豆腐果苷類似物及其製備抗老年痴呆症藥物的用途的製作方法

2023-06-14 06:39:21

專利名稱：豆腐果苷類似物及其製備抗老年痴呆症藥物的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物化學領域，尤其涉及豆腐果苷類似物及其製備抗老年痴呆藥物的用途。
背景技術：
隨著全世界人口的老齡化，阿爾茨海默病(俗稱老年痴呆，Alzhemer′s disease，AD)成為威脅老人晚年生活的主要疾病之一。AD是一種不可逆轉的大腦進行性退變疾病。臨床表現為記憶力減退伴有其他認識功能損害的獲得性智能減退，致使晚期患者喪失綜合視、聽、觸、嗅等信息的能力，導致患者不能獨立生活。AD的發病機制複雜，病因學尚未完全清楚，至今沒有好的根治或逆轉病程的藥物。目前，對於AD的病因主要有以下三種說法其一，大腦皮層及其它腦區神經上出現β-澱粉樣蛋白(βAP)沉積和神經纖維纏結(NFT)。βAP在AD的神經元損害中起了重要作用。βAP沉積作用於神經細胞膜引起的細胞損害甚至死亡。其二，AD的發生與衰老引起的生理、生化改變有密切的關係。鈣平衡失調、自由基增多等都可導致神經元的損害。其三，AD與中樞神經遞質如乙醯膽鹼、5-羥色胺、興奮性胺基酸等異常有關。大量的研究證實，AD病人學習和記憶能力的喪失與乙醯膽鹼能神經功能的下降有直接關係。膽鹼能假說為AD的治療提供了理論依據，乙醯膽鹼酯酶抑制劑成為目前治療AD最有效的手段。
乙醯膽鹼酯酶抑制劑如它克林，毒扁豆鹼，加蘭他敏，齊多哌啶，石杉鹼甲能夠增強AD病人的認知能力，但是多數藥物因其具有中樞或外周系統副作用而使其廣泛應用受到限制。因此對老年痴呆疾病仍需繼續研究尋找一類新型化合物，開發新一代毒副作用低、療效高的乙醯膽鹼酯酶抑制劑。
豆腐果苷(Helicid)，屬芳香酚苷，化學名為對苯甲醛-O-β-D-阿洛吡喃糖苷，由對羥基苯甲醛和葡萄糖兩部分構成。是山龍眼科植物蘿蔔樹(Helicid Hilgirica Beed)的果實中的有效成分。豆腐果苷是化學結構與天麻素有相似的單體糖苷。經藥理和臨床研究證明，豆腐果苷對中樞神經系統作用與天麻素相似，但其鎮靜、安眠、止痛的作用較天麻素強，對神經官能症引起的頭痛、頭昏、睡眠障礙的治療作用顯效快，一般用藥3～7天顯效。目前豆腐果苷已作為OTC藥物應用於國內臨床。國內外尚未見豆腐果苷行為致畸效應及其他毒副作用的報導。
豆腐果苷是一種較好的鎮靜、止痛藥，具有天然資源豐富、價格低廉、無毒、無明顯副作用等特點。豆腐果苷的研究，主要集中在80年代，近幾年研究較少，且均停留在對已有功能的進一步研究如毒性研究，神經性頭痛的臨床觀察，穩定性研究等。近期有文獻報導豆腐果苷本身具有新的抗抑鬱活性，與金絲桃甙相近。但目前國內外還沒有針對豆腐果苷進行結構修飾，系統研究其類似物的構效關係的研究報導。

發明內容
本發明的目的之一是提供一類新的具有對乙醯膽鹼酯酶高選擇性抑制作用的豆腐果苷類似物。
解決上述目的的技術方案是式I所示的豆腐果苷類似物
其中，式I中的Ra表示為Ra＝O或NNHCSNH2或NNHCONH2或NOH或NOCH3或NHCSNH2或NHCONH2，Rb表示為全保護或部分保護或未保護的五碳糖、六碳糖、二糖中的一種。
優選地，所述豆腐果苷類似物為式II所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基；或R1和R2為異丙叉基，R3，R4為H；或R1，R2為H，R3和R4為苄叉基；或R4為三苯甲基或磷酸酯或對甲基苯磺酸酯，R1，R2，R3為H；或R4為H，R1，R2，R3為乙醯基或新戊醯基或苯甲醯基或苄基或烯丙基。
優選地，所述豆腐果苷類似物為式III所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基；但不包括R1，R2，R3，R4均為H或均為乙醯基時，Ra為氧的已知化合物。
更優選地，R1，R2，R3，R4均為H，Ra為NOCH3，其結構式如下
優選地，所述豆腐果苷類似物為式IV所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基；但不包括R1，R2，R3，R4均為H或乙醯基時，Ra為氧的已知化合物。
優選地，所述豆腐果苷類似物為式VI所示 R1，R2，R3自獨立地是H，或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基。
優選地，所述豆腐果苷類似物為式VII所示
R1，R2，R3自獨立地是H；或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基。
更優選地，R1，R2，R3或各自獨立地是H，Ra為O，結構式為 優選地，所述豆腐果苷類似物為式VIII所示 其中R1，R2，R4，R6，R7，R8，R9各自獨立地是H，或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基。
本發明的另一目的是提供一種用於治療老年痴呆症的藥物組合物。
