一種獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體新劑型及其製備方法
2023-07-03 12:42:16 1
專利名稱：：一種獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體新劑型及其製備方法
技術領域：
：本發明屬於獸用抗生素製劑領域，涉及沃尼妙林及其鹽的脂質體新劑型及其製備方法。
背景技術：
：沃尼妙林(valnemulin)及其鹽是新一袋截短側耳素類半合成抗生素，屬二萜烯類，與泰妙菌素屬同一類藥物，是動物專用抗生素，主要用於防治豬、牛、羊及家禽的支原體病和革蘭氏陽性菌感染。1999年由歐共體批准用於預防與治療由豬痢疾短螺旋體感染引起的豬痢疾和由肺炎支原體感染引起的豬地方性肺炎，它是第一個全歐洲批准的獸用藥物預混劑，被列為獸用處方藥。沃尼妙林的普通製劑，如預混劑、注射液等，用藥後藥物在血液及組織中均勻分布，沒有靶向性，且藥物進入血液循環後，要與蛋白結合，經受多種酶、組織、器官的代謝和排洩等，只有少量藥物能夠達到靶部位。如果要提高靶區的藥物濃度，就必須增加劑量，這不僅增加成本，造成藥物的浪費，也增大了藥物的毒副作用和藥物在動物體內的殘留，增加了產生耐藥性的可能性。脂質體(liposomes)是新型藥物載體，是由脂質雙分子層形成的微型囊泡。近年來脂質體作為藥物載體的研究愈來愈受到重視，研究進展非常迅速，對脂質體的研究領域逐漸擴大和不斷深入。但是，國內外獸用脂質體製劑的相關研究較少，且獸用脂質體製劑的研究主要以抗寄生蟲、微量元素、營養藥物為主，品種數量上偏少，尤其是缺少抗生素類和消化系統類藥物脂質體製劑的研究。
發明內容本發明的目的在於提供一種獸用沃尼妙林(valnemulin)及其鹽的脂質體，將沃尼妙林及其鹽製成脂質體，提高了藥物的組織選擇性，提高了藥物的療效，對細胞內細菌及支原體感染亦有效；肺靶向脂質體使藥物靶向於肺部，對於肺部感染效果更顯著；長循環脂質體顯著提高了脂質體在體內的循環時間，使藥物更長期更有效的發揮藥效。本發明的另一目的在於提供沃尼妙林及其鹽的脂質體的製備方法。本發明的目的是通過如下技術方案實現的本發明提供一種獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體，其特徵在於以沃尼妙林或沃尼妙林鹽為原料藥，以磷脂和膽固醇為膜材。本發明的沃尼妙林及其鹽的脂質體可製備成沃尼妙林或沃尼妙林鹽的普通脂質體、肺靶向脂質體或長循環脂質體，製備過程中可根據需要用輔料進行表面修飾。其中，本發明所述的沃尼妙林鹽為沃尼妙林的鹽酸鹽、磷酸鹽或酒石酸鹽，所述的磷脂為天然磷脂、合成磷脂或上述二者的混合物。本發明的沃尼妙林及其鹽的脂質體中，沃尼妙林或沃尼妙林鹽與磷脂的重量比為2:ii:iio。進一步，沃尼妙林或沃尼妙林鹽與磷脂的重量比優選範圍為i:5i:50。其中，沃尼妙林或沃尼妙林鹽的肺耙向脂質體的粒徑範圍為7-30ym，用於進行表面修飾的輔料為N-乙醯氨基甘露糖、氨基甘露糖醇、氨基脫氧甘露糖醇中的任一種；沃尼妙林及其鹽的長循環脂質體中用於表面修飾的輔料包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醯胺、殼聚糖中的任一種。本發明的肺靶向脂質體中用於進行表面修飾的輔料與磷脂的重量比為1:5i:200;長循環脂質體中用於進行表面修飾的輔料與磷脂的重量比為i:5i:200。