稚鮑養殖方法

2023-05-31 20:56:26 1

專利名稱：稚鮑養殖方法
技術領域：
本發明涉及海水貝類養殖技術領域，特別涉及一種提高稚鮑養殖成活率、節水節 能、綠色環保的養殖方法。
背景技術：
鮑作為海中八珍之一，歷來備受市場青睞，鮑的肉質細嫩，味道鮮美，含有豐富的 蛋白質，歷來是水產養殖的佳品。我國的鮑養殖研究從20世紀70年代開始起步，經過近 三十年的發展，取得了巨大的成績和顯著的經濟效益，但是在養殖模式上始終沒有大的突 破。近年來，隨著稚鮑人工養殖規模的擴大，技術上的缺陷也逐漸凸顯出來，在養殖過程中， 特別是在稚鮑剝離後，容易引發一些稚鮑疾病，2010年在遼寧、山東等地繼2007年以來再 次爆發大規模的流行病，許多養殖場在稚鮑剝離後出現大批量的死亡，有些養殖場死亡率 甚至高達90%，給養殖戶帶來了巨大的經濟損失。病原體感染是引起稚鮑死亡的主要原因， 人工養殖環境下主要是細菌性疾病和病毒性疾病。常見的潛在致病菌有副溶血弧菌、河流 弧菌、溶藻弧菌等。副溶血弧菌主要導致稚鮑肌肉萎縮病，死亡率可達50%左右，而河流弧 菌和副溶藻弧菌引發的感染導致的死亡率高達60-70%。目前常規的防治稚鮑掉板的方法主要是定期施用抗生素，抗生素雖然具有藥物直 接入水、濃度高、吸收快、療效好的優點，但缺點是可能對稚鮑產生刺激性、引發新病症。如 果長期大量使用抗生素不僅會使潛在致病菌耐藥菌株增加，也會使一些鮑病例變得難以治 愈。此外鮑體內抗生素殘留會影響稚鮑品質，不利於銷售，進而造成養殖者的經濟損失。中 草藥防治稚鮑掉板也是一種常見的辦法，具有無藥物殘留、經濟效益高的優點，但也有見效 慢的缺點，因而尋求一種更高效、經濟的辦法顯得極為迫切。蛭弧菌為寄生性革蘭氏陰性菌，具有寄生、進而裂解其它細菌的作用，是一種優良 的微生物控菌液。蛭弧菌蛭質體是蛭弧菌在特定宿主細菌的周質空間內進行生長繁殖的形 式；蛭弧菌遊泳體是蛭弧菌侵入宿主細菌前的生長形式。「綠色養殖」成為近年來國家的重 大需求，引起水產界的廣泛關注。目前，用蛭弧菌混合菌液來進行稚鮑養殖的養殖方式在國 內外尚未報導。已有的研究表明，作為一種有益微生物製劑，無論是在食品工業還是在(海洋) 水產養殖等領域，蛭弧菌的應用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell (1978) 研究發現，蛭弧菌及對動物及人的細胞不具侵染性[Lenz R. W.，HespellR. B. Attempts to grow bedellovibrios micurgically-inj ected into animal cells.Archives of Microbiology, 1978,119(3) =245-248] 在國內，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對魚類細 胞的作用，發現它對魚類細菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強。蛭弧菌 BDH21 02對魚類細胞及病原菌的作用。微生物學通報，2006，33(1) :7_11]。

發明內容
本發明的目的在於克服現有技術存在的不足，提供一種提高稚鮑免疫力、促進稚
3鮑生長、提高稚鮑成活率的養殖方法。本發明的目的通過下述方案實現稚鮑養殖方法，其特徵在於，養殖過程如下(1)在養殖池內鋪磚，然後注入海水；(2)稚鮑下池，同時開始曝氣；(3)定期投餵餌料，並在養殖水體中和/或投餵的餌料中添加蛭弧菌遊泳體和蛭 質體的混合菌液；且每5-30天換水一次，每次全池換；(4)當稚鮑體長達到1. 0-1. 6cm時，即可採收稚鮑；所述蛭弧菌菌株為蛭弧菌(Bdellovibrio sp. ) BDFM05，由中國典型培養物保藏 中心保藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC NO :M209172，保藏日期為2009年8月7日。 