一種用於治療老年痴呆症的藥物組合物，它含有上述的豆腐果苷類似物作為有效成分以及藥學上可接受的輔助劑。
本發明的另一目的是提供上述豆腐果苷類似物在在製備抗老年痴呆症藥物中的應用。
採用現有文獻報導的活性測試方法[見Ellman等「A New and Rapid ColorimetricDetermination of Acetylcholineterase Activity」，Biochem.Pharm.1，88，(1961)]。對式I所示豆腐果苷類似物作為乙醯膽鹼抑制劑的活性進行測試，通過乙醯膽鹼酯酶和丁醯膽鹼酯酶抑制體外測試表明，豆腐果苷本身抗乙醯膽鹼作用很弱，然而式I所示豆腐果苷類似物具有顯著的抗乙醯膽鹼活性，其乙醯膽鹼酯酶IC50均優於對照物加蘭他敏(IC50＝0.55μM)；同時對丁醯膽鹼酯酶抑制作用非常弱因而表現出很好的選擇性。因此式I所示的豆腐果苷類似物可用於製備治療老年痴呆症的藥物。
因此，本發明提供了如式I所示豆腐果苷類似物製備抗老年痴呆症藥物的用途。
本發明提供的新的豆腐果苷類似物及其製備抗老年痴呆症藥物的用途填補了現有技術的空白，為開發新一代毒副作用低、療效高的治療老年痴呆症的藥物開拓了新的思路。


下面結合附圖和實施例對本實用新型作進一步闡述。
圖1是部分化合物(8d和9bd)乙醯膽鹼酯酶抑制曲線示意圖；圖2是化合物8d和9bd.的乙醯膽鹼酯酶抑制動力學雙倒數圖，其中a代表化合物8d；b代表化合物9bd。
具體實施例方式
本發明中的豆腐果苷類似物，部分是由天然豆腐果苷經過化學修飾(即對醛基和糖上羥基進行改造，例如在醛基上引入含氮的基團而得到的；部分是由對羥基苯甲醛為起始原料合成得到。
本發明的豆腐果苷類似物的製備如以下反應式1-2所示反應式1
2a R1，R2，R3，R4＝Ac 3a R1，R2，R3，R4＝H R5＝NHCSNH22b R1，R2，R3，R4＝Bz 3b R1，R2，R3，R4＝H，R5＝NHCONH22c R1，R2，R3，R4＝Bn 3c R1，R2，R3，R4＝H，R5＝OH2d R1，R2＝C(CH3)2；R3，R4＝H 3d R1，R2，R3，R4＝H，R5＝OCH32e R1，R2＝H；R3，R4＝PhCH3ab R1，R2，R3，R4＝Ac，R5＝NHCONH22f R4＝PO(OCH3)2；R1，R2，R3＝H3ac R1，R2，R3，R4＝Ac，R5＝OH2g R4＝C(Ph)3；R1，R2，R3＝H 3ad R1，R2，R3，R4＝Ac，R5＝OCH32h R4＝H；R1，R2，R3＝Ac 3ba R1，R2，R3，R4＝Bz，R5＝NHCSNH23bb R1，R2，R3，R4＝Bz，R5＝NHCONH23bc R1，R2，R3，R4＝Bz，R5＝OH3bd R1，R2，R3，R4＝Bz，R5＝OCH33da R1，R2＝(CH3)2C，R3，R4＝H，R5＝NHCSNH23db R1，R2＝(CH3)2C，R3，R4＝H，R5＝NHCONH23dc R1，R2＝(CH3)2C，R3，R4＝H，R5＝OH3dd R1，R2＝(CH3)2C，R3，R4＝H，R5＝OCH3反應式2
其中R5＝NHCSNH2或NHCONH2或OH或OCH3。
以下通過具體實施例對本發明作進一步說明。
實施例12，3，4，6-O-四乙醯基豆腐果苷(2a)合成先將1.0g豆腐果苷(1，3.5mmol)、無水吡啶2mL加入到圓底燒瓶中，攪拌至完全溶解後，滴加2.5g乙酸酐(25mmol)，室溫反應12h。倒入50ml冰水攪拌半小時後，分層萃取氯仿層。冰水洗滌數次後，無水硫酸鎂乾燥，旋轉蒸乾溶劑，得到淡黃色糖漿狀物質，95％乙醇重結晶得白色固體粉末2a，產率56.1％。熔點135-136℃。產物結構經IR，NMR，MS和元素分析數據確定。
Anal.Calcd for C21H24O11C55.75，H5.35；foundC55.79，H5.26；IR(KBr，cm-1)υ1752(C-O)，1693(CHO)，1601(Ph)，1506(Ph)，1224(C-O)，1157(C-O-C)，1127(C-O-C)，1085(C-O-C)，914(糖基)，876(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.91(s，1H，CHO)，7.85(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.13(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，5.75(t，1H，J＝2.9Hz，H-3』)，5.48(d，1H，J＝8.1Hz，H-1』)，5.19(dd，1H，J＝3.0Hz，8.1Hz，H-2』)，5.16(dd，1H，J＝2.8Hz，9.9Hz，H-4』)，4.27-4.32(m，1H，H-5』)，4.24-4.26(m，2H，H-6』)，2.04，2.05，2.08，2.18(4×s，4×3H，4×CH3CO)；ACPI-MSm/z469.9(M+NH4+，100).
