用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物的製作方法

2023-06-03 12:31:36 1

專利名稱：用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物(fat and oil processed composition)(經加工的油脂組合物或經加工的包含油類和脂類的組合物)，和/或用於抑制和/或改善體重增加的經加工的油脂組合物，其可用於食物和飲料比如保健食品、具有保健要求的食物(用於特定用途[FOSHU]的食物和具有營養功能要求的食物)、醫藥、非醫藥、化妝品等。
背景領域最近幾年中，由於日常生活環境惡化比如飲食習慣的西化和缺乏運動，肥胖症的人數不斷增加，伴隨肥胖症增加的與生活方式相關疾病已被認為是嚴重的社會問題。與生活方式相關疾病包括內臟的脂肪肥胖症(visceral fatobesity)、II型糖尿病、高脂血症以及高血壓，這些疾病屬於多危險因素症候群並最終引起血管疾病比如動脈硬化。因此，需要對由肥胖症所引起的體重增加具有抑制作用的組合物，以預防和/或改善這些與生活方式相關疾病，作為該組合物的形式需要是可每日攝取的食物和飲料比如保健食品和具有保健要求的食物(用於特定用途[FOSHU]和具有營養功能要求的食物)、或醫藥、非醫藥、化妝品等。
多危險因素症候群被認為是「代謝性症候群」，與根據Reaven的「症候群X」(Diabetes，37，1595-1607，1988)、根據Kaplan的「致命四重奏(the deathlyquartet)」(Archives of Internal Medicine，149，1514-1520，1989)、根據DeFronzo的「胰島素耐受性症候群」(Diabetes Care，14，173-194，1991)以及根據Matsuzawa的「內臟脂肪症候群」(Diabetes/Metabolism Reviews，13，3-13，1997)是相同的病理概念，且據估計這些症候群中共同的至病因素是胰島素耐受性。
已顯示用於改善胰島素耐受性的藥物噻唑烷衍生物比如曲格列酮、匹格列酮和羅格列酮，起核內受體過氧化物酶體增殖劑-激活受體γ(PPARγ)的配體的作用，改善II型糖尿病患者的胰島素耐受性，並且表現出降低血糖增高藥的作用。還顯示這些噻唑烷衍生物增加皮下脂肪量但降低內臟脂肪量並表現出降低血液游離脂肪酸作用、降低血壓作用和抗炎作用(參見Martens，F.M.，et al.，Drugs，62，1463-1480，2002)。也就是說，那些具有PPARγ配體活性的化合物可有效改善胰島素耐受性並預防和/或改善與生活方式相關疾病比如內臟脂肪肥胖症、II型糖尿病、高脂血和高血壓。
甘草是一種豆科甘草屬(Glycyrrhiza)植物，用作食物和藥物(草藥)，其主要的種屬包括光果甘草(Glycyrrhiza glabra)、甘草(G.uralensis)，脹果甘草(G.inflata)等。親水性組分甘草甜素(甘草酸)包含於任何種屬的甘草中，而疏水性組分黃酮類化合物則作為特定化合物包含於特定種屬中。有時利用這些種屬特異性黃酮類化合物識別甘草種屬。
在從甘草獲得的萃取物中，發現疏水性甘草萃取物可用於預防和/或改善的多危險因素症候群，其中所述疏水性甘草萃取物包含大量甘草黃酮類化合物和很少量甘草甜素(參見WO 02/47699)。
另一方面，包含於疏水性甘草萃取物的疏水性甘草黃酮類化合物幾乎不溶於水，當為有機溶劑萃取物的形式時容易硬化，隨時間變化快速發生顏色的顯著改變，因此難以被應用。為了解決這一問題，將疏水性甘草黃酮類化合物溶於中鏈脂肪酸甘油三酯中，並將所得疏水性甘草黃酮類化合物製劑用作抗氧化劑、抗菌劑、酶抑制劑、著色劑、抗腫瘤劑、抗變應性劑(anti-allergic agent)和抗病毒劑(參見日本專利號2794433)。但是在日本專利號2794433中並不限於該化合物，並且不知它們用作預防和/或改善與生活方式相關疾病的藥物以及它們對抑制和/或改善體重增加的作用。
