囊泡的簡便製備方法及其在藥物緩/控釋中的應用與流程
2023-06-27 12:11:41 3
本發明涉及生物載體領域，尤其涉及一種囊泡的簡便製備方法及其在藥物緩/控釋中的應用。
背景技術：
：囊泡有較強的增溶能力，其雙層膜具有較好的牢固性和穩定性，作為藥物載體給藥途徑較廣，載藥穩定性、藥物增溶量以及藥物生物利用度較高。近十多年來囊泡作為藥物載體已有注射劑、口服懸浮液或乳劑、滴眼液、滴鼻液及外用劑型等許多報導，大多仍處於動物試驗階段，也有一些臨床觀察報告。非離子表面活性劑囊泡是一種有效的藥物輸送載體，它能大大提高藥物療效，降低藥物毒副作用，又能緩慢緩慢釋放藥物，改變藥物的體內動力學，同時還具有靶向性能。目前，有關磁性囊泡的製備主要基於磁性納米顆粒的參雜，這種方法製備相對複雜，而且納米顆粒毒性未知，用於載藥存在潛在風險。現在FDA已經通過的作為藥物載體的囊泡一般都是由脂質體製備，脂質體製備囊泡一般方法較為複雜，需經過有機溶劑溶解、旋蒸成膜、超聲、凍融、擠壓等過程。複雜的過程使得囊泡的製備時間長,成本高,因此,提供一種簡便的囊泡製備方法同時保證囊泡的優異的藥物緩/控釋能力至關重要。技術實現要素：本發明的目的在於提供一種囊泡的簡便製備方法及其在藥物緩/控釋中的應用,製備過程簡化，製備成本低，並且能夠同時保持較好的藥物緩/控釋能力。本發明的技術方案是：一種囊泡的簡便製備方法，包括如下步驟，將兩親脂肽溶解在PBS緩衝液中，靜置，將靜置後的溶液通過注射器擠壓通過濾膜數次，即製得囊泡。優選的，所述的兩親脂肽含有極性胺基酸作為頭基且含有長烷基鏈作為尾鏈。其中，所述極性胺基酸為絲氨酸、酪氨酸、蘇氨酸或天冬氨酸；所述長烷基鏈為油酸的烷基鏈。優選的，所述的兩親脂肽為油酸(OA)與絲氨酸(S)分子的化合物，分子式如式1所示，優選的，所述的兩親脂肽為如下化合物，分子是如式2、式3、式4所示：OATT式2；OAYY式3；OADD式4。優選的，將兩親脂肽溶解在PBS緩衝液中，兩親脂肽在PBS緩衝液中的濃度為1-4mg/ml。優選的，靜置的時間為24-48h。優選的，將溶液通過注射器擠壓通過的濾膜孔徑為100nm，經過濾膜反覆擠壓40次，即製得囊泡。本發明另一方面還提供了上述製備方法製備得到的囊泡及其在藥物緩/控釋中的應用，所述的囊泡通過包封藥物進行藥物的緩/控釋。相比於現有技術，本發明的有益效果在於：1、本發明的簡便製備方法與傳統方法相比，省去了眾多複雜的步驟，不需要有機溶劑的溶解、旋蒸和凍融等過程就可以製備出尺寸較為均一的囊泡，步驟簡單，製備效率高；2、本發明的簡便製備方法能夠快速為藥物提供載體，同時囊泡的藥物緩/控釋能力比脂質體囊泡的緩/控釋能力更好，是潛在的替代脂質體囊泡的一類生物材料。附圖說明圖1為本發明實施例1製備的囊泡電鏡照片；圖2為本發明實施例1製備的囊泡與脂質體囊泡藥物釋放曲線。具體實施方式下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。本發明實施例提供了一種囊泡的簡便製備方法，包括如下步驟，將兩親脂肽溶解在PBS緩衝液中，靜置，將靜置後的溶液通過注射器擠壓通過濾膜數次，即製得囊泡。在上述步驟中，所述的脂肽含有脂質與胺基酸的化合物或複合體並且脂肽分子具有兩親性，兩親脂肽分子溶解在PBS緩衝液即磷酸緩衝鹽溶液中，溶解過程中，難以溶解時可採用超聲處理促進溶解，溶解後通過靜置使其充分組裝成為雙分子膜，然後即可擠囊泡，將靜置後的溶液通過注射器擠壓通過濾膜，經過濾膜反覆擠壓數次上述靜置後的自組裝雙分子膜即可形成囊泡，通過控制擠壓的次數可以控制囊泡的尺寸。在本發明的一優選實施例中，所述的兩親脂肽含有極性胺基酸作為頭基且含有長烷基鏈作為尾鏈。其中，所述極性胺基酸為絲氨酸、酪氨酸、蘇氨酸或天冬氨酸；所述長烷基鏈為油酸的烷基鏈。作為優選的實施例，所述的兩親脂肽為油酸(OA)與絲氨酸(S)分子的化合物，分子式如式1所示，作為優選的實施例，所述的兩親脂肽為如下化合物，分子是如式2、式3、式4所示：兩親脂肽為油酸(OA)與蘇氨酸(T)的化合物：OATT式2；兩親脂肽為油酸(OA)與酪氨酸(Y)的化合物：OAYY式3；兩親脂肽為油酸(OA)與天冬氨酸(D)的化合物：OADD式4。在本發明的一優選實施例中，將兩親脂肽溶解在PBS緩衝液中，兩親脂肽在PBS緩衝液中的濃度為1-4mg/ml，具體的，濃度可以為1mg/ml，1.5mg/ml，2mg/ml，2.5mg/ml，3mg/ml，3.5mg/ml，4mg/ml。兩親脂肽PBS緩衝液中濃度低時形成的囊泡較小，作為最優選的實施例，濃度在4mg/ml時形成的囊泡數量多，大小均一。