實施例22，3，4，6-O-四苯甲醯基豆腐果苷(2b)合成先將1.0g豆腐果苷(1，3.5mmol)溶於20mL氯仿中。室溫攪拌下，依次加入3.5g苯甲醯氯(25mmol)，無水吡啶4mL。後室溫反應24h。加入10mL甲醇終止反應，攪拌10分鐘後，旋轉蒸乾溶劑得油狀物。加入氯仿稀釋，分別用稀鹽酸，飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，冰水洗滌。減壓濃縮後，經矽膠柱層析分離得白色固體粉末2b，產率為47.7％。熔點182.9-183.2℃。產物結構經IR，NMR，MS和元素分析數據確定。
Anal.Calcd for C41H32O11C70.28，H4.60，foundC70.37，H4.49；IR(KBr，cm-1)υ1752(C-O)，1690(CHO)，1601(Ph)，1508(Ph)，1451，1266(C-O)，1157(C-O-C)，1108(C-O-C)，1025(糖基)，832(Ph)，710，619(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ ppm9.86(s，1H，CHO)，7.90-8.04，7.29-7.65(m，20H，ArH)，7.72(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，7.16(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，6.32(t，1H，J＝3.0Hz，H-3』)，5.82(d，1H，J＝7.8Hz，H-1』)，5.69(dd，1H，J＝3.1Hz，7.8Hz，H-2』)，5.61(dd，1H，J＝9.7Hz，2.8Hz，H-4』)，4.71-4.78(m，2H，H-6』，H-5』)，4.50(dd，1H，H-6』)；ACPI-MSm/z 700.9(M+H，3)，717.9(M+NH4+，100)實施例32，3，4，6-O-四苄基豆腐果苷(2c)合成將3.5mmol豆腐果苷(1)，四丁基溴化銨0.43g(1.33mmol)，粉末狀氫氧化鉀7.0g(30mmol)，加入到盛有10mL二氯甲烷的50mL圓底燒瓶中攪拌10分鐘後，緩慢滴加含苄溴2.4ml的二氯甲烷5mL，室溫下攪拌反應5h。後將反應物倒入50ml冰水中，萃取分離有機相，水洗數次後，加入無水硫酸鎂乾燥，減壓蒸乾溶劑得淺黃色糖漿。再用矽膠柱層析分離得無色透明糖漿物，產率56.2％。
IR(KBr，cm-1)υ1693(CHO)，1601(Ph)，1505(Ph)，，1308(C-O)，1245(C-O-C)，1161(C-O-C)，1094(糖基)，832(Ph)，737，698(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.86(s，1H，CHO)，7.29-7.65，7.90-8.04(m，20H，ArH)，7.72(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.16(d，2H，J＝8.6 Hz，ArH)，6.32(t，1H，J＝3.7Hz，H-3』)，5.88(d，1H，J＝7.8Hz，H-1』)，5.70(dd，1H，J＝3.5Hz，8.8Hz，H-2』)，4.47-4.53(m，1H，H-6』)，4.71-4.78(m，2H，H-6』，H-5』)，5.59-5.63(dd，1H，J＝8.7Hz，12.6Hz，H-4』)；ACPI-MSm/z 764.1(M+NH4+，100).
實施例42，3-O-異丙叉基豆腐果苷(2d)合成取0.3g碘溶解於50mL乾燥丙酮中，待溶解完全後加入1.0g豆腐果苷(1，3.5mmol)，室溫攪拌反應4h。溶液變透明澄清，加入稀硫代硫酸鈉溶液除去多餘的碘，最後得到無色透明溶液。用二氯甲烷萃取，水洗數次後，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾溶劑得淺黃色固體。再用矽膠柱層析分離得白色固體粉末2d，產率為70.3％，mp.153-154℃。產物結構經IR，NMR(1H，13C，COSY)，MS和元素分析數據確定。
Anal.Calcd for C16H20O7C59.25，H6.22，foundC59.13，H6.26；IR(KBr，cm-1)υ3456(O-H)，1752(C-O)，1683(CHO)，1602(Ph)，1509(Ph)，1387(CH3)，1254(C-O)，1216(C-O-C)，1141(C-O-C)，1098(C-O-C)，967(糖基)，836(Ph)；1H NMR(CDCl3，500MHz)δppm9.90(s，1H，CHO)，7.85(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.11(d，J＝8.6 Hz，2H，ArH)，5.53(d，1H，J＝9.6 Hz，H-1』)，4.70(dd，1H，J＝2.9Hz，6.8Hz，H-3』)，4.47(dd，1H，J＝6.7，3.0Hz，H-2』)，4.16(dd，1H，J＝5.9Hz，9.6Hz，H-4』)，3.88-3.92(m，1H，H-5』)，3.80-3.85，(dd，1H，J＝8.4 Hz，11.8Hz，H-6』)，3.69-3.75(dd，1H，J＝7.1Hz，11.8Hz，H-6』)，1.45(s，3H，-C-CH3)，1.58(s，3H，-C-CH3)；13C NMR(CDCl3，125MHz)δppm190.12，161.09，131.99，131.22，116.22，110.84，96.40，75.33，73.62，73.47，65.24，62.97，26.69，24.89；ESI-MSm/z 323(M-1，100).
