脫色飲料的製作方法

2023-06-12 03:33:21

脫色飲料的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種包含miRNA或植物提取物的、用來使皮膚(尤其是人體皮膚)脫色的飲料。本發明的主題也涉及用來製備植物提取物的方法，也稱作「提取」。本發明的主題也涉及根據本發明的脫色飲料用於使皮膚(尤其是人體皮膚)脫色的用途。
【專利說明】脫色飲料
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種包含miRNA或植物提取物的、用於使皮膚、尤其是人體皮膚脫色的飲料。
【背景技術】
[0002]皮膚的色素沉著尤其對女人而言是個美學問題，但相當多的男人也對該問題變得愈發敏感。例如，不均勻的色素沉著可能以老年斑的形式或以色素沉著不規則性的形式出現。
[0003]三種色素通過它們的表面分布而造成皮膚顏色:胡蘿蔔素、血紅素和黑色素。
[0004]在這三種色素中，黑色素是皮膚中最豐富的色素:它在皮膚中的含量水平和確切組成(真黑素或褐黑素)決定其顏色。在參與黑素生成的各種酶(包括酪氨酸酶)的幫助下，黑色素從酪氨酸產生。
[0005]為了使膚色均一，現在已知將脫色化妝品組合物應用於皮膚，例如美白霜。這些乳霜尤其包含脫色活性劑。
[0006]這些活性劑的例子有氫醌、曲酸或壬二酸。
[0007]然而，依然需要提供更有效的和更易於施用的用於皮膚脫色的新型產品。
[0008]此外，考慮到消費者對無毒的、非免疫原性的和生物可降解的產品的不斷增加的需求，以及對於源自化學工業的化合物的日益嚴格的監管約束，理想的是這些產品是天然來源的。
[0009]已經證實，某些人類miRNA能夠減少參與黑色素生成的酶的黑色素產生(FR1161950)。
[0010]此外，aang等人已經證實，小鼠中的某些基因的表達可以用植物miRNA來調節(Zhang 等.Exogenous plant MIR168a specifically targets mammalian LDLRAPI:evidence of cross-kingdom regulation by microRNA.CellRes.2012Jan ；22(1):107-26)。
[0011] 申請人:現已證實，當用植物產生的人類miRNA的模擬物處理人黑色素細胞時，該細胞的黑色素水平下降；並且口服特定的植物miRNA改變了皮膚的人黑色素細胞中的黑色素水平。

【發明內容】

[0012]因此，本發明的主題是一種尤其針對人類皮膚的脫色飲料，其包含選自ppt-miR1039_5p、zma_miR528a*、osa-miR4128e_5p 以及 hsa_mir330 的至少一種植物miRNA。
[0013]詞語「微RNA(miRNA) 」理解為指長度約為21個核苷酸的非編碼RNA。已經證實它們在基因表達的轉錄後調節中發揮關鍵作用，例如通過影響翻譯的水平或使目標mRNA失穩定(Friedman RC Most mammalian mRNAs are conserved targets of microRNAs.Genome Res.2009,19:92-105)。
[0014]目前知道的miRNA被特別地記錄在www.mirbase.0rg中。
[0015]ppt-miR1039_5p 是存在於小立碗蘚(Physcomitrella patens)( 一種北半球常見的苔蘚物種)的整個植株(尤其是假根、葉、莖和分生組織)的提取物中的miRNA。miRNAppt-miR1039-5p 在mirbase 中的登記號是MIMAT0005148，且其序列為 5』-UCU UUG GGU CUUUCU CUC CUG-3』 (SEQ ID NO:1)。
[0016]zma_miR528a*是存在於玉米(Maize)的整個植株(尤其是根、葉、莖、分生組織、種子、花和果實)的提取物中的miRNA。miRNA zma_miR528a*在mirbase中的登記號是MIMAT0015362，且其序列為 5，-CCU GUG CCU GCC UCU UCC AUU-3，(SEQ ID NO:2)。
[0017]osa-miR1428e_5p是存在於水稻(Oryza sativa)( 一種原產於亞洲的稻物種)的整個植株(尤其是根、葉、莖、分生組織、種子、花和果實)的提取物中的miRNA。miRNAosa-miR4128e-5p 在 mirbase 中的登記號是 MIMAT0007784，且其序列為 5』 -AAU UCA CAGGCC CUA UCU UGU G_3』 (SEQ ID NO:3)。
[0018]miRNA hsa_mir330 是存在於人 RNA 中的 miRNA。miRNA hsa_mir330 在 mirbase 中的登記號是 M10000803，且其序列為 5』 -CUU UGG CGA UCA CUG CCU CUC UGG GCC UGU ⑶CUUA GGC UCU GCA AGA UCA ACC GAG CAA AGC ACA CGG CCU GCA GAG AGG CAG CGC UCUGCC C-3，(SEQ IDNO:4)。