本發明所要解決的問題綜上，光甘草素(glabrene)、光甘草定(glabridin)、光甘草酚(glabrol)、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B(hyspaglabridin B)具有PPARγ配體活性，並由此在改善胰島素耐受性中和在預防和/或改善與生活方式相關疾病比如內臟脂肪肥胖症、II型糖尿病、高脂血和高血壓中有效。但是，這些化合物的水溶性和穩定性較差，因此難以應用於飲食品和醫藥。因此，本發明提供了用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的組合物，和/或抑制和/或改善體重增加的組合物，其包含至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物，其可用於飲食品中比如保健食物、具有保健要求的食物(用於特定用途[FOSHU]和具有營養功能要求的食物)、或醫藥、非醫藥或化妝品等。

發明內容
本發明人鑑於上述情況進行了徹底研究，並因而發現光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定、和歐甘草素B或其鹽、酯或糖苷特別溶解於某些種類的油脂中由此改善了這些化合物的穩定性，還改善了其加工成飲食品、醫藥、非醫藥、化妝品等的可加工性，並且表現出抑制營養過剩時體重增加的作用，由此完成了本發明。
即，本發明的第一方面涉及用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物，其包含其中溶解有至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定、和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷的油脂，本發明第二方面涉及用於抑制和/或改善體重增加的經加工的油脂組合物，其包含其中溶解有至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定、和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷的油脂。
本發明的最佳實施方式在下文，參考其實施方案對本發明進行了詳細描述。
根據本發明的用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物，和用於抑制和/或改善體重增加的經加工的油脂組合物，包含其中溶解有至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷的油脂。如此處所用，經加工的油脂組合物是其中溶解有上述化合物的油脂或用於飲食品、醫藥、非醫藥、化妝品等包含該油脂的組合物。即，經加工的油脂組合物包括油脂中溶解有上述化合物的組合物、包含其它物質與上述組合物混合的組合物、以及用於飲食品、醫藥、非醫藥、化妝品等的組合物，其通過加工上述組合物而製備。優選地，該組合物包含光甘草定和至少一種選自光甘草素、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物。該組合物更優選包含光甘草定、光甘草素以及至少一種選自光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物。該組合物最優選包含全部的光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B。這些化合物的總量優選約為基於該經加工的油脂組合物的0.01至30重量％，更優選約0.1至30重量％，更加優選約1至10重量％。當總量高於約30重量％時，這些化合物可能無法溶於油脂中。當總重低於約0.01重量％時，無法充分地顯示本發明的效果。這些化合物，與噻唑啉二酮衍生物比如曲格列酮和匹格列酮相似，具有PPARγ配體活性因此可有效改善胰島素耐受性並預防和/或改善與生活方式相關疾病比如構成代謝性綜合症的內臟脂肪肥胖症、II型糖尿病、高脂血和高血壓。
