治療和預防纖維化的方法

2023-05-28 18:02:26

專利名稱：治療和預防纖維化的方法
技術領域：
技術人員已知的其它方法生產 單克隆抗體。已經開發了一個示例的方法，稱為"組合抗體展示"方法， 用於鑑定並分離具有特定抗原特異性的抗體片段，該方法可用於生產單 克隆抗體(組合抗體展示的描述參見例如Sastry et al. (1989)屍rac. Ato/. Jed Sc. [/Si 86:5728-32; Huse et al. (1989) 246:1275-81;和
Orlandietal. (1989)/Voc.A^/.^cac/.S". 86:3833-37 )。用免疫原
免疫動物後，克隆所得B細胞集合的抗體所有組成成分。使用寡聚引物 混合物和PCR,可以獲取多種免疫球蛋白分子群體的可變區的DNA序 列。例如，對應於5'前導(信號肽)序列和/或構架1 (FRl)序列的混合寡核 苦酸引物，以及針對保守的3'恆定區引物的引物，可用於從各種鼠抗體 PCR擴增重鏈可變區和輕鏈可變區(Larrick et al. (1991), Aorec/zmgw^ 11: 152-156)。類似的策略也可用於從人抗體擴增人重鏈可變區和輕鏈可 變區(Larrick et al. (1991) Me/7zo<iy: C0wp"w/0;7 A/e/7zo2z_yOTo/ogy 2: 106-10)。嵌合抗體，包括嵌合免疫球蛋白鏈，可通過本領域已知的重 組DNA技術製備。例如，用限制酶消化編碼鼠(或其它物種)單克隆抗體 分子的Fc恆定區的基因，以去除鼠Fc編碼區，並且用人Fc恆定區編碼 基因的等同部分來取代(參見PCT/US86/02269; EP 184,187; EP 171,496; EP 173,494; WO 86/01533;美國專利No. 4,816,567; EP 125,023; Better et al. (1988) 240:1041-43; Lm et al. (1987)屍亂淑/.爿cac/. 5"".
84:3439-43; Liu et al. (1987) </. /w附麗o/. 139:3521-26; Sun et al. (1987)屍rac. M^/. Jem/. 84:214-18; Nishimura et al. (1987)
Omc. 47:999-1005; Wood et al. (1985) W^w/^ 314:446-49;和Shaw etal. (1988)丄Ato/. Qmcer/"W. 80:1553-59 )。如果需要，可以通過本領域已知方法，使抗體或免疫球蛋白 鏈人源化。可通過用人Fv可變區的等同序列取代不直接參與抗原結合 的Fv可變區的序列，而產生人源化抗體，包括人源化免疫球蛋白^T連。 產生人源化抗體的通用方法由以下文獻提供Momson， S. L. (1985) S".6wce 229: 1202-07, Oi等(1986) Bwrec/m&w^y 4: 214，禾口美國專利Nos. 5,585,089、 5,693,761和5,693,762,所述文獻的內容通過引用全部結合 到本文中。這些方法包括編碼至少一個重鏈或輕嗜連的全部或部分免疫5求 蛋白Fv可變區的核酸序列的分離、操縱和表達。對於本領域技術人員 來說，所述核酸的來源是眾所周知的，例如可得自產生針對預先確定的 耙的抗體的雜交瘤。然後，編碼人源化抗體或其片段的重組DNA可以 克隆到合適的表達載體中。可通過CDR移植或CDR取代，製備人源化或CDR移植的 抗體分子或免疫球蛋白，其中一個、兩個或所有免疫球蛋白鏈的CDR 都可以被取代。參見例如美國專利No.5,225,539; Jones et al. (1986) 7Vafwe 321:552-25; Verhoeyan et al. (1988) Scze"ce 239:1534-36;和Beidler etal. (1988)/./附w麗o/. 141:4053-60,所有這些文獻的內容通過引用全部 結合到本文中。美國專利No. 5,225,539描述了 CDR移植方法，所述方 法可用於製備本發明的人源化抗體(也參見GB 2188638A)。特定人抗體 的所有CDRs都可以被至少一部分非人類CDR取代，或者僅有部分 CDRs可以被非人CDRs取代。僅有必要取代人源化抗體與預先確定的 抗原結合所需的CDRs的數量。通過例如缺失、添加或取代抗體其它部分(例如恆定區)而修 飾的單克隆抗體、嵌合抗體和人源化抗體，也包括在本發明範圍內。例 如，抗體可以通過以下方法修飾(i)擊夫失恆定區；(ii)用另一個恆定區取 代原有恆定區，所述另一個恆定區例如能增加抗體半衰期、穩定性或親 和力的恆定區，或者所述恆定區來自另一物種或抗體類別；或(iii)修飾 恆定區內的一個或多個胺基酸，以改變例如糖基化位點的數目、效應細 胞功能、Fc受體(FcR)結合、補體固定等。改變抗體恆定區的方法是本領域已知的。可以通過在抗體恆 定部分用不同的殘基取代至少一個胺基酸殘基，產生具有功能改變(例如 對細胞上的FcR或補體Cl成分等效應配體的親和力發生改變)的抗體(參見例如E.P. 388,151A1、 U.S. 5,624,821和U.S. 5,648,260，所述文獻 的內容全都通過引用結合到本文中)。也可以將類似的改變類型用於鼠免 疫球蛋白或其它物種的免疫球蛋白。例如，可通過用側鏈上具有合適官 能團的殘基取代指定殘基，或者通過引入帶電荷的官能團，例如穀氨酸 或天冬氨酸，或許芳族非極性殘基，例如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸或 丙氨酸，來改變抗體(例如IgG，例如人IgG)的Fc區對FcR (例如Fc 丫R1) 或對Clq結合的親和力(參見例如U.S. 5,624,821)。此外，可以用經過^f務飾的轉基因非人動物反應於抗原攻擊而 生產IL-21和/或IL-21R的人抗體，以生產全人抗體，而不是動物的內源 抗體。參見例如PCR^HfWO 94/02602。已經使非人宿主中編碼重和輕 免疫球蛋白鏈的內源基因喪失能力，並將有活性的編碼人重和輕鏈免疫 球蛋白的基因座插入宿主基因組。使用例如含有必要人DNA區段的酵 母人工染色體，摻入人基因。然後，通過使含有比修飾的完全互補序列 少的修飾的中間轉基因動物雜交，得到提供所有需要的修飾的動物後 代。這樣的非人動物的一個實施方案是小鼠，並稱作XENOMOUSETM， 如在PCT/^開WO 96/33735和WO 96/34096中4皮露的。該動物生產分 泌全人免疫球蛋白的B細胞。