一種胸腺五肽注射液的製作方法
2023-06-12 15:10:06 1
專利名稱：一種胸腺五肽注射液的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種注射液，特別是涉及一種胸腺五肽注射液。
背景技術：
胸腺五肽(Thymopentin，簡稱TP-5)是胸腺生成素II(Thymopoietin)的第32至36位的胺基酸片斷。Goldstein等人發現該片斷是胸腺生成素II的免疫活性中心，並保留了胸腺生成素II的生物活性和生理功能，其主要生理作用為雙向調節機體的免疫功能，進而增強機體的整體免疫力。
胸腺五肽目前已廣泛應用於臨床，治療多種疾病，如惡性腫瘤所致的免疫功能下降；慢性乙、C型肝炎及其併發症；各種原發性或繼發性T細胞缺陷病，如兒童先天性免疫缺陷病；某些自身免疫性疾病，如類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、兒童支氣管哮喘和哮喘支氣管炎等；各種細胞免疫功能低下的疾病，如病毒性肝炎、預防上呼吸道感染、頑固性口腔潰瘍等等。
同絕大多數的肽類分子一樣，胸腺五肽在普通的水溶液中穩定性較低。多肽在水溶液中的穩定性受鹽離子種類和濃度、酸鹼度、多肽的濃度、添加劑的組成等多種因素的影響(Manning等人，1986，Pharmaceutical Research雜誌第6卷903-918頁)。目前臨床使用的是凍乾粉針劑型，每支含胸腺五肽1毫克，使用前溶於1毫升的注射用水中。凍乾粉針的生產工藝複雜，醫生使用也不方便。
發明內容
本發明的目的是提供一種胸腺五肽注射液。
本發明所提供的胸腺五肽注射液，基本上由濃度為0.1-100mg/ml的胸腺五肽，2-100mg/ml的甘氨酸和10-50mmol/L的檸檬酸鈉組成。
上述注射液中，胸腺五肽的濃度可以選擇1-100mg/ml，在10-100mg/ml時胸腺五肽在水溶液中可以保存更長時間；甘氨酸的濃度可以選擇為10-50mg/ml，在20-30mg/ml時對增強胸腺五肽在水溶液中穩定性的效果更佳；檸檬酸鈉的優選濃度為20-30mmol/L；注射液一般用NaOH調節pH以7.0-7.2為宜。
本發明所提供的胸腺五肽注射液，具有室溫穩定、保存時間長的特點，120天後胸腺五肽純度保持在99％左右，而且使用方便，能夠直接用於臨床。
圖1A-圖1E為胸腺五肽HPLC圖，示甘氨酸濃度對胸腺五肽穩定性影響，其中圖1A-圖1E分別為甘氨酸濃度為0、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml時保存90天後胸腺五肽的HPLC2A-圖2E為胸腺五肽HPLC圖，示檸檬酸鈉濃度對胸腺五肽穩定性影響，其中圖2A-圖2E分別為檸檬酸鈉濃度為0、15、20、25、30mmol/L時保存90天後胸腺五肽的HPLC3A-圖3E為胸腺五肽HPLC圖，示胸腺五肽濃度對其穩定性影響，其中圖3A-圖3E分別為胸腺五肽濃度為1、10、20、40、60mg/ml時保存120天後的HPLC圖具體實施方式
實施例1、甘氨酸濃度對胸腺五肽在水溶液中穩定性的影響精密稱量103.6毫克胸腺五肽(按照樣品中胸腺五肽純度為100％，水分含量為3.5％計算，胸腺五肽的重量為103.6毫克×(1-3.5％)＝100毫克)、735毫克檸檬酸鈉(含2分子結晶水)、不同重量甘氨酸(0、0.2、0.5、1、2、3、4、5、7、10克)於100毫升容量瓶中，加入約90毫升水，振搖使其充分溶解後用1M NaOH調節pH值至7.0，然後加水至刻度。
將容量瓶中的溶液用0.22μm濾膜過濾除去溶液中存在的其它不溶性雜質以及細菌。
將過濾後的溶液分裝至1毫升的安培瓶中。
取45瓶溶液在25℃條件下密封放置，分別在第0、30、90天採用HPLC進行含量檢測跟蹤。色譜條件為色譜柱Vydac 238DE54(4.6×250mm)C18柱流動相A0.1％三氟乙酸溶於10％乙腈流動相B0.1％三氟乙酸溶於90％乙腈洗脫程序(如表1所示)1.0毫升/分鐘，線性梯度表1、HPLC的梯度洗脫程序
全部過程採用紫外檢測儀(波長275nm)監測，根據峰面積歸一化法計算胸腺五肽的純度。試驗結果如表2所示，表中數值為胸腺五肽純度。
表2、甘氨酸濃度對水溶液胸腺五肽純度的影響
甘氨酸濃度為0、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml時保存90天胸腺五肽樣品的HPLC分離圖如圖1A-圖1E所示。
