蕎麥七新黃酮化合物的製作方法

2023-06-09 15:16:06

專利名稱：蕎麥七新黃酮化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一類具有自由基清除活性的新黃酮類化合物，具體地說是從翼
蓼根塊蕎麥七中提取的新黃酮類化合物，涉及含有蕎麥七素A的提取物，本發 明的提取物和新的化合物具有清除自由基的用途。
背景技術：
黃酮類化合物存在於多種植物之中，其具有廣泛的生物活性和重要的藥用
價值，其主要表現在以下幾個方面①對心血管系統疾病的治療作用，如蘆丁、 槲皮素、葛根素等黃酮類化合物具有明顯的擴冠作用己在臨床上被應用多年。 橙皮甙、香葉木甙等能降低血管脆性及異常的通透性，可用作防治高血壓及動 脈硬化的輔助治療劑。有些黃酮類化合物還具有明顯的降低血脂和抑制血栓形 成的作用。②肝保護作用，從水飛薊種子中得到的水飛薊素，異水飛薊素及次 水飛薊素等黃酮類化合物，經動物實驗和臨床實踐均證明其有很強的保肝作用。 (+)-兒茶素對脂肪肝及因半乳糖胺或CC14引起的中毒性肝損傷均顯示有一定作 用。③抗炎作用，金蕎麥中的雙聚原矢車菊苷元有抗炎、祛痰、解熱、抑制血 小板聚集和提高機體免疫力的作用，臨床用於肺膿腫及其它感染性疾病。④清 除自由基、抗氧化作用，所有需氧生物的生理過程均會產生自由基，在人體內 當自由基的積聚量過大時，將會產生多種疾病。許多重大疾病與體內自由基的 產生與積累有非常明顯的正相關性。藥物對自由基的清除能力一般與其抗氧化 活性成正比。多數黃酮類化合物因具有多元酚結構單元，而使其有較強的抗氧
化和清除自由基的能力；並且黃酮類化合物分子中酚羥基數目越多，其對自由 基的清除能力和抗氧化活性亦越強，如芸香苷，槲皮素及異槲皮素等清除超氧 自由基和羥基自由基的作用都強於自由基清除劑生育酚和合成抗氧化劑2， 6-二 叔丁基對甲基苯酚(BHT);因這一特點黃酮類化合物已被用作自由基對DNA損 傷所致癌變的預防藥劑和輔助治療，也有黃酮類化合物作為紫外線對皮膚損傷 的防護劑。由於黃酮類化合物具有以上這些重要的生理活性，它們的研究與開 發已受到了廣泛的關注[Saraf， Swamlata. et al. Pharmacognosy Reviews, 2007， 1(1), 30-40]。
蕎麥七是蓼禾鬥翼蓼屬植物翼蓼(^raxygo"訓g/ra她'Damm.et Diels)的塊，是太白山七藥的一種，其入藥能涼血、止血、祛溼解毒[李安仁等.中國植
物志(二十五巻第一分冊).北京科學出版社，1998， pll7-118]。該植物為我國 特有單種屬，有關其化學活性成分的研究處於空白。為了發現生物活性物質， 我們對蕎麥七的有效化學成分進行了研究，從中發現了具有強清除自由基活性 的新黃酮類化合物。
本發明的目的在於通過對蕎麥七有效化學成分的提取與分離，提供得到蕎 麥七素A提取物粗品的方法，本發明還提供了蕎麥七A提取物粗品，其中蕎麥 七素A的含量為50%—95%，本發明提供了一類新的黃酮化合物蕎麥七素A和 蕎麥七素B，及這些化合物的製備方法，另一方面本發明涉及蕎麥七素A提取物 粗品和新的黃酮化合物的用途，即可以作為自由基清除劑，更進一步地可以用 於預防和治療如心血管疾病和癌症等與自由基有關的疾病。
為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案
本發明的新黃酮類化合物可用下述通式(I )表示
(I)