實施例54，6-O-苄叉基豆腐果苷(2e)合成取豆腐果苷1.0g(3.3mmol)，苯甲醛二甲縮醛0.5mL(3.5mmol)，無水N，N-二甲基甲醯胺(DMF)15mL，對甲基苯磺酸10mg，50℃攪拌反應過夜。後將反應液倒入100mL冰水中得到白色沉澱。過濾，抽乾，石油醚洗滌後得白色固體粉末0.9g，產率70％。mp.175.8℃。產物結構經IR，1HNMR，FAB-MS和元素分析數據確定。
Anal.Calcd for C20H20O7C 64.51，H 5.41，foundC 64.69，H 5.29；IR(KBr，cm-1)υ3443(O-H)，1690(CHO)，1603(Ph)，1410(Ph)，1249(C-O)，1216(C-O-C)，1076(C-O-C)，1017(C-O-C)，836，617；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm9.88(s，1H，CHO)，7.86(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，7.44-7.46(m，2H，ArH)，7.35-7.38(m，3H，ArH)，7.24(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，5.62(s，1H，CH)，5.37，5.40(d，1H，J＝7.9Hz，H-1』)，5.32-5.33(m，1H，H-2』)，4.24-4.28(m，1H，H-3』)，4.10-4.14(m，2H，H-5』，H-4』)，3.62-3.71(m，2H，H-6』)；FAB-MSm/z 373(M+1).
實施例66-O-磷酸二甲酯基豆腐果苷(2f)合成稱取3mmol(2d)溶於10mL氯仿中，後加入3mmol三乙胺，冰浴下攪拌30min，逐滴加入3mmol三氯氧磷，冰浴下繼續反應2h，後過濾除沉澱，濾液減壓濃縮後，加入丙酮10mL，水4mL，碳酸氫鈉0.8g，室溫攪拌5h，再次減壓濃縮，加入氯仿萃取，無水硫酸鎂乾燥，減壓蒸乾溶劑得橙紅色固體，經矽膠柱層析得淺黃色固體，產率83.3％。熔點180-181℃。
IR(KBr，cm-1)υ3315(OH)，1169(CHO)，1604(Ph)，1508(Ph)，1300(OCH3)，1254(C-O)，1216(C-O-C)，1170(C-O-C)，1068(C-O-C)，1010(糖基)，860(Ph)；1H NMR；(d6-DMSO，500MHz)δppm9.88(s，1H，CHO)，7.86(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，7.25(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，5.73(s，0.5H，OH)，5.71(s，0.5H，OH)，5.53(s，0.5H，OH)，5.50(s，0.5H，OH)，5.38(d，1H，J＝8.0Hz，H-1』)，4.42-4.46(m，3H，H-3』，H-4』，H-5』)，4.12-4.14(m，2H，H-6』)，3.76(s，3H，OCH3)，3.72(s，3H，OCH3)，3.62-3.67(m，1H，H-2』)；13C NMR(d6-DMSO，125MHz)δppm55.10，55.17，63.21，67.52，68.93，69.38，76.25，97.97，116.38，130.80，131.58，161.67，191.44；31P NMR(1∶10 H3PO4水溶液作外標)δ2.38ppm；ESI-MSm/z 393(M+1，25)。
實施例72，3，4-O-三乙醯基豆腐果苷(2h)合成I.稱取0.01mol豆腐果苷溶於20mL無水吡啶中，氮氣保護下室溫攪拌10min後，加入0.015mol三苯甲基氯，繼續室溫反應20h。TLC跟蹤至反應完全。後倒入冰水中，氯仿萃取，分離有機相，用1M鹽酸、水洗數次後，無水硫酸鎂乾燥，減壓旋轉蒸乾溶劑，得到棕黃色糖漿狀物質，後經矽膠柱層析分離得白色固體粉末(2g)3.54g，產率67.5％，mp 148-149℃。
IR(KBr，cm-1)υ3405(O-H)，2914，1691(CHO)，1590(Ph)，1424(Ph)，1241(C-O)，1066(C-O-C)，708(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.78(s，1H，CHO)，7.72(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)，7.30-7.38(m，5H，ArH)，7.05-7.20(m，12H，ArH)，5.26(d，1H，J＝7.9Hz，H-1』)，4.18(s，1H，CH)，3.85-3.88(m，1H，CH)，3.68(d，1H，J＝5.6Hz，CH)，3.55-3.58(m，1H，CH)；3.32-3.37(m，2H，2×CH)；3.08(s，1H，-OH)；2.92(s，2H，2×-OH)；FAB-MSm/z 525(M+1)，547(M+Na).