包含於本發明經加工的油脂組合物中的光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B有效抑制和/或改善由營養過剩比如攝入高脂/高糖食物引起的體重增加。
本發明所用的光甘草定、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B是歸類於異黃烷的黃酮類化合物，是由下面通式(1)代表的化合物[式1] 其中，在光甘草定中，R1＝H，R2＝OH；在3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定中，R1＝OH，R2＝OCH3；在4′-鄰-甲基光甘草定中，R1＝H，R2＝OCH3；以及在歐甘草素B中，R1和R2一起是-CH＝CH-C(CH3)2-O-從而構成6-元環。
本發明所用的光甘草素是歸類於異黃-3-烯(isoflav-3-ene)的黃酮類化合物，是由下面通式(2)代表的化合物[式2] 本發明所用的光甘草酚是歸類於二氫黃酮的黃酮類化合物，是由下面通式(3)代表的化合物[式3] 光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B是特別包含於甘草中光果甘草中的成分，幾乎不包含於其它種屬中。但是，這些化合物可包含於光果甘草與其它種屬的雜交物中。這些化合物可與其它黃酮類化合物成分相分離，通過HPLC分析使用反相柱比如ODS檢測並定量。
上述化合物的脂肪酸酯也可用於本發明中。這些酯可由任意有機酸或無機酸形成。為了適應本發明的目的，可使用用於食物、飲料、藥物或化妝品的適當的酸。優選地，可使用脂肪酸。脂肪酸可包括但不限於長鏈脂肪酸比如油酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸或亞麻酸；以及短鏈或中鏈脂肪酸比如丁酸或乙酸。
本發明還可適當地使用上述化合物的鹽。這些化合物的溶液可以與適用於食物、飲料、藥物或化妝品的適當酸混合而形成，這些酸比如鹽酸、硫酸、甲磺酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、乙酸、安息香酸、草酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。當該化合物具有酸性部分時，可使用可用於食物、飲料、藥物或化妝品的適當的鹽。該鹽包括與鹼金屬鹽形成的鹽比如鈉、鉀鹽；鹼土金屬鹽比如鈣或鎂鹽；以及合適的有機配位體比如季銨鹽。
與糖部分通過一種或多種羥基結合的糖苷可合適地用於本發明中。糖部分可以是任意糖。糖部分可包括但不限於單糖、二糖、三糖、寡糖和多糖。
當該化合物具有至少一個不對稱中心時，它可以存在對映體形式。當該化合物具有至少兩個不對稱中心時，它可以存在非對映體形式。這樣的異構體和其任意比例的混合物均可包括在本發明的範圍內。該化合物可以被任選取代。
在本發明中，並不特別限制製備光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的方法，這些化合物可通過光果甘草獲得。當從甘草獲得這些化合物時，並不特別限制其方法，這些化合物可包含於通過有機溶劑比如乙醇、乙酸乙酯和丙酮萃取而得的疏水性甘草萃取物中，並可使用該萃取物本身，但也可使用經柱處理、除臭處理、脫色處理等純化疏水性萃取物而得的粗或純產物。當然，本發明所用的化合物可以是來源於天然物質比如其它植物的化合物、化學合成的化合物或在培養細胞中生物合成的化合物。所用化合物可以是純化的化合物，但也可使用經純化仍為粗品形式的化合物，只要它們不含不適於飲食品、醫藥、非醫藥或化妝品等的雜質即可。
