紫杉醇抗腫瘤藥物的新用途的製作方法

2023-06-02 08:44:21 1

專利名稱：紫杉醇抗腫瘤藥物的新用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及紫杉醇抗腫瘤藥物的用途，特別涉及紫杉醇抗腫瘤藥物在治療原發性肝細胞肝癌中的新用途。
紫杉醇(Taxol)是從紫杉樹皮中分離提純的天然產物，是一種作用於微管的具有獨特作用機制的新的抗腫瘤藥物。1983-1987年完成Ⅰ期臨床試驗，1987-1989年完成Ⅱ期臨床試驗。目前已成為治療卵巢癌和乳腺癌的一線藥物。美國一個婦瘤研究部門(GOG)對394名卵巢癌患者的Ⅲ期臨床試驗表明，紫杉醇合用順鉑，比環磷醯胺合用順鉑的緩解率更高(分別為77％和62％)。因此，GOG把紫杉醇加順鉑作為治療晚期卵巢癌的標準方案。美國另一組Ⅱ期臨床試驗表明，對未經治療的晚期卵巢癌患者，紫杉醇單獨應用即有約60％的緩解率(Ann Med．1995，27127-130)。還有報告稱未經治療的或對阿黴素無效的轉移性乳癌應用紫杉醇可取得較好療效(緩解率分別為62％、20％-48％)，前者甚至可以完全緩解(BreastCancer Res Treat．1995，3327-37)。除卵巢癌和乳腺癌外，紫杉醇還對多種腫瘤具有較好的療效，單獨或聯合用藥對非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部腫瘤、急性白血病等也有較好療效。由於在治療卵巢癌、乳腺癌等腫瘤所取得的成功，它被譽為90年代抗癌藥物的三大進展之一。一向認為肝癌細胞對化療藥物不敏感，肝癌在歐美的發病率又較低，故對紫杉醇治療原發性肝細胞肝癌的可行性研究很少，儘管西德癌症中心已完成紫杉醇治療肝癌的Ⅰ期臨床研究，並且推薦Ⅱ期臨床的劑量為2．43mg／kg(90mg／m2)，但無療效報告(Eur J Cancer．1998，341290-1292)。我國臺灣的Ⅱ期臨床又報導紫杉醇在劑量為4．73mg／kg(175mg／m2)時對原發性肝細胞肝癌無顯著療效(Br J Cancer．1998，78∶34-39)。故迄今尚無任何數據支持紫杉醇可有效地用於治療原發性肝細胞肝癌。
本發明的目的是提供一種紫杉醇抗腫瘤藥物的新用途，即紫杉醇在製備治療原發性肝細胞肝癌藥物中的應用。動物實驗效果極為顯著，抑瘤率高達97％。
本發明人在闡明一定的理論根據和對劑量學進行了較嚴格論證的基礎上，將紫杉醇對人肝癌異種移植模型進行治療試驗，獲得滿意的結果。為紫杉醇抗腫瘤藥物提供一種新用途，即紫杉醇在製備治療原發性肝細胞肝癌藥物中的應用。
以SMMC-7721人肝癌細胞為實驗材料，在體外觀察紫杉醇對人肝癌生長的影響，並探討其抗肝癌作用的機制。在體外，紫杉醇對SMMC-7721細胞的生長有明顯抑制作用，IC50為18．96nmol／L，並有一定的濃度和時間依賴關係。普通光鏡下，10nmol／L紫杉醇作用於SMMC-7721細胞24h後，細胞脫壁變圓，折光性增強，個別細胞有出泡現象，提示細胞出現周期阻滯，並有凋亡發生。48h後，細胞成碎片狀，飄浮在培液中。作用48h後電鏡下可見凋亡小體。細胞經碘化丙錠染色後以螢光顯微鏡觀察，處理24h後的細胞多處於分裂期並可見部分多核細胞，處理48h可見凋亡小體。