II.取5mmol 2g溶於5mL乙酸酐中，後加入1mL吡啶，室溫攪拌12h，TLC跟蹤至反應完全。後倒入50mL冰水中，用氯仿萃取，分離有機相。水洗數次後，無水硫酸鎂乾燥，減壓旋幹溶劑，得到淡黃色糖漿狀物。未經純化直接下步反應。
III.將II中得到的產物直接溶於20mL無水甲醇中，完全溶解後，加入碘300mg，室溫攪拌反應2h，TLC跟蹤反應基本完全。加入稀硫代硫酸鈉溶液除去多餘的碘，得到無色透明溶液。用氯仿萃取，水洗，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾溶劑得黃色糖漿。後經矽膠柱層析分離得淺黃色糖漿(2h)，1.20g，產率58.8％，熔點140-141℃。
IR(KBr，cm-1)υ3471(O-H)，2947，1757(CHO)，1590(Ph)，1391(Ph)，1232(C-O)，1066(C-O-C)，841，625(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.83(s，1H，CHO)，7.76(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.05(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，5.64(s，1H，CH)，5.37(d，1H，J＝8.1Hz，H-1』)，5.00(dd，1H，J＝5.5Hz，8.3Hz，CH)，4.32-4.36(m，1H，CH)，4.14-4.17(m，1H，CH)，4.02-4.05(m，1H，CH)；3.80(dd，1H，J＝7.0Hz，9.6 Hz，CH)，2.09，2.06，2.04(3×s，3×3H，3×CH3CO)；FAB-MSm/z 411(M+1).
實施例81-(4-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃阿洛糖基)苯亞甲基)硫代氨基脲(3aa)取2a(0.45g，1mmol)溶解於15mL乙醇中，另稱取氨基硫脲(0.09g，1mmol)加入到上述溶液中。回流攪拌反應3小時後，過濾，濾液經減壓濃縮後得到固體。乙醚洗滌，95％乙醇重結晶，乾燥得純品3aa。白色固體粉末，產率95.0％，熔點135.6-136.3℃.
Anal.calcd C50.28，H5.18，N8.00；FoundC49.95，H4.910，N7.749；IR(KBr，cm-1)υ3452，3301，1753，1579，503，1409，1226，1092，1046，714；1H-NMR(CDCl3，300MHz)δppm10.04(s，1H，NH)，7.89(s，1H，-CH＝N-)，7.61(d，2H，J＝8.7Hz，Ar-H)，7.19(s，1H，NH)，7.04(d，2H，J＝8.7Hz，Ar-H)，6.49(s，1H，NH)，5.75(t，1H，J＝3.0Hz，CH)，5.42(d，1H，J＝8.1Hz，H-1』)，5.17(dd，1H，J＝8.1Hz，3.1Hz，CH)，5.073(dd，1H，J＝9.6Hz，2.7Hz，CH)，4.28(d，1H，J＝4.2Hz，CH)，4.25(s，2H，2×CH)，2.18，2.09，2.06，2.04(4×s，4×3H，4×CH3CO)；13C NMR178.5，171.3，171.2，170.3，158.3，143.2，129.8，129.6，158.3，117.4，96.5，70.8，69.7，68.1，66.7，62.6，26.2，21.3，21.2；ESI-MSm/z 526(M+1，33.5)，548(M+Na，100).
實施例91-(4-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃阿洛糖基)苯亞甲基)氨基脲(3ab)取2a(0.45g，1mmol)溶解於15mL乙醇中，另稱取鹽酸羥胺(0.11g，1mmol)用氫氧化鈉溶液調pH＝6-7後加入到上述溶液中。回流攪拌反應6小時後，冷卻過濾，濾液經減壓濃縮後得到固體。乙醚洗滌，95％乙醇重結晶，乾燥得純品3ab。白色固體粉末，產率85.1％，熔點.m.p.211.4-211.9℃.IR(KBr，cm-1)υ3423，1716，1572，1409，1232，1093，1052；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm8.79(s，1H，N-H)，7.59(s，1H，-CH＝N)，7.58(d，2H，J＝8.7 Hz，ArH)，7.05(d，2H，J＝8.7Hz，ArH)，5.75(t，1H，J＝2.7Hz，CH)，5.42(d，1H，J＝8.4Hz，H-1′)，5.18(dd，1H，J＝2.7Hz，8.7Hz，CH)，5.08(dd，1H，J＝2.7Hz，8.3Hz，CH)，4.26-4.29(m，3H，3×CH)，2.19，2.10，2.07，2.05(4×s，12H，4×CH3-C＝O)；13C-NMR(CDCl3，75MHz)δppm171.9，171.1，169.5，159.4，154.8，141.8，129.2，128.7，117.5，97.3，71.9，69.2，67.6，66.5，63.2，21.2，21.1，21.0；ESI-MSm/z 510(M+1，77.4)，532(M+Na，100)。
實施例101-(4-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃阿洛糖基)苯亞甲基)羥胺(3ac)取2a(0.45g，1mmol)溶解於15mL乙醇中，另稱取鹽酸羥胺(0.07g，1mmol)用氫氧化鈉溶液調pH＝6-7後加入到上述溶液中。室溫攪拌2小時後，過濾，濾液經減壓濃縮後得到固體。乙醚洗滌，95％乙醇重結晶，乾燥得純品3ac。白色固體粉末，產率78.2％，熔點161.0-161.9℃.IR(KBr，cm-1)υ3454，1752，1687，1376，1224，1099，1054，952；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm8.07(s，1H，-CH＝N-)，7.50(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，6.98(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，5.27-5.31(m，2H，2×CH)，5.10-5.20(m，2H，2×CH)，4.28(dd，1H，J＝7.0Hz，12.3Hz，CH)，4.17(dd，1H，J＝10.3Hz，12.3Hz，CH)，3.86-3.91(m，1H，CH)，2.04，2.05，2.06，2.07(4×s，4×3H，4×CH3-C＝O)；ESI-MSm/z 468(M+1，5)，490(M+Na，100).