用於本發明的油脂是脂肪酸甘油酯包括中鏈脂肪酸甘油三酯，優選該脂肪酸甘油酯包含至少約50wt％的中鏈脂肪酸甘油三酯，更優選該脂肪酸甘油酯包含至少約70wt％的中鏈脂肪酸甘油三酯。該中鏈脂肪酸甘油三酯包含約C6至C12脂肪酸作為組分的脂肪酸，其中脂肪酸的組分比例沒有具體的限制，但約C8至C10脂肪酸組分的比例優選至少約50wt％或更多，更優選至少約70wt％或更多。具體地，更優選中鏈脂肪酸甘油三酯在約20℃時比重約為0.94至0.96，在約20℃時粘度約為23至28cP。所用的中鏈脂肪酸甘油三酯可以來源於天然物質或通過酯交換製備。
用於本發明的油脂是包含偏甘油酯的脂肪酸甘油酯，優選包含至少約50wt％或更多偏甘油酯的脂肪酸甘油酯，更優選包含至少約70wt％或更多偏甘油酯的脂肪酸甘油酯。該偏甘油酯是甘油二酯(1，2-二醯甘油，1，3-二醯甘油)或甘油單酯(1-單醯基甘油，2-單醯基甘油)，且可使用甘油二酯和/或甘油單酯，但從加工性能的觀點來看，優選甘油二酯。所用的偏甘油酯可以來源於天然物質或通過酯交換製備。
作為用於該本發明的油脂，可以使用中鏈脂肪酸甘油三酯和偏甘油酯的混合物，或可以使用中鏈脂肪酸的偏甘油酯。
在本發明中，並不特別限制將光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B溶解在油脂中的方法，且可通過常規的攪拌或混合過程完成。當使用包含這些化合物的萃取物或這些化合物的粗精製品時，由於在其中包含這些化合物以外的雜質，因此當這些化合物通過攪拌或混合過程溶解於油脂中時，通過比如過濾或離心過程合意地除去不溶於油脂的雜質。當使用這些化合物的純化製品時，可方便地獲得溶液。當使用包含這些化合物的萃取物或這些化合物的粗精製品時，其溶解於有機溶劑比如乙醇中，然後將所得溶液與油脂混合，並蒸除有機溶劑。
通常，粉末態的光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B不穩定，即使將這些化合物溶解於有機溶劑比如乙醇中仍無法改善這些化合物的穩定性。但是，這些化合物的穩定性可通過將它們溶解於本發明所用的油脂中而改善。此外，這些化合物在水中微溶，所述化合物的吸收率可通過溶解於本發明所用的油脂中而改善。
本發明的組合物可以包含適用於食物、飲料、藥物或化妝品的賦形劑。賦形劑可以是例如任何惰性的、適於口腔、腸內、透皮、皮下或腸胃外給藥的有機或無機物。賦形劑可包括但不限於水、明膠、阿拉伯膠、乳糖、微晶纖維素、澱粉、澱粉乙醇酸鈉、磷酸氫鉀、硬脂酸鎂、滑石粉以及膠體二氧化矽等。該組合物還可包含其它藥理學試劑和常規添加劑比如穩定劑、潤溼劑、乳化劑、調味劑以及緩衝劑等。
根據本發明用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物和/或用於抑制和/或改善體重增加的經加工的油脂組合物，可用於飲食品比如保健食物，具有保健要求的食物(用於特定用途[FOSHU]和具有營養功能要求的食物)，醫藥，非醫藥或化妝品等，對它們的形式沒有特殊要求。例如，具有至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物的油脂可單獨用於烹調、軟膠囊和洗劑。此外，它們可與油部分自由地混合，並因此按照目的與其它油脂混合以調節它們的物理性能。在這種情況下，另一種油脂優選是食物或醫藥，它們的類型和用量取決於個別產品所需的物理性能或各種情況比如應用它們時的溫度範圍，其性質比如粘度和熔點可通過調節它們的類型和用量而得以控制。例如可以使用植物油比如玉米油、菜籽油、高芥酸菜籽油(high erucic rapeseed oil)、豆油、橄欖油、紅花油、棉子油、向日葵油、米糠油、棕櫚油和棕櫚核油，動物油類比如魚油、牛油、豬油、乳脂以及蛋黃油，或以上述油類作為起始物質通過分餾法、氫化或酯交換獲得的油脂，或其混合油。
通過上述方法獲得的經加工的油脂組合物可用作液體油脂比如色拉油和油炸油以及用作塑料油脂比如人造黃油和起酥油，並且可用於油包水型乳液和水包油型乳液。經加工的油脂組合物可通過噴霧乾燥轉化成粉劑從而用作粉狀的油脂。用於由這些油脂作為初始物質生產的食物、飲料的經加工的油脂組合物包括各種類型的補充物，比如軟膠囊、硬膠囊、片劑、咀嚼劑、條帶和香料袋，糖果類比如口香糖、巧克力、硬糖、果凍、餅乾和薄脆餅乾，冷凍糖果比如冰淇淋和冰點心，飲料比如乳制飲料、軟飲料、維生素飲料和美容飲料，麵條比如切面(稠白麵條)、中國麵條、義大利麵和衝泡式中國麵條，清蒸魚糊製備的產品比如魚糕(清煮魚香腸)、圓筒狀魚糕(管狀的蒸烤魚糊卷)和魚肉山芋丸子(由底棲魚製成的清淡、疏鬆的餅塊)，和調料比如調味品、蛋黃醬和醬汁，以及麵包、火腿、湯、各種殺菌包裝食品和各種冷凍食品，且該用於食物和飲料的經加工的油脂組合物還可以用於寵物食物和家畜飼料。