本發明還提供了該獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體的製備方法，其步驟如下1)將磷脂、膽固醇和/或用於表面修飾的輔料溶於氯仿，置於圓底燒瓶中，旋轉蒸發乾燥至呈乾燥薄層；2)將沃尼妙林或其鹽溶於PBS溶液中；3)將沃尼妙林或其鹽的PBS溶液加到燒瓶中，進行振蕩水化，即得沃尼妙林或其鹽的脂質體。本發明的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體的製備方法，其製備也可按如下步驟進下1)將磷脂、膽固醇和/或用於表面修飾的輔料溶於氯仿或乙醚，置於圓底燒瓶中；2)將沃尼妙林或其鹽溶於PBS溶液中；3)將沃尼妙林或其鹽的PBS溶液加到燒瓶中，進行超聲乳化，然後進行減壓蒸發，達到膠態後，滴加PBS溶液，繼續減壓蒸發，即得沃尼妙林或其鹽的脂質體。本發明的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體的製備方法，其製備還可按如下步驟進下1)將磷脂、膽固醇和/或用於表面修飾的輔料溶於乙醚，置於燒杯中；2)將沃尼妙林或其鹽溶於PBS溶液中；3)在6(TC加熱攪拌下，注射入沃尼妙林或其鹽的PBS溶液，繼續攪拌至揮盡乙醚，即得沃尼妙林或其鹽的脂質體。如進一步將製得的脂質體經過鈷60射線滅菌，可製備成沃尼妙林及其鹽的脂質體注射液；或將脂質體進行冷凍乾燥，即得沃尼妙林及其鹽的脂質體凍乾粉針。本發明的沃尼妙林及其鹽的脂質體可以降低普通沃尼妙林注射液的毒副作用，提高藥效；肺靶向脂質體可以使藥更有效的濃集於肺部，顯著提高沃尼妙林治療肺部感染的效果，且毒副作用更低；長循環脂質體能夠延長沃尼妙林在體內循環時間，明顯延長藥物的作用時間，減少給藥次數。通過下列實施例將更具體的說明本發明，但是應理解所述實施例僅是為了說明本發明，而不是以任何方式限制本發明的範圍。具體實施例方式實施例1鹽酸沃尼妙林脂質體的製備1)將卵磷脂1000mg、膽固醇100mg溶於20ml氯仿，置於圓底燒瓶中，在旋轉蒸發器上，真空蒸發乾燥至呈乾燥薄層；2)將150mg鹽酸沃尼妙林溶於25mlPBS中；3)將鹽酸沃尼妙林PBS溶液加到燒瓶中，進行振蕩水化，即得鹽酸沃尼妙林脂質體。實施例2沃尼妙林脂質體的製備1)將卵磷脂2000mg、膽固醇lOOmg溶於20ml氯仿-乙醚(1:1，V/V)，置於圓底燒瓶中；2)將40mg沃尼妙林溶於20mlPBS溶液中；3)將沃尼妙林的PBS溶液加入燒瓶中，進行超聲乳化3min，然後進行減壓蒸發，達到膠態後，滴加5mlPBS溶液，繼續減壓蒸發，即得沃尼妙林脂質體。實施例3磷酸沃尼妙林脂質體的製備1)將大豆磷脂1000mg、膽固醇150mg溶於30ml乙醚，置於燒杯中；2)將2000mg磷酸沃尼妙林溶解於25mlPBS溶液中；3)在6(TC加熱攪拌下，注射入磷酸沃尼妙林的PBS溶液，繼續攪拌至揮盡乙醚，即得磷酸沃尼妙林脂質體。實施例4酒石酸沃尼妙林脂質體的製備1)將大豆卵磷脂1100mg、膽固醇lOOmg溶於20ml氯仿，置於圓底燒瓶中，在旋轉蒸發器上，真空蒸發乾燥至呈乾燥薄層；2)將酒石酸沃尼妙林10mg溶於25mlPBS中；3)將沃尼妙林PBS溶液加到燒瓶中，進行振蕩水化，即得酒石酸沃尼妙林脂質體。實施例5鹽酸沃尼妙林肺靶向脂質體的製備1)將大豆磷脂1000mg、膽固醇lOOmg、N_乙醯氨基甘露糖lOOmg溶於20ml氯仿-乙醚(l:1，V/V)，置於圓底燒瓶中；2)將150mg鹽酸沃尼妙林溶解於20mlPBS溶液中；3)將鹽酸沃尼妙林的PBS溶液加入燒瓶中，進行超聲乳化3min，然後進行減壓蒸發，達到膠態後，滴加5mlPBS溶液，繼續減壓蒸發，即得鹽酸沃尼妙林肺靶向脂質體。