可以在用感興趣的免疫原免疫後從動物直 接得到抗體，例如，多克隆抗體的製備物，或者從源自動物的永生化B 細胞(例如生產單克隆抗體的雜交瘤)得到抗體。另外，可以回收編碼 含有人可變區的免疫球蛋白的基因，並表達，以直接得到抗體，或可以 進一步修飾，以得到抗體類似物，例如單鏈Fv分子。也-可以用其它蛋白結合分子調節IL-21和/或IL-21R的活 性。這樣的蛋白結合分子包括小模塊免疫藥物(SMI )藥物(Tmbion Pharmaceuticals, Seattle, WA) 。 SMIP是一種單《連多肽，由相關結構 (例如抗原，反受體等)的結合結構域、具有1個或沒有半胱氨酸殘基 的鉸鏈區多肽、和免疫球蛋白CH2和CH3結構域組成(也參見 www.tmbion. com ) 。 SMIP和它們的用法和用途，/>開在例如，美國 開專利申請Nos. 2003/0118592 , 2003/0133939 , 2004/0058445 , 2005/0136049 ,2005/0175614 ,2005/0180970 ,2005/0186216 , 2005/0202012 , 2005/0202023 , 2005/0202028 , 2005/0202534 和 2005/0238646及其相關專利家族成員中，它們都在本文中整體引作參 考。
其它實施方案中，本文所述的IL-21R/IL-21拮抗劑可與至少 一種以下藥物聯用IL-13拮抗劑，例如可溶性IL-13受體和/或抗IL-13 抗體；IL-2拮抗劑，例如IL-2融合蛋白(如Seragen製備的DAB 486-IL-2 和/或DAB 389-IL-2 ,參見例如Sewell et al. (1993)血/72〃",y臉膽.36:1223-33)和抗IL-2R抗體(例如抗Tac (人源化抗體；Protem Design Labs,參見Junghans et al. (1990) C朋cer 50:1495-502)。另 一種聯合 療法包括IL-21R/IL-21拮抗劑與非消除性抗CD4抑制劑如IDEC-CE9.1/SB 210396 (抗CD4抗體，GlaxoSmith幻ine)的聯用。其它的聯合 包括IL-21R/IL-21拮抗劑與CD80 (B7.1)和CD86 (B7.2)共刺激途徑拮抗 劑(如抗體、可溶性受體或拮抗性配體)；p-選擇蛋白糖蛋白配體(PSGL) 和PSGL-l抑制劑(如PSGL和/或PSGL-1的抗體和小分子抑制劑)、T 細胞和B細胞消除劑(如抗CD4或抗CD22抗體)和抗炎細胞因子及其 激動劑(如抗體)。抗炎細胞因子可以包括IL-4 (如Schenng-Plough Biopharma) ; IL-10 (如SCH 52000;重組IL-IO, Schering-Plough Biopharma) ; IL-11; IL-13和TGFp或其激動劑(例如，激動劑抗體)。
在其它實施方案中，至少一種IL-21R/IL-21拮抗劑可以與至 少一種抗炎藥物、免疫抑制劑、代謝抑制劑和酶抑制劑共同配製和/或共 同施用。可以與本文所述IL-21R/IL-21拮抗劑聯合施用的藥物或抑制劑 的非限制性實例包括但不限於，下述的至少一種非甾體類抗炎藥 (NSAIDs)(包括但不限於阿司匹林、雙水楊酯、二氟尼柳、布洛芬、 酮基布洛芬、萘丁美酮、吡羅昔康、萘普生、雙氯芬酸、茚曱新、舒林 酸、託美汀、依託度酸、酮洛來克、奧沙普溱、替尼達普、美洛昔康、 吡羅昔康、醋氯芬酸、託美汀、噻洛芬酸、尼美舒利等)；柳氮磺胺吡 啶；皮質類固醇(例如潑尼松龍)；細胞因子抑制性抗炎藥(CSAIDs); 核苷酸生物合成抑制劑(例如，嘌呤生物合成抑制劑(如葉酸拮抗劑， 例如，曱氨蝶呤))；和嘧啶生物合成抑制劑，例如，二氳乳清酸脫氫 酶(DHODH )抑制劑，例如，來氟米特(參見例如Kraan et al. (2004) j肌 A/^w附.Dw 63:1056-61)。與IL-21/IL-21R拮抗劑耳關合施用的治療劑可以 包括NSAIDs、 CSAIDs、 DHODH抑制劑(例如，來氟米特)和葉酸拮 抗劑(例如，甲氨蝶呤)中的一種或多種。
可以與IL-21/IL-21R拮抗劑聯合使用的其它試劑的實例包括 下述的至少一種皮質類固醇(口服的、吸入的和局部注射劑)；免疫 抑制劑(例如，環孢菌素和他克莫司(FK-506 ) ) ; mTOR抑制劑(例 如，西羅莫司(雷帕黴素)或雷帕黴素類似物和/或衍生物，例如雷帕黴 素酯衍生物，例如，CCI-779 (參見例如Elit(2002)Cwr. (9pm./m^y"g. Z)nig《3:1249-53; Huang et al. (2002) Cwrr Z>wgs 3:295-304)));幹擾促炎細胞因子例如TNFa或IL-1的信號傳遞的試劑(例 如IRAK, NIK, IKK， p38或MAP激酶抑制劑)；TPL-2、 Mk-2和NFKb 抑制劑；COX2抑制劑(例如，塞來考昔，羅非考昔等及其變體)；磷 酸二酯酶抑制劑(例如環戊苯丙酮)；磷脂酶抑制劑(例如，胞質溶膠 磷脂酶2 (cPLA2)的抑制劑，例如，三氟曱酮類似物(美國專利 6,350,892 ));血管內皮細胞生長因子(VEGF)抑制劑；VEGF受體抑制 劑；血管發生抑制劑；RAGE和可溶性RAGE;雌激素受體p ( ERB ) 激動劑、ERB-NFKb拮抗劑；千擾素-(3 (例如IFN (3-la和IFN (3-lb ); 考帕松；和皮質類固醇。
可與IL-21R/IL-21拮抗劑聯合使用的其它有用治療劑包括 布地縮松；表皮生長因子；氨基水楊酸酯；6-巰基噤呤；硫唑噤呤；甲 硝唑；脂加氧酶抑制劑；美沙拉秦；奧沙拉秦；巴柳氮；抗氧化劑；血 栓烷抑制劑；生長因子；彈性蛋白酶抑制劑；吡啶基-咪唑化合物；葡 糖苷酸或葡萄糖綴合的潑尼松的前藥；地塞米松或布地縮松；ICAM-反 義硫代磷酸酯寡脫氧核糖核苷酸(ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); 可溶性補體受體1(TP10; T Cell Sciences, Inc.);緩釋美沙拉秦；血小板 激活因子(PAF)的桔抗劑；環丙沙星；利諾卡因；環孢菌素A;羥氯喹 (PLAQUENIL );米諾環素(MINOCINTM)和anakmra (KINERET )。
選擇用於與本發明的IL-21/IL-21R拮抗劑聯合施用的特定治 療劑將很大程度取決於一些因素，如特定受試者、需要的靶和治療的選 定長度。所述確定在本領域技術人員的技術和知識範圍內。