流式細胞儀分析發現10nmol／L紫杉醇作用於細胞4h後，G2／M期百分率明顯增高，表明細胞被阻滯在有絲分裂期，隨後出現凋亡。隨著作用時間延長，G2／M期阻滯增強，凋亡細胞百分率也隨之增高，凋亡的出現滯後於有絲分裂阻滯，其峰值亦滯後於細胞周期阻滯的峰值。本發明的研究表明，紫杉醇有一定的抗肝癌活性。紫杉醇體外抑制人肝癌細胞生長與其引起細胞周期阻滯、異常的有絲分裂以及細胞凋亡等有關。關於紫杉醇引起人肝癌細胞有絲分裂阻滯和誘導細胞凋亡之間的關係，這可能是經紫杉醇作用後，細胞被阻滯於有絲分裂期，激活了有絲分裂檢查點，通過檢查點的作用，再激活誘發凋亡的機制，從而使細胞發生凋亡。在此體外實驗的基礎上，本發明進行了紫杉醇的體內實驗。實驗動物為裸小鼠BALB／c。將其接種人原發性肝癌細胞SMMC-7721。紫杉醇以體積比為1∶1的無水乙醇-蓖麻油為溶劑溶解，再以大於其一倍體積的生理鹽水按治療劑量的要求稀釋。臨用前配製，稍現霧狀即可。紫杉醇動物實驗治療的劑量範圍是5-15mg／kg。每鼠注射量均為200μl。注射途徑為腹腔注射(ip)。注射方案為按設定劑量每日一次，連續注射10天，並通過療效曲線、腫瘤抑制率觀察療效。在一定的安全劑量範圍內，腫瘤抑制的有效率高達100％，注射10天後實驗組的平均瘤重僅為溶劑對照組的3％，為5-氟脲嘧啶(5-Fu)的4％；抑瘤率高達97％。顯示紫杉醇對治療惡性腫瘤肝癌具有顯著的臨床前的藥效，見表1。
表1紫杉醇、5-Fu及對照組腹腔給藥對荷SMMC-7721人體肝癌的裸小鼠的療效比較樣品劑量給藥方案瘤重 抑制率mg／kg x±SD ％紫杉醇 10 ip×10qd 0．06±0．06 96．97*5-Fu 10 ip×10qd 1．26±0．46 34．38對照組 相應溶劑**ip×10qd 1．92±0．46*P＜0．001**相應溶劑是以體積比為1∶1∶10的無水乙醇-蓖麻油-生理鹽水混合液紫杉醇動物實驗治療肝癌的劑量範圍是5-15mg／kg，臨床使用的劑量為0．42-1．25mg／kg(或15-50mg／m2)，臨床使用經血管注射，在10天的治療方案中總劑量不超過12．5mg／kg。
本發明優點紫杉醇是一種新型的抗腫瘤藥物，目前被應用在卵巢癌及乳腺癌等腫瘤的化療上，療效甚好。關於紫杉醇對肝癌的作用，西德癌症中心對其一定劑量下的毒性進行了評價，無療效報導；臺灣的研究則認為一定劑量的紫杉醇對原發性肝細胞肝癌無效。故尚無確鑿數據表明紫杉醇可以有效地治療原發性肝細胞肝癌，而肝癌是我國最常見的、惡性程度最高的腫瘤之一，迄今臨床上尚無有效的化療手段。本發明在闡明一定的理論根據和對劑量學進行了較嚴格論證的基礎上，突破已有研究的框框，提供了紫杉醇在治療原發性肝細胞肝癌中的新用途。採用紫杉醇劑量為5-15mg／kg對人肝癌異種移植模型進行治療試驗，獲得滿意的結果。試驗表明腫瘤抑制的有效率高達100％，注射10天後實驗組的平均瘤重僅為溶劑對照組的3％，為5-Fu的4％；證明抑瘤率高達97％。本發明為紫杉醇治療惡性腫瘤肝癌獲得的顯著的臨床前的藥效，表明了紫杉醇臨床治療原發性肝細胞肝癌的可行性，不但有可能用於臨床以提高肝癌患者的生存率，而且，有可能修改肝癌的化療方案，重新評估化療，特別是紫杉醇在肝癌治療中的地位。有可能改變晚期肝癌患者目前幾乎束手無策的局面。