實施例6鹽酸沃尼妙林長循環脂質體的製備1)將大豆磷脂750mg、膽固醇100mg、聚乙二醇-2000120mg溶於乙醚，置於燒杯中；2)將150mg鹽酸沃尼妙林溶解於25mlPBS溶液中；3)在6(TC加熱攪拌下，注射入鹽酸沃尼妙林的PBS溶液，繼續攪拌至揮盡乙醚，即得鹽酸沃尼妙林長循環脂質體。實施例7磷酸沃尼妙林長循環脂質體的製備1)將大豆磷脂1500mg、膽固醇100mg、聚乙二醇-4000300mg溶於乙醚，置於燒杯中；2)將50mg磷酸沃尼妙林溶解於25mlPBS溶液中；3)在6(TC加熱攪拌下，注射入磷酸沃尼妙林的PBS溶液，繼續攪拌至揮盡乙醚，即得磷酸沃尼妙林長循環脂質體。實施例8沃尼妙林長循環脂質體的製備1)將大豆磷脂800mg、膽固醇100mg、聚乙烯吡咯烷酮k30160mg溶於20ml氯仿中，置於圓底燒瓶中，在旋轉蒸發器上，真空蒸發乾燥至呈乾燥薄層；52)將沃尼妙林lOOmg溶於25mlPBS中；3)將沃尼妙林PBS溶液加到燒瓶中，進行振蕩水化，即得沃尼妙林長循環脂質體。實施例9鹽酸沃尼妙林長循環脂質體的製備1)將大豆磷脂1000mg、DMPC(二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼)200mg、膽固醇100mg、聚乙烯吡咯烷酮kl7100mg溶於20ml氯仿，置於圓底燒瓶中，在旋轉蒸發器上，真空蒸發乾燥至呈乾燥薄層；2)將鹽酸沃尼妙林100mg溶於25mlPBS中；3)將鹽酸沃尼妙林PBS溶液加到燒瓶中，進行振蕩水化，即得鹽酸沃尼妙林長循環脂質體。實施例10鹽酸沃尼妙林長循環脂質體的製備1)將DPPC(合成二棕櫚醯磷脂醯膽鹼)2000mg、膽固醇200mg、聚乙烯醇10mg溶於20ml氯仿-乙醚(1:1，V/V)，置於圓底燒瓶中；2)將300mg鹽酸沃尼妙林溶解於20mlPBS溶液中；3)將鹽酸沃尼妙林的PBS溶液加入燒瓶中，進行超聲乳化3min，然後進行減壓蒸發，達到膠態後，滴加5mlPBS溶液，繼續減壓蒸發，即得鹽酸沃尼妙林脂質體。實施例11磷酸沃尼妙林長循環脂質體的製備1)將大豆磷脂1500mg、DPPC(合成二棕櫚醯磷脂醯膽鹼)200mg、膽固醇100mg、聚丙烯醯胺100mg溶於30ml乙醚，置於燒杯中；2)將150mg磷酸沃尼妙林溶解於25mlPBS溶液中；3)在6(TC加熱攪拌下，注射入磷酸沃尼妙林的PBS溶液，繼續攪拌至揮盡乙醚，即得磷酸沃尼妙林長循環脂質體。實施例12酒石酸沃尼妙林長循環的脂質體的製備1)將大豆磷脂1500mg、膽固醇100mg、殼聚糖50mg溶於乙醚，置於燒杯中；2)將150mg酒石酸沃尼妙林溶解於25mlPBS溶液中；3)在6(TC加熱攪拌下，注射入酒石酸沃尼妙林的PBS溶液，繼續攪拌至揮盡乙醚，即得酒石酸沃尼妙長循環林脂質體。實施例13磷酸沃尼妙林肺靶向脂質體的製備1)將大豆磷脂1200mg、膽固醇100mg、氨基甘露糖醇240mg溶於20ml氯仿-乙醚(1:1，V/V)，置於圓底燒瓶中;2)將150mg磷酸沃尼妙林溶解於20mlPBS溶液中；3)將磷酸沃尼妙林的PBS溶液加入燒瓶中，進行超聲乳化3min，然後進行減壓蒸發，達到膠態後，滴加5mlPBS溶液，繼續減壓蒸發，即得磷酸沃尼妙林肺靶向脂質體。實施例14酒石酸沃尼妙林肺靶向脂質體的製備1)將大豆磷脂1600mg、膽固醇150mg、氨基脫氧甘露糖醇8mg溶於20ml氯仿-乙醚(1:1，V/V)，置於圓底燒瓶中；2)將150mg鹽酸沃尼妙林溶解於20mlPBS溶液中；3)將酒石酸沃尼妙林的PBS溶液加入燒瓶中，進行超聲乳化3min，然後進行減壓蒸發，達到膠態後，滴加5mlPBS溶液，繼續減壓蒸發，即得酒石酸沃尼妙林肺靶向脂質體。