BDFM05呈單細胞，橢圓形，大小為1. 43X0. 53 μ m,端生鞭毛，鞭毛長度至少2 μ m ；所述蛭弧 菌(Bdellovibrio sp. )BDFM05以雙層平板法於28°C培養三天可形成直徑2 3mm的透明 圓形噬菌斑，將得到的圓形噬菌斑接種後，分別將蛭弧菌蛭質體和遊泳體分開發酵，然後等 濃度混合。優選地，所述鋪磚是先將磚洗刷乾淨並用高錳酸鉀溶液消毒，消毒後再採取騎疊 式擺磚。優選地，所述海水在注入前經過砂濾和沉澱處理。所投餵的餌料為人工合成餌料，優選地，所述投餵餌料時要先停止曝氣，投餌 0. 5-lh後再開始曝氣。優選地，所述稚鮑下池後，曝氣量10-100L/h/m3，光照控制在50-200lux，水溫控制 在 15-28 0C ο優選地，所述在投餵的餌料中添加蛭弧菌混合菌液是指用濃度為10-107pfU/mL的 蛭弧菌混合菌液浸泡餌料20 40分鐘。優選地，所述在養殖水體中添加的蛭弧菌混合菌液，使蛭弧菌混合菌在水體中的 濃度至少達到10pfu/mL。優選地，所述每次換水後都立即添加蛭弧菌混合菌液，並使蛭弧菌混合菌在水體 中的濃度至少達到10pfu/mL。優選地，所述蛭弧菌混合菌在水體中的濃度為10_107pfu/mL。優選地，所述蛭弧菌混合菌液的製備方法為在含副溶血弧菌的DNB液體培養基中接入蛭弧菌BDFM05 (CCTCCM209172)，恆溫搖 床150rpm 300rpm、20 35°C培養24 48h ；培養液於4°C 6000 8000rpm離心15 20min，去除含蛭弧菌遊泳體的上清，得到的沉澱即是蛭弧菌蛭質體；將含蛭弧菌遊泳體的 上清液經16000 18000rpm離心15 20min後，得到的沉澱即是蛭弧菌遊泳體；將上述得到的蛭弧菌蛭質體和遊泳體分別用DNB液體培養基進行懸浮，得到兩種 菌液，兩種菌液按遊泳體和蛭質體細菌數1 1的比例混合，即得到蛭弧菌混合菌液。本發明相對於現有技術，具有如下的優點及效果1、本發明所述的蛭弧菌混合菌液能顯著提高稚鮑體質，增強免疫力。。本發明中所述的蛭弧菌混合菌液在控制稚鮑養殖環境、餌料、水體中細菌的效果 顯著，能夠明顯改善稚鮑體質，增強免疫力。
2、本發明所述的蛭弧菌混合菌液在控制和消除稚鮑潛在致病菌應用中安全性好。蛭弧菌混合菌液通過裂解潛在致病菌的方法是生物方法。用蛭弧菌遊泳體和蛭質 體製成的混合菌液作為控制稚鮑育稚鮑水體細菌的蛭弧菌混合菌液，兼具遊泳體起效快， 活力強和蛭質體製備、保存容易，殺菌時間久、環境耐受力強的雙重優點。這些優點使得蛭 弧菌混合菌液非常適合作為抑止或清除生物體及其環境中潛在致病菌的生物淨化因子，且 其在裂解完宿主細菌後，會因飢餓而自動消亡，從而克服了抗生素濫用帶來的副作用和常 規消毒劑對稚鮑的不利影響，同時已有研究證明蛭弧菌對人等無毒。3、所述的蛭弧菌混合菌液能淨化水質並促進稚鮑生長。 蛭弧菌混合菌液對水質有淨化作用，能改善養殖生物腸道環境，增強食慾，促進生長。4、含有本發明所述的蛭弧菌混合菌液適合推廣應用於鮑魚養殖過程。蛭弧菌混合菌液對人和鮑魚無毒副作用，適合於鮑魚大規模工廠化養殖，可以為 鮑魚的綠色加工生產提供保障並且為控制和消除鮑魚潛在致病菌提供了一種新方法。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步具體詳細描述，但本發明的實施方式不限 於此，對於未特別註明的工藝參數，可參照常規技術進行。本發明的實施地位於山東某養殖 場，本發明的稚鮑為皺紋盤鮑，由該養殖場提供。實施例1蛭弧菌混合菌液的製備蛭弧菌蛭質體的製備所述蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05以雙層平板法於 28°C培養三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑，所用的蛭弧菌混合菌液通過以下方 法發酵在裝有IOOmL營養肉湯Nutrient Broth (蛋白腖10g，牛肉膏粉3g，氯化鈉5g，pH 7. 