其中，當R產H，R2-(9-cc-L-吡喃阿拉伯糖基，R3二OH時，化合物為4',5,5，，7國 四羥基-3-甲氧基-3'-0-cc-L-吡喃阿拉伯糖基黃酮，即蕎麥七素A，其結構為式l;
當R產OCH3， R2=H， R產0-^"D-卩比喃葡萄糖基時，化合物為5，5，,7-三羥基-2，,3-二甲氧基-4，-O^D-卩比喃葡萄糖基黃酮，即蕎麥七素B，其結構為式2。formula see original document page 5
發明內容本發明還提供了通式(I )化合物的製備方法
將翼蓼根塊蕎麥七的乾粉先用極性溶劑，例如95%乙醇或甲醇冷浸或回流 提取，合併浸提液或回流提取液並濃縮得到總浸膏，優選減壓濃縮；總浸膏經 脫脂後再次萃取，脫脂劑和萃取的溶劑選自石油醚、乙醚、氯仿或乙酸乙酯中 的一種，萃取物用矽膠柱色譜分離，以不同比例的氯仿和甲醇的混合溶劑為流
動相進行梯度洗脫逐步提高甲醇的比例，收集氯仿:甲醇=7:3 (體積比)的洗脫 液，濃縮該部分，得到含有蕎麥七素A和蕎麥七素B的固體物質，稱之為蕎麥 七素A提取物粗品，其中提取物粗品中蕎麥七素A的含量為5(m—95%，優選含 量70-95%。
用甲醇洗滌蕎麥七素A提取物粗品後，剩餘的固體物質乾燥後得到蕎麥七 素A，甲醇洗滌液濃縮後再經矽膠柱色譜分離，以不同比例的丙酮和石油醚的 混合物為流動相進行梯度洗脫，收集丙酮:石油醚=4:1 (體積比)部分的洗脫液， 濃縮該洗脫液並乾燥得到蕎麥七素B。
具體提取和得到通式(I )化合物的方法如下
將翼蓼根塊蕎麥七的乾粉先用95%乙醇冷浸數天，過濾，將浸液合併，減 壓濃縮得到總浸膏；總浸膏用水分散後，用石油醚萃取脫脂，剩下的部分用乙 酸乙酯再次萃取。乙酸乙酯萃取物經200-300目矽膠柱色譜分離，用氯仿和甲醇 的混合溶液為流動相進行梯度洗脫，收集氯仿:甲醇=7:3 (體積比)部分的洗脫 液，對此洗脫液減壓濃縮得到提取物粗品，其中含有蕎麥七素A為70y。一959L
將提取物粗品用甲醇洗滌，殘餘物乾燥後得蕎麥七素A，洗滌液濃縮後再 經矽膠柱色譜分離，用丙酮和石油醚的混合溶劑為流動相進行梯度洗脫，收集 丙酮:石油醚=4:1 (體積比)部分的洗脫液，對此洗脫液進行濃縮乾燥得到蕎麥 七素B。
式(I )化合物的結構通過包括H-H COSY、 HMQC、 HMBC、 NOESY 二維
核磁共振譜在內的現代波譜手段進行確定。
此外，本發明對式(I)化合物進行了清除自由基的活性試驗。結果表明，本 發明的新黃酮類化合物具有自由基清除能力，而且與已知黃酮類自由基清除劑 蘆丁、葛根素、大豆甙元和合成的抗氧化劑BHT相比，具有更強的自由基清除 能力。
本發明的蕎麥七素A提取物粗品、新黃酮類化合物可以作為清除自由基的 抗氧化保健品的原料，也可以作為藥物的活性成分，用於預防和治療如心血管
6疾病或癌症等與自由基有關的疾病。
可以將提取粗品和新黃酮類化合物和藥物載體混合製備成各種藥物製劑形
式，藥學可接受載體包括藥學常規的填充劑、溼潤劑、粘合劑、崩解劑、賦形
劑、抗氧劑、調味劑等。藥物製劑形式包括片劑、膠囊劑、滴丸劑、微丸劑、
散劑、顆粒劑等其中優選片劑、膠囊劑。


附圖為不同濃度的受試樣品對 OH自由基的清除率。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步說明，但本發明的內容並不局限於下述 實施例。
