骨質疏鬆症的診斷和/或骨質疏鬆症骨折危險的預測方法
2023-07-01 06:08:41
專利名稱：骨質疏鬆症的診斷和/或骨質疏鬆症骨折危險的預測方法
技術領域：
本發明涉及一種能夠迅速、簡便並且正確地對骨質疏鬆症進行診斷和/或對骨質疏鬆症骨折危險進行預測的方法。
在骨密度減少較輕度時，並不立刻出現臨床症狀，但隨著減少程度的變大，也就變得越容易引起骨折或骨變形。脊椎容易引起骨折或骨變形，而出現由於錐體的壓迫骨折或脊椎變形引起的腰痛等症狀。
另外，大腿骨頸部或骨盆的骨折，有時會使患者失去運動功能，從而對以後的生活帶來很大影響。
現在，骨質疏鬆症的診斷，是通過X線照相等物理學方法進行，但是該方法須要大規模的診斷裝置，並且不僅具有由於使用X線產生的安全性問題，還存在只有在骨密度明顯減少的發病後期才能有效診斷的缺點。
所以，通過對以絕經後骨質疏鬆症或老年性骨質疏鬆症為代表的各種骨質疏鬆症進行早期發現並且診斷、從而對骨折危險進行預測，有望確立可以有效治療的迅速、簡便並且準確的方法。
近年，通過從血液或尿中檢測與骨代謝有關的因子，並且以此為骨代謝標記進行測定，從而使診斷骨質疏鬆症的方法獲得了急速的進步。骨代謝標記與骨吸收標記和骨形成標記有很大區別，但是，其中已知骨基質主要成分的I型膠原交聯成分的分解產物Pyridinoline(Pyr)、去氧Pyridinoline(D-Pyr)、I型膠原C末端端肽片斷(CTx)、I型膠原C末端端肽片斷(ICTP)、I型膠原N端端肽片斷(NTx)、破骨細胞產生的酒石酸抵抗性酸性磷酸酯酶(TRAP)作為骨吸收標記有效。但是，人們正在探索在特異性和靈敏度方面更優良的骨吸收標記。
本發明發明人等鑑於上述問題，進行了種種探討，結果發現，尿中的γ-穀氨醯轉肽酶(以下簡稱為γ-GTP)可以用作骨吸收標記，γ-GTP越多，骨密度就越低，骨質疏鬆症處於發病期，或者通過給予骨質疏鬆症的治療藥發現使γ-GTP減少和骨密度的恢復(增加)，通過利用這種相關性，發現了能夠迅速、簡便並且正確地對骨質疏鬆症進行診斷和/或對骨質疏鬆症骨折危險進行預測的方法。
γ-GTP已知為作為特異性的反映肝膽道類疾病的標記的轉移酶。在特開平10-87507號公報中公開了γ-GTP具有促進破骨細胞分化的活性，但是，本次發現尿中的γ-GTP作為特異骨吸收標記發揮作用是不能根據所述公報公開的內容而完全預知的以外發現。
本發明是根據所述見解而完成的，本發明的骨質疏鬆症的診斷和/或骨質疏鬆症骨折危險的預測方法，如權利要求1所述，其特徵在於，測定尿中的γ-GTP。
另外，權利要求2所述的方法是在權利要求1所述的方法中，其特徵在於，在尿中添加γ-GTP活性測定用基質，通過由顯色程度測定γ-GTP的活性，從而測定γ-GTP。
另外，本發明的骨密度的監控方法，如權利要求3所述，其特徵在於，測定尿中的γ-GTP。
另外，本發明，如權利要求4所述，其特徵在於，將尿中的γ-GTP作為骨吸收標記使用。
另外，本發明的試劑，如權利要求5所述，其特徵在於，至少含有γ-GTP活性測定用基質的、用於對骨質疏鬆症進行診斷和/或對骨質疏鬆症骨折危險進行預測的試劑。
圖2是表示治療3個月後兩者的相關圖。
圖3是表示治療6個月後兩者的相關圖。
圖4是表示治療12個月後兩者的相關圖。
圖5是表示治療中的尿中γ-GTP和尿中NTx的推移圖。
本發明的骨質疏鬆症的診斷和/或骨質疏鬆症骨折危險的預測方法，其特徵在於，測定尿中的γ-GTP。
對於尿中的γ-GTP的測定方法無特殊的限制，可以根據利用對γ-GTP的特異抗體的酶免疫定量法(EIA)、放射性免疫定量法(RIA)、利用高效液相色譜法(HPLC)的定量方法等，其中優選通過在尿中添加γ-GTP活性測定用基質，由顯色程度來測定γ-GTP活性的方法(酶法)。根據酶法，由於無須對檢體進行前處理等，在短時間內可以確定結果，所以具有能夠簡便、快速測定的優點。另外，用於該方法的測定試劑作為肝膽道類疾病等的診斷試劑有各種市售品，在本發明中，利用該市售的測定試劑，可以以與肝膽道類疾病等的診斷中的操作方法(用法、用量)相同的方法測定。γ-GTP的測定值如果須要可以根據尿中的肌酸酐值進行修正。
作為γ-GTP活性測定用基質，可以使用所述市售診斷試劑中的各種合成基質，例如，L-γ-谷醯基對硝基醯基苯胺、L-γ-谷醯基-3-羧基-4-硝基醯基苯胺、L-γ-谷醯基-3-羧基-4-羥基醯基苯胺、L-γ-谷醯基-對-N-乙基-N-羥基乙基氨基醯基苯胺、L-γ-谷醯基-3，5-二溴-4-羥基醯基苯胺、L-γ-谷醯基-α-萘胺、L-γ-谷醯基-3-羧基-1，4-亞苯基二胺等。另外，作為L-谷醯基的受體物質通常添加甘氨醯甘氨酸。
