一種香蜂草苷的製備方法
2023-05-28 11:34:41 2
專利名稱：一種香蜂草苷的製備方法
技術領域：
本發明屬於天然產物分離領域，涉及一種香蜂草苷的製備方法，尤其是涉及一種應用大孔樹脂色譜和高效液相製備色譜法製備香蜂菜苷的方法。
背景技術：
風輪菜為唇形科風輪菜屬植物，1995版中國藥典以「斷血流」名稱收載。風輪菜具有清熱解毒、止血活血的功效，可用於治療崩漏、子宮肌瘤出血、尿血、牙齦出血、創傷出血等症。風輪菜主要含黃酮、黃酮苷及三萜皂苷等化合物，其中黃酮類和皂苷類化合物為其主要活性成分。香蜂草苷為雙氫黃酮苷類物質，臨床廣泛用於各種出血症的預防和治療。中國專利(公開號為CN1872083A) 「香蜂草苷在製備治療或預防出血性疾病的藥物中的應用」， 該發明提供了香蜂草苷在製備治療或預防出血性疾病的藥物中的應用，具體地提供了香蜂草苷在製備治療或預防內出血、陰道出血、消化道出血、病理性出血及外出血的藥物中的應用。目前，尚未見香蜂草苷的提取分離工藝方面的相關報導。
發明內容
本發明要解決技術問題是提供一種香蜂草苷的製備方法，該方法所用試劑無毒性，對環境無汙染，製得產品含量高。本發明是通過以下技術方案實現的一種香蜂草苷的製備方法，其特徵在於包含以下步驟(1)以風輪菜為原料，粉碎，加5-8倍量50-75 %的乙醇溶液超聲提取2_4次，過濾，得到提取液；(2)將步驟⑴中得到的提取液濃縮至無醇味，上大孔樹脂柱富集，先用蒸餾水洗脫雜質，再用4-6BV60%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，乾燥得到粗品；(3)將步驟(2)中得到的粗品用乙醇溶解，微濾，用製備型高效液相色譜儀進行分離純化，紫外在線監測，檢測波長為282nm，收集目標流分，濃縮至小體積，放置結晶；(4)將步驟(3)中得到的結晶用乙醇重結晶，濾出結晶，乾燥即得香蜂草苷。所述步驟⑵中大孔樹脂可選AB-8、SPD-300和LSA-40中的一種。所述步驟(3)中微濾所用濾膜的孔徑為0. 45 μ m,高效液相色譜以C8或C18反相鍵合矽膠為固定相，55-65 %乙腈水溶液為流動相。本發明的積極效果是(1)所用的反相高效液相製備色譜，具有分離度高、重現性好、分離時間短、製備量大等優點，分離的到產品純度可達98 %以上。(2)本發明使用的溶劑系統較為簡單，還具有低成本，回收率高的優點。
下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施方式。
具體實施例方式實施例1 以風輪菜為原料，取2kg，粉碎，加8倍量75%的乙醇溶液超聲提取3次，過濾，得到提取液，濃縮至無醇味，上LSA-40大孔樹脂柱富集，先用蒸餾水洗脫雜質，再用6BV60 % 乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，乾燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微濾膜過濾，用製備型高效液相色譜儀進行分離純化，以C18反相鍵合矽膠為固定相，55%乙腈水溶液為流動相，紫外在線監測，檢測波長為282nm，收集目標流分，濃縮至小體積，放置結晶，過濾，結晶用乙醇回流溶解，放冷結晶，濾出結晶，乾燥即得香蜂草苷3. 6g，含量為98. 3%。實施例2:以風輪菜為原料，取2kg，粉碎，加5倍量55 %的乙醇溶液超聲提取4次，過濾，得到提取液，濃縮至無醇味，上AB-8大孔樹脂柱富集，先用蒸餾水洗脫雜質，再用4BV60 %乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，乾燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微濾膜過濾，用製備型高效液相色譜儀進行分離純化，以C8反相鍵合矽膠為固定相，65%乙腈水溶液為流動相，紫外在線監測，檢測波長為282nm，收集目標流分，濃縮至小體積，放置結晶，過濾，結晶用乙醇回流溶解，放冷結晶，濾出結晶，乾燥即得香蜂草苷3. Ig,含量為98. 2%。