從表2可以發現甘氨酸濃度在2-100mg/ml範圍內都會增加胸腺五肽在水溶液中的穩定性，優選是濃度為10-50mg/ml，最優選是20-30mg/ml。
實施例2、檸檬酸鈉濃度對胸腺五肽在水溶液中穩定性的影響精密稱量103.6毫克胸腺五肽(按照樣品中胸腺五肽純度為100％，水分含量為3.5％計算，胸腺五肽的重量為103.6毫克×(1-3.5％)＝100毫克)、3克甘氨酸、不同重量含2分子結晶水的檸檬酸鈉(0、147毫克、294毫克、441毫克、588毫克、735毫克、882毫克、1.18克、1.47克)於100毫升容量瓶中，加入約90毫升水，振搖使其充分溶解後用1M NaOH調節pH值至7.1，然後加水至刻度。
將容量瓶中的溶液用0.22μm濾膜過濾除去溶液中存在的其它不溶性雜質以及細菌。
將過濾後的溶液分裝至1毫升的安培瓶中。
取45瓶溶液在25℃條件下密封放置，分別在第0、30、90天採用HPLC進行含量檢測跟蹤。色譜條件與實施例1相同。
全部過程採用紫外檢測儀(波長275nm)監測，根據峰面積歸一化法計算胸腺五肽的純度。試驗結果如表3所示，表中數值為胸腺五肽純度。
表3、檸檬酸鈉濃度對水溶液胸腺五肽純度的影響
檸檬酸鈉濃度為0、15、20、25、30mmol/L時保存90天胸腺五肽樣品的HPLC分離圖如圖2A-圖2E所示。
從表3可以發現檸檬酸鈉在濃度10-50mmol/L範圍內都會增加胸腺五肽在水溶液中的穩定性，優選濃度是20-30mmol/L。
實施例3、胸腺五肽濃度對其在水溶液中穩定性的影響精密稱量735毫克檸檬酸鈉(含2分子結晶水)、3克甘氨酸及不同重量的胸腺五肽(取胸腺五肽適量，精密稱定，按照樣品中胸腺五肽純度為100％，水分含量為3.5％計算，使胸腺五肽重量分別達到10、50、100、500毫克、1、2、4、6、8、10克)於100毫升容量瓶中，加入約90毫升水，振搖使其充分溶解後用1M NaOH調節pH值至7.2，然後加水至刻度。
將容量瓶中的溶液用0.22μm濾膜過濾除去溶液中存在的其它不溶性雜質以及細菌。
將過濾後的溶液分裝至1毫升的安培瓶中。
取45瓶溶液在37℃條件下密封放置，分別在第0、60、120天採用HPLC進行純度檢測跟蹤。色譜條件與實施例1相同。
全部過程採用紫外檢測儀(波長275nm)監測，根據峰面積歸一化法計算胸腺五肽的純度。試驗結果如表4所示，表中數值為胸腺五肽純度。
表4、胸腺五肽濃度濃度對其水溶液純度的影響
胸腺五肽濃度為1、10、20、40、60mg/ml時保存120天胸腺五肽樣品的HPLC分離圖見附圖3A-圖3E。
結果表明，胸腺五肽濃度在0.1-100毫克/毫升時都比較穩定，但是隨著胸腺五肽濃度的增加，其在水溶液中的穩定性略有提高，優選是1-100毫克/毫升，最優選是10-100毫克/毫升。
權利要求
1.一種胸腺五肽注射液，基本上由濃度為0.1-100mg/ml的胸腺五肽，2-100mg/ml的甘氨酸和10-50mmol/L的檸檬酸鈉組成。
2.根據權利要求1所述的胸腺五肽注射液，其特徵在於所述胸腺五肽的濃度為1-100mg/ml，
3.根據權利要求2所述的胸腺五肽注射液，其特徵在於所述胸腺五肽的濃度為10-100mg/ml。
4.根據權利要求1所述的胸腺五肽注射液，其特徵在於所述甘氨酸的濃度為10-50mg/ml。
5.根據權利要求4所述的胸腺五肽注射液，其特徵在於所述甘氨酸的濃度為20-30mg/ml。
6.根據權利要求1所述的胸腺五肽注射液，其特徵在於所述檸檬酸鈉的濃度為20-30mmol/L。
7.根據權利要求1至6任一所述的胸腺五肽注射液，其特徵在於所述注射液pH為7.0-7.2。
8.根據權利要求1所述的胸腺五肽注射液，其特徵在於胸腺五肽濃度為1mg/ml，甘氨酸濃度為30mg/ml，檸檬酸鈉濃度為25mmol/L，pH為7.0-7.2。
全文摘要
本發明公開了一種胸腺五肽注射液，該注射液可以直接用於臨床注射使用。本發明的胸腺五肽注射液，基本上由濃度為0.1－100mg/ml的胸腺五肽，2－100mg/ml的甘氨酸和10－50mmol/L的檸檬酸鈉組成。胸腺五肽的優選濃度為10－100mg/ml，甘氨酸的優選濃度為20－30mg/ml，檸檬酸鈉的優選濃度為20－30mmol/L，注射液pH為7.0－7.2。本發明所提供的胸腺五肽注射液，具有室溫穩定的特點，120天後胸腺五肽純度保持在99％左右，而且使用方便，能夠直接用於臨床。
文檔編號A61P1/16GK1676162SQ20041002985
公開日2005年10月5日 申請日期2004年3月30日 優先權日2004年3月30日
發明者楊先剛, 嚴莉 申請人:北京中科亞光生物科技有限公司