一種檢測香菇中甲醛含量的方法
2023-06-09 17:10:26 2
專利名稱：一種檢測香菇中甲醛含量的方法
技術領域：
本發明涉及食品安全檢測領域，特別是涉及一種檢測香菇內生甲醛含量的 方法。
背景技術：
甲醛為較高毒的物質，已經被世界衛生組織確定為致癌和致畸物質，是公 認的變態反應源，也是潛在的強致突變物之一。大量文獻記載，甲醛對人體健 康的影響在嗅覺異常、刺激、過敏、肺功能異常、肝功能異常和免疫功能異常 等方面。發生甲醛急性經口中毒後可直接損傷人的口腔、咽喉、食道和胃黏膜， 同時產生中毒反應，輕者頭暈、咳嗽、嘔吐、上腹疼痛，重者出現昏迷、休克、 肺水腫、肝腎功能障礙，導致出血、腎衰竭和呼吸衰弱而死亡。長期接觸低濃 度甲醛，可引起神經系統、免疫系統、呼吸系統和肝臟的損害，出現頭昏(痛)、 乏力、嗜睡、食慾減退、視力下降等中毒症狀。
大量調査研究發現，許多食品中含有甲醛。香菇中甲醛主要是作為形成香 菇特徵風味的酶學途徑的副產物產生的。香燕中的甲醛含量是衡量香燕質量的 一項重要指標。
大量有關甲醛的動力學變化研究表明，在進行香菇甲醛含量的檢測過程中，
香菇勻漿液在37T:下保溫時，甲醛含量快速上升；2h 2.5h甲醛的形成速率趨 於平緩；2.5h後勻漿液中甲醛含量達到穩定。4t下保溫的香菇勻漿液樣品，其 甲醛含量的變化隨著時間的延長也有增加，但增幅不大。這是因為香菇子實體 在被破碎後，在適宜甲醛代謝相關酶(Y-穀氨醯轉肽酶和半胱氨醯亞碸裂解酶) 表現活力的溫度下，酶活力增加，發生的酶促反應使甲醛大量代謝產生。因此，
在香菇樣品的前處理過程中，若不對酶活力加以控制，將對最終的檢測結果產 生很大的影響。
現有技術中檢測香菇中甲醛含量的方法主要有分光光度比色法、高效液相
色譜(HPLC)法。
分光光度比色法通過蒸餾將甲醛從香菇樣品中提取後，用乙醯丙酮試劑將 甲醛衍生反應生成黃色的化合物，使用分光光度計於414nm下測定相應的吸收 值，定量檢測樣品中提取得到的甲醛含量。
HPLC法通過蒸餾從香菇樣品中提取甲醛，用DNPH (2,4-二硝基苯肼)將 甲醛衍生成在紫外區有特徵強吸收的腙類化合物，將這一衍生產物用HPLC進 行分離，於355nm通道的紫外檢測器檢測，根據所得的色譜圖以目標峰峰面積 來對甲醛進行定量。
上述方法均未考慮到香菇樣品在粉碎及前處理過程中香燕中的內生甲醛在 酶的作用下大量產生的影響，造成檢測值往往高於實際含量。
因此，找到一種準確的檢測方法，是有效地控制香菇及其製品甲醛含量在 安全範圍的前提，是關係到廣大消費者身體健康且迫切需要解決的問題。
發明內容
本發明為了解決現有檢測技術的不足，提供了一種能夠準確檢測香燕中甲 醛含量的方法，可真實地反映香菇中甲醛的含量，適用於鮮菇樣品或幹菇製品 中甲醛的檢測。
本發明方法包括下列步驟
a.樣品處理
把鮮香菇置於4'C預冷30分鐘，在冰水浴中破碎勻漿，用冰水稀釋燕漿， 經分散機分散置於冰水浴中；
或把幹香菇粉碎，使其細度達200目以上，加冰水混合搖勻；
b.滅酶經處理的香菇樣品置於10(TC沸水浴中，放置5分鐘；
C.破壁滅酶處理後的樣品置於冰水浴中冷卻，用超聲破碎細胞壁，4。C放 置12小時；
d. 對漿料離心，取上清夜；對上清夜進行HPLC分離、測定；
e. 根據色譜圖中甲醛吸收峰面積計算得出香菇樣品中的甲醛含量。
本發明方法的樣品前處理過程均在冰水浴環境下進行，可避免勻漿過程產 生的熱量使勻漿液溫度升高引起Y -穀氨醯轉肽酶和半胱氨醯亞碸裂解酶表現高 活性，而催化產生甲醛，尤其是在香菇子實體細胞被超聲破碎之後，如不控制 勻漿液溫度，甲醛將在短時間內大量產生。將待測樣品在作滅酶處理前保持低 溫，可有效地控制相關酶活性，避免因酶催化作用而產生甲醛使檢測結果失真 的情況發生。
酶遇熱易失活。將經過前處理的香菇勻漿液在IO(TC沸水浴中放置5 min, 可保證酶的活力完全喪失。
經滅酶處理的樣品應立即置於冰水浴中冷卻。因香燕勻漿液經過高溫滅酶 處理後，整體都處於高溫狀態，此時甲醛也處於高的飽和蒸汽壓狀態，應立即 降溫收斂，防止甲醛揮發損失。
冷卻後的樣品用超聲儀滿功率(100W)超聲30min，破碎香菇子實體細胞， 甲醛分子即從細胞組織中溶出，並溶於浸提水中。將超聲處理後的樣品於4"C下 放置過夜，使甲醛更完全地溶出擴散到周圍水環境中。