實驗例1實施例1和實施例6製備的沃尼妙林脂質體的藥代動力學研究6實驗方法取15隻健康大鼠，隨機分成3組，即鹽酸沃尼妙林注射液組、鹽酸沃尼妙林普通脂質體組、鹽酸沃尼妙林長循環脂質體組。實驗前禁食一夜，分別股靜脈注射相當於10mg/kg沃尼妙林劑量的鹽酸沃尼妙林注射液、鹽酸沃尼妙林普通脂質體、鹽酸沃尼妙林長循環脂質體。給藥後0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、48h從大鼠眼眶取血0.5ml，離心分離血漿，測定血漿中沃尼妙林的含量。實驗結果實施例1和實施例6製備的沃尼妙林脂質體的藥代動力學實驗結果見表l。表1實施例1和實施例6製備的沃尼妙林脂質體的藥代動力學研究tableseeoriginaldocumentpage7實驗例2實施例5製備的沃尼妙林脂質體的肺靶向性研究實驗方法1、取健康小鼠96隻，隨機分成兩組，即鹽酸沃尼妙林注射液組與鹽酸沃尼妙林肺靶向脂質體組。實驗前禁食一夜，分別靜脈注射相當於10mg/kg沃尼妙林劑量的鹽酸沃尼妙林注射液和鹽酸沃尼妙林肺靶向脂質體，於注射0.5、1、2、4、8、12、24小時，每組隨機選取6隻小鼠眼眶取血0.5ml，離心分離血漿。斷頭處死小鼠，剖腹，取出肺，用生理鹽水漂洗殘留血，濾紙吸乾水分，精密稱量組織重量，製備成0.5g/ml的肺組織勻槳，檢測沃尼妙林含量。實驗結果實施例5製備的沃尼妙林脂質體的肺靶向研究結果見表2。表2實施例5製備的沃尼妙林脂質體的肺靶向研究結果tableseeoriginaldocumentpage8實驗例3實施例1製備的鹽酸沃尼妙林脂質體的臨床藥效試驗實驗方法1、選取體重20-30kg，診斷為氣喘病的豬60頭，隨機分為三組，分別為A、B、C組，每組20頭。A組靜脈注射相當於10mg/kg沃尼妙林劑量的鹽酸沃尼妙林注射液，每天注射一次，連用三天。B組靜脈注射相當於6mg/kg沃尼妙林劑量的沃尼妙林脂質體，第一天和第三天每天注射一次，共注射兩次。C組為陰性對照組不給藥。2、療效判斷。治癒用藥數天後，食慾、呼吸恢復正常，咳嗽、喘氣完全消失，停藥後IO天內不復發者，稱為治癒；好轉臨床症狀有所減輕，或臨床症狀暫時消失，但停藥後10天內又復發者，稱為好轉。實驗結果實施例1製備的鹽酸沃尼妙林脂質體的臨床藥效試驗結果見表3。表3按照實施例1製備的鹽酸沃尼妙林脂質體的臨床藥效試驗結果tableseeoriginaldocumentpage8權利要求一種獸用沃尼妙林(valnemulin)及其鹽的脂質體，其特徵在於以沃尼妙林或沃尼妙林鹽為原料藥，以磷脂和膽固醇為膜材。2.根據權利要求1所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體，其特徵在於可製備成沃尼妙林或沃尼妙林鹽的普通脂質體、肺靶向脂質體或長循環脂質體，製備過程中可用輔料進行表面修飾。3.根據權利要求1所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體，其特徵在於所述的沃尼妙林鹽為沃尼妙林的鹽酸鹽、磷酸鹽或酒石酸鹽，所述的磷脂為天然磷脂、合成磷脂或上述二者的混合物。4.根據權利要求1所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體，其特徵在於沃尼妙林或沃尼妙林鹽與磷脂的重量比為2:11:110。