一種由青蒿、金銀花、梔子製成的中成藥的含量測定方法
2023-05-27 13:17:41 1
專利名稱：一種由青蒿、金銀花、梔子製成的中成藥的含量測定方法
技術領域：
本發明屬於中藥分析領域，涉及一種中成藥的含量測定方法，具體涉及對一種由青蒿、金銀花、桅子製成的中成藥進行含量測定的方法。
背景技術：
本發明涉及的中成藥的原藥材組成為青蒿6 25重量份、金銀花3 15重量份、桅子3 12重量份。本中成藥功能主治為清熱，疏風，解毒，用於上呼吸道感染(外感風熱證)所致的高熱、微惡風寒、頭身痛、咳嗽、痰黃等症。該中成藥已獲得中國國家食品藥品監督管理局批准上市銷售，藥品的通用名稱為熱毒寧注射液，藥品批准文號為國藥準字 Z20050217。由於該藥物抗病毒、抗菌退熱療效顯著，作用迅速，在臨床上已逐漸得到了廣大醫生和患者的歡迎。現有技術中，在公開號為CN 1517124A，申請號為200410000134. X的中國專利中， 公開了一種對本中成藥(在本發明中被命名為「熱毒寧注射液」)中桅子苷和綠原酸進行含量測定的方法，但該方法對熱毒寧注射液中主要成分含量的檢測不夠全面，本發明提供技術方案是在熱毒寧注射液基礎成分研究和現有含量測定方法的基礎上，按照《中藥注射液基本技術要求》及中藥注射液再評價的相關規定，對其高效液相色譜指紋圖譜及含量測定方法進行進一步優化，將高效液相色譜指紋圖譜和已明確的9個成分含量測定相結合，建立更為全面的質量控制方法，以更為有效快捷的控制熱毒寧注射液的產品內在質量，提高質量控制水平。
發明內容
本發明的目的是提供一種對由青蒿、金銀花、桅子製成的中成藥(在本發明中被命名為「熱毒寧注射液」)進行含量測定的方法。本發明是通過以下技術方案來實現本發明目的的採用反相高效液相色譜法對熱毒寧注射液中的新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、桅子苷、secoxyloganin (斷氧化馬錢子苷)、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C九種成分中的任意一種或幾種成分進行含量測定，測定的色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，以甲醇或乙腈為流動相A，以0. 05% 1.0%磷酸或0. 05% 1.0%醋酸為流動相B，A+B = 100%，進行梯度洗脫，洗脫程序為以下三種程序中的任意一種(1)起始時，流動相A的百分比濃度為8 20%，流動相B的百分比濃度為92 80%，0至20min內，流動相A的百分比濃度線性上升至25 35%，流動相B的百分比濃度線性下降至75 65 %，21至60min內，流動相A的百分比濃度線性上升至45 55 %，流動相B的百分比濃度線性下降至55 45% ；艮口
權利要求
1.一種由青蒿、金銀花、桅子製成的中成藥的含量測定方法，其特徵在於，採用反相高效液相色譜法對該藥物中的新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、桅子苷、secoxyloganin, 異綠原酸B、異綠原酸Α、異綠原酸C九種成分中的任意一種或幾種成分進行含量測定， 測定的色譜條件為色譜柱為C18柱，以甲醇或乙腈為流動相A，以0. 05% 1. 0%磷酸或 0. 05% 1.0%醋酸為流動相B，A+B = 100%，進行梯度洗脫，洗脫程序為以下三種程序中的任意一種(1)起始時，流動相A的百分比濃度為8 20%，流動相B的百分比濃度為92 80%， 0至20min內，流動相A的百分比濃度線性上升至25 35%，流動相B的百分比濃度線性下降至75 65 %，21至60min內，流動相A的百分比濃度線性上升至45 55 %，流動相B 的百分比濃度線性下降至55 45% ；(2)起始時，流動相A的百分比濃度為15 25%，流動相B的百分比濃度為85 75%， 0至50min內，流動相A的百分比濃度線性上升至45 55%，流動相B的百分比濃度線性下降至55 45%，51至60min內，流動相A的百分比濃度線性上升至56 65%，流動相B 的百分比濃度線性下降至44 35% ；(3)起始時，流動相A的百分比濃度為10 22%，流動相B的百分比濃度為90 78%， 0至30min內，流動相A的百分比濃度線性上升至23 30%，流動相B的百分比濃度線性下降至70 77 %，31至60min內，流動相A的百分比濃度線性上升至55 65 %，流動相B 的百分比濃度線性下降至45 35%，61至70min內，流動相A的百分比濃度保持在55 65 %，流動相B的百分比濃度保持在45 35 %。
2.根據權利要求1所述的洗脫程序，其特徵在於，選擇以下三種程序中的任意一種(1)起始時，流動相A的百分比濃度為12%，流動相B的百分比濃度為88%，0至20min 內，流動相A的百分比濃度線性上升至30%，流動相B的百分比濃度線性下降至70%，21至 60min內，流動相A的百分比濃度從30 %線性上升至50%，流動相B的百分比濃度從70 % 線性下降至50% ；(2)起始時，流動相A的百分比濃度為20%，流動相B的百分比濃度為80%，0至50min 內，流動相A的百分比濃度線性上升至50%，流動相B的百分比濃度線性下降至50%，51至 60min內，流動相A的百分比濃度從50%線性上升至60%，流動相B的百分比濃度從50% 線性下降至40% ；(3)起始時，流動相A的百分比濃度為20%，流動相B的百分比濃度為80 %，0至30min 內，流動相A的百分比濃度線性上升至25%，流動相B的百分比濃度線性下降至75%，31至 60min內，流動相A的百分比濃度從25%線性上升至60%，流動相B的百分比濃度從75% 線性下降至40%，61至70min內，流動相A的百分比濃度保持在60%，流動相B的百分比濃度保持在40%。