可以與IL-21R/IL-21拮抗劑聯合的治療劑的其它實例包括以 下一種或多種6-巰基。票呤(6-MP);硫哇噤呤；柳氮磺胺吡啶；美沙拉 秦；奧沙拉秦；氯喹；羥氯喹(PLAQUENII^);青黴胺；金硫丁鹽 (aurothiornalate)(肌內和口服)；碌u唑噤呤；秋水仙石成；p-2腎上腺素受 體激動劑(沙丁胺醇、特布他林、沙美特羅)；黃。票呤(茶砵、氨茶鹼)；色 甘酸鹽；奈多羅米；酮替芬；異丙阿託銨和氧託銨；麥考酚酸嗎乙酯； 腺苷激動劑；抗血栓劑；補體抑制劑；和腎上腺素能藥劑。
在本申請中引用的所有參考文獻、專利、和公開的專利申請 的完整內容，都在本文引作參考。實施例
下面的實施例提供了本發明的解釋性實施方案，但是不以任 意方式限制本發明。本領域普通技術人員可以認識到，在本發明的範圍 內包括許多其它的實施方案。實施例1:材料和方法實施例1.1:小鼠、寄生蟲感染和抗原製備
從Taconic Farms (Germantown, NY)獲得雌性或雄性 C57BL/6, C57BL/6/Ai-IL畫10KO/IL-4KO小鼠(Hoffmann et al. (1999)丄 /mmw"o/. 163:927-938)。 C57BL/6背景上的IL-21R7—小鼠雜交對，是獲自 飼養在哈佛公共衛生學院(Boston, MA)的雜交群落(Kasaian et al. (2002) /mmwm(y 16:559-69)。所有的小鼠都在國家衛生部的美國實'驗動物管理 批准設施鑑定協會的特定無抗原條件下飼養。NIAID動物管理和使用委 員會批准了所有實驗程序。曼氏血吸蟲卵是按照以前的描述(Wynn et al. (1995) A^ e 376:594-96)/人受感染的小鼠(Biomedical Research Institute, Rockville, MD)的肝提取。為了誘導同步的原發肺肉芽肺，靜脈內(i.v.) 給予小鼠5,000個卵。為了誘導繼發肉芽腫，用5000個活卵腹膜內(i.p.) 給小鼠致敏，然後用5,000個活卵靜脈內攻擊(Wynn et al. (1994) </. Ejc/ . A/e J. 179:551-61)。在感染實驗中，用獲自感染的S w w/^a/ana g/Wrata 蟲咼牛(Biomedical Research Institute, Rockville, MD)的曼氏血吸蟲波多黎 各抹(NMRI)的25 - 30個尾蚴通過尾部經皮感染小鼠。從曼氏血吸蟲卵 純化可溶性卵抗原(SEA)和可溶性蠕蟲抗原製劑(SWAP),並且勻 漿(Cheever etal. (1994)/./附附w"o/. 153:753-59)。所有動物在處死時都進行灌注，使得能夠按照其它部分的描述(W.)確定蠕蟲和組織卵負荷。按照以前的描述(Katona et al. (1983) 乂 /附ww朋/. 130:350-56)製備巴西曰圓 線蟲(A/7p/ os7yowgy/1^ 6nxs7/ze"wi )么力蟲(L3)。通過皮下:;主射500個L3 接種小鼠。接種後第7天，收集肺組織和縱隔淋巴結進行細胞因子分析。實施例1.2:組織病理學和纖維化
在Wright吉姆薩染色的組織切片上確定肺和肝肉芽肺的大 小(Histopath of America, Clinton, MD)。所有分析中包括了每隻小鼠大約 30個肉芽肺。熟練的病理學家評價了相同切片中的嗜酸性粒細胞、肥大 細胞和其它類型的細胞的百分比。按照以前的描述確定通過羥脯氨酸水 平測量的肝和腸中的血吸蟲卵悽t目和肝的月交原含量(Cheever et al., sw; ra)。具體地，110°C下在5 ml 6N HCl中水解肝的200mg的部分18 小時後，通過Bergman和Loxley的技術(Bergman and Loxley (1963) j"^yhca/ B^c/zew. 35:1961-65)將肝膠原測量為羥脯氨酸。肝的羥脯氨 酸的增加與所有實驗中的卵數目正相關，肝膠原報導為每10,000個卵中 以微摩爾表示的高於正常肝膠原的增加；(感染的肝膠原_正常肝膠 原)/肝中卵的數目X 10—4或每對蠕蟲的微摩爾數。在慢性時間點的晚 期，纖維化報導為每個肝的總肝膠原。同一個體對所有組織特徵進行評 分，並且不知道實-驗:沒計。實施例1.3:FACS分析
收穫整個肺，並且置於RPMI中。擠壓通過70微米的尼龍 網(BD Falcon, San Diego, CA)而使組織石皮碎。洗滌單細胞懸浮液，通過 用ACK裂解溶液溫育3分鐘，裂解紅細胞。4。C下用PE-Cy5標記的抗 CD4和Fc阻斷抗體(兩種抗體都來自BD Pharmmgen, San Diego, CA ) 一起在FACS緩衝液中將肺淋巴細胞標記15分鐘。洗滌後，用FLOWJOTM 軟體(Treestar, Inc.， Ashland, OR)在FACS Calibur上分析細胞。實施例1.4:用sIL-21R-Fc進行的IL-21阻斷實驗
無菌取出脾和腸繫膜淋巴結(感染模型)或肺相關的淋巴結 (肺模型)，按照以前的描述製備單細胞懸浮液(Hesse et al. (2000) 屍w/zo/. 157:945-55)。培養物在溼化的5% C02氣氛下，37。C下溫育。用 SEA (20 ju g/ml)、 SWAP (50 ju g/ml)、伴刀豆球蛋白A(Con A; 1 ju g/ml) 或單獨的培養基刺激細胞。在72小時收穫上清液，測定細胞因子的產 生。用成對抗體(BD Pharmmgen, San Diego, CA)按照以前的描述(W.), 通過夾心ELISA測量IFN-y、 IL-5和IL-IO。用重組鼠細月包因子(BD Pharmingen， San Diego, CA)構建的標準曲線計算細胞因子水平。用鼠 IL-13 ELISA試劑盒(R&D Systems, Minneapolis,畫)，根據製造商的方 案測量IL-13水平。用小鼠TGF-13 1 DUOSET ELISA顯示系統(R&D Systems, Minneapolis, MN)，根據製造商的方案對TGF-13 1水平進行定 量。為了避免來源於牛的TGF-P 1汙染，用PBS將細胞洗滌3次，在含 有0.5%小鼠血清的培養基中培養。實施例1.6: RNA分離和純化以及實時聚合酶鏈反應
