殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊製備方法

2023-05-29 08:16:41

殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊製備方法,它是由下列重量組份的原料製成：油酸：4－6份，司盤-80：4－6份，吐溫-80：8－12份，1,2-丙二醇：4－6份，2％海藻酸鈉溶液：78－82份，1.5％氯化鈣溶液：148－152份，1.5％殼聚糖溶液中：98－102份。其製備方法的步驟是：（1）按比例將油酸、司盤-80、吐溫-80、丙二醇依次混勻，然後加入2％海藻酸鈉溶液，應用乳化器以800 r/min攪拌速度乳化3－5min，製成乳膠。（2）將膠乳加入1.5％氯化鈣溶液中，製成80～60μm微小乳膠顆粒；（3）取凝粒加入1.5％殼聚糖溶液中，發生聚電解質絡合反應，經過3－4小時聚合反應後，形成殼聚糖-海藻酸鈉微囊。
【專利說明】殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊製備方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊製備方法，屬於中草藥製劑【技術領域】。

【背景技術】
[0002]微囊載藥技術是目前醫藥界重點研發的高新技術之一。微囊是應用高分子成膜材料，將固態或液態藥物包裹成大小為I?100ym的微小囊膜粒子。微囊作為藥物的一種優良的載藥系統，不僅具有緩釋、控釋和靶向釋藥的特性，而且還可以改變藥物的給藥途徑，提高藥物穩定性，增加藥物的吸收，提高藥物的生物利用度，降低藥物的毒副作用，保護藥物免受環境因素的影響，其應用前景較為廣闊。
[0003]殼聚糖和海藻酸鈉是天然的高分子多糖，生物相容性好，具有良好的成膜性，是目前製備載藥微囊最為理想的高分子可降解材料。目前，微囊製備方法主要有噴霧法和乳化法兩類。噴霧法需要特殊的生產設備，乳化法需要使用化學交聯劑或有機溶劑。這些方法不僅生產工藝複雜，生產量較低，反應條件激烈，而且使用的化學試劑還存在一定的毒性，汙染環境，並影響包載藥物的穩定性，因此，現有微囊製備技術嚴重製約了微囊藥物的產業化進程。研究創新微囊生產工藝，是近年來醫藥領域新興的研究課題。


【發明內容】

[0004]本發明的目的是提供一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊製備方法，本方法不需要特殊的儀器設備，生產成本低，工藝簡單，易於實現產業化。
[0005]本發明解決其技術問題所採用的技術方案是:它是由下列重量組份的原料製成: 油酸:4 —6份，司盤-80: 4 —6份，吐溫-80:8 —12份，1，2-丙二醇:4 —6份，2%
海藻酸鈉溶液:78 - 82份，1.5%氯化鈣溶液:148 — 152份，1.5%殼聚糖溶液中:98 — 102份。
[0006]其製備方法的步驟是:
(I)按比例將油酸、司盤-80、吐溫-80、丙二醇依次混勻，然後加入2 %海藻酸鈉溶液，在20 — 25°C室溫環境，應用乳化器以800 r/min攪拌速度乳化3 — 5min，製成乳膠。
[0007](2)將膠乳加入1.5%氯化鈣溶液中，在20 - 25°C室溫環境，應用乳化器以10000r/min速度攪拌3 — 5min,製成80?60 μ m微小乳膠顆粒；在20 — 25°C室溫環境靜置條件下，經海藻酸鈉分子鏈中古羅糖醛酸片段的5-C00-和2-0H與I個鈣離子通過4個配位鍵螯合反應20 - 24小時，形成具有2個六元環結構的穩定螯合物顆粒。
[0008](3)取凝粒加入1.5%殼聚糖溶液中，在20 - 25°C室溫環境靜置條件下，海藻酸鈉分子鏈上游離的羧基與殼聚糖分子上游離的氨基通過靜電作用，發生聚電解質絡合反應，形成殼聚糖-海藻酸鈉聚電解質複合膜。經過3 — 4小時聚合反應後，形成殼聚糖-海藻酸鈉微囊。微囊液經2000r/min離心1min,用蒸懼水洗漆,然後經2000r/min離心1min,收集微囊，經乾燥器55°C乾燥12小時後即得微囊成品。
[0009]本發明的有益效果是:本發明採用把丙二醇作為輔助乳化劑組分加入到油酸、司盤-80、吐溫_80、2%海藻酸鈉溶液組成的體系中，製成穩定的乳膠，然後把該膠乳依次加入到氯化鈣溶液和殼聚糖溶液中，經攪拌和交聯後，乾燥製成載藥微囊。本發明的載藥微囊製備方法不需要特殊的儀器設備，生產工藝簡單，而且還不需要使用化學交聯劑或有機溶齊U，減少了環境汙染。利用微囊包載藥物後，能夠提高藥物的生物利用度，延長藥物的療效，增強藥物的穩定性。