實施例111-(4-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃阿洛糖基)苯亞甲基)甲氧基胺(3ad)以甲氧基胺鹽酸鹽為原料，合成步驟同3ac。白色固體粉末，產率67.5％.熔點131.8-132.0℃.IR(KBr，cm-1)υ1748，1608，1509，1236，1046，917；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm8.0(s，1H，-CH＝N)，7.50(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，6.97(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，5.26-5.31(m，2H，2×CH)，5.09-5.19(m，2H，2×CH)，4.26(dd，1H，J＝7.0Hz，12.3Hz，CH)，4.17(dd，1H，J＝10.4Hz，12.4Hz，CH)，3.95(s，3H，OCH3)，3.85-3.91(m，1H，CH)，2.04，2.05，2.06，2.08(4×s，4×3H，4×CH3-C＝O)；ESI-MSm/z 482(M+1，6)，504(M+Na，100).
實施例12對甲醯基苯酚-2，3，4，6-O-四乙醯基-β-D-葡萄糖苷(6b)合成I取葡萄糖5g溶解於20ml吡啶中，攪拌至完全溶解後，加入乙酸酐25mL，室溫攪拌5h，後加入少量冰水攪拌10min，再用50mL氯仿稀釋。分離有機相，依次用水洗，2M硫酸，飽和碳酸鈉，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸乾溶劑得無色透明糖漿。後用95％乙醇洗滌得白色固體。
II取5g全乙醯化葡萄糖(I中產物)，溶於20mL二氯甲烷中，冰浴0℃攪拌10min後，緩慢滴加33％氫溴酸冰醋酸溶液12mL。改為室溫攪拌5h。二氯甲烷稀釋後，倒入100mL冰水中。分離有機相，依次用水洗，飽和碳酸氫鈉，飽和食鹽水洗滌，減壓蒸乾溶劑得棕黃色糖漿，石油醚和乙醚洗滌得白色固體粉末，α-溴代-2，3，4，6-四-O-乙醯基吡喃葡萄糖，熔點.87-89℃(lit.88-89℃)。
III取對羥基苯甲醛2mmol，氫氧化鈉2.1mmol，四丁基溴化銨0.2mmol，水10ml，氯仿10ml於100ml三口瓶中，50℃攪拌至完全溶解，後緩慢滴加含溴代糖2mmol的氯仿溶液25ml，繼續反應5-12h。分離有機相，稀氫氧化鈉洗滌，水洗，無水硫酸鎂乾燥，減壓蒸乾溶劑，經矽膠柱層析得到6b，白色固體，產率約50％，熔點142-143℃。
Anal.Calcd for C12H24O11C55.75，H5.35；foundC55.56，H5.48；IR(KBr，cm-1)υ2963，2746；1750；1737；1692；1601；1222；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.90(s，1H，CHO)，7.83(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.10(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，5.46-5.54(m，2H，2×CH)，5.17(d，1H，J＝8.1Hz，H-1』)，5.10-5.14(m，1H，CH)，4.09-4.25(m，3H，H-5』，H-6』)，2.19(s，3H，CH3CO)；2.06(s，2×3H，2×CH3CO)；2.02(s，3H，CH3CO)；ACPI-MSm/z 469.8(M+NH4+，100)同上述方法製備得到6a，6e.
實施例13對甲醯基苯酚-2，3，4-O-三苯甲醯基-β-D-核糖苷(6d)合成I取核糖5g溶解於20mL吡啶中，攪拌至完全溶解後，冰浴下滴加苯甲醯氯10mL，室溫攪拌24h，後加入少量冰水攪拌10min，再用氯仿100mL稀釋。分離有機相，依次用水洗，稀酸，飽和碳酸鈉水溶液，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸乾溶劑得無色透明糖漿。
II取5g保護糖(I中產物)，溶於20mL CH2Cl2中，冰浴0℃攪拌10min後，緩慢滴加33％氫溴酸的冰醋酸溶液12mL。後改為室溫攪拌10h。50mL二氯甲烷稀釋後，倒入100ml冰水中。分離有機相，依次用水洗，飽和碳酸氫鈉，飽和食鹽水洗滌，減壓蒸乾溶劑得棕黃色糖漿。後用石油醚洗滌得白色固體粉末，溴代-2，3，4，-三-O-苯甲醯基吡喃核糖，熔點120-122℃(lit.121-122℃)。
III取對羥基苯甲醛3mmol，氫氧化鈉3mmol，四丁基溴化銨1mmol，水10mL，氯仿10mL於100mL三口瓶中，50℃攪拌至完全溶解，後緩慢滴加含溴代糖2mmol的氯仿溶液25mL，繼續反應24h。分離有機相，1M氫氧化鈉溶液洗滌，水洗數次，無水硫酸鎂乾燥，減壓蒸乾溶劑，經矽膠柱層析得到6d，白色固體粉末，產率27％，熔點.129-130℃。
Calcd for C33H26O9C 69.96，H 4.63；foundC 70.03，H 4.54；IR(KBr，cm-1)υ1727(C-O)，1694(CHO)，1600(Ph)，1505(Ph)，1260(C-O)，1103(C-O-C)，1025(糖基)，859(Ph)，707(Ph)；1HNMR(CDCl3，300MHz)δppm9.83(s，1H，CHO)，7.94-7.96(m，4H，Ar-H)，7.77-7.80(m，4H，Ar-H)，7.38-7.49(m，4H，Ar-H)，7.17-7.22(m，7H，Ar-H)，5.92(t，1H，J＝3.6Hz，H-2』)，5.86(d，1H，J＝3.3Hz，H-1』)，5.63(d，1H，J＝7.4 Hz，H-3』)，5.62(d，1H，J＝6.3Hz，H-4』)，4.22(d，1H，J＝12.7Hz，H-5』)，4.09(dd，1H，J＝1.8Hz，12.7Hz，H-5』)；ACPI-MSm/z 583.9(M+NH4+，100)使用上述通法合成6c.