為營養富集目的，可在使用的同時加入各種的維生素比如維生素A、C、D和E，或在使用的同時加入調味劑比如各種的鹽、香料、牛奶-相關物比如全脂奶粉、脫脂奶粉、發酵牛奶和乳脂。除了上述起始材料外，可使用用於常規水包油型乳狀液和油包水乳狀液的任何抗氧化劑和著色劑。
當經加工的油脂組合物用作軟膠囊製劑時，每個膠囊所包含的至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物總量約為0.01至150mg，優選約0.1至150mg，更優選約1至50mg。取決於不同目的，可進一步加入各種維生素比如維生素A、C、D和E，製劑基質物質比如蜂蠟以及乳化劑。在這種情況下，乳化劑包括但是不局限於，脂肪酸甘油酯，脂肪酸糖酯，去水山梨糖醇脂肪酸酯，聚山梨酸酯和磷脂。在這些化合物之中，優選脂肪酸甘油酯，並且更優選聚甘油脂肪酸酯。聚甘油脂肪酸酯特別優選二甘油一油酸或聚甘油-縮合的蓖麻油酸酯。
包含於根據本發明用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物、和/或用於抑制和/或改善體重增加的經加工的油脂組合物中的光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B，在經加工的油脂組合物的含量合意地為允許所攝入的這些化合物的總量為每成年人每天約0.01至10mg/kg(體重)，優選約0.1至1mg/kg，從而顯示它們抑制和/或改善與生活方式相關疾病和/或抑制和/或改善體重增加的效果。
但是，雖然有效量可根據年齡、體重、健康情況、對象病情的嚴重程度、攝入的方式和時間、哺乳動物對象的排洩比例或組合物的合用而改變，但可以通過本領域技術人員已知的方法經實驗或憑經驗確定。本發明提供了用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的方法，包括給予需要或不需要的哺乳動物對象本發明的組合物。可通過對象自身或保健人員對改善程度進行評價，可以主觀的(例如意見)或客觀的(例如可通過測試或診法測量)。
實施例在下文，本發明參考實施例進行詳細描述，但本發明不局限於實施例。
實施例19.85kg收穫於阿富汗的甘草(光果甘草)經乙醇萃取(於45℃在兩小時內使用49.25L萃取兩次)，然後濃縮所得萃取液得到4.4L濃縮液。進一步濃縮3L濃縮液，然後施用活性炭處理並濃縮得到811.2g包含疏水性甘草萃取物的乙醇溶液。剩下的濃縮液(1.4L)用於比較實施例1中。
將上述乙醇溶液629.2g(包含125.8g疏水性甘草萃取物)，與187.6g的Actar M-2(具有C8∶C10＝99∶1的脂肪酸組成的中鏈脂肪酸甘油三酯[MCT]，由Riken Vitamin製造)混合，然後在攪拌下將該混合物保持在80℃約1小時，減壓濃縮除去乙醇。抽濾濃縮物以分離不溶物，過濾後，進一步向濾液中加入45.7g的MCT，得到297.0g的MCT溶液作為經加工的油脂組合物。
將所得的MCT溶液1g，溶於HPLC用甲醇中形成總體積為100ml的溶液。在下麵條件下使用HPLC分析該溶液樣品，結果每克MCT溶液中所包含的光甘草素、光甘草定、光甘草酚和4′-鄰-甲基光甘草定的量分別為6.6mg、30.8mg、12.6mg和3.7mg(總量53.7mg；含量5.4重量％)。
HPLC分析條件使用了分析柱J’sphere ODS-H80，4.6×250mm(YMC)，柱溫為40℃。作為流動相，使用20mM磷酸水溶液和乙腈，流速為1ml/min，梯度條件為乙腈在開始分析後20分鐘內維持在35％，然後在20分鐘至75分鐘內線性升高至70％，在75分鐘至80分鐘內升高至80％。注射體積為20μl，檢測波長為254nm。各化合物的保留時間為光甘草素40.0分鐘、光甘草定50.2分鐘、光甘草酚58.3分鐘、4′-鄰-甲基光甘草定66.8分鐘。