從肺和肝組織樣品提取總RNA,分別置於1 ml TRIZOLtm試 劑 (Invitrogen, Carlsbad, CA)中。用組織polytron(Omni International Inc.， Marietta, GA)將樣品勻漿，根據製造商的推薦提取總RNA，用來自Qiagen 的RNEASY 孩i試劑盒(Qiagen Sciences, Germantown, MD)進一步純 化。用SUPERSCRIPT IITM (Invitrogen,Carlsbad, CA)和寡核苷酸(dT)的混 合物以及隨機引物對各個樣品RNA(l fig)進行逆轉錄。在ABI PRISM 7900序列;險測系統(Applied Biosystems, Foster City, CA)上進4亍實時聚合 酶鏈反應(RT-PCR)。採用SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City， CA), 並且通過Applied Biosystems針對ABI PRISM 7700/7900序列檢測系統(Applied Biosystems, Foster City, CA) 描述的比較性閾循環方法，確定一些基因的mRNA的相對量。在該方法 中，將每個樣品的mRNA水平標準化為次黃。票呤鳥噤呤磷酸核糖基轉移酶mRNA水平，然後表示為與未感染的對照水平的相對增加或減少。用 PRIMER EXPRESS 軟體(Applied Biosystems, Foster City, CA)設計引 物。以前發表過IL-13、 IL隱4、 IL-IO、 HPRT (Hesse et al. (2001)丄/ww朋o/. 167:6533-44) 、 IL-13R oc 2 (Chiaramonte et al. (2003)丄￡"平 197:687-701)、 Yml、 FIZZ1和酸性幾丁質酶(AMCase) (Sandler et al., sw/ ra)的引物,包4舌
IL-215， GCCAG ATCGC CTCCT GATTA 3， (sense) (SEQ ID NO:28); 5， CATGC TCACA GTGCC CCTTT 3， (antisense) (SEQ ID NO:29);
IL隱21R5， CTCCC CCCTT GAACG TGACT 3， (sense) (SEQ ID NO:30); 5， TTGCC CCTCA GCACG TAGTT 3， (antisense) (SEQ ID NO:31);
用BD OPTEIATM小鼠IgE ELISA Set (BD Biosciences Pharmmgen, San Diego, CA),根據製造商的方案測量總IgE。通過間接 ELISA評估SEA特異性IgGl和IgG2b同種型特異性抗體(Ab)滴度。用 PBS稀釋的IO jug/mlSEA(100 ju 1/孑L)包被IMMULON 4板(Thermo Labsystems Inc., Beverly MA)，用系列2倍稀釋液分析血清樣品。以1:1000 的稀釋度使用生物素-大鼠抗小鼠IgGl (Zymed, San Francisco, CA)。此 後使用過氧化物酶標記的鏈黴親和素(KPL, Gaithersburg, MD)底物酶。以 1:1000的稀釋度使用第二步辣根過氧化物酶綴合的大鼠抗小鼠IgG2b (Zymed, San Francisco, CA) Ab。加入100 n 1單成分ABTS過氧化物酶 底物(KPL, Gaithersburg, MD)後，用VMAXTM動態微量滴定板讀數器 (Molecular Devices)在405 nm讀出孑L中的吸光度。
肝纖維化(針對卵數目調整)隨著感染強度(蠕蟲對)的增 加而減輕。因此，通過分析協方差比較這些變量，其中採用了作為協變 量的活卵總數的對數和每個卵的羥脯氨酸含量的對數。通過單向 ANOVA或斯氏14全-驗(Cheever et al., s比較不隨感染強度改變的變 量。用ANOVA評估細胞因子mRNA表達和肉芽腫大小的改變。當 p<0.05*， pO.0P承或口<0.001***時，認為差異是顯著的。實施例2:調節1型和2型極化反應期間的IL-21和IL-21R
與IL-21 (Wurster et al. (2002)， w戸;Mehta et al. (2004) /www朋/. Wev. 202:84-95)相比,對IL-21受體的調節和功能知之甚少。為 了確定IL-21及其受體在體內的病理性TH2反應中是否受到調節，採用 了曼氏血吸蟲肉芽腫形成的模型。在該模型中，已知Th2細胞因子在病 變形成中起顯著作用(Pearce and MacDonald，認/ ra)。最初的研究設計用 於確定IL-21和IL-21RmRNA表達是否與體內極化的TH2細胞因子反應 相關。通過採用暴露於曼氏血吸蟲卵後產生高度加劇的TH1 (IL-4- IL-10,或TH2 (IL-12勺IL-10,細胞因子反應的小鼠實現了該目的。在IL-4:/IL匿10i "Th1"小鼠中，到攻擊後4天，IFN隱y mRNA表達在肺中比 基線增加了 75倍，到第14天，保持比背景高大約50倍(

圖16A)。 在任何時間點都不能在這些小鼠中檢測到IL-13 mRNA，證實建立了高 度極化的THl炎症反應。相反，IL-12勺IL-10: "TH2"小鼠顯示在攻擊後 所有時間點IL-13 mRNA增加200 -250倍，IFN-y改變很少到沒有改 變。與展示高度極化的表達模式的Th1/Th2細胞因子相反，IL-21與極 化的表型不相關(圖16B)。在這兩組中，在血吸蟲卵攻擊後，IL-21 mRNA 水平比基線至少增加50倍，但在THl-極化的小鼠中觀察到的增加平均 比TH2極化的動物高3-4倍(圖16B;下圖)。IL-21R也不與TH1或 TH2免疫反應特異性相關。但是，與在傾向於TH1的動物中更顯著的 IL-21相反，在TH2-極化的小鼠中觀察到對I1-21R的最大反應(圖16B;上圖)。實施例3:在對血吸蟲卵的肺反應期間IL-21R缺陷型小鼠肺中的2 型細胞因子產生減少
為了確定TH2效應物反應的減少是否對於曼氏血吸蟲肺肉 芽腫形成是特異性的，用腸線蟲巴西諾卡氏菌感染WT和IL-21R:小 鼠。通過將第三階段的幼蟲(L3)接種到皮膚下，建立感染。隨著寄生 蟲成熟，它們從接種部位遷移，通過循環系統進入肺。 一旦進入肺，寄 生蟲引發劇烈和高度極化的TH2反應(Urban et al. (1993) /■ /附m節o/. 151:7086-94),通過分析一些TH2相關基因在肺(圖18A)和肺相關淋 巴結(圖18B)中的表達而證實該反應。巴西諾卡氏菌感染後，WT小 鼠的肺和淋巴結展示出IL-4、 IL-13、 AMCase、 FIZZ1/RELM1 a和Yml mRNA表達的顯著增加(圖18A和18B)。但是，與肺肉芽肺模型一致， 觀察到了 IL畫21R- 、鼠肺內IL畫4、 IL-13和AMCase的水平顯著減少，以 及Yml和FIZZl mRNA水平輕微減少(圖18A)。引流淋巴結顯示出相似的減少，但Yml和FIZZ1的減少在淋巴結中更顯著(圖18B)。兩 種組織之間僅有的其它主要區別是AMCase mRNA反應，其似乎局限於 肺。綜合起來，這些數據證實了 IL-21R在體內的TH2反應發生中的重 要作用。但是，顯著的是，儘管發生了顯著減弱的TH2反應，巴西諾卡 氏菌感染的IL-21R— 、鼠在成蟲排驅方面沒有顯示顯著延遲(未示出)。實施例5: 2型細胞因子驅動的炎症在IL-21R〃-小鼠的肺中減少