4士0.2)的錐形瓶中接種 0. 5mL 107cfu/mL副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus，購於 美國典型微生物菌種保藏中心American Type Culture Collection，編號ATCC 17802)， 200rpm、28°C搖床培養18小時，培養液於4°C、5000rpm離心15min，棄上清。沉澱用5mL生 理鹽水懸浮後，加入到一個裝有IOOmL DNB (dilute nutrient broth)液體培養基(營養肉 湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，海水晶28g，溶於IOOOmL蒸餾水，pH值為 7. 2 7. 6)的錐形瓶中，再加入ImL含103pfu/mL的蛭弧菌BDFM05 (CCTCC M209172)。恆溫 搖床250rpm、28°C培養36h。培養液於4°C 6000rpm離心20min，得到上清液和沉澱，保留沉 澱，加入IOmLDNB液體培養基(營養肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，海 水晶28g，溶於IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 2 7. 6)重新懸浮沉澱物，得到濃度為109pfu/ mL的蛭弧菌蛭質體菌液。蛭弧菌遊泳體的製備將上述蛭弧菌蛭質體製備方法中的上清液於4°C 6000rpm 離心20min後的、含蛭弧菌遊泳體上清液，16000rpm離心20min，得到的沉澱即是蛭弧菌遊 泳體。加入IOmL DNB液體培養基(營養肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. Ig, 溶於IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 2 7. 6)懸浮蛭弧菌遊泳體，得到濃度為109pfu/mL蛭弧 菌遊泳體菌液。將同濃度的遊泳體和蛭質體按1 1體積混合，得到109pfU/mL的蛭弧菌混合菌液。 實施例2 1、蛭弧菌混合菌液在養殖中應用。本發明實施地的養殖池建在養殖大棚內，每個水池規格為2X2X0. 75m，水深為 0.45m。每池放置曝氣管8條。水池上方蓋上遮光度為60%的遮光布，避免光照過強。光照 強弱可以調節，光照強度一般控制在(50-200) Iux0實施地海域的具體水質條件為水溫15_28°C，鹽度27-33%。，pH 6. 8-7. 2，海水經 過砂濾、沉澱處理，並在進入養殖池前，在池進水管口包紮一個200目的網袋，防止細砂入 池。水源水質符合中華人民共和國國家標準漁業水質標準(GB11607-89)要求，符合農業部 《無公害食品海水養殖用水水質》(NY5052-2001)要求。鋪磚前，將四角水泥方磚洗刷乾淨並用高錳酸鉀溶液消毒，消毒後再放入池底，池 底共放60塊四腳水泥磚，兩側對稱、騎疊式放置，每列6塊，每側5列。放磚後各池均用高 錳酸鉀溶液消毒，反覆衝洗乾淨，然後注入經過砂濾和沉澱處理的海水。稚鮑下池，所選取 的附稚鮑波紋板附稚鮑量在30-2000粒/板，稚鮑體長在2. 0-4. 5mm，稚鮑健康、活力好，每 池稚鮑剝離量為10000粒，投鮑後即開始曝氣，曝氣量為50L/h/m3，本發明設置一個生產對 照組_正常流水，日換水量為池水量的2倍，每天早上6:00用高壓水衝洗池子，晚上18:00 正常投餌，期間不加蛭弧菌混合菌液，完全的工廠養殖方式，將其編為A組。其他具體編排 方案如下(1)在養殖水體中蛭弧菌混合菌液，但餌料中不加。每次換水後立即在養殖水體中添加蛭弧菌混合製劑，所需48個水池分為B-1、 B-2、B-3、B-4, C-I、C_2、C_3、C_4，D_l、D_2、D_3、D_4，E_l、E_2、E_3、E—4，F_l、F_2、F—3、 F-4，G-l、G-2、G-3、G-4，每組2個重複。