由γ-GTP活性的顯色程度的測定，根據由γ-GTP活性測定用基質游離產生的顯色物質、由基質游離產生的物質產生的顯色物質的顯色程度進行測定，為能夠進一步高精度地測定，優選根據比色法測定。比色測定可以以與肝膽道類疾病等的診斷中的比色測定相同的方法進行測定。如果使用各種自動分析裝置，可以在短時間內對大量的檢體進行處理。
為使測定簡便，也可以視覺測定。此時，由於尿為檢體，顯色優選黃色以外的顏色。作為能夠製作黃色以外顯色的基質，可以舉出L-γ-谷醯基-3，5-二溴-4-羥基醯基苯胺(3，5-二溴-4-羥基醯基苯胺(DBHA)游離，通過單酚單氧酶的作用，而DBHA與N-甲基-N-(3-甲基苯基)-N』-琥珀醯基二胺氧化縮和生成綠色色素)。
在以上方法中，若測定尿中的γ-GTP，由於γ-GTP具有骨吸收標記的作用，所以γ-GTP越多，說明骨密度越低，骨質疏鬆症正處於發病期。另一方面，由於γ-GTP的減少意味著骨密度的恢復(增加)，所以症狀正處於改善期。所以，利用該相關性，可以迅速、簡便並且正確地對骨質疏鬆症進行診斷和/或對骨質疏鬆症骨折危險進行預測。另外，對於各個患者通過多次測定尿中的γ-GTP來對骨密度進行監測，從而可以容易地對骨質疏鬆症治療藥的選擇或者其效果進行判定。以下在實施例中對本發明進行詳細說明，但本發明不受以下限制。
(方法)以無肝膽道類疾病的未對骨質疏鬆症進行治療的絕經女性35人為對象，在徵求同意的前提下測定血清和尿中的γ-GTP(各個測定根據將關東化學社制的Merck Liquid γ-GT J用作測定試劑的酶法，根據操作程序利用日立製作所社制7170型自動分析裝置進行測定)。
另外，作為對照的骨吸收標記，將尿中的I型膠原N末端端肽片斷(NTx)用作對照的骨形成標記並測定血清中的鹼性磷酸酯酶(ALP)(前者的測定根據將持田製藥社制Osteomark用作測定試劑的ELISA法，後者的測定根據將和光純藥工業社制L型EWaKoATP·J用作測定試劑的酶法進行測定)。
另外，用Lunar社制DPX對腰椎和大腿骨頸部的密度進行測定。從所述測定的時間點，對每個人在12個月期間作為激素補充療法的治療，每日單獨服用結合型雌激素0.625mg或每日服用它和甲羥孕酮2.5mg，在治療開始後3個月、6個月、12個月測定血清中和尿中的γ-GTP、尿中的NTx、血清中的ALP。另外，在治療開始後6個月和12個月測定骨密度。
(結果)發現根據激素補充療法的治療中，尿中γ-GTP和尿中NTx之間有顯著的正相關(參照
圖1～圖4)。兩者顯示相同的推移，在治療12個月後尿中的γ-GTP平均減少21.4％，尿中的NTx平均減少37.7％。
骨密度在治療12個月後，腰椎骨密度(L2-L4BMD)平均增加6.0％，大腿骨頸部骨密度(Femoral neck BMD)平均增加1.7％(參照圖5)。另外，血清ALP在治療12個月後平均減少18.5％。血清中γ-GTP在治療中無顯著變化。
由以上結果可知，尿中的γ-GTP越多，骨密度就越低；在激素補充療法中測定的γ-GTP的減少和骨密度的恢復(增加)一致；另外，尿中的γ-GTP與可以有效地作為骨吸收標記的尿中的NTx顯示相同的推移；所以尿中的γ-GTP可以有效地作為骨吸收標記。
如前述，γ-GTP由於具有促進破骨細胞的分化作用，所以尿中的γ-GTP可以有效地用作具有現存骨吸收標記中不具有的性質的標記。
根據本發明，提供了尿中作為新型的骨吸收標記的γ-GTP，通過測定尿中的γ-GTP可以迅速、簡便並且準確地對骨質疏鬆症進行診斷和/或對骨質疏鬆症骨折危險進行預測。
權利要求
1.一種骨質疏鬆症的診斷和/或骨質疏鬆症骨折危險的預測方法，通過測定尿中的γ-穀氨醯轉肽酶(γ-GTP)進行診斷和預測。
2.根據權利要求1所述的方法，通過在尿中添加γ-GTP活性測定基質，由顯色程度測定γ-GTP的活性，從而測定γ-GTP。
3.一種骨密度的監測方法，通過測定尿中的γ-GTP進行監測。
4.尿中的γ-GTP作為骨吸收標記的使用。
5.一種試劑，至少含有γ-GTP活性測定用基質，並且用於對骨質疏鬆症進行診斷和/或對骨質疏鬆症骨折危險進行預測。
全文摘要
以提供新型的骨吸收標記為基礎，從而提供一種能夠迅速、簡便並且正確地對骨質疏鬆症進行診斷和/或對骨質疏鬆症骨折危險進行預測的方法，其特徵在於，測定尿中的γ－GTP。
文檔編號G01N33/50GK1454263SQ01815376
公開日2003年11月5日 申請日期2001年9月12日 優先權日2000年9月14日
發明者新飯田俊平, 真田光博, 石塚保行 申請人:株式會社應用細胞生物工程