實施例14對甲醯基苯酚-O-β-D-核糖苷(8d)合成稱取(6d)0.57g(1mmol)溶於15ml無水甲醇中，後加入配製好的含0.2mol/L甲醇鈉的甲醇溶液15mL，室溫攪拌反應20h。後倒入50mL冰水中，用乙酸乙酯多次萃取。減壓濃縮後，經矽膠柱層析分離得8b，淺黃色固體，產率85.3％。熔點162-163℃。
IR(KBr，cm-1)υ3405；1683；1582；1415；1240；1109；1000；825；650；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm9.85(s，1H，CHO)，7.84(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.17(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，5.41(d，1H，J＝5.2Hz，H-1』)，5.22(s，1H，OH)，5.03(s，1H，OH)，3.89(s，1H，CH)，3.59-3.69(m，4H，4×CH)；13C NMR(DMSO-d6，75MHz)δppm192.46，162.48，133.04，132.61，131.45，117.43，116.80，99.09，71.04，69.05，68.58，65.05；FAB-MSm/z 255(M+1，3)，277(M+Na，15).
實施例151-(4-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯亞甲基)硫代氨基脲(9ba)白色固體粉末，產率92.6％，熔點211.5-211.8℃.IR(KBr，cm-1)υ3425，1569，1500，1412，1201，1076，956；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm11.31(s，1H，N-H)，8.10(s，1H，N-H)，7.97(s，1H，-CH＝N)，7.92(s，1H，N-H)，7.71(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.01(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，4.92(d，1H，J＝7.0Hz，H-1』)，3.69-3.69(m，1H，CH)，3.43-3.46(m，1H，CH)，3.15-3.35(m，4H，4×CH)；ESI-MSm/z 358(M+1，5)，380(M+Na，100).
實施例161-(4-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯亞甲基)氨基脲(9bb)白色固體粉末，產率92.6％，熔點206.9-207.8℃.IR(KBr，cm-1)υ3381，2917，1676，1579，1507，1457，1243，1172，1034，926，872；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm10.09(s，1H，N-H)，7.77(s，1H，-CH＝N)，7.62(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.00(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，6.42(brs，2H，N-H)，4.89(d，1H，J＝7.0 Hz，H-1』)，3.69-3.69(m，1H，CH)，3.42-3.48(m，1H，CH)，3.15-3.35(m，4H，4×CH)；ESI-MSm/z 342(M+1，3)，364(M+Na，100).
實施例171-(4-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯亞甲基)羥胺(9bc)稱取1mmol 8b溶於15mL甲醇中，另取鹽酸羥胺1.1mmol(0.08g)用氫氧化鈉水溶液中和至pH＝6-7，緩慢滴加到上述甲醇溶液中，45℃反應2h後，靜置冷卻出現淺黃色固體。抽濾，乙醇洗滌，真空乾燥，得淺黃色固體8bc，產率92.6％。熔點162-163℃。
IR(KBr，cm-1)υ3384，2913，1606，1513，1242，1082，965；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm11.02(brs，1H，-OH)，8.05(s，1H，-CH＝N)，7.50(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.02(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，4.89(d，1H，J＝7.0Hz，H-1』)，3.31-3.36(m，2H，2×CH)，3.23-3.29(m，2H，2×CH)，3.13-3.19(m，2H，2×CH)；ESI-MSm/z 300(M+1，3)，322(M+Na，100).
實施例181-(4-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯亞甲基)甲氧胺(9bd)白色固體粉末，產率92.6％，熔點102.7-103.7℃.IR(KBr，cm-1)γ3355，2930，1608，1509，1236，1046，916；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm8.14(s，1H，-CH＝N-)，7.52(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.03(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，4.91(d，1H，J＝7.3Hz，H-1』)，3.84(s，3H，OCH3)，3.68(brs，0.5H，-OH)，3.65(brs，0.5H，-OH)，3.41-3.47(m，1H，CH)，3.17-3.35(m，5H，5×CH)；ESI-MSm/z 314(M+1，8)，336(M+Na，100).