5.根據權利要求4所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體，其特徵在於沃尼妙林或沃尼妙林鹽與磷脂的重量比優選範圍為i:5i:50。6.根據權利要求2所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體，其特徵在於沃尼妙林或沃尼妙林鹽的肺靶向脂質體的粒徑範圍為7-30iim，用於進行表面修飾的輔料為N-乙醯氨基甘露糖、氨基甘露糖醇、氨基脫氧甘露糖醇中的任一種；沃尼妙林或沃尼妙林鹽的長循環脂質體中用於表面修飾的輔料包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醯胺、殼聚糖中的任一種。7.根據權利要求6所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體，其特徵在於肺靶向脂質體中用於進行表面修飾的輔料與磷脂的重量比為1:51:200;長循環脂質體中用於進行表面修飾的輔料與磷脂的重量比為i:5i:200。8.如權利要求1-7任一項所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體的製備方法，其特徵在於步驟如下1)將磷脂、膽固醇和/或用於表面修飾的輔料溶於氯仿，置於圓底燒瓶中，旋轉蒸發乾燥至呈乾燥薄層；2)將沃尼妙林或其鹽溶於PBS溶液中；3)將沃尼妙林或其鹽的PBS溶液加到燒瓶中，進行振蕩水化，即得沃尼妙林或其鹽的脂質體。9.如權利要求l-7任一項所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體的製備方法，其特徵在於步驟如下1)將磷脂、膽固醇和/或用於表面修飾的輔料溶於氯仿或乙醚，置於圓底燒瓶中；2)將沃尼妙林或其鹽溶於PBS溶液中；3)將沃尼妙林或其鹽的PBS溶液加到燒瓶中，進行超聲乳化，然後進行減壓蒸發，達到膠態後，滴加PBS溶液，繼續減壓蒸發，即得沃尼妙林或其鹽的脂質體。10.如權利要求l-7任一項所述的獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體的製備方法，其特徵在於步驟如下1)將磷脂、膽固醇和/或用於表面修飾的輔料溶於乙醚，置於燒杯中；2)將沃尼妙林或其鹽溶於PBS溶液中；3)在6(TC加熱攪拌下，注射入沃尼妙林或其鹽的PBS溶液，繼續攪拌至揮盡乙醚，即得沃尼妙林或其鹽的脂質體。全文摘要本發明涉及一種獸用沃尼妙林及其鹽的脂質體新劑型及其製備方法，屬於獸用抗生素製劑領域。該製劑以沃尼妙林及其鹽為主要成分，以磷脂和膽固醇為膜材，可製備成沃尼妙林或沃尼妙林鹽的普通脂質體、肺靶向脂質體或長循環脂質體。本發明提供的沃尼妙林及其鹽的脂質體比其普通製劑有更好的組織選擇性，對細胞內部的細菌、支原體感染有效，並可降低毒副作用。肺靶向脂質體使藥物靶向於肺部，對於肺部支原體感染，細菌感染等有顯著效果，並且降低了毒副作用。長循環脂質體顯著提高了脂質體在體內的循環時間，使藥物更長時間更有效的發揮藥效，從而減少給藥次數及給藥劑量。文檔編號A61P31/04GK101744799SQ20081023952公開日2010年6月23日申請日期2008年12月12日優先權日2008年12月12日發明者叢日剛,馮華兵,劉瀾,文波,田玲,莫雲,葛代興,葛冰,謝先仁,黃建茹申請人:北京大北農科技集團股份有限公司;北京大北農動物保健科技有限責任公司;韶山大北農動物藥業有限公司