圖1．紫杉醇，5-Fu及對照組對荷SMMC-7721人體肝癌裸小鼠的療效曲線圖。
圖2．紫杉醇，5-Fu及對照組腹腔給藥對荷SMMC-7721人體肝癌裸小鼠的治療後腫瘤實體中C相應溶劑ip×10pdTa10mg／kg紫杉醇ip×10pdFu10mg／kg 5-Fuip×10pd。
本發明通過以下的實施例作進一步闡述。
實施例紫杉醇用於治療荷原發性肝細胞肝癌的裸小鼠試驗紫杉醇以1∶1(體積比)的無水乙醇-蓖麻油(Cremophor EL)為溶劑溶解，再以生理鹽水稀釋成所需劑量的混合液。臨用前配製，稍現霧狀即可。實驗裸小鼠體重20g±2g，均為雌性，接種SMMC-7721細胞3×106個／只，待瘤塊長至5-10mm時隨機分組，每組5或10隻，開始治療。動物實驗治療的劑量高劑量組為10mg／kg、中劑量組為2mg／kg、低劑量組為0．4mg／kg，5-FU組為10mg／kg。經腹腔注射，每鼠注射量均為200μl，每日一次，連續注射10天。
觀察療效(1)療效曲線每隔2天用遊標卡尺測量體積一次，以腫瘤體積(mm3)為縱坐標，以治療後天數為橫坐標，繪出療效曲線(見圖1)。
(2)腫瘤抑制率的計算停藥24小時後處死全部動物，解剖瘤塊，稱瘤重，按以下公式計算腫瘤抑制率腫瘤抑制率=1-(實驗組瘤重／對照組瘤重)×100％試驗結果高劑量組的腫瘤抑制率為96．97％、中劑量組的腫瘤抑制率為25％、低劑量組的腫瘤抑制率為29．17％，標準劑量的5-FU組的腫瘤抑制率為34．38％(見表2及圖2)。
表2不同濃度的紫杉醇，5-Fu及對照組腹腔給藥治療荷原發性肝癌細胞SMMC-7721的裸小鼠的腫瘤抑制率 *P＜0．001**相應溶劑是以體積比為1∶1∶10的無水乙醇-蓖麻油-生理鹽水混合液
權利要求
1.一種紫杉醇抗腫瘤藥物的應用，其特徵在於紫杉醇在製備治療原發性肝細胞肝癌藥物中的應用。
2.如權利要求1所述的紫杉醇抗腫瘤藥物的應用，其特徵在於紫杉醇治療原發性肝細胞肝癌藥物的臨床使用劑量為每天0．42-1．25mg／kg或15-50mg／m2。
3.如權利要求1所述的紫杉醇抗腫瘤藥物的應用，其特徵在於紫杉醇治療原發性肝細胞肝癌藥物在10天治療中的總劑量不超過12．5mg／kg。
4.如權利要求1所述的紫杉醇抗腫瘤藥物的應用，其特徵在於紫杉醇治療原發性肝細胞肝癌藥物是溶解於體積比為1∶1的無水乙醇∶蓖麻油的溶劑中，再以大於其一倍體積的生理鹽水按劑量需要稀釋。
全文摘要
一種紫杉醇抗腫瘤藥物的新用途,即紫杉醇在製備治療原發性肝細胞肝癌藥物中的應用。體外研究表明,紫杉醇可以抑制人肝癌細胞生長,該抑制作用與其引起細胞周期阻滯、異常的有絲分裂以及細胞調亡等有關。在此研究基礎上,將紫杉醇用於治療荷原發性肝細胞肝癌的裸小鼠,實驗治療的劑量範圍是5—15mg/kg。結果腫瘤抑制的有效率高達100%,抑瘤率高達97%。這一結果使紫杉醇治療肝癌可能改變晚期肝癌患者目前幾乎束手無策的局面。
文檔編號A61K31/337GK1292263SQ9911695
公開日2001年4月25日 申請日期1999年10月11日 優先權日1999年10月11日
發明者袁金輝, 謝弘, 張茹萍, 李常法 申請人:中國科學院上海細胞生物學研究所, 上海華聯製藥有限公司