水蛭素的提取方法
2023-05-28 17:38:16 2
專利名稱：水蛭素的提取方法
技術領域：
本發明屬於水蛭素的製備方法技術領域，涉及一種成品收率達到99%以上的水蛭素提取方法。
背景技術：
水蛭素是水蛭體內的一種蛋白質，含65個胺基酸殘基和3對二硫鍵，具有高度特異的抗凝血酶活性，抑制凝血酶結合底物，故有抗凝血作用。目前在製備水蛭素時，通常是將水蛭冷卻後進行搗碎，而活的水蛭在搗碎時困難很大，因為水蛭身體是軟的不易搗碎，而且在加工過程中水蛭不斷逃跑，爬得四周都是，十分噁心；也有的是用開水將水蛭煮一下，使其死後再搗碎，但是在過水時水蛭素分泌物從水蛭口腔中流失；通常對泥漿狀水蛭用電爐或手工煮，這樣既不能工業化，又不能恆溫加熱； 對水蛭液採用離心機離心分離不完全，水蛭素成品收率低，由於現有的水蛭素提取方法存在上述工藝不合理的缺點，因而水蛭素成品的質量穩定性差，收率通常只有80%左右。
發明內容
為了克服現有技術的上述缺點，本發明提供一種具有工藝合理、操作方便實用、水蛭素成品的質量穩定性好和收率提高到99%以上的水蛭素的提取方法。本發明解決其技術問題所採用的技術方案是一種水蛭素的提取方法，其工藝步驟是
第一步將水蛭洗淨去除泥土雜質後進行冰凍，經冰凍後對水蛭進行整體搗碎，然後將整體搗碎後的水蛭用工業豆漿機磨成泥漿狀；
第二步將經第一步製得的泥漿狀水蛭加熱到60-80°C，並維持2-3分鐘；
第三步向將經第二步加溫後的水蛭漿中加入質量百分比濃度為10 %的冰醋酸，調整pH值在4-4. 4，隨即冷卻至25-30°C，再加入質量百分比濃度為10 %的NaCO3，調整pH 值 6-7 ；
第四步經第三步處理後的水蛭漿用布袋過濾收集母液殘渣，然後加入純淨水先後淨提3次，淨集全部浸提液，再用管式離心機進行離心分離；
第五步將經第四步得到的母液用透析膜透析36h，每12h更換一次透析膜；
第六步將經第五步得到的透析液用冷凍乾燥法製得水蛭素粗品；
第七步將經第六步得到的粗品用適當的蒸餾水進行水溶解，再透析16h，所得溶液經冷凍乾燥製得水蛭素精品。在所述第一步中進行搗碎時，連同水蛭體外的冰也一起進行搗碎。在所述第二步中採用夾層加熱攪拌鍋進行加熱，停止加熱後放去夾層內的水，待冷卻時再在夾層中通過自來水進行冷卻。在第三步中的所述pH值調整，是在經第二步加熱處理後，調酸的目的是要使水蛭血紅蛋白凝固，PH值4時凝固最完全，因此調酸的pH值一定要到位，冷卻後調pH值至7，這樣中和了酸性，到液體變色並析出澄清的水為止。在第四步中採用管式離心機進行離心分離，將濾液反覆進行三次離心分離，收集液體並去除管中的殘渣。在第五步中所述透析膜呈帶狀，徑長大於30mm，這樣才能一次性透析完全。本發明的有益效果是採用冰凍處理使得水蛭素不流失，同時在搗碎時連同水蛭體外的冰也一起進行搗碎，所以沒有水蛭素的損失，然後通過工業的豆漿機把它磨成泥漿狀；採用夾層的加熱攪拌鍋進行加熱，這樣既能工業化操作，又能進行恆溫加熱，停止加熱後放去夾層水，待冷卻時再在夾層中通過自來水冷卻；在加熱後，調酸的目的是要使水蛭素中的血紅蛋白凝固，PH值4時凝固最完全，調酸的pH值一步到位，冷卻後調pH值至7，這樣中和了酸性，到液體變色並析出澄清的水為止；使用管式離心機,將濾液反覆三次離心分離，收集液體並去處管中的殘渣，提高收率；透析漠呈帶狀，徑長在30mm以上，這樣一次性透析完全，透析液採用純淨水使得低分子的物質能完全排出；具有工藝合理、操作方便實用、水蛭素成品的質量穩定性好和收率提高到99%以上的特點。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明進一步說明。一種水蛭素的提取方法，其工藝步驟是第一步將水蛭洗淨去除泥土雜質後進行冰凍，採用冰凍處理使得水蛭素不流失，經冰凍後對水蛭進行整體搗碎，然後將整體搗碎後的水蛭用工業豆漿機磨成泥漿狀；在進行搗碎時，連同水蛭體外的冰也一起進行搗碎，所以沒有水蛭素的損失。第二步將經第一步製得的泥漿狀水蛭加熱到60-80°C，並維持2-3 分鐘；採用夾層加熱攪拌鍋進行加熱，這樣既能工業化操作，又能進行恆溫加熱，停止加熱後放去夾層內的水，待冷卻時再在夾層中通過自來水進行冷卻。