將放置12小時後的樣品離心取上清液，進行常規HPLC分離和檢測-往上 清液中加入0.5ml 0.05%的DNPH乙腈溶液衍生劑，於60。C水浴中衍生反應 15min。將衍生後的反應液冷卻，過膜。HPLC色譜條件
進樣量20pL;
流動相乙腈水=60 : 40;
流速lml mirf1; 檢測波長355nm。
本方法將香菇樣品的整個前處理過程控制在低溫環境中進行，可有效地抑 制相關酶活性，避免因酶催化作用而產生甲醛；將樣品在沸水浴中高溫滅酶能 使酶的活力完全喪失，使香菇子實體細胞的破碎過程和甲醛檢測過程不再受到 酶的影響；結合使用HPLC分離甲醛和紫外檢測器檢測，能夠準確測定香菇中 甲醛含量，可真實地反映香菇甲醛含量，適用於鮮香菇樣品或幹香菇製品中甲 醛的檢測。
具體實施例方式
實施例l
稱取500g鮮香菇樣品，4"C預冷30min後放入勻漿機中，在冰水浴環境下 勻漿。秤取5g勻漿液加入到盛有50ml預冷水的具塞三角瓶中，用分散機進行 分散後放置於冰水中。
將分散後的鮮菇勻漿液在10(TC沸水浴中高溫滅酶5min，取出用冰水降溫 冷卻。
將滅酶、冷卻後的勻漿液用超聲儀滿功率(100W)超聲30min，取出於4
"C下放置12小時。
將放置12小時的樣品取出，6000rpm離心5min。吸取lml上清液於具塞比 色管中，加入0.5ml0.05。/。的DNPH乙腈溶液衍生劑，於6(TC水浴中衍生反應 15min，流水冷卻，過膜，進樣HPLC分離和檢測。
HPLC色譜條件
進樣量20nL;
流動相乙腈水=60 : 40;
流速lml min-1;
檢測波長355nm。
根據色譜圖中甲醛吸收峰面積計算得出該鮮香菇樣品中的甲醛含量為
2.68mg/kg。
對照實驗採用傳統的方法(即通過蒸餾從香恭樣品中提取甲醛，進行HPLC 分離、測定)對相同鮮香菇樣品進行檢測，測定甲醛含量為23.06mg/kg。
說明使用本發明的方法，由於消除了樣品處理過程中相關酶的影響，得到 的測定結果明顯低於對照方法，更接近樣品中的甲醛實際含量。
實施例2:
稱取50g幹香菇樣品，用粉碎機粉碎至200目。秤取5g幹菇粉加入到盛有
50ml預冷水的具塞三角瓶中，搖勻。
將搖勻後的樣品在IO(TC沸水浴中高溫滅酶5min，取出用冰水降溫冷卻。 將滅酶、冷卻後的勻漿液用超聲儀滿功率(100W)超聲30min，取出於4
t:下放置12小時。
將放置12小時後的樣品取出，6000rpm離心5min。吸取lml上清液於具塞 比色管中，加入0.5ml0.05。/。的DNPH乙腈溶液衍生劑，於6(TC水浴中衍生反應 15min，流水冷卻，過膜，進樣HPLC分離和檢測。
H
PLC色譜條件
進樣量20pL;流動相乙腈水=60 : 40;
流速lml mirf1; 檢測波長355nm。 根據色譜圖中甲醛吸收峰面積計算得出該幹香菇樣品中的甲醛含量為: 384.55mg/kg。
權利要求
1、一種檢測香菇中甲醛含量的方法，其特徵在於包括下列步驟a.樣品處理把鮮香菇置於4℃預冷30分鐘，在冰水浴中破碎勻漿，用冰水稀釋菇漿，經分散機分散置於冰水浴中；或把幹香菇粉碎，使其細度達200目以上，加冰水混合搖勻；b.滅酶經處理的香菇樣品置於100℃沸水浴中，放置5分鐘；c.破壁滅酶處理後的樣品置於冰水浴中冷卻，用超聲破碎細胞壁，4℃放置12小時；d.對漿料離心，取上清夜；對上清夜進行HPLC分離、測定；e.根據色譜圖中甲醛吸收峰面積計算得出香菇樣品中的甲醛含量。
2、 如權利要求l所述檢測香菇中甲醛含量的方法，其特徵在於步驟c中用超聲 儀以功率100W超聲30分鐘。
全文摘要
本發明公開了一種檢測香菇中甲醛含量的方法，適用於鮮香菇樣品或幹香菇製品中甲醛的檢測。本發明方法包括下列步驟在冰水浴中對樣品進行處理、100℃沸水浴中高溫滅酶、超聲破碎子實體細胞、HPLC分離、測定甲醛含量。本方法將香菇樣品的整個前處理過程控制在低溫環境中進行，可有效地抑制相關酶活性，避免因酶催化作用而產生甲醛；將樣品在沸水浴中高溫滅酶能使酶的活力完全喪失，使香菇子實體細胞的破碎過程和甲醛檢測過程不再受到酶的影響；結合使用HPLC分離甲醛和紫外檢測器檢測，能夠準確檢測出香菇中的甲醛含量。
文檔編號G01N30/02GK101196496SQ20071016477
公開日2008年6月11日 申請日期2007年12月17日 優先權日2007年12月17日
發明者勵建榮, 鬍子豪 申請人:浙江工商大學