3.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於，對新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C七種成分中的任意一種或幾種成分進行含量測定時，測定波長為320 330nm。
4.根據權利要求3所述的測定波長，其特徵在於，波長為3Mnm。
5.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於，對桅子苷、secoxyloganin兩種成分中的任意一種或兩種成分進行含量測定時，檢測波長為230 MOnm。
6.根據權利要求5所述的測定波長，其特徵在於，波長為237nm。
7.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於，對照品溶液的製備方法為精密稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、桅子苷、secoxyloganin、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C對照品，加入40% 60%甲醇溶解並稀釋製成混合對照品儲備溶液。
8.根據權利要求7所述的混合對照品儲備溶液，其特徵在於，製備方法為精密稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、桅子苷、咖啡酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、 secoxyloganin對照品適量，精密稱定，加50%甲醇溶解並稀釋製成每Iml中含新綠原酸 0. 1 0. 4mg、綠原酸0. 5 1. 2mg、隱綠原酸0. 2 0. 7mg、桅子苷0. 5 1. 5mg、咖啡酸 0. 1 O.^ig、異綠原酸B 0. 2 0.8mg、異綠原酸A 0. 1 0. 6mg、異綠原酸C 0. 2 0. 9mg、 secoxyloganin 0. 1 0. 4mg的混合對照品儲備溶液。
9.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於，對咖啡酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、secoxyloganin五種成分中的任意一種或幾種成分進行含量測定時，供試品溶液的製備方法為精密稱取待測藥物置量瓶中，加40% 60%甲醇稀釋，搖勻，即得。
10.根據權利要求9所述的供試品溶液的製備方法，其特徵在於，精密吸取待測藥物 lml，置IOml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
11.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於，對新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、桅子苷四種成分中的任意一種或幾種進行含量測定時，供試品溶液的製備方法為精密稱取待測藥物置量瓶中，加40% 60%甲醇稀釋，搖勻，即得。
12.根據權利要求11所述的供試品溶液的製備方法，其特徵在於，精密吸取待測藥物 lml，置100ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
13.根據權利要求1、7、8所述的測定方法，其特徵在於，標準曲線的製作方法為精密吸取3 8份不同的劑量的混合對照品儲備溶液，分別置容量瓶中，加40% 60%甲醇稀釋，製成不同濃度的混合對照品溶液，進樣測定，以色譜峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。
14.根據權利要求13所述的標準曲線的製作方法，其特徵在於，精密吸取6份不同劑量的混合對照品儲備溶液，分別為0. 25ml,0. 5ml、l. 0ml,2. 0ml,4. 0ml,10. 0ml,分別置10ml 容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，製成六個濃度的混合對照品溶液，進樣測定，以色譜峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。
15.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於，取供試品溶液1 20μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，計算，得各成分含量。
16.根據權利要求15所述的供試品溶液的進樣量，其特徵在於，進樣量為10μ 1。
全文摘要
本發明屬於中藥分析領域，具體涉及一種由青蒿、金銀花、梔子製成的中成藥的含量測定方法。該方法採用反相高效液相色譜法對該中成藥中的新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、梔子苷、secoxyloganin、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C九種成分進行含量測定，色譜條件為色譜柱為C18柱，以甲醇或乙腈為流動相A，以0.05％～1.0％磷酸或0.05％～1.0％醋酸為流動相B，A+B＝100％，進行梯度洗脫。該含量測定方法重現性良好，該方法分別從定性定量的角度全面的反映藥物主要成分及其含量變化情況，提高了對藥物的質量控制水平。
文檔編號G01N30/02GK102233021SQ201010173578
公開日2011年11月9日 申請日期2010年4月30日 優先權日2010年4月30日
發明者付小環, 劉濤, 宋愛華, 畢宇安, 王振中, 章晨峰, 蕭偉, 陳鳳龍 申請人:江蘇康緣藥業股份有限公司