比較實施例1將實施例1中所用的濃縮物蒸發至幹並研磨得到疏水性甘草萃取物，然後將其100mg溶解於HPLC用甲醇中形成總體積為100ml的溶液。使用HPLC分析該溶液樣品，結果每克疏水性甘草萃取物中所包含的光甘草素、光甘草定、光甘草酚和4′-鄰-甲基光甘草定的量分別為16.5mg、90.4mg、34.1mg和9.3mg。
比較實施例2將100mg實施例1中所用的乙醇溶液溶解於HPLC用甲醇中形成20ml的溶液。使用HPLC分析該溶液樣品，結果每克乙醇溶液中所包含的光甘草素、光甘草定、光甘草酚和4′-鄰-甲基光甘草定的量分別為3.4mg、18.7mg、7.1mg和1.9mg。
貯存穩定性測試於80℃的加速試驗中進行光甘草素、光甘草定、光甘草酚和4′-鄰-甲基光甘草定在上述MCT溶液中的貯存穩定性試驗。MCT溶液保存於80℃的水浴中，分別貯藏1、3和5小時後測定光甘草素、光甘草定、光甘草酚和4′-鄰-甲基光甘草定的含量。貯存穩定性表示為貯藏後的含量與貯藏前含量的比例，假定貯藏前各化合物的含量為100％。
貯存穩定性試驗的結果示於表1中。在該表中，化合物1表示光甘草素，化合物2表示光甘草定，化合物3表示光甘草酚，化合物4表示4′-鄰-甲基光甘草定。
經類似方式完成比較實施例1中疏水性甘草萃取物的貯存穩定性試驗。結果示於表2中。
經類似方式完成比較實施例2中乙醇溶液的貯存穩定性試驗。結果示於表3中。
表1

表2

表3

化合物1至4在MCT溶液中穩定，然而在疏水性甘草萃取物和乙醇溶液中，尤其是化合物1和2不穩定，且隨著貯藏時間的推移而含量減少。
根據這些結果，揭示了化合物1和2在疏水性甘草萃取物和乙醇溶液中不穩定，而化合物1至4在MCT溶液中穩定。該測試是80℃的加速試驗，由此揭示了它們在大約室溫的條件下可穩定存在幾天至幾個月。
實施例2從包含51.9g疏水性甘草萃取物和468.2g MCT的103.7g乙醇溶液中，經與實施例1相同的方法獲得497.4g的MCT溶液。該MCT溶液經HPLC分析，結果每克MCT溶液中所包含的光甘草素、光甘草定、光甘草酚和4′-鄰-甲基光甘草定的量分別為1.2mg、12.3mg、1.9mg和0.9mg(總量16.3mg；含量1.6重量％)。
實施例3對於減少內臟脂肪的作用和抑制體重增加的作用允許C57BL/6J小鼠(雌性，8周齡)不限量地接受高脂/高糖飲食8周以引起飲食-誘發的肥胖症。所用的高脂/高糖飲食是半固體純化飼料，包含25wt％酪蛋白、14.869wt％玉米澱粉、20wt％蔗糖、2wt％豆油、14wt％豬油、14wt％牛脂、5wt％纖維素粉、3.5wt％AIN-93礦物混合物、1wt％AIN-93維生素混合物、0.25wt％重酒石酸膽鹼、0.006wt％叔丁基對苯二酚和0.375wt％L-胱氨酸(Oriental Yeast Co.，Ltd.)。
此後，將小鼠分為4組(組A、B、C和D，分別含有10隻小鼠)，不限量向各組給予粉狀高脂/高糖飲食8周，其中所述粉狀高脂/高糖食物中已加入如表4所示的實施例2中的MCT溶液和MCT。如同MCT一樣，使用Actar M-2(Riken Vitamin)。
給予樣品後，在乙醚麻醉下打開各小鼠腹腔，通過腹部大動脈血液採血並處死小鼠後，移除腸繫膜脂肪、腎周脂肪和子宮周脂肪然後稱重。腸繫膜脂肪、腎周脂肪和子宮周脂肪的總重被認為是腹內脂肪重量。各組重量的變化和所測量的脂肪重量的變化示於表5中。
各組攝取飼料量沒有可識別的差異，但組B至D與組A相比可看出對體重增加的明顯抑制作用。比較組B至D與組A還可看出腸繫膜脂肪、腎周脂肪、子宮周脂肪和腹內脂肪的顯著減少。也就是說，向已由高脂/高糖引起飲食-誘發肥胖症的小鼠提供其中加入了至少1％實施例2中的MCT溶液的食物時，其顯示了對增加體重具有顯著的抑制作用並且對腹內脂肪的累積具有顯著的抑制作用。