各組的換水周期及加菌液濃度如下B 組(B-1、B-2、B_3、B-4) 5 天換(全池)水一次；C 組(C-l、C-2、C-3、C-4) 10 天換(全池)一次；D 組(D-l、D-2、D_3、D-4) 15 天換(全池)一次水E 組(E-l、E-2、E_3、E-4) 20 天換(全池)一次水F 組(F-l、F-2、F_3、F-4) 25 天換(全池)一次水G 組(G-l、G-2、G_3、G-4) 30 天換(全池)水一次B-I、C-I、D-I、E-I、F-I、G-I組每次換水後立即往水池中潑灑蛭弧菌混合製劑，使 水體中蛭弧菌混合製劑菌體濃度達到IO1PfuAiL ；B-2、C-2、D-2、E-2、F-2、G-2組每次換水後立即往水池中潑灑蛭弧菌混合製劑，使 水體中蛭弧菌混合製劑菌體濃度達到103pfU/mL ；B-3、C-3、D-3、E_3、F_3、G_3組為每次換水後立即往水池中潑灑蛭弧菌混合製劑， 使水體中蛭弧菌混合製劑菌體濃度達到105pfU/mL ；B-4、C-4、D-4，E_4、F_4、G_4組為每次換水後立即往水池中潑灑蛭弧菌混合製劑， 使水體中蛭弧菌混合製劑菌體濃度達到107pfu/mL。(2)在餌料中加蛭弧菌混合菌液，但在養殖水體中不加。每天投餌前用蛭弧菌混合菌液浸泡餌料半小時，而每次換水後養殖水體都不加蛭 弧菌混合菌液。所需 48 個水池分為 b-1、b-2、b-3、b-4 ；c-l、c-2、c-3、c-4 ；d_l、d_2、d_3、d-4 ;e-l、e-2、e-3、e-4 ；f_l、f_2、f_3、f_4 ；g_l、g_2、g_3、g_4 每組 2 個重複。各組的換水 周期及加菌液濃度如下b 組(b-1、b-2、b-3、b-4) 5 天換(全池)水一次；c 組(c-1、c-2、c-3、c_4) 10 天換(全池)水一次；d 組(d-1、d-2、d-3、d-4) 15 天換(全池)水一次；e 組(e-1、e-2、e_3、e_4) 20 天換(全池)水一次；f 組(f-1、f-2、f-3、f-4) 25 天換(全池)水一次；g 組(g-1、g_2、g_3、g-4) 30 天換(全池)水一次；b-1、c-1、d-1、e-1、f-1、g-Ι組投的餌料經過濃度為IO1PfuAiL的蛭弧菌混合製劑 菌液浸泡過的餌料；每次換水不在水體加蛭弧菌混合製劑。b-2、c-2、d-2、e-2、f-2、g-2組投的餌料經過濃度為103pfu/mL的蛭弧菌混合製劑 菌液浸泡過的餌料；每次換水不在水體加蛭弧菌混合製劑。b-3、c-3、d-3、e-3、f-3、g-3組投的餌料經過濃度為105pfu/mL的蛭弧菌混合製劑 菌液浸泡過的餌料；每次換水不在水體加蛭弧菌混合製劑。b-4、c-4、d-4、e-4、f-4、g-4組投的餌料經過濃度為107pfu/mL的蛭弧菌混合製劑 菌液浸泡過的餌料；每次換水不在水體加蛭弧菌混合製劑。(3)在養殖水體和餌料中均添加蛭弧菌混合製劑每次投餌前用蛭弧菌混合製劑浸泡餌料半小時，每次換水後養殖水體也添加蛭弧 菌混合製劑。所需 48 個水池分為 Bb-I、Bb-2、Bb_3、Bb_4 ；Cc-U Cc_2、Cc_3、Cc_4 ；Dd-U Dd-2、Dd-3、Dd-4 ；Ee_l、Ee_2、Ee_3、Ee_4 ；Ff_l、Ff_2、Ff_3、Ff_4 ；Gg_l、Gg_2、Gg_3、Gg_4 每組2個重複。