本發明所用的蕎麥七為蓼科翼蓼屬植物翼蓼(戶fera;9^0"ww gz'ra/而Damm.et Diels)的根塊，從陝西太白山採集。其它所用化學試劑均為化學純。化合物結構 確定所用的核磁共振儀為Bruker AVANCE 300超導核磁共振儀，TMS作為內標； 紅外光譜採用Nicolet 170SX FT-IR紅外光譜儀測定；質譜用Bruker Esquire 3000plus (德國Bruker公司)質譜儀測定；紫外光譜用TU-1901紫外-可見分光光 度計(北京普析通用儀器有限責任公司)測定；熔點採用X-6型顯微熔點測定 儀測定(北京泰克儀器有限公司，溫度未校正)。
實施例1
蕎麥七素A提取物粗品的製備
取蕎麥七乾粉4500克用10升95%乙醇浸泡2天後過濾，濾渣再用同樣方 法處理4次，合併各次濾液，減壓濃縮後得到黑色浸膏。將此浸膏分散於水中， 用石油醚(b.p. 60-90°C)進行萃取脫脂3次，每次用石油醚2升。剩餘物用乙 酸乙酯萃取3次，每次用2升乙酸乙酯，將萃取液合併後減壓濃縮得到乙酸乙 酯萃取物71克。對乙酸乙酯萃取物進行矽膠柱色譜(1.5kg， 200-300目)分離， 用氯仿與甲醇的混合溶劑為流動相進行梯度洗脫(從100%氯仿到100%甲醇)，收 集氯仿:甲醇=7:3 (體積比)部分的洗脫物。對此洗脫物減壓濃縮得到固體物質 2.34克，該固體物質為本發明的蕎麥七素A提取物粗品，其中蕎麥七素A的含 量為91%。
實施例2蕎麥七素A的製備
將實施例1所得蕎麥七素A提取物粗品2.34克用甲醇反覆洗滌後，所得剩 餘固體物乾燥得淡黃色粉末2.13克，為蕎麥七素A。
蕎麥七素A: 4'，5， 5'，7 -四羥基-3-甲氧基-3'-0- 丄-吡喃阿拉伯糖基黃酮， 淡黃色粉末，m.p. 258-259 。C， ESI-MS m/z ([M-H]—): 463。
IRu(KBr/max) cm": 3539, 3394, 2924, 1659 (C=0)， 1614, 1562， 1514, 1447。
UV (MeOH) W 269， 359腦。
^誦NMR (300MHz，溶劑DMSO-d6) & 6'20(1H， d, ^L53Hz， 6-H), 6.42(1H， d， 《/=1.53Hz, 8國H), 7'33(1H, d， ^1.44Hz, 2，-H), 7.42(1H， d,盧1.44Hz， 6,誦H), 4'76(1H, d, ^7.23Hz， l"國H)， 3.24(1H, m, 2"-H), 3'30(1H， m, 3"國H), 3.32(1H: m, 4"鄰，3.87(1H， m， 5"-HA)， 3.28(1H， m, 5"-HB), 3.81(3H， s, 3-OCH3)， 12.67(1H， s， 5-OH), 10.88(1H， s, 7-OH)， 9.46(1H， s, 3，畫OH)， 9.01(1H， s， 5,-OH), 5.13, 5.17，5.57(共3個H，糖環羥基)。13C-NMR (300MHz,溶劑DMSO-&) & 155.5(2-C)， 138.4(3-C), 178.0(4-C), 161.2(5-C), 99.1(6-C)， 164.8(7-C), 94.0(8-C), 156.7(9-C)， 104.7(10陽C)， 120.2(1，隱C)， 139.1(2,-C)， 146.4(3，-C)， 111.0(4,-C)， 146.1(5，-C)， 109.1(6，-C)， 103.7(1,，國C)， 76.2(2"-C), 73.6(3"國C)， 69.9(4"-C)， 66.3(5"-C)，60.1(3-OCH3)。波譜數據表明蕎麥七素A為式1所示結構。
實施例3
蕎麥七素B的製備