實施例3 以風輪菜為原料，取5kg，粉碎，加8倍量50%的乙醇溶液超聲提取2次，過濾，得到提取液，濃縮至無醇味，上AB-8大孔樹脂柱富集，先用蒸餾水洗脫雜質，再用4BV60%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，乾燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微濾膜過濾，用製備型高效液相色譜儀進行分離純化，以C18反相鍵合矽膠為固定相，60%乙腈水溶液為流動相，紫外在線監測，檢測波長為282nm，收集目標流分，濃縮至小體積，放置結晶，過濾，結晶用乙醇回流溶解，放冷結晶，濾出結晶，乾燥即得香蜂草苷9. 7g，含量為98. 7%。實施例4 以風輪菜為原料，取5kg，粉碎，加6倍量65%的乙醇溶液超聲提取2次，過濾，得到提取液，濃縮至無醇味，上SPD-300大孔樹脂柱富集，先用蒸餾水洗脫雜質，再用5BV60% 乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，乾燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微濾膜過濾，用製備型高效液相色譜儀進行分離純化，以C8反相鍵合矽膠為固定相，60%乙腈水溶液為流動相，紫外在線監測，檢測波長為282nm，收集目標流分，濃縮至小體積，放置結晶，過濾，結晶用乙醇回流溶解，放冷結晶，濾出結晶，乾燥即得香蜂草苷10. 4g，含量為98. 3%。實施例5 以風輪菜為原料，取10kg，粉碎，加5倍量70%的乙醇溶液超聲提取2次，過濾，得到提取液，濃縮至無醇味，上LSA-40大孔樹脂柱富集，先用蒸餾水洗脫雜質，再用6BV60% 乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，乾燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微濾膜過濾，用製備型高效液相色譜儀進行分離純化，以C8反相鍵合矽膠為固定相，65%乙腈水溶液為流動相，紫外在線監測，檢測波長為282nm，收集目標流分，濃縮至小體積，放置結晶，過濾，結晶用乙醇回流溶解，放冷結晶，濾出結晶，乾燥即得香蜂草苷26. 9g，含量為98. 8%。
權利要求
1.一種香蜂草苷的製備方法，其特徵在於包含以下步驟(1)以風輪菜為原料，粉碎，加5-8倍量50-75%的乙醇溶液超聲提取2-4次，過濾，得到提取液；(2)將步驟(1)中得到的提取液濃縮至無醇味，上大孔樹脂柱富集，先用蒸餾水洗脫雜質，再用4-6BV60%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，乾燥得到粗品；(3)將步驟(2)中得到的粗品用乙醇溶解，微濾，用製備型高效液相色譜儀進行分離純化，收集目標流分，濃縮至小體積，放置結晶；(4)將步驟(3)中得到的結晶用乙醇重結晶，濾出結晶，乾燥即得香蜂草苷。
2.根據權利要求1所述的一種香蜂草苷的製備方法，其特徵在於所述步驟(2)中大孔樹脂可選AB-8、SPD-300和LSA-40中的一種。
3.根據權利要求1所述的一種香蜂草苷的製備方法，其特徵在於所述步驟(3)中微濾所用濾膜的孔徑為0. 45 μ m,高效液相色譜以反相鍵合矽膠為固定相，乙腈水溶液為流動相。
全文摘要
本發明涉及一種香蜂草苷的製備方法，方法包括以風輪菜為原料，粉碎，加乙醇溶液提取，提取液濃縮至無醇味，上大孔樹脂柱富集，先用蒸餾水洗脫雜質，再用4-6BV60％乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，乾燥得到粗品，粗品採用製備型高效液相色譜儀進行分離純化，收集目標流分，濃縮至小體積，放置結晶，乙醇重結晶，濾出結晶，乾燥即得香蜂草苷。本發明獲得的產品純度可達到98％以上。
文檔編號C07H17/07GK102234301SQ20111011785
公開日2011年11月9日 申請日期2011年5月6日 優先權日2011年5月6日
發明者萬冬梅, 劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司