東方百合種球的試管繁育方法
2023-05-28 00:16:46
專利名稱：東方百合種球的試管繁育方法
技術領域：
本發明涉及花卉組培苗方法，特別是東方百合種球的試管繁育。
背景技術：
東方百合是百合科百合屬的多年生球根類花卉，其花大美麗、色彩豐富、香味濃鬱，具有較高的觀賞價值和經濟價值，是世界四大切花之一。我國切花產業中東方百合所佔比重越來越大，然而多數種球仍依靠進口，質量參差不齊，嚴重製約我國百合鮮切花的發展。利用組織培養技術結合莖尖脫毒可生產出優質無病毒種球，然而我國百合的種球國產化生產仍進展緩慢，現有的種球繁育技術一般是先通過組織培養生產百合種苗，然後在大田進行3-4年的種球繁育，達到商品種球的規格。植物組織培養(Tissue culture)是指用無菌方法使植物體的離體(in vitro)器官、組織和細胞在人為提供的條件下生長和發育的所有培養技術的總稱，也稱之為離體培養(In vitro culture)或試管培養。在百合組培中，常常因為培養出的當年試管鱗莖周徑小、重量輕，導致栽種成活率低，僅長葉不抽莖，種植3-4年後才能達到商品球的規格和標準。如果提高百合組培小鱗莖栽種當年的抽莖率，則可以縮短繁殖栽培年限。因此，通過改善培養條件促進組培小鱗莖在瓶內的膨大和增重，是百合組培小鱗莖出瓶栽種後快速生長和提高抽莖率的關鍵因子。現有研究研究結果表明鱗片不同部位誘導小鱗莖的能力從強到弱依次為基部> 中部>尖部，中層>外層> 內層。小鱗莖誘導的最佳培養基為MS+2.0mg/L 6-BA+O. 2mg/L NAA。在一定濃度範圍內，隨蔗糖和PP333(—種生長調節劑)濃度的增加，小鱗莖的增殖速度加快，二者最適濃度分別為9%和15mg/L。黑暗較光照利於小鱗莖的增殖。A、鱗片的選擇和消毒程序；選取東方百合種球中層鱗片，用牙刷蘸上洗衣粉除去鱗片表面雜質，用清水衝洗乾淨後，在超淨工作檯上先用70%酒精處理45s，無菌水衝洗3-4遍，0. 1 %升汞消毒13min， 無菌水衝洗5-7遍後備用。(用於建立百合的無菌體系)B、鱗片的誘導；將消毒過的鱗片切分成1 cm X 1 cm的小方塊，內側朝上接種於MS+2. Omg/L 6-BA+O. 2mg/L NAA+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的誘導培養基上進行鱗片誘導，誘導率達到98% 以上，平均每片鱗莖誘導不定芽3. 3個。(用於從鱗片上誘導小鱗莖)C、小鱗莖的增殖；30-40d 後將誘導出來的小鱗莖轉接至 MS+1. 0-2. 0mg/L6_BA+l. Omg/L KT+0. 2mg/ L NAA+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的增殖培養基上進行小鱗莖增殖，黑暗培養，增殖係數達到 6. 01。D、試管內成球。在無菌條件下將叢芽分割成單個芽，剪去上部葉片，接種於2MS+6-BA 1. Omg/ L+NAA 0. 2mg/L+蔗糖70g/L+瓊脂7g/L的成球培養基中誘導試管成球，試管成球率96%，鮮重平均增重12. 8倍，平均直徑增加4. 5倍。現有技術的缺點1、百合組培苗移栽成活率低；2、由於組培苗鱗莖小，需要在大田繁育的周期長；3、生產成本高，繁育過程易受自然環境的影響。
發明內容
本發明的目的在於克服上述缺陷，提供一種東方百合種球的試管繁育方法。本發明的方案是包括①鱗片的選擇和消毒程序；②鱗片的誘導；③小鱗莖的增殖；④試管的成球；其特徵在於鱗片的誘導工序是將消毒過的鱗片切取靠近基部1-1. 5cm 長的鱗片，內側朝上接種於MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的誘導培養基上進行鱗片誘導；小鱗莖的增殖工序是30-40d後將誘導出來的小鱗莖轉接至MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的增殖培養基上進行小鱗莖增殖，正常光照培養；兩個月以後進入試管的成球，將小鱗莖轉入MS+6-BA 0. 2mg/L+NAA0. 5mg/L+CCC 150mg/L+蔗糖80g/L+瓊脂7g/L成球培養基中，培養基PH值均為5. 8，培養條件均為光照強度 2000-22001x，14h/d，溫度 23_25°C，直至成球。本發明的優點在於其一，在百合成球培養基中通過添加矮壯素(CCC)，可明顯提高種球得直徑和鮮重；其二，利用試管內成球技術可明顯縮短東方百合種球在大田的生長周期，提高種球移栽成活率，加快百合種苗的抽莖，縮短東方百合商品種球的繁育周期，從而降低生產成本。
