油茶殼的提取物溶液濃縮、乾燥得到油茶殼的提取物，乙醇水溶液質量為油茶殼質量的30倍。
5.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於將油茶餅粉碎，加入質量百分比濃為70％的乙醇水溶液，在50℃下超聲波提取45min，趁熱減壓抽濾得到油茶餅的提取物溶液或進一步將油茶餅的提取物溶液濃縮、乾燥得到油茶餅的提取物，乙醇水溶液質量為油茶餅質量的30倍。
6.如權利要求1所述的抑制劑在抑制脂肪酸合酶中的應用。
7.如權利要求1所述的抑制劑在製備用於抑制肥胖的藥品或保健品中的應用。
8.一種含有權利要求1所述的抑制劑的用於抑制肥胖的藥品或保健品。
全文摘要
本發明公開了一種肪酸合酶的抑制劑，包括油茶殼或油茶餅的提取物及其他藥學上可接受的輔料。油茶殼或油茶餅的提取物製備方法為將油茶殼或油茶餅粉碎，加入提取劑在35～70℃下超聲波提取30～90min，趁熱減壓抽濾得到油茶殼或油茶餅的提取物溶液或進一步將油茶殼或油茶餅的提取物溶液濃縮、乾燥得到油茶殼或油茶餅的提取物。油茶殼或油茶餅的提取物的提取物對FAS有非常強的慢結合不可逆抑制作用。油茶籽提取物的這種FAS強抑制能力為它在藥物(抗癌藥和減肥藥)開發中打開了廣闊的前景。
文檔編號A61P3/04GK101045111SQ200710068349
公開日2007年10月3日 申請日期2007年4月27日 優先權日2007年4月27日
發明者沈建福, 姜天甲, 陳秋平, 王徐卿, 張嶽 申請人:浙江大學