[0019]本發明的飲料可以有利地包含佔飲料總重量的0.0001 %到10%重量、優選0.001%到1%重量比例範圍的所述miRNA。
[0020]本發明的主題也涉及一種包含至少一種選自小立碗蘚、玉米和水稻的植物提取物的脫色飲料。
[0021]本發明的飲料可以有利地包含三種植物提取物:小立碗蘚、玉米和水稻。
[0022]本發明的飲料可以有利地包含佔飲料總重量的0.0001 %到10%重量、優選
0.001%到I %重量比例範圍的所述植物提取物。
[0023]可用於本發明的植物提取物可以源自整個植株，尤其是根、葉、莖、分生組織、種子、花和果實。
[0024]所述提取物可以在任何溶劑的幫助下，優選使用水性溶劑、醇溶劑或油溶劑得到。
[0025]詞語「水性溶劑」被理解為指主要含水的溶劑。
[0026]詞語「醇溶劑」被理解為指任選地在水的存在下，選自一元醇類(如甲醇、乙醇或異丙醇)以及二醇類(如丙二醇或二丙二醇)的溶劑。
[0027]詞語「油溶劑」被理解為指選自食用油的溶劑。
[0028]除前述miRNA之外，本發明的飲料也可以包含至少一種食品領域中的常用添加劑。
[0029]特別地，根據優選實施方式，本發明的飲料可以包含，但不限於下述一種或多種添加劑:
[0030]-一種或多種甜味劑，例如葡萄糖和/或甜味劑替代品如阿斯巴甜、三氯蔗糖、山梨糖醇、其他多元醇或乙醯磺胺酸鉀。所述甜味劑和/或甜味劑替代品可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0031]-一種或多種質構劑和/或膠凝劑，例如黃原膠、角叉菜膠、果膠或纖維素化合物。所述質構劑和/或膠凝劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0032]-一種或多種營養物質，例如礦物質(Ca2+，Mg2+...)、維生素(A, B, C，D，K...)、益生菌、果汁和花蜜、椰汁，或抗氧化劑如石榴提取物。所述營養物質可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0033]-一種或多種乳化劑。所述乳化劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0034]-一種或多種防腐劑，例如交聯酚類或殺生物劑(山梨酸酯、丙酸酯或苯甲酸酯)。所述防腐劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0035]-一種或多種酸，例如檸檬酸。所述酸可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0036]-一種或多種著色劑和/或食用調味劑。所述著色劑和/或食用調味劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0037]-一種或多種香料和/或口味增強劑。所述香料和/或口味增強劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0038]-一種或多種胺基酸和/或蛋白質，例如膠原蛋白或彈性蛋白。所述胺基酸和/或蛋白質可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於飲料中；
[0039]-咖啡因，其可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在於本飲料中；
[0040]-及其混合物，但不限於該列舉的種類。
[0041]上述添加劑的實例被特別引述於「食品與飲料添加劑一美國工業研究和對2014年、2019 年的預測(Freedonia 集團)(Food and Beverage Additives-US Industry Studywith Forecasts for2014&2019 (Freedonia group)) 」 中，其描述了通常用於食品工業的廣泛食品添加劑，這些食品添加劑適合被用作本發明的脫色飲料的附加成分。
[0042]本發明的主題也涉及本發明的脫色飲料用於使皮膚(尤其是人體皮膚)脫色的用途。
[0043]例如，本發明的飲料可以每天飲用一次或兩次，在飯前和/或飯後飲用。
[0044]該飲料可以以多種方式提供給消費者，例如易拉罐、瓶子或紙盒。
附圖簡要說明
圖1顯示了用ppt-miR1039-5p或對照miR處理的MNTl細胞的酪氨酸酶的蛋白質印跡分析。
實施例
[0045]實施例1:ppt-miR1039_5p 的處理
[0046]材料和方法
[0047]細胞
[0048]在37°C以及5% 二氧化碳的潮溼氣氛中，在含10%胎牛血清(#10270，Gibco)、I %青黴素-鏈黴素(#15140, Gibco)和1% L-穀氨醯胺(#25030, Gibco)的RPMI1640培養基(#21875, Gibco)中培養人黑素瘤MNT-1色素細胞(Reish等，1995)。
[0049]miRNA的模擬物