另外可以理解的是溶解過程中，為了促進溶解，可以採取本領域常見的促進溶解的措施，例如機械攪拌、超聲溶解等等。在本發明的一優選實施例中，靜置的時間為24-48h。靜置是為了促使兩親脂肽分子自組裝形成雙分子膜，靜置時間過短，雙分子膜形成不完全，靜置時間過長不利於雙分子膜形成囊泡。在本發明的一優選實施例中，將溶液通過注射器擠壓通過的濾膜孔徑為100nm，經過濾膜反覆擠壓40次，即製得囊泡。可以理解的是，溶液也可通過其他孔徑的濾膜進行擠壓得到囊泡。在擠壓的次數上，次數少形成的囊泡數量少囊泡較大，擠壓次數多形成的囊泡數量多但是囊泡直徑比較小，具體的擠壓次數可以根據囊泡數量和囊泡直徑的需要進行調整。本發明一實施例還提供了上述簡便製備方法製備得到的囊泡及其在藥物緩/控釋中的應用。上述簡便製備方法能夠在簡化步驟的前提下，高效率低成本的製備囊泡，同時保證囊泡的高緩/控釋能力。為了更清楚詳細地介紹本發明實施例所提供的囊泡的簡便製備方法及其在藥物緩/控釋中的應用方法，以下將結合具體實施例進行說明。實施例1囊泡製備：首先稱取4mgOASS粉末溶於1mLPBS緩衝液中，超聲20分鐘使其充分溶解，將溶液靜置24-48h，使其自組裝形成雙分子膜；；使用注射器將靜置後的溶液擠壓通過100nm孔徑濾膜，溶液通過40次左右，可基本形成大量囊泡。(1)、囊泡低溫透射電子顯微鏡照片：Cryo-TEM測定方法為：採用低溫投射電子顯微鏡對溶液的形貌進行觀察，樣品的製備是在一個環境控制系統內(CEVS)，溫度為25℃。用鑷子夾住銅網插入到制樣系統內，用移液槍移取約5μL樣品溶液滴到銅網上，通過兩側的濾紙拍打幾秒吸去多餘的溶液製得一層薄膜，隨後迅速插入到液氮冷卻的液態乙烷中。冷凍後的樣品儲存在液氮中，通過Gatan626樣品杆(通過液氮冷卻)傳輸到透射電鏡中(JEOLJEM-1400TEMPlus)觀察，操作電壓為120kV。整個操作都在液氮環境中進行。圖像通過GatanmultiscanCCD進行記錄。Cryo-TEM的結果參見圖1，圖1說明形成的囊泡數量多，且粒徑在150～300nm左右。(2)、囊泡藥物包封率：藥物包封方法：將4mgOASS溶於阿黴素(DOX)的pH4.0的PBS緩衝溶液1mL中製備囊泡，然後將pH調至7.4，製成DOX-囊泡溶液。包封率測定：使用紫外法測定藥物包封率，首先繪製藥物分子標準曲線，精確配製濃度分別為0.8、1.6、2.4、3.2、4.0微克/毫升的阿黴素(DOX)溶液，在480nm處測定吸收度，以濃度為橫坐標吸光度為縱坐標繪製標準曲線；其次將DOX-囊泡溶液4度透析，儘量將囊泡外DOX分子透析完全，紫外檢測透析的外液濃度。具體結果參見下表1。表1囊泡包封率藥脂比1:4001:501:10DPPC:DOC＝1：400包封率(EE)0.64670.77220.82910.7427通過表1可以看出，本發明的簡便製備方法製備得到的囊泡平均包封率與脂質體囊泡具有相近的藥物包封能力。(3)、藥物緩釋作用：藥物緩釋實驗方法：將4mgOASS溶於DOX的pH4.0的PBS緩衝溶液1mL中製備囊泡，然後將pH調至7.4。將溶液裝在透析袋中，透析袋放入PBS溶液中，考察不同時間(0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20小時)藥物透析出半透膜的量，做出釋放曲線，參見圖2。通過圖2可以看出，本發明的製備方法製備的囊泡具有比脂質體囊泡更好的緩釋效果。能夠在長達20小時內緩慢釋放藥物，脂質體囊泡在10小時之內基本釋放完全。實施例2：兩親脂肽為油酸(OA)與蘇氨酸(T)的化合物，分子式如下：OATT式2囊泡製備：首先稱取1mgOATT粉末溶於1mLPBS緩衝液中，超聲20分鐘使其充分溶解，將溶液靜置24-48h，使其自組裝形成雙分子膜；；使用注射器將靜置後的溶液擠壓通過100nm孔徑濾膜，溶液通過38次左右，可基本形成大量囊泡。實施例3：兩親脂肽為油酸(OA)與酪氨酸(Y)的化合物，分子式如下：OAYY式3囊泡製備：首先稱取2mgOAYY粉末溶於1mLPBS緩衝液中，超聲20分鐘使其充分溶解，將溶液靜置24-48h，使其自組裝形成雙分子膜；；使用注射器將靜置後的溶液擠壓通過100nm孔徑濾膜，溶液通過42次左右，可基本形成大量囊泡。實施例4：兩親脂肽為油酸(OA)與天冬氨酸(D)的化合物，分子式如下：OADD式4囊泡製備：首先稱取3mgOADD粉末溶於1mLPBS緩衝液中，超聲20分鐘使其充分溶解，將溶液靜置24-48h，使其自組裝形成雙分子膜；；使用注射器將靜置後的溶液擠壓通過100nm孔徑濾膜，溶液通過40次左右，可基本形成大量囊泡。當前第1頁1 2 3