設計隨後的實驗系列，用於確定IL-21R是否調節繼發TH2 反應的發生。為了進行這些實驗，用曼氏血吸蟲卵使WT和IL-21R—〃小 鼠致敏，2周後靜脈內攻擊。如預期的，致敏的小鼠發生了強肉芽腫反 應，其比初次攻擊的動物(圖17C)強4-5倍(圖19C)。如在初次攻 擊的模型中觀察到的，暴露於卵後肺內IL-21和IL-21R mRNA顯著增 加，但11-21反應在第二次攻擊過程中到達峰值要早得多。與IL-21相比， IL-21R僅輕度增加，但在兩個時間點都保持顯著升高，而IL-21 mRNA 水平在第4天達到峰值後開始減少(圖19A)。因此，證明配體在組織 中更緊密的調節。IL-21R- 、鼠中的IL-21表達也顯著減少，證明受體及 其配體之間存在強反饋機制。在TH2相關細胞因子中，IL-13是最強的 反應，顯示在WT小鼠中比基線增加50 - 100倍。但是，它在IL-21R: 小鼠中減少到比背景高10-20倍，證明IL-21R是最大程度發生繼發性 TH2反應所需要的。再次，IL-21R-z—小鼠中TH2細胞因子表達的減少不 伴隨IFN-y的顯著增加。實際上，IFN-y mRNA表達在IL-21R:小鼠的 肺內減少。然而，敲除在淋巴結和肺中顯示輕度但持續的IFN-y產生增 加，表明悉體上Th2細胞因子的更強抑制(圖19B)。與初次卵攻擊模 型一致，TH2和TH1細胞因子產生的減少在肉芽腫組織中更顯箸(圖 19A)，但SEA誘導的TW反應在脾中也部分減少(圖19B)。繼發性 肉芽腫炎症的顯著減少與肺中較弱的TH2反應的發生一致(圖19C)。 此外，FIZZ1、 Yml和AMCase表達顯著減少(圖19D)，進一步證實 了 IL-21R—A小鼠中繼發性TH2效應物反應的顯箸受損。實施例6: IgG抗體、肉芽腫形成和2型細胞因子在感染的IL-21R 缺陷小鼠中顯著減少
隨後，為了確定IL-21信號傳遞是否是維持慢性TH2佔優勢的反應所必須的，使動物經皮暴露於曼氏血吸蟲尾蚴，分析它們在感染 後的急性和慢性時間點的病理反應和免疫反應。如在肺肉芽腫研究中觀察到的，受感染的WT小鼠的肝中IL-21R和IL-21 mRNA表達顯箸上 調。相反，IL-21mRNA甚至在慢性感染後在IL-21R- 、鼠中也是幾乎檢 測不到的(圖20A)。在感染後的急性階段，IL-21R— 、鼠也表現出TH2 細胞因子mRNA表達的顯著減少(圖20A)。但是，所述改變仍然局限 於肉芽肺組織，因為這兩組的淋巴結和脾細胞反應在寄生蟲抗原體外刺 激後是相似的(圖20B)。在體外測定中注意到的唯——致的差異是脾 細胞培養物中IL-5和11-10產生減少2 - 3倍。IL-21R:小鼠在感染後的 急性期也發生了顯著更小的肉芽腫(圖20C),這與肝中IL-4和IL-13 mRNA反應的減少一致(圖20A)。但是，這不伴隨肉芽腫中嗜酸性細 胞百分比的任何明顯改變(圖20C)。病變的更詳細顯微鏡分析證明肉 芽腫的總體組成沒有可檢測的改變(圖21A )。也進行了實驗，確定IL-21R 缺陷是否特異性影響CD4+ T細胞募集到肉芽腫組織。為了解決該問題， 使用肺肉芽腫模型，以使炎症細胞的募集同步。但是，與肝肉芽腫的顯 微鏡評估(圖21A) —致，肺中CD4+ T細胞的百分比在暴露於卵之前 和之後在WT和IL-21R- 、鼠中是相似的(圖21B)。因此，CD4+T細 胞募集或擴增的改變不太可能解釋在組織中觀察到的Thl/Th2細胞因子 反應減少。相反，它們似乎由於總體炎症反應的更普遍減少而導致。重 要的是，到感染後12周，這兩組都有效下調了它們的肉芽腫反應(Pearce and MacDonald, swpra)。因此，在慢性時間點，肉芽肺大小沒有顯著差 異(圖20C)。在慢性感染的敲除小鼠中觀察到了 TH2細胞因子反應的 最小損害(圖20A)。在急性期觀察到的FIZZ1和Yml的顯箸減少在 慢性感染的IL-21R—7—動物中也減少(圖20D)。但是，在第12周，AMCase 的表達仍保持顯著低水平，表明慢性感染的IL-21R— 、鼠中至少一個亞 組的TH2驅動的反應持續減少。
也檢驗了 IL-21R:小鼠血清抗體水平的改變(圖22)。與它 們受抑制的細胞因子反應一致(圖20A) , IL-21R:小鼠表現出寄生蟲 特異性IgG! (TH2-相關抗體)和IgG2b (THl-相關抗體)滴度的顯著減少，這 種減少在慢性時間點保持(圖22B)。但是，令人感興趣的是，這不伴 隨IgE的任何顯著改變(圖22C)，表明選擇性受損僅僅是血清抗體同 種型的一個亞型。已經表明外源性IL-21抑制IgE產生(Suto etal. (2002)100:4565-73),這可以解釋IgE在慢性感染的IL-21R一小鼠中IgE 的輕微升高。重要的是，IL-21RV-小鼠中2型反應的總體減少不是歸因 於寄生蟲負荷的差異，因為在所有時間點，在這兩個組的組織中發現了 相似數目的卵和成對的成蟲(圖22A)。實施例7: IL-21R缺陷減慢肝纖維化的進展
由於認為TH2細胞因子在組織纖維生成中起主要作用(Wynn (2004), w/ ra)，隨後檢查了曼氏血吸蟲感染的IL-21R,小鼠中肝纖維化 的發生和進展。在感染後的多個時間點測定肝羥脯氨酸水平，作為組織 膠原含量的直接測量值。如所預期的，在受感染的WT小鼠中觀察到了 顯著的肝纖維化(圖22D)。相反，IL-21R一展示出在急性和慢性時間 點的顯著更少的纖維化。顯著的是，到感染後第29周，IL-21R— 、鼠顯 示出與WT小鼠相比，總的肝膠原含量減少了 50%以上(圖22E)，由 此證實了 IL-21R在TH2-依賴性纖維化進展中的重要和必不可少的作 用。