【具體實施方式】
[0010]本發明殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊，它是由下列重量組份的原料製成:
油酸:4 — 6份，司盤-80: 4-6份，吐溫-80:8 — 12份，
I, 2-丙二醇:4 一 6份，2%海藻酸鈉溶液78 - 82份，
1.5%氯化鈣溶液:148 - 152份，1.5%殼聚糖溶液中:98 — 102份。
[0011]實施例1
一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊，由下列重量份的原料製成:油酸:6份，司盤-80:4份，吐溫-80:10份，1，2_丙二醇:4份，2%海藻酸鈉溶液82份，1.5%氯化鈣溶液:152份，1.5%殼聚糖溶液中:98份。
[0012]實施例2
所述的一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊，由下列重量份的原料製成:油酸:5份，司盤-80: 6份，吐溫-80: 12份，1,2-丙二醇:6份，2%海藻酸鈉溶液78份，1.5%氯化鈣溶液:150份，1.5%殼聚糖溶液中:100份。
[0013]實施例3
所述的一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊，由下列重量份的原料製成:油酸:6份，司盤-80: 5份，吐溫-80:8份，1,2-丙二醇:5份，2%海藻酸鈉溶液80份，1.5%氯化鈣溶液:148，1.5%殼聚糖溶液中:102份。
[0014]實施例4
上述實施例1-3殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊的製備方法，其製備步驟是:(I)按重量組分比例將油酸、司盤-80、吐溫-80、丙二醇依次混勻，然後加入2%海藻酸鈉溶液，在20 -25°C室溫環境，應用乳化器以800 r/min攪拌速度乳化3 — 5min，製成乳膠。
[0015](2)將膠乳加入1.5%氯化鈣溶液中，在20 - 25°C室溫環境，應用乳化器以10000r/min速度攪拌3 — 5min,製成80?60 μ m微小乳膠顆粒；在20 — 25°C室溫環境靜置條件下，經海藻酸鈉分子鏈中古羅糖醛酸片段的5-C00-和2-0H與I個鈣離子通過4個配位鍵螯合反應20 - 24小時，形成具有2個六元環結構的穩定螯合物顆粒。
[0016](3)取凝粒加入1.5%殼聚糖溶液中，在20 - 25°C室溫環境靜置條件下，海藻酸鈉分子鏈上游離的羧基與殼聚糖分子上游離的氨基通過靜電作用，發生聚電解質絡合反應，形成殼聚糖-海藻酸鈉聚電解質複合膜。經過3 — 4小時聚合反應後，形成殼聚糖-海藻酸鈉微囊。微囊液經2000r/min離心1min,用蒸懼水洗漆,然後經2000r/min離心1min,收集微囊，經乾燥器55°C乾燥12小時後即得微囊成品。
[0017]本發明殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊以加入牛血清白蛋白為模型藥物，對其體外釋藥特性進行了實驗: (I)取油酸5mL、司盤-80 5mL、吐溫-80 10mL、丙二醇5mL，依次混合均勻，然後加入2%海藻酸鈉溶液(含2%牛血清白蛋白)80mL，室溫條件下以800 r/min攪拌速度乳化3 —5min，製成油包水型膠乳。
[0018](2)取膠乳加入1.5%氯化鈣溶液中，室溫環境10000r/min攪拌3 — 5min，製成凝膠微粒，螯合反應20 - 24小時。
[0019](3)取凝膠微粒沉澱加入1.5%殼聚糖溶液中(pH5.0),交聯成膜3 — 4小時，然後經2000r/min離心1min,用蒸懼水洗漆,收集微囊,經55°C乾燥，即得微囊成品。
[0020]為進一步驗證本發明的具體應用效果，在加入牛血清白蛋白為模型藥物制出的微囊檢測其理化指標為:
1、物理性狀
本發明的殼聚糖-海藻酸鈉微囊為表面光整的圓形微囊，平均粒徑為60±12 μ m，微囊無粘連，分散度、均勻度良好。
[0021]2、載藥含量測定
(I)蛋白含量測定
應用BCA方法測定蛋白含量。用PBS溶解適量的蛋白標準品，使蛋白溶液終濃度為
0.5mg/mL。取配製的蛋白標準品溶液O、1、2、4、8、12、16、20 μ L，分別加入96孔微量板孔中，然後再補加PBS溶液，使各標準品孔中的液量均為20 μ L。取待測樣品適當稀釋，每樣品孔加樣品20 μ L。然後各孔加入雙縮脲試劑200μ L，37°C放置15 — 30min，用酶標儀測定562nm波長下的吸收值，根據標準曲線計算蛋白濃度。結果蛋白濃度在I 一 8Pg/mL範圍內，吸收度與濃度呈良好的線性關係，以吸光值A值對濃度C值進行回歸，得回歸方程C =18.0904 A + 0.2406，r = 0.9998。