由此，包含光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的MCT溶液，顯示了對體重增加有效的抑制作用，並且在攝取高脂/高糖食物等過量營養的情況下減少內臟脂肪。
表4

表5

均值±SE(n＝10)，*(P＜0.05)**(p＜0.01)實施例4軟膠囊劑的製備(1)通過旋轉式軟膠囊製造裝置將實施例1中的MCT溶液注射入明膠膜中得到含量為350mg的軟膠囊。每一軟膠囊中所包含的光甘草素、光甘草定、光甘草酚和4′-鄰-甲基光甘草定的量分別為2.3mg、10.8mg、4.4mg和1.3mg(總量18.8mg；含量5.4重量％)。
軟膠囊劑的製備(2)在57重量份的MCT(Actar M-2，Riken Vitamin Co.Ltd.)中，將3重量份的一縮二甘油單油酸酯(diglycerin monooleate)(DO-100V，Riken Vitamin)溶解，並在攪拌下向其中加入40重量份實施例1中的MCT溶液以製備均勻溶液。
通過旋轉式軟膠囊製造裝置將該溶液注射入明膠膜中得到含量為350mg的軟膠囊劑。每一軟膠囊中所包含的光甘草素、光甘草定、光甘草酚和4′-鄰-甲基光甘草定的量分別為0.9mg、4.3mg、1.8mg和0.5mg(總量7.5mg；含量2.1重量％)。
實施例5粉末油脂的製備在400重量份的水中，溶解70重量份的糊精和20重量份的酪蛋白鈉製得水相。
向製備的水相中，攪拌下加入10重量份實施例1中的MCT然後經勻化器乳化，所得乳劑經噴霧乾燥得粉末油脂。
實施例6人造黃油的製備向80重量份的硬棉花籽油(商標名Snow Light，Kanegafuchi ChemicalIndustry Co.，Ltd.)中加入20重量份的實施例1中的MCT溶液和10重量份的無鹽黃油(Yotsuba Nyugyo Co.，Ltd.)、0.2重量份的甘油單脂肪酸酯(商標名Emulgy MS，Riken Vitamin)和0.2重量份的卵磷脂，然後於60℃加熱溶解製備油相。
向84.9重量份已製備的油相中，攪拌下加入15.1重量份水，然後乳化20分鐘，此後冷卻並經配合器揉捏製備人造黃油。
實施例7濃乳(conc.milk)的製備將10重量份實施例1中的MCT溶液加熱至70℃以後，依次在其中溶解0.1重量份的卵磷脂和0.1重量份的聚甘油脂肪酸酯以製備油相。
單獨地，於60℃將25重量份的粉狀脫脂奶、0.1重量份的脂肪酸甘油酯和0.1重量份的脂肪酸糖酯溶於64.6重量份的水中製備水相。
預先乳化所製備的水相和油，相然後在145℃使用UHT消毒器滅菌4秒鐘。然後，真空冷卻該乳劑並在10MPa壓力下使用均質器攪勻然後用平板冷卻至10℃得到加工的濃乳。
實施例8蛋黃醬的製備向混合器中加入10重量份的醋、1重量份的食鹽、0.6重量份的糖、0.2重量份的芥末粉和0.2重量份的穀氨酸鈉，然後在15至20℃攪拌並混合以製備水相。然後，將10重量份的蛋黃加入至68重量份的米白色壓榨油和10重量份實施例1MCT溶液中，然後在攪拌下乳化該混合物製備乳劑(10至15℃)，在15至20℃攪拌下將該乳劑逐漸加入上述水相得到預乳化混合物。然後，使用膠體磨乳化該混合物得到蛋黃醬。
工業實用性根據本發明，可提供用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物(加工的油脂組合物或加工的包含油類和脂類的組合物)，和/或用於抑制和/改善體重增加的經加工的油脂組合物，其可用於食物和飲料比如保健食品、具有保健要求的食物(用於特定用途[FOSHU]的使用和具有營養功能要求的食物)、醫藥、非醫藥、化妝品等。該經加工的油脂可有效改善胰島素耐受性，預防和/或改善與生活方式相關疾病比如內臟脂肪肥胖症、II型糖尿病、高脂血症和高血壓，和/或抑制和/或改善肥胖症即體重增加。
權利要求