進行了實驗，以檢驗IL-21抑制劑是否可以減慢受感染的 WT小鼠中的纖維化的進展。為了進行這些實驗，從感染後第6周(大 約此時首先在肝中檢測到卵)開始，用sIL-21R-Fc或對照蛋白處理各組 C57BL/6小鼠總共5周。儘管兩組具有相似的蠕蟲和組織卵負荷(數據 未示出)，接受IL-21阻斷劑的小鼠顯示在實驗結束時肝纖維化減少 50%以上(圖22F) 。 IL-4和IL-13 mRNA表達在肝中也減少，肉芽胂 大小減少大約15% (數據未示出)。因此，這些數據支持用IL-21R; 小鼠進行的實驗。實施例8: IL-21信號傳遞促進替代激活的巨噬細胞發育
最近將IL-21表徵為能夠抑制未接觸過抗原的Th細胞分化 未產生IFN- y的TH1細胞的TH2細胞因子(Wurster et al. (2002)， s甲ra)。 由於血吸蟲中的免疫反應從早期IFN-Y進化為持續和顯著的TH2反應 (Pearce and MacDonald, sw/ ra)， #^驗了 IL-21R信號傳遞對蠕蟲i秀導的TH2反應的發生的影響。用曼氏血吸蟲感染WT小鼠，增加了肝中的IL-21 和IL-21R表達，證實11-21信號傳遞與蠕蟲誘導的2型免疫的聯繫。但 是，在肺中，血吸蟲卯在Th1和TH2極化的反應中都誘導顯著ILJ1表 達。實際上，當小鼠極化為TH1反應時，IL-21表達增加最多。這些數 據表明IL-21相對於其它TH2-相關細胞因子表現出較受限的表達模式。 IL-21的受體也不能展示Th1/Th2-特弄性模式。但是，與TH1極化的小 鼠相比，在TH2極化的小鼠肺中幾乎誘導了多4倍的IL-21受體，這提 供了一種最初提示，表明IL-21R信號傳遞可能參與TH2-介導的炎症的 調節。
為了確定2型效應物反應在缺乏IL-21R的條件下是否受 損，檢驗了在TH2極化條件下優先誘導的一些基因的表達。這些基因包 括AMCase、 Yml和FIZZl,認為所有這些都在TH2介導的炎症的調節 中起重要和非冗餘的作用(Zhu et al., Chiaramonte et al. (2003),Nair et al.,認/ ra; Mentink-Kane et al.,認/ ra; Guo et al. (2000) 祝o/. C/zem. 275:8032-37)。儘管在原發、繼發或慢性免疫反應過程中觀 察到了一些變異，在每種情況下，IL-21R:小鼠展示這些&2-相關基因 的高度顯著減少。Ym 1和AMCase是與低等生物的幾丁質酶具有同源性 的蛋白家族成員(Nair et al.， s，ra)。儘管它們在宿主免疫反應中的確切 功能還不確定，但認為它們在嗜酸性細胞趨化、組織重塑和纖維化中起 重要作用。實際上，最近的研究表明，AMCase中和作用可以改善過敏 原驅動的炎症和氣道高反應性，由此證實哺乳動物幾丁質酶參與Th2免 疫(Zhu et al, w; ra)。 FIZZ1也與組織纖維生成相關(Mentmk-Kane et al., s，ra;Lmetal. (2004)/./mw麗o/. 173:3425-31)。因此，IL-21R的主要功能可能是調節傷口癒合和纖維化的機理。因此，除了參與蠕蟲誘導的免 疫反應，IL-21R可以參與多種TW-介導的炎性病症的調節。[Ol卯]在血吸蟲病中，IL-21R缺陷對疾病的進展具有顯著作用。盡 管感染強度在WT和IL-21R一小鼠中相同，但在IL_21R不存在的條件 下，卵誘導的炎症反應顯著減少。也存在肺中繼發肉芽腫形成的顯著減 少和原發肉芽腫的更快消退。綜合起來，這些數據說明IL-21R在肉芽腫 性炎症中的必不可少的作用。以前的研究表明IL-4和11-13對病變形成 是關鍵的(Pearce and MacDonald; ^w/ ra)，因此認為IL-21R直接或間接影 響這些細胞因子的活性。這些研究提示IL-21不是單獨作用，因為在IL-4/IL-10雙敲除小鼠中觀察到了極高水平的IL-21，而肉芽腫形成在這 些TH2缺陷動物中幾乎完全消除(Hoffmann et al. (2000)丄/wmw"o/. 164:6406-16; Sandler et al. (2003) </. /wmw朋/. 171:3655-67)。因此，IL-21 似乎與IL-4和IL-13 —起作用，誘導最大反應。本文公開的數據表明 IL-21R一小鼠中肉芽腫的細胞組成沒有可檢測的改變，並且CD4+T細胞 募集沒有特異性受損。綜合起來，這些發現提示IL-21R通過調節TH2 效應物反應的總體強度，調節寄生蟲誘導的病理學的發展。
為了進一步闡釋涉及的機理，進行了實驗，確定IL-21是否 直接調節巨噬細胞功能，因為體內數據表明與"替代激活的"表型相關 的一些基因顯著;鹹少(Gordon, A'w/7n2; Mantovani et al. (2005) /w附wm'/y 23:344-46)。表現替代激活的表型的巨噬細胞和成纖維細胞是血吸蟲肉 芽肺的主要細胞組成成分，功能研究提示它們關鍵參與疾病進展(Hesse etal.(2001), s，ra)。實際上，Brombacher等人的一項重要研究顯示完全缺乏替代激活的巨噬細胞的小鼠在曼氏血吸蟲感染後發生致死性卵誘 導的病理(Herbertetal. (2004)/附m朋z(y 20:623-35)。此外，由於巨嗟細月包來源的TGF- (3 1參與IL-13介導的纖維化的機理(Lee et al. (2001) / ￡x/7. A/^/. 194:809-21; Fichtner-Feigletal. (2006) AAw. Met/. 12:99-106),進行了 實驗，確定IL-21是否調節巨噬細胞中的TGF-p 1產生。為了研究這些 問題，在用IL-21、 IL-4和IL-13的多種組合刺激後，測量骨髓來源的巨 噬細胞中的Arg-1和FIZZ1 mRNA、精氨酸酶活性和TGF- (3 1蛋白反應。 Arg-1和FIZZ1是IL-4Roc/Stat6-依賴性基因(Lm et al.,《w/ ra; Hesse et al. (2001), sw;^a; Munder et al. (1998)/ /w附w"o/. 160:5347-54);因jt匕，它々]起替代的巨噬細胞激活的功能性標誌物的作用。重要的是，這些發現提 示當巨噬細胞暴露於IL-21時，它們變得對IL-4和IL-13的Arg-1和FIZZ1 誘導活性更敏感。通過尿素的產生評估的精氨酸酶活性也顯著增加，證 明IL-21是高度功能性替代激活的巨噬細胞發育的重要刺激物。相反， IL-21對巨噬細胞的TGF-P 1產生沒有作用。因此，似乎並不涉及促纖 維化的細胞因子TGF- P 1,這與以前調查TGF- p 1在血吸蟲病中的作用 的研究一致(Kaviratne et al. (2004)丄/w/m#w/. 173:4020-29)。相反，IL-21 顯著增加BMM0S中的IL-4Roc和IL-13Rocl表達，並且減少可溶性 IL-13誘斜受體的體內產生，這可能解釋它們對IL-4和IL-13的提高的敏 感性。因此，這些數據符合IL-21R;小鼠，並且提示IL-21R信號傳遞的 一個重要功能是增強AAM0的發育，這與纖維化的機理相關(Hesse etal. (2001), s甲ra; Hesse et al. (2000), sw/ ra)。此外，由於已經表明AAM0方文 大CD4+ TH2細胞分化(Bonecchi et al. (1998) 92:2668-71),這些數據也可以解釋IL-21IT 、鼠中蠕蟲誘導的TH2活性的總體減少。