實施例1所得蕎麥七素A提取物粗品2.34克用甲醇洗滌分離出蕎麥七素A 後，將甲醇洗滌液減壓濃縮後得到的固體進行矽膠柱色譜(lOOg， 200-300目) 分離，用丙酮與石油醚的混合溶劑為流動相進行梯度洗脫(從100%石油醚到 100%丙酮)，收集丙酮:石油醚=4:1 (體積比)部分的洗脫液，減壓濃縮得淡黃 色粉末狀蕎麥七素B26毫克。
蕎麥七素B: 5，5，,7-三羥基-2，,3-二甲氧基-4，-0-^D-吡喃葡萄糖基黃酮，淡 黃色粉末，m,p.250-252。C， ESI-MS m/z ([M-H]—): 507。
IRu(KBr/max) cm": 3364 (OH)， 2920 (-CH2)， 1655 (C-O), 1600, 1496。UV (MeOH) W 256, 360腦。
'H-NMR (300MHz,溶劑DMSO國4) & 6.20(1H， s, 6國H)， 6.33(1H， s, 8-H)， 6.99(1H， s， 3，醫H), 6.84(1H, s， 6，-H), 4.78(1H, d，聲7.62Hz, 1"國H), 3.11(1H， m, 2"-H)， 3.17(1H, m， 3"國H), 3.07(1H， m， 4"-H), 3.22(1H, m， 5"-H)， 3.38(1H， m， 6"-HA)， 3.72(1H, m, 6，，-HB), 3.70(3H， s， 3-OCH3)， 3.84(3H， s, 2，-OCH3), 12.71(1H， s, 5國OH)， 10.78(1H, s, 7-OH)， 8,96(1H, s， 5'誦OH)， 4.65， 4.98(共4個H,糖環羥 基)。
13C-NMR (300MHz，溶劑DMSO誦&) & 156.5(2-C), 139.5(3-C)， 178.6(4-C)， 161.9(5陽C), 98.9(6畫C)， 164.4(7-C)， 94.3(8國C), 157.6(9-C)， 105.4(10-C)， 111.9(1，-C), 150.7(2，-C)， 102.5(3，畫C), 149.4(4,-C)， 141.4(5，誦C)， 116.5(6，-C)， 102.4(1"-C), 73.7(2，，陽C), 77.2(3，，國C)， 70.7(4，，誦C), 77.8(5，，誦C), 61.5(6"誦C), 60.5(3-OCH3)， 56.1(2，-OCH3)。波譜數據表明蕎麥七素B為式2所示結構。
實施例4
清除，OH自由基活性試驗
1、 受試化合物蕎麥七素A、蘆丁、大豆甙元、葛根素、BHT
2、 試驗方法
按照文獻[蔣林玲等.分析科學學報，2008， 24(2)， 212-214]方法，以褪色 光度法測定Fenton反應體系所產生的'OH自由基的量和受試樣品對該體系所產 生-OH自由基的清除率，以評價受試樣品清除。H自由基的活性。
2.1羥基自由基的測定
在5 mL比色管中加入pH 4.0的Tris-HCl緩衝溶液0.8 mL， 3.3 X 10'2 mmol/L 的Cy5溶液0.6mL， 1.0 mmol/L的FeSO4溶液0.4 mL，然後搖勻溶液，再加入0.01% 的H2CV溶液0.4mL，加二次水稀釋至刻度，搖勻，放置7min後測定647nm處的 吸光度A;同時測定不加H202體系的吸光度Ao。則自由基的產生量為AA-Ao 一A，通過測定羥基自由基形成前後的吸光度變化AA來表示Fenton反應體系所產 生-OH自由基的量。
2.2羥自由基清除率的測定
9在上述Fenton反應體系中加入一定量的受試樣品後再加蒸餾水至刻度，按 同樣操作測定體系的吸光度As，則受試樣品對。H自由基的清除率(S)按照下 列公式計算。