各組的換水周期及加菌液濃度如下Bb 組(Bb-1、Bb-2、Bb_3、Bb_4) 5 天換(全池)水一次；Cc 組(Cc-1、Cc-2、Cc_3、Cc_4) 10 天換(全池)水一次；Dd 組(Dd-1、Dd-2、Dd_3、Dd_4) 15 天換(全池)水一次；Ee 組(Ee-1、Ee_2、Ee_3、Ee_4) 20 天換(全池)水一次；Ff 組(Ff-U Ff-2, Ff_3、Ff-4) 25 天換(全池)水一次；Gg 組(Gg-1、Gg-2、Gg_3、Gg-4) 30 天換(全池)水一次；Bb-O、Cc-O、Dd-O、Ee_0、Ff-O、Gg-O組每次換水後，不添加混合製劑；Bb-U Cc-U Dd-1、Ee-U Ff-I、Gg-I組為每次換水後立即往水池中潑灑蛭弧菌 混合製劑，使水體中蛭弧菌混合製劑菌體濃度達到IO1PfuAiL ；每次投餌的餌料用濃度為 IO1PfuAiL的蛭弧菌混合製劑浸泡半小時；Bb-2、Cc-2、Dd-2, Ee_2、Ff_2、Gg-2組為每次換水後立即往水池中潑灑蛭弧菌 混合製劑，使水體中蛭弧菌混合製劑菌體濃度達到103pfU/mL ；每次投餌的餌料用濃度為 103pfu/mL的蛭弧菌混合製劑浸泡半小時。Bb-3、Cc-3、Dd-3、Ee_3、Ff_3、Gg-3組為每次換水後立即往水池中潑灑蛭弧菌 混合製劑，使水體中蛭弧菌混合製劑菌體濃度達到105pfU/mL ；每次投餌的餌料用濃度為 105pfu/mL的蛭弧菌混合製劑浸泡半小時。Bb-4、Cc-4、Dd-4、Ee_4、Ff-4, Gg-4組為每次換水後立即往水池中潑灑蛭弧菌 混合製劑，使水體中蛭弧菌混合製劑菌體濃度達到107pfU/mL ；每次投餌的餌料用濃度為
7107pfu/mL的蛭弧菌混合製劑浸泡半小時。本發明的各組池中，所投餵的餌料為人工合成餌料，餌料量隨稚鮑大小而變化，當 要投餵餌料時，要先停止曝氣，投餌0. 5h後再開始曝氣。為了減少殘餌對水質的破壞，需要 每天對除A組外各組池底和四角方磚上的殘餌進行虹吸，也可間隔5天對殘餌進行虹吸。除 此之外，每晚需要觀察稚鮑活動情況，吃食狀況等。從下板到統計，時間為60天，為了了解蛭弧菌混合菌液對稚鮑的成活率的影響與 促生長能力，需要對活稚鮑進行計數，並按一定指標統計稚鮑。(4)養殖指標與測量①稚鮑初始量，每池1萬稚鮑。②收稚鮑平均殼長，隨機抽取50粒稚鮑，測量殼長，取平均值。③稚鮑平均重量，隨機抽取50粒稚鮑，稱其總重後取平均④收稚鮑總量，稱取IOg稚鮑，計算其粒數，將稚鮑稱總重估算粒數。⑤成活率，某階段結束時稚鮑量佔該階段投稚鮑量的百分率。(5)稚鮑免疫指標測定試驗結束每組取樣18個去殼，3個/管放於6個分別盛有lmLHank』 s緩衝液(pH 值7-8)的2mL-Eppendorf管中，貯於-80°C以備抗免疫指標的測定。測定時取出樣品，使其 在冰上融化。進行勻漿，然後6000r/min，-4°C離心5min.取上清用於免疫指標的測定。①酚氧化物酶的測定酚氧化物酶的活性測定是通過測定和左旋多巴胺反應生成的多巴胺的吸光值來 計算的。把每個樣品100 μ L到1. 5mL的Eppendorf管中，每個樣品重複三次。再加入用 PBS液配製的0. 5mg/mL均海藻酸鈉在26-27°C下反應30min。加入50 μ L的用PBS液配製 的3mg/mL的左旋多巴胺，IOmin後，在490nm處讀取吸光值。對照液用相應的PBS液代替海
藻酸鈉。②溶菌酶活力測定以溶壁微球菌凍乾粉為底物。用0. lmol/L,pH = 6.4的磷酸鹽緩衝液配成底物懸 液(OD57tlnm 0. 3)，取3. OmL該懸液於試管內置冰浴中，再加入50 μ L待測血清，混合，測Atl 值。然後將試液移入37°C溫浴中置30min，取出後再置於冰浴中lOmin，以終止反應，測其A 值。溶菌活力Ul按(A。-A) /A式計算。③感染實驗感染試驗於預先消毒的盛有15L砂濾海水(鹽度29 30%。)的透明水族箱中進
行，從A，B-U B-2.....Gg-4各個組隨機取稚鮑200顆，設兩個重複。向各組水體中添加副
溶血弧菌液，使水體中副溶血弧菌菌體濃度達到108cfu/mL。實驗期間不流水養殖，正常投 餌，以5L/h/m3連續曝氣，水溫為22°C，pH控制在7. 2。人工感染後，連續觀察5天，最終計 算成活率，採用相對存活率(Relative Percentage Survival, RPS)計算式RPS (% ) = (1-免疫組死亡率/對照組死亡率)X 100%此種方法對稚鮑養殖的各項指標影響具體見下表表15天換水對稚鮑生長情況和免疫力的影響