在人類血吸蟲病中，纖維化肝病理的發生是慢性發病率和致 死率的主要原因(Pearce and MacDonald， Wynn et al. (2004)/wmw"o/. Wev. 201:156_67)。由於已知TH2細胞因子應答在膠原沉積中起 重要作用(Wynn et al. (2004), A'w/ ra),最終的實驗系列檢驗了 IL-21R對 肝纖維化進展的影響。顯著的是，纖維化的發生在IL-21R— 、鼠中顯著 減少，敲除動物到感染後第29周時顯示肝纖維化減少50%以上。重要 的是，當用sIL-21R-Fc處理受感染的WT小鼠時也產生了相似的發現。 因此，IL-21受體也揭示為抗纖維化治療的潛在的新靶。綜上所述，這 些研究說明IL-21R在TH2細胞因子介導的疾病進展中的關鍵作用。因 此，IL-21R應該歸為調節2型免疫和巨噬細胞極化的重要受體之一。實施例10:預示性治療
給診斷患有肝硬化的受試者施用IL-21R融合蛋白，以減少 肝中纖維化組織的積累。IL-21R融合蛋白包括在C末端通過接頭(對應 於SEQ ID NO:17的胺基酸236-243 )與人免疫球蛋白Gl (IgGl) Fc-突變 序列(對應於SEQIDNO:17的胺基酸244-467)融合的SEQIDNO:2的 胺基酸1-235。
給診斷感染血吸蟲的受試者施用可溶性ILJ1R片段，以減 少纖維化組織的積累。該片段含有SEQIDNO:2的胺基酸20-538。
手術後，給受試者施用IL-21R抗體，以減少傷口癒合過程 中由於手術切口導致的纖維化積累。[0198給診斷患有肝硬化的受試者施用IL-21抗體，以減少肝中纖 維化組織的積累。
權利要求
1.治療、改善或預防受試者中的纖維化或纖維化相關病症的方法，包括給受試者施用治療有效量的減少受試者中IL-21和/或IL-21R的水平的試劑。
2. 權利要求l的方法，其中該試劑是IL-21/IL-21R拮抗劑，選自 抗IL-21R抗體、抗IL-21抗體、抗IL-21R抗體的抗原結合片段、抗IL-21抗體的抗原結合片段和IL-21R的可溶性片段。
3. 權利要求2的方法，其中該試劑是IL-21R的可溶性片段，並且 所述IL-21R的可溶性片段包含與選自下組的胺基酸序列具有至少90% 同一性的胺基酸序列SEQ ID NO:2的胺基酸1-538、 SEQIDNO:2的氨 基酸20-538、 SEQ ID NO:2的胺基酸1-235、 SEQ ID NO:2的胺基酸20-235、 SEQIDNO:2的胺基酸1-236、 SEQIDNO:2的胺基酸20-236、 SEQ ID NO:5的胺基酸1-529、 SEQ ID NO:5的胺基酸20-529、 SEQ ID NO:5 的胺基酸1-236和SEQ ID NO:5胺基酸20-236 。
4. 權利要求3的方法，其中所述IL-21R的可溶性片段結合於IL-21 多肽。
5. 權利要求l的方法，其中該試劑是IL-21R的可溶性片段，並且 所述IL-21R的可溶性片段包含與以下所示胺基酸序列基本相同的氨基 酸序列SEQIDNO:ll、 SEQIDNO:13、 SEQIDNO:15、 SEQIDNO:17、 SEQ IDNO:19、 SEQ ID NO:21、 SEQ IDNO:23、 SEQ IDNO:25或SEQ ID NO:27。
6. 權利要求5的方法，其中IL-21R的可溶性片段的胺基酸序列包 含與SEQ ID NO:l 1或SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列基本相同的氨基 酸序列。
7. 權利要求l的方法，其中該試劑是IL-21R的可溶性片段，並且 所述IL-21R的可溶性片段由與以下所示核酸序列基本相同的核苷酸序 列編碼SEQIDNO:10、 SEQIDNO:12、 SEQIDNO:14、 SEQIDNO:16、 SEQ ID NO: 18、 SEQ ID NO:20 、 SEQ ID NO:22、 SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:26。
8. 權利要求7的方法，其中所述IL-21R的可溶性片段由與SEQID NO: 12或SEQ ID NO: 16所示核酸序列基本相同的核苷酸序列編碼。
9. 權利要求2的方法，其中該試劑是IL-21R的可溶性片段，並且所述IL-21R的可溶性片段包含IL-21R的胞外域和免疫球蛋白Fc片段。
10. 權利要求9的方法，其中IL-21R的胞外域的胺基酸序列包含與 SEQ ID NO:2的胺基酸1-235或SEQ ID NO:2的胺基酸20-235具有至少 卯％同一性的胺基酸序列。
11. 權利要求9的方法，其中免疫球蛋白Fc片段具有改變的功能。
12. 權利要求11的方法，其中免疫球蛋白Fc片段具有SEQ ID NO:17 的胺基酸244-467的胺基酸序列。
13. 權利要求l的方法，其中纖維化或纖維化相關病症影響肝、表 皮、內皮、肌肉、腱、軟骨、心臟、胰腺、肺、子宮、神經系統、睪丸、 卯巢、腎上腺、動脈、靜脈、結腸、小腸、膽管或胃。
14. 權利要求13的方法，其中纖維化或纖維化相關病症影響肝、 表皮、內皮或肺。
15. 權利要求14的方法，其中纖維化或纖維化相關病症是肺間質 纖維化。
16. 權利要求13的方法，其中纖維化或纖維化相關病症是血吸蟲 感染的結果。
17. 權利要求l的方法，其中纖維化或纖維化相關病症是傷口癒合 的結果。
18. 權利要求17的方法，其中傷口癒合由手術切口導致。
19. 權利要求l的方法，進一步包括給受試者施用至少一種另外的 治療劑。
20. 權利要求19的方法，其中所述至少一種另外的治療劑選自 細胞因子抑制劑、生長因子抑制劑、免疫抑制劑、抗炎劑、代謝抑制劑、 酶抑制劑、細胞毒性劑和細力包抑制劑。