實施例19豆腐果苷及其類似物膽鹼酯酶抑制活性測試取5支1.5mL分別裝有840μL0.1MpH為8.0的磷酸鹽緩衝液離心管，依次加入0，5，10，20，40，50μL的1.0mM的樣品(豆腐果苷及其類似物)二甲基亞碸(DMSO)溶液，並用DMSO加至890μL。分別加入50μL 4mg/mL DTNB(5，5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸))和10μL乙醯膽鹼酯酶溶液，並在37℃保溫15min，立刻加入50μL 2mg/mL硫代乙醯膽鹼溶液，搖勻後測其在λ＝412mm處的吸光度(AN)。參比用0.1M pH8.0磷酸鹽緩衝液，以未加樣品所測的吸光度(ACONTROL)值作為100個活力單位相對酶活力Ar＝(AN/ACONTROL)×100
然後以酶的相對活力對抑制劑濃度作圖，根據抑制曲線求得各個化合物的IC50值(抑制酶活力50％時的抑制濃度)。
如圖1所示中8d及9bd的抑制曲線圖，由圖1可分別讀出抑制活力50％時對應的化合物抑制濃度，分別是0.20μM，0.49μM。
表一部分豆腐果苷類似物膽鹼酯酶(AChE及BuChE)抑制活性(IC50，μM).


and表示在樣品濃度為500μM範圍內未檢測到.b文獻報導IC50值0.8-0.3μM.
如表一所示，部分豆腐果苷類似物具有較強的乙醯膽鹼酯酶(AChE)抑制活性，如化合物6b，7bc，7db，7dd，8d，9bc，9bd，IC50值均小於10μM，尤其是化合物8d和9bd，IC50值小於對照藥加蘭他敏氫溴酸鹽(IC50＝0.55μM)。除苯甲醯基糖苷化合物外，其他化合物都對丁醯膽鹼酯酶(BuChE)的作用非常弱，因而具有很高的選擇性。
實施例20部分豆腐果苷類似物對乙醯膽鹼酯酶抑制動力學測試乙醯膽鹼酯酶的動力學測試方法見J.Massoulie，S.Bon，I.Silman.Progress.of BrainResearch.98(1993)139-146。取5支1.5mL分別裝有840，850，855，860，870μL磷酸鹽緩衝液的離心管，加入一定量的樣品DMSO溶液，並用DMSO加至DMSO佔總體積5％，分別加入50μL 4mg/mL DTNB和10μL乙醯膽鹼酯酶溶液，並在37℃恆溫水浴槽中保溫15分鐘，再分別加入50，40，35，30，20μL 2mg/mL硫代乙醯膽鹼溶液。用紫外分析測試儀檢測412nm處乙醯膽鹼酯酶催化水解硫代乙醯膽鹼的時間掃描曲線。曲線的斜率即為反應的初速度[V]，然後以1/[V]對1/[S]作圖，以未加樣品的為控制線，如圖2所示。
由圖2可知雙倒數所做的直線束延長後交於一點，且交點落在第二象限(8d)或第三象限內(9bd)，並不在X或Y軸上，故可判斷化合物8d和9bd均屬混合型抑制劑。說明該類化合物既能直接與乙醯膽鹼酯酶的活性部位結合，也能和酶的其他部位結合從而抑制乙醯膽鹼酯酶的活性。
權利要求
1.式I所示的豆腐果苷類似物 其中，式I中的Ra表示為Ra＝O或NNHCSNH2或NNHCONH2或NHCSNH2或NHCONH2或NOH或NOCH3，Rb表示為全保護或部分保護或未保護的五碳糖、六碳糖、二糖中的一種。
2.根據權利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特徵在於所述豆腐果苷類似物為式II所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基；或R1和R2為異丙叉基，R3，R4為H；或R1，R2為H，R3和R4為苄叉基；或R4為三苯甲基或磷酸酯基或對甲苯磺酸酯基，R1，R2，R3為H；或R4為H，R1，R2，R3為乙醯基或新戊醯基或苯甲醯基或苄基或烯丙基。
3.根據權利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特徵在於所述豆腐果苷類似物為式III所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基；但不包括R1，R2，R3，R4均為H或均為乙醯基時，Ra為氧的已知化合物。
4.根據權利要求3所述的豆腐果苷類似物，其特徵在於R1，R2，R3，R4均為H，Ra為NOCH3，其結構式如下
5.根據權利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特徵在於所述豆腐果苷類似物為式IV所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基；但不包括R1，R2，R3，R4均為H或均為乙醯基時，Ra為氧的已知化合物。
6.根據權利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特徵在於所述豆腐果苷類似物為式VI或VII所示 R1，R2，R3各自獨立地是H，或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基。
7.根據權利要求6所述的豆腐果苷類似物，其特徵在於R1，R2，R3或各自獨立地是H，Ra為O，結構式為
8.根據權利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特徵在於所述豆腐果苷類似物為式VIII所示 其中R1，R2，R4，R6，R7，R8，R9各自獨立地是H，或均為乙醯基；或均為新戊醯基；或均為苯甲醯基；或均為苄基；或均為烯丙基。
9.一種用於治療老年痴呆症的藥物組合物，它含有以權利要求1-8任一所述的豆腐果苷類似物作為有效成分以及藥學上可接受的輔助劑。
10.權利要求1-8任一所述的豆腐果苷類似物在製備抗老年痴呆症藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開一類新的具有對乙醯膽鹼酯酶高選擇性抑制作用的式I的豆腐果苷類似物，其中，式I中的R
文檔編號A61P25/00GK101029064SQ20071002750
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月11日 優先權日2007年4月11日
發明者聞環, 王子厚, 周亞耀, 林崇懶, 葛輝, 彭文烈, 宋化燦, 曹日暉, 戴曉暢, 胡利昆, 張利生, 王豔華 申請人:昆明貝克諾頓製藥有限公司