[0050]第-1日，在六孔板(#353046，Falcon)的每個孔中接種4X IO5的MNT-1細胞。[0051]第零日，利用5 微升的 Lipofectamine2000 (#1668-019, Invitrogen),用 50 和IOOnM 的 miRNA 模擬物(ppt-miR1039_5p，Qiagen MSY0005148)轉染細胞。
[0052]第一日，更換培養基。
[0053]第三日，細胞被胰蛋白酶化，並以每個孔4 X IO5細胞接種。
[0054]第四日，用50nM的miRNA模擬物(見第零日)再次轉染細胞。
[0055]第五日，更換培養基。[0056]第七日，細胞被胰蛋白酶化，並以每個孔4 X IO5細胞接種。
[0057]第八日，一個六孔板用於RNA的細胞裂解，另一個用於蛋白質的細胞裂解。
[0058]蛋白質印跡
[0059]用75微升的放射免疫沉澱(RIPA)緩衝液(1% NP40、0.5%脫氧膽酸鈉、PBS中的
0.1% SDS)以及蛋白酶抑制劑(Roche)在4°C下從六孔板提取蛋白質30分鐘。蛋白質溶解產物在4°C下和以HOOOrpm離心30分鐘。上清液被轉移至預冷卻的1.5毫升微量離心管中，並被置於冰上。蛋白質濃度用BCA蛋白分析法(ThermoFisher)測定。在10% SDS-聚丙烯醯胺凝膠上分離蛋白質(50微克)，並在室溫下以100伏特下一小時將蛋白質轉移到ProTron硝酸纖維素膜(Whatman)上。所述膜在緩衝Tris鹽溶液(SCT)中用5%的脫脂奶粉飽和。在0.5% (v/v)的Tween/SCT(TTBS)中用稀釋的第一抗體(見下)探測所述薄膜過夜，然後將所述薄膜在TTBS中洗滌三次，每次5分鐘。第二抗體在TTBS中以1: 10，000稀釋，並在室溫下應用一小時。之後，所述薄膜在TTBS中洗漆三次,每次10分鐘,並利用AmershamHyperfiIm (GE Healthcare)以化學發光溶液 SuperSignal WestPico (Thermoscientific)顯影。
[0060]使用的第一抗體如下:
[0061]-山羊多克隆抗Tyr(C_19)，SC-7833 (Santa Cruz)，稀釋 1/1000
[0062]-小鼠單克隆抗β_肌動蛋白(CA_15)，A5441(Sigma)，稀釋1/7500
[0063]使用的第二抗體如下:
[0064]-抗小鼠IgG HRP, W402B (Promega)，稀釋 1/10000
[0065]-抗山羊IgG HRP, 705-035-147 (Jackson ImmunoResearch),稀釋 1/10000。
[0066]結果
[0067]應注意到,添加50nM的ppt-miR1039_5p相對於對照分析降低了酪氨酸酶的量,且在加入IOOnM的ppt-miR1039-5p的情況下觀察到的酪氨酸量的更多下降(圖1)。這些結果顯示，ppt-miR1039-5p降低MNTl細胞中的酪氨酸酶量。
[0068]實施例2:脫色飲料的組合物
[0069]製得具有下述組成a)或b)的脫色飲料:
[0070]miRNA(ppt-miR1039_5p)0.1 %
[0071]組成a)
[0072]椰汁25%
重構乳(reconstituted whey)25%
石才留和軟果汁5°/。
穩定劑:果股0.1%
睃化劑:檸檬酸0.1%
水足量至100毫升
[0073]組成b)
[0074]
咖p非因80毫克
牛磺酸1000毫克
D-葡萄糖醛酸內酯600毫克
維生素B21.5毫克
維生素B320.5毫克
維生素B55毫克
維生素B65毫克
維生素BI25微克水 足量至100毫升
【權利要求】
1.包含至少一種選自小立碗蘚(Physcomitrellapatens)、玉米(Maize)和水稻(Oryza sativa)的植物提取物的脫色飲料。
2.權利要求1的飲料，其特徵在於其包含三種植物提取物:小立碗蘚、玉米和水稻。
3.權利要求1或2的飲料，其特徵在於其包含佔飲料總重量的0.0001%到10%重量比例範圍的所述植物萃取物。
4.權利要求1-3任一項的飲料，其特徵在於所述植物提取物是水性提取物、醇提取物或油性提取物。
5.包含選自ppt-miR1039-5p、zma-miR528a*、osa-miR4128e-5p 和 hsa_mir330 的至少一種miRNA的脫色飲料。
6.權利要求5的飲料，其特徵在於其包含佔飲料總重量的0.0001%到10%重量比例範圍的所述miRNA。
7.權利要求1-6任一項的飲料，其特徵在於其另外包含選自以下的至少一種添加劑:數種甜味劑、甜味劑替代品、質構劑、膠凝劑、營養物質、乳化劑、防腐劑、酸、著色劑、食用調味劑、香料、口味增強劑、胺基酸、蛋白質、咖啡因及其混合物。
8.權利要求1-7任一項的飲料用於使皮膚脫色的用途。
【文檔編號】A23L2/38GK103478826SQ201310240319
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年6月9日 優先權日:2012年6月13日
【發明者】G·聖蒂尼, C·馬埃, L·拉呂, F·朗博夫 申請人:香奈兒香水美妝品公司, 居裡研究所, 國家科學研究中心