第三步向將經第二步加溫後的水蛭漿中加入質量百分比濃度為10 %的冰醋酸，調整pH值在4-4. 4，隨即冷卻至 25-300C，再加入質量百分比濃度為10 %的NaCO3,調整pH值6_7 ;調酸的目的是要使水蛭血紅蛋白凝固，PH值4時凝固最完全，因此調酸的pH值一定要到位，冷卻後調pH值至7，這樣中和了酸性，到液體變色並析出澄清的水為止。第四步經第三步處理後的水蛭漿用布袋過濾收集母液殘渣，然後加入純淨水先後淨提3次，淨集全部浸提液，再用管式離心機進行離心分離；採用管式離心機進行離心分離，將濾液反覆進行三次離心分離，收集液體並去除管中的殘渣，提高收率。第五步將經第四步得到的母液用透析膜透析36h，每12h更換一次透析膜；所述透析膜呈帶狀，徑長大於30mm，這樣才能一次性透析完全，透析液採用純淨水使得低分子的物質能完全排出。第六步將經第五步得到的透析液用冷凍乾燥法製得水蛭素粗品。第七步將經第六步得到的粗品用適當的蒸餾水進行水溶解，再透析16h，所得溶液經冷凍乾燥製得水蛭素精品。本發明具有工藝合理、操作方便實用、水蛭素成品的質量穩定性好和收率高的特點。經本發明處理所得水蛭素的收率達到99%以上。
權利要求
1.一種水蛭素的提取方法，其特徵在於工藝步驟是第一步將水蛭洗淨去除泥土雜質後進行冰凍，經冰凍後對水蛭進行整體搗碎，然後將整體搗碎後的水蛭用工業豆漿機磨成泥漿狀；第二步將經第一步製得的泥漿狀水蛭加熱到60-80°C，並維持2-3分鐘；第三步向將經第二步加溫後的水蛭漿中加入質量百分比濃度為10 %的冰醋酸，調整pH值在4-4. 4，隨即冷卻至25-30°C，再加入質量百分比濃度為10 %的NaCO3，調整pH 值 6-7 ；第四步經第三步處理後的水蛭漿用布袋過濾收集母液殘渣，然後加入純淨水先後淨提3次，淨集全部浸提液，再用管式離心機進行離心分離；第五步將經第四步得到的母液用透析膜透析36h，每12h更換一次透析膜；第六步將經第五步得到的透析液用冷凍乾燥法製得水蛭素粗品；第七步將經第六步得到的粗品用適當的蒸餾水進行水溶解，再透析16h，所得溶液經冷凍乾燥製得水蛭素精品。
2.如權利要求I所述水蛭素的提取方法，其特徵是在所述第一步中進行搗碎時，連同水蛭體外的冰也一起進行搗碎。
3.如權利要求I所述水蛭素的提取方法，其特徵是在所述第二步中採用夾層加熱攪拌鍋進行加熱，停止加熱後放去夾層內的水，待冷卻時再在夾層中通過自來水進行冷卻。
4.如權利要求I所述水蛭素的提取方法，其特徵是在第三步中的所述PH值調整，是在經第二步加熱處理後，調酸的目的是要使水蛭血紅蛋白凝固，pH值4時凝固最完全，因此調酸的PH值一定要到位，冷卻後調pH值至7，這樣中和了酸性，到液體變色並析出澄清的水為止。
5.如權利要求I所述水蛭素的提取方法，其特徵是在第四步中採用管式離心機進行離心分離，將濾液反覆進行三次離心分離，收集液體並去除管中的殘渣。
6.如權利要求I所述水蛭素的提取方法，其特徵是在第五步中所述透析膜呈帶狀，徑長大於30mm,這樣才能一次性透析完全。
全文摘要
本發明涉及一種水蛭素的提取方法，先將水蛭洗淨、冰凍、整體搗碎並磨成泥漿狀，再加熱到60-80℃，並維持2-3分鐘，再調整pH值在4-4.4，隨即冷卻至25-30℃,再加入質量百分比濃度為10﹪的NaCO3，調整pH值6-7，然後加入純淨水先後淨提3次，淨集全部浸提液，再用管式離心機進行離心分離，再將母液用透析膜透析36h，每12h更換一次透析膜；然後用冷凍乾燥法製得水蛭素粗品；最後經冷凍乾燥製得水蛭素精品。具有工藝合理、操作方便實用、水蛭素成品的質量穩定性好和收率高的特點。經本發明處理所得水蛭素的收率達到99%以上。
文檔編號C07K14/815GK102603890SQ20121007978
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月23日 優先權日2012年3月23日
發明者胡立平 申請人:韶關市頤林泉生物科技有限公司