表210天換水對稚Ι ■生長情況和免疫力的影響
權利要求
稚鮑養殖方法，其特徵在於，養殖過程如下(1)在養殖池內鋪磚，然後注入海水；(2)稚鮑下池，同時開始曝氣；(3)定期投餵餌料，並在養殖水體中和/或投餵的餌料中添加蛭弧菌遊泳體和蛭質體的混合菌液；且每5 30天換水一次，每次全池換水；(4)當稚鮑體長到1.0 1.6cm時，即可採收稚鮑；所述蛭弧菌菌株為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，由中國典型培養物保藏中心保藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC NOM209172，保藏日期為2009年8月7日。
2.根據權利要求1所述的養殖方法，其特徵在於，所述鋪磚是先將磚洗刷乾淨並用高 錳酸鉀溶液消毒，消毒後再採取騎疊式擺磚。
3.根據權利要求1所述的養殖方法，其特徵在於，所述海水在注入前經過砂濾和沉澱 處理。
4.根據權利要求1所述的養殖方法，其特徵在於，所述投餵餌料時要先停止曝氣，投餌 0. 5-lh後再開始曝氣。
5.根據權利要求1所述的養殖方法，其特徵在於，所述稚鮑下池後，曝氣量控制在 10-100L/h/m3，光照控制在 50-2001ux，水溫控制在 15_28°C。
6.根據權利要求1所述的養殖方法，其特徵在於，所述在投餵的餌料中添加蛭弧菌混 合菌液是指用濃度為10-107pfu/mL的蛭弧菌混合菌液浸泡餌料20 40分鐘。
7.根據權利要求1所述的養殖方法，其特徵在於，所述在養殖水體中添加的蛭弧菌混 合菌液，使蛭弧菌混合菌在水體中的濃度至少達到10pfU/mL。
8.根據權利要求7所述的養殖方法，其特徵在於，所述每次換水後都立即添加蛭弧菌 混合菌液，並使蛭弧菌混合菌在水體中的濃度至少達到10pfU/mL。
9.根據權利要求7或8所述的養殖方法，其特徵在於，所述蛭弧菌混合菌在水體中的濃 度為 10-107pfu/mL。
10.根據權利要求1 8任意一項所述的養殖方法，其特徵在於，所述蛭弧菌混合菌液 的製備方法為在含副溶血弧菌的DNB液體培養基中接入蛭弧菌BDFM05，恆溫搖床150rpm 300rpm、 20 35°C培養24 48h ；培養液於4°C 6000 8000rpm離心15 20min，去除含蛭弧 菌遊泳體的上清，得到的沉澱即是蛭弧菌蛭質體；將含蛭弧菌遊泳體的上清液經16000 18000rpm離心15 20min後，得到的沉澱即是蛭弧菌遊泳體；將上述得到的蛭弧菌蛭質體和遊泳體分別用DNB液體培養基進行懸浮，得到兩種菌 液，兩種菌液按遊泳體和蛭質體細菌數1 1的比例混合，即得到蛭弧菌混合菌液。
全文摘要
本發明公開了一種稚鮑養殖方法，養殖過程如下(1)在養殖池內鋪磚，然後注入海水；(2)稚鮑下池，同時開始曝氣；(3)定期投餵餌料，並在養殖水體中和/或投餵的餌料中添加蛭弧菌混合菌液；且每5-30天換水一次，每次換水量為一個量程；(4)當稚鮑體長達到1.0-1.6cm時，即可收稚鮑；所述蛭弧菌菌株為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，由中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC NOM209172，保藏日期為2009年8月7日。本發明的優點有(1)能節能減排，更環保；(2)蛭弧菌混合菌液起效快、活力強且製備方便、殺菌時間久；(3)能夠明顯改善稚鮑體質，增強免疫力。
文檔編號C12R1/01GK101953315SQ20101027083
公開日2011年1月26日 申請日期2010年8月31日 優先權日2010年8月31日
發明者蔣小平, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學