21. 權利要求19的方法，其中所述至少一種另外的治療劑選自 TNF拮抗劑、抗TNF劑、IL-12拮抗劑、IL-15拮抗劑、IL-17拮抗劑、 IL-18拮抗劑、IL-22拮抗劑、T細胞消除劑、B細胞消除劑、環孢菌素、 FK-506、 CCI-779、依那西普、英夫單抗、利妥希瑪、阿達木單抗、潑 尼松龍、硫唑。票呤、金、柳氮磺胺吡啶、羥氯喹、米諾環素、阿那白滯 素、阿巴他塞、曱氨蝶呤、來氟米特、雷帕黴素、雷帕黴素類似物、Cox-2 抑制劑、cPLA2抑制劑、NSAIDs、 p38抑制劑、B7.1、 B7.2、 ICOSL、 ICOS和/或CD28的拮抗劑和CTLA4激動劑。
22. 權利要求l的方法，其中所述受試者是人。
23. 鑑定用於治療、改善或預防受試者中的纖維化或纖維化相關病 症的化合物的方法，包括(a)測量感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/ 或IL-21R水平；(b)使感興趣的細胞或樣品與化合物接觸；和(c)測量與 化合物接觸後感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平，其中與 未接觸的感興趣的細胞或樣品相比，接觸的感興趣的細胞或樣品中的 IL-21和/或IL-21R水平較低，則鑑定出化合物是可用於治療、改善或預 防受試者中的纖維化或纖維化相關狀況的化合物。
24. 鑑定用於治療、改善或預防受試者中的纖維化或纖維化相關病 症的化合物的方法，包括(a)測量感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/ 或ILJ1R水平；(b)使感興趣的細胞或樣品與化合物接觸；(c)測量與化 合物接觸後感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平；和(d)比 較接觸的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平與IL-21和/ 或IL-21R的參照水平，其中與IL-21和/或IL-21R的參照水平相比，接 觸的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平較低，則筌定出化 合物是可用於治療、改善或預防受試者中的纖維化或纖維化相關狀況的 化合物。
25. 監測受試者中的纖維化或纖維化相關狀況的進展的方法，包 括(a)在第一時間點測量來自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21 和/或IL-21R水平；和(b)在第二時間點測量來自受試者的感興趣的細胞 或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平；其中與第 一時間點時來自受試者的 感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平相比，第二時間點時來 自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平較低，提供 纖維化或纖維化相關狀況的嚴重程度降低的指示。
26. 預測受試者中的纖維化或纖維化相關狀況的方法，包括(a) 在第一時間點測量來自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或 IL-21R水平；和(b)在第二時間點測量來自受試者的感興趣的細胞或樣品 中的IL-21和/或IL-21R水平；其中與第一時間點時來自受試者的感興趣 的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平相比，第二時間點時來自受試 者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平較低，表明受試者 將發生纖維化或纖維化相關狀況的可能性降低，或受試者中的纖維化或 纖維化相關狀況將惡化的可能性降低。
27. 預測受試者中的纖維化或纖維化相關狀況的方法，包括(a) 測量來自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平；(b) 比較來自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平與 IL-21和/或IL-21R的參照水平，其中與IL-21和/或IL-21R的參照水平 相比，來自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平較 低，表明受試者將發生纖維化或纖維化相關狀況的可能性降低，或受試 者中的纖維化或纖維化相關狀況將惡化的可能性降低。
28. 診斷受試者中的纖維化或纖維化相關狀況的方法，包括(a) 測量來自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平；(b) 比較來自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平與 IL-21和/或IL-21R的參照水平，其中與IL-21和/或IL-21R的參照水平 相比，來自受試者的感興趣的細胞或樣品中的IL-21和/或IL-21R水平較 高，表明受試者存在纖維化或纖維化相關狀況。
全文摘要
本發明提供了通過測量IL-21和/或IL-21受體(IL-21R)水平(例如IL-21和/或IL-21R蛋白和/或mRNA的表達水平、IL-21和/或IL-21R的活性水平、IL-21與IL-21R的相互作用水平)的改變而篩選用於治療、改善或預防纖維化和/或纖維化相關狀況的組合物的方法。本發明進一步提供了用於治療纖維化和/或纖維化相關狀況的IL-21或IL-21R的拮抗劑。進一步提供了通過測量IL-21和/或IL-21R的水平(即IL-21和/或IL-21R的活性水平、IL-21和/或IL-21R的表達水平(如IL-21和/或IL-21R基因產物的水平)和/或IL-21與IL-21R的相互作用水平)而診斷、預測和監測纖維化和/或纖維化相關狀況的進展(例如治療過程)的方法。
文檔編號A61P17/02GK101287759SQ200680021090
公開日2008年10月15日 申請日期2006年4月13日 優先權日2005年4月14日
發明者D·A·楊, M·格魯斯比, M·科林斯, T·A·溫 申請人:惠氏公司;美國政府衛生與公眾服務部;哈佛大學校長及研究員協會