formula see original document page 10
3、試驗結果
通過分別對受試樣品蕎麥七素A、蘆丁、葛根素、大豆甙元、BHT—系列不 同濃度溶液對。H自由基的清除率測定，求出了表示受試樣品對，OH自由基清除 能力大小的指標IC5o值(即50Q/。的。H自由基被清除時所需樣品的量)。測試結果 附圖和表l所示。
實驗結果表明，蕎麥七素A不僅具有自由基清除的能力，而且對'OH自由基 的清除能力明顯強於其它受試的蘆丁等樣品。
表l受試樣品對'OH自由基清除能力
受試樣品蕎麥七素 A蘆丁BHT葛根素大豆甙元
IC50 (腿olAnL)23.732.142.243.870.權利要求
1、結構如通式(I)的化合物其中，當R1＝H，R2＝O-α-L-吡喃阿拉伯糖基，R3＝OH時，化合物為4』，5，5』，7-四羥基-3-甲氧基-3』-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基黃酮，即蕎麥七素A，其結構為式1，當R1＝OCH3，R2＝H，R3＝O-β-D-吡喃葡萄糖基時，化合物為5，5』，7-三羥基-2』，3-二甲氧基-4』-O-β-D-吡喃葡萄糖基黃酮，即蕎麥七素B，其結構為式2，
2、 一種蕎麥七素A提取物粗品，其中含有蕎麥七素A 50%—95%。
3、 權利要求2的蕎麥七素A提取物粗品，其中含有蕎麥七素A 70%—95%。
4、 權利要求2的蕎麥七素A提取物粗品的製備方法，將翼蓼根塊蕎麥七的 乾粉先用極性溶劑浸提或回流提取，合併浸提液或回流提取液濃縮得到總浸膏； 總浸膏經脫脂後再次萃取；萃取物用矽膠柱色譜分離，以不同比例的氯仿和甲 醇的混合溶劑為流動相進行梯度洗脫，收集氯仿:甲醇=7:3 (體積比)部分的洗 脫液，濃縮得到含有蕎麥七素A和蕎麥七素B的固體物質，稱之為蕎麥七素A 提取物粗品。
5、 權利要求1化合物的製備方法，將翼蓼根塊蕎麥七的乾粉先用極性溶劑 浸提或回流提取，合併浸提液或回流提取液並減壓濃縮得到總浸膏；總浸膏經 脫脂後再次萃取；萃取物用矽膠柱色譜分離，以不同比例的氯仿和甲醇的混合溶劑為流動相進行梯度洗脫，收集氯仿:甲醇=7:3 (體積比)部分的洗脫液，濃 縮乾燥得到蕎麥七素A提取物粗品；用甲醇洗滌蕎麥七素A提取物粗品後，剩 餘的固體物質為蕎麥七素A;甲醇洗滌液濃縮後再經矽膠柱色譜分離，以不同 比例的丙酮和石油醚的混合物為流動相進行梯度洗脫，收集丙酮:石油醚=4:1 (體積比)部分的洗脫液，濃縮、乾燥得到蕎麥七素B。
6、 權利要求4或5所述的製備方法，其中極性溶劑為95%乙醇或甲醇， 脫脂和再次萃取的溶劑選自石油醚、乙醚、氯仿或乙酸乙酯中的一種。
7、 權利要求4或5所述的製備方法，其中選用200—300目的矽膠柱進行色譜分離。
8、 權利要求1所述化合物和權利要求2或3所述蕎麥七素A提取物粗品用 於製備預防或治療與自由基有關的疾病的藥物用途。
9、 權利要求8的用途，其中的疾病為心血管疾病或癌症。
全文摘要
本發明提供了含有結構為式(I)的蕎麥七提取物，提供了結構為式(I)的新黃酮類化合物，及含有式(I)化合物的提取物，提供了新黃酮類化合物的製備方法和它們治療和自由基有關疾病的醫藥用途。
文檔編號A61P9/00GK101591368SQ20081012364
公開日2009年12月2日 申請日期2008年5月28日 優先權日2008年5月28日
發明者張喜全, 李寶林, 楊戰軍, 蔣林玲, 顧紅梅 申請人:陝西師範大學;江蘇正大天晴藥業股份有限公司