具體實施例方式東方百合試管內種球繁育技術涉及東方百合組織培養技術，包括A、鱗片的選擇和消毒程序；選取東方百合種球中層鱗片，用牙刷蘸上洗衣粉除去鱗片表面雜質，用清水衝洗乾淨後，在超淨工作檯上先用無菌水衝洗5-7遍，70%酒精處理45s，無菌水衝洗3-4遍， 0. 升汞消毒13min，無菌水衝洗5-7遍後備用，汙染率小於2%。(用於建立百合的無菌體系)B、鱗片的誘導；將消毒過的鱗片切取靠近基部1-1. 5cm長的鱗片，內側朝上接種於MS+6-BA 2mg/ L+NAA 0. 2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的誘導培養基上進行鱗片誘導，誘導率達到100%。 (用於從鱗片上誘導小鱗莖)C、小鱗莖的增殖；30-40d後將誘導出來的小鱗莖轉接至MS+6-BA 2mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖40g/L+ 瓊脂7g/L的增殖培養基上進行小鱗莖增殖，正常光照培養，增殖係數達到5. 9，試管苗長勢強健，葉色濃綠。正常光照培養有利於植株對營養元素的吸收和利用。(用於小鱗莖增殖， 從而滿足工廠化的規模要求)D、試管內成球(創新點成球培養基中添加矮壯素CCC(一種生長調節劑)，可明顯增加種球直徑和鮮重)。待種球數量達到預期值時，將小鱗莖轉入MS+6-BA 0. 2mg/L+NAA 0. 5mg/L+CCC 150mg/L+蔗糖80g/L+瓊脂7g/L成球培養基中，試管成球率100%，鮮重平均增重13. 5倍，平均直徑增加6. 1倍。(用於試管成球，提高試管種球的直徑和鮮重，從而提高種苗移栽成活率，並加快百合種球抽莖)培養基PH值均為5. 8，培養條件均為光照強度2000-22001x，14h/d，溫度23_25°C。其原理為通過影響試管成球率及質量的多個因素進行試驗研究，主要因素包括 無機鹽濃度、激素種類及濃度、蔗糖濃度、矮壯素(CCC)濃度以及有無光照。評價指標包括 成球率、鱗莖直徑和鱗莖鮮重。試驗研究結果顯示，無機鹽濃度對東方百合試管內成球率、 鱗莖直徑及鱗莖鮮重均無顯著影響。細胞分裂素6-BA在一定範圍內隨濃度的提高，鱗莖的直徑和鮮重也增加，但同時鱗莖的畸形率也相應提高；細胞生長素NAA對於東方百合的成球率、鱗莖直徑及鮮重有顯著影響。蔗糖濃度對東方百合的試管成球率有顯著影響。蔗糖含量越高、所含澱粉也越多，它分解的糖元有利於細胞的生長發育，使得鱗莖的直徑和鮮重也增加。本技術首次利用矮壯素(CCC)來促進百合鱗莖生長，研究結果顯示矮壯素對於控制東方百合植株高度有顯著作用，同時也有利於鱗莖的生長和膨大。本發明英文名詞說明MS 組培中用到的一種基本培養基(包含大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分)6-BA 6-苄氨基嘌呤，一種植物細胞分裂素NAA:萘乙酸，一種植物細胞生長素PP333 多效唑，植物生長調節劑KT 6-糖基氨基嘌呤，一種植物細胞分裂素CCC 矮壯素，一種植物生長調節劑Lx 勒克斯，光照強度單位
權利要求
1.東方百合種球的試管繁育方法，包括①鱗片的選擇和消毒程序；②鱗片的誘導；③ 小鱗莖的增殖；④試管的成球；其特徵在於鱗片的誘導工序是將消毒過的鱗片切取靠近基部1-1. 5cm長的鱗片，內側朝上接種於MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. 2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的誘導培養基上進行鱗片誘導；小鱗莖的增殖工序是30-40d後將誘導出來的小鱗莖轉接至MS+6-BA 2mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的增殖培養基上進行小鱗莖增殖，正常光照培養；兩個月以後進入試管的成球，將小鱗莖轉入MS+6-BA 0. 2mg/L+NAA 0. 5mg/L+CCC 150mg/L+蔗糖80g/L+瓊脂7g/L成球培養基中，培養基PH值均為5. 8，培養條件均為光照強度2000-22001x，14h/d，溫度23_25°C，直至成球。
全文摘要
東方百合種球的試管繁育方法，涉及涉及花卉組培苗方法。包括①鱗片的選擇和消毒程序；②鱗片的誘導；③小鱗莖的增殖；④試管的成球；鱗片的誘導是切取鱗片基部接種於MS+6-BA 2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的誘導培養基上；增殖是30-40d後將小鱗莖轉接至MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的增殖培養基上增殖；兩個月後轉入MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+CCC 150mg/L+蔗糖80g/L+瓊脂7g/L成球培養基中，培養基PH值為5.8，光照強度2000-2200lx，14h/d，溫度23-25℃直至成球。優點在於明顯提高種球得直徑和鮮重，提高種球移栽成活率，縮短東方百合商品種球的繁育周期，從而降低生產成本。
文檔編號A01H4/00GK102499082SQ20111032650
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月24日 優先權日2011年10月24日
發明者鍾海豐, 黃宇翔 申請人:清流縣鴻翔農莊農業發展有限公司