1.一種用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的經加工的油脂組合物，其中在油脂中溶解有至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷，其中這些化合物的總量為基於該組合物重量的約0.01至30重量％。
2.一種用於抑制和/或改善體重增加的經加工的油脂組合物，其中在油脂中溶解有至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷，其中這些化合物的總量為基於該組合物重量的約0.01至30重量％。
3.一種用於改善胰島素耐受性的經加工的油脂組合物，其中在油脂中溶解有至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷，其中這些化合物的總量為基於該組合物重量的約0.01至30重量％。
4.根據權利要求1至3任一項的經加工的油脂組合物，其中所包含的選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B中至少一種的化合物或其鹽、酯或糖苷的量，應使得每成年人每天對這些化合物總量的攝取量約為0.01至10mg/kg體重。
5.根據權利要求1至4任一項的經加工的油脂組合物，其中油脂包含脂肪酸甘油酯，該脂肪酸甘油酯包含中鏈脂肪酸甘油三酯和/或偏甘油酯。
6.根據權利要求1至5任一項的經加工的油脂組合物，其中油脂包含脂肪酸甘油酯，該脂肪酸甘油酯包含約50重量％或更多的中鏈脂肪酸甘油三酯。
7.根據權利要求1至5任一項的經加工的油脂組合物，其中油脂包含脂肪酸甘油酯，該脂肪酸甘油酯包含約50重量％或更多的偏甘油酯。
8.根據權利要求1的經加工的油脂組合物，其中與生活方式相關疾病包括選自內臟脂肪肥胖症、II型糖尿病、高脂血症和高血壓中的至少一種疾病。
9.根據權利要求1的經加工的油脂組合物，其中與生活方式相關疾病是內臟脂肪肥胖症和/或II型糖尿病。
10.根據權利要求1至9任一項的經加工的油脂組合物，其為飲食用。
11.根據權利要求1至9任一項的經加工的油脂組合物，其為醫藥用。
12.根據權利要求1至9任一項的經加工的油脂組合物，其用於美容。
13.一種軟膠囊製劑，其包含被包封於其中的根據權利要求1至12的經加工的油脂組合物。
14.根據權利要求13的軟膠囊製劑，其包含至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷，每一膠囊中這些化合物的總量為約0.01至150mg。
15.根據權利要求1至14任一項的經加工的油脂組合物，其中至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷是從光果甘草中獲得的。
16.用於製備根據權利要求1至15任一項的組合物的方法，其包括將至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′-羥基-4′-鄰-甲基光甘草定、4′-鄰-甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物或其鹽、酯或糖苷溶解於油脂中。
17.一種用於預防和/或改善哺乳動物與生活方式相關疾病的方法，其包括向需要其的哺乳動物對象給予有效量的根據權利要求1至15任一項的組合物。
全文摘要
本發明的目的在於提供一種用於預防和/或改善與生活方式相關疾病的組合物，其包含至少一種選自光甘草素、光甘草定、光甘草酚、3′－羥基－4′－鄰－甲基光甘草定、4′－鄰－甲基光甘草定和歐甘草素B的化合物，這些化合物具有PPARγ配體活性，並可有效地改善胰島素耐受性以及預防和/或改善與生活方式相關疾病比如內臟脂肪肥胖症、II型糖尿病、高脂血症和高血壓，其可用於食物和飲料(比如保健食物和保健功能食物)、藥物、非藥物、化妝品等；或提供一種用於抑制和/或改善體重增加的組合物。
文檔編號A61K31/352GK1777420SQ20048001021
公開日2006年5月24日 申請日期2004年7月14日 優先權日2003年7月31日
發明者荒井直樹, 岸田秀之, 池原俊則, 前辰正 申請人:株式會社鍾化