[0022](2)微球載藥量和包封率測定
取製備BSA-殼聚糖-海藻酸鈉微囊液，應用BCA蛋白含量測定法，測定微囊液中游離的白蛋白濃度，計算游離白蛋白含量，進而計算微囊中包含的白蛋白含量，試驗重複5次。包封率(％)=(白蛋白投藥量一乳液游離白蛋白量)/白蛋白投藥量X100%。結果測得微囊載藥量為81.32±5μ g/mg，包封率為63% ±2.8%。
[0023](3)體外釋放實驗
取BSA-殼聚糖-海藻酸鈉微囊適量，加入PBS (pH7.4)中，室溫環境靜置，間隔一定時間吸取上清液4ml，重新加入4ml PBS(pH7.4)，以BCA法測定562nm波長下的吸光值，計算藥物累積釋放百分率，試驗重複5次。結果測得24h的蛋白釋放率為71% ±2.8%。
[0024]本發明的殼聚糖-海藻酸鈉微囊是應用乳化凝膠法製備的一種載藥微囊。由於藥物被包裹在可生物降解的微囊中，能夠緩慢釋放藥物的有效成分，延緩藥物的吸收，維持機體長時間的有效血藥濃度，可顯著延長藥劑療效。
[0025]由於微囊能夠緩慢釋放藥物的有效成分，所以能降低用藥成本，減少用藥次數，並為臨床用藥帶來許多方便。因此，應用本發明的殼聚糖-海藻酸鈉微囊作為載藥系統，製備的緩釋藥劑還具有良好的治療效果，而且使用方便，用藥次數少，節省人力和物力。本發明的殼聚糖-海藻酸鈉微囊藥劑是目前臨床治療畜禽疾病的較為理想的一種新型製劑。
【權利要求】
1.一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊，其特徵是:它是由下列重量組份的原料製成: 油酸:4 — 6份，司盤-80: 4-6份，吐溫-80:8 — 12份， I,2-丙二醇:4 一 6份，2%海藻酸鈉溶液78 - 82份， 1.5%氯化鈣溶液:148 - 152份，1.5%殼聚糖溶液中:98 — 102份。
2.根據權利要求1所述的一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊，其特徵是:由下列重量份的原料製成: 油酸:6份，司盤-80: 4份，吐溫-80:10份，1，2_丙二醇:4份，2%海藻酸鈉溶液82份，1.5%氯化鈣溶液:152份，1.5%殼聚糖溶液中:98份。
3.根據權利要求1所述的一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊，其特徵是:由下列重量份的原料製成: 油酸:5份，司盤-80: 6份，吐溫-80: 12份，1，2-丙二醇:6份，2%海藻酸鈉溶液78份，1.5%氯化鈣溶液:150份，1.5%殼聚糖溶液中:100份。
4.根據權利要求1所述的一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊，其特徵是:由下列重量份的原料製成: 油酸:6份，司盤-80: 5份，吐溫-80:8份，1，2_丙二醇:5份，2%海藻酸鈉溶液80份，1.5%氯化鈣溶液:148，1.5%殼聚糖溶液中:102份。
5.根據權利要求1、2、3、4所述的任意一種殼聚糖-海藻酸鈉載藥微囊的製備方法，其特徵是:其製備步驟是: (1)按重量組分比例將油酸、司盤-80、吐溫-80、丙二醇依次混勻，然後加入2%海藻酸鈉溶液，在20 - 25 °C室溫環境，應用乳化器以800 r/min攪拌速度乳化3 — 5min，製成乳膠； (2)將膠乳加入1.5%氯化鈣溶液中，在20 - 25°C室溫環境，應用乳化器以10000r/min速度攪拌3 - 5min，製成80?60 μ m微小乳膠顆粒；在20 — 25°C室溫環境靜置條件下，經海藻酸鈉分子鏈中古羅糖醛酸片段的5-C00-和2-0H與I個鈣離子通過4個配位鍵螯合反應20 — 24小時，形成具有2個六元環結構的穩定螯合物顆粒； (3)取凝粒加入1.5%殼聚糖溶液中，在20 - 25°C室溫環境靜置條件下，海藻酸鈉分子鏈上游離的羧基與殼聚糖分子上游離的氨基通過靜電作用，發生聚電解質絡合反應，形成殼聚糖-海藻酸鈉聚電解質複合膜；經過3 - 4小時聚合反應後，形成殼聚糖-海藻酸鈉微囊；微囊液經2000r/min離心1min,用蒸懼水洗漆,然後經2000r/min離心1min,收集微囊，經乾燥器55°C乾燥12小時後即得微囊成品。
【文檔編號】A61K9/50GK104434879SQ201410650189
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月17日 優先權日:2014年11月17日
【發明者】史同瑞, 王巖, 張代玉, 劉宇, 王爽, 高峰, 楊淑萍, 蘇永福, 陳亮, 王麗坤, 張鵬宇, 王剛 申請人:黑龍江省獸醫科學研究所