Igf2bp1自身抗體識別的抗原多肽的製作方法

2023-05-31 14:54:41

Igf2bp1自身抗體識別的抗原多肽的製作方法
【專利摘要】本發明涉及IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽。其中，該多肽具有如SEQID?NO：1-3所示胺基酸序列至少之一。利用本發明的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽，能夠有效地檢測樣品，例如肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品（例如血清樣品）中的IGF2BP1自身抗體。
【專利說明】IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物醫學領域。具體地，本發明涉及IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽及其用途。更具體地，本發明涉及一種IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽、該多肽在製備檢測腫瘤血清中IGF2BP1抗體的用途、一種用於檢測樣品中IGF2BP1抗體的試劑盒。
【背景技術】[0002]肺癌是一種嚴重危害人類健康的惡性疾病，生物學特性十分複雜，早期無創性診斷困難，目前尋找腫瘤相關標誌物已成為肺癌早期診斷和免疫治療的研究熱點。但現階段應用於臨床的腫瘤標誌物仍然不多，且對肺癌的早期發現仍缺乏足夠的敏感性、特異性和可重複性，因此，目前迫切需要尋找有效腫瘤相關標誌物用於肺癌早期診斷。而近年研究表明，腫瘤患者自身免疫系統會對腫瘤相關抗原產生自身抗體，這些自身抗體存在於肺癌患者體循環中，甚至在肺癌臨床症狀出現5年前就可以出現了，因此自身抗體可能成為監測腫瘤發生的早期標誌物。相較於血清中腫瘤抗原型標誌物，血清中腫瘤抗原相應自身抗體同時具有豐度高，易檢測等優勢，可能成為更為可靠的血清腫瘤標誌物，將有助於腫瘤的早期診斷。因此，尋找肺癌抗原相應自身抗體，對於肺癌早期診斷以及預後檢測意義重大。然而，目前相關報導很少。

【發明內容】

[0003]本發明是基於發明人的下列發現而完成的:
[0004]近年來，研究發現IGF2BP1 (insulin-like growth factor 2 mRNA bingdingpiOteinl，胰島素樣生長因子2mRNA結合蛋白I)屬於高度保守的RNA結合蛋白，在mRNA轉錄後調控的多個方面發揮重要作用。IGF2BP1在睪丸癌早期原位癌中即有大量表達，提示其可能成為癌症發生的早期標誌物；而在卵巢癌、結腸癌的研究中，則證明了 IGF2BP1的高水平表達與癌症的復發轉移以及不良預後相關；同時，在肺癌中，IGF2BP1的表達水平與腫瘤細胞低分化程度相關，並提示可能成為不良預後的標誌物。在肝細胞癌的研究中發現IGF2BP1作為自身抗原，能引起患者血清中自身抗體的表達變化，這一變化與肝細胞癌密切相關。綜上，發明人發現IGF2BP1自身抗體可能成為更為有效的腫瘤標誌物。但是目前尚未有商品化的IGF2BP1自身抗體檢測試劑盒。
[0005]本發明旨在解決現有技術的上述缺陷至少之一，而提供一種有用的商業選擇。
[0006]為此，本發明提出了一種IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽。根據本發明的實施例，其多肽活性片段為下列至少之一:
[0007]I) SEQ ID No:1 所示序列:MNKLYIGNLNESVTPADLEK ；
[0008]2) SEQ ID No: 2 所示序列:IAPPETPDSKVRMVIITGPP ;
[0009]3) SEQ ID No: 3 所示序列:RVIGKGGKTVNELQNLTAAE ；
[0010]4) SEQ ID No: 1_3所示胺基酸序列經胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的胺基酸衍生序列。[0011]根據本發明的實施例，優選地，本發明的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽具有如RVIGKGGKTVNELQNLTAAE (SEQ ID NO:3)所示的胺基酸序列。由此，可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1自身抗體的效率。
[0012]另外，本發明還提出了前面所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽在製備檢測腫瘤血清IGF2BP1抗體試劑盒中的用途。尤其是，該試劑盒可以用於檢測的腫瘤為肺癌。
[0013]為此，本發明提出了一種用於檢測樣品中IGF2BP1抗體的試劑盒。根據本發明的實施例，該試劑盒包括:前面所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽。具體地，根據本發明的實施例，該試劑盒可以包括:96孔板，所述96孔板的孔中包被前面所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽。進一步，該試劑盒可以進一步包括:陰性對照樣品，所述陰性對照樣品為IGF2BP1抗體為陰性的血清，或者/額外地可以進一步包括:標準樣品，所述標準樣品為IGF2BP1抗體濃度分別為lU/ml，5U/ml，10U/ml, 15U/ml的血清。根據本發明的實施例，IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽的濃度可以為，每個反應孔I μ g/ml。根據本發明的實施例，尤其是，該試劑盒可以用於檢測的腫瘤為肺癌。
[0014]為此，在本發明的又一方面，本發明提出了一種分離的多肽。根據本發明的實施例，該多肽具有如SEQ ID NO:1-3所示胺基酸序列至少之一。即，該多肽具有如下列所示胺基酸序列之一:
[0015]MNKLYIGNLNESVTPADLEK (SEQ ID NO:1);
[0016]IAPPETPDSKVRMVIITGPP (SEQ ID NO:2);
[0017]RVIGKGGKTVNELQNLTAAE (SEQ ID NO:3)。
[0018]根據本發明的實施例，利用具有上述胺基酸序列的多肽，能夠有效地檢測樣品，例如肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品(例如血清樣品)中的IGF2BP1自身抗體。
[0019]根據本發明的實施例，優選地所述多肽具有如RVIGKGGKTVNELQNLTAAE (SEQ IDN0:3)所示的胺基酸序列。由此，可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1自身抗體的效率。
[0020]在本發明的又一方面，本發明提出了前面所述多肽在檢測樣品中IGF2BP1自身抗體的用途。
[0021]根據本發明的實施例，所述樣品為來自肺癌或疑似肺癌患者以及健康志願者的血液樣品。
[0022]在本發明的又一方面，本發明提出了前面所述多肽在製備試劑盒中的用途，所述試劑盒用於檢測樣品中的IGF2BP1自身抗體。
[0023]根據本發明的實施例，所述樣品為來自肺癌或疑似肺癌患者以及健康志願者的血液樣品。
[0024]在本發明的又一方面，本發明提出了一種用於檢測樣品中IGF2BP1自身抗體的試劑盒。根據本發明的實施例，該試劑盒包括:前面所述的多肽。由此，利用根據本發明的實施例，可以有效地藉助根據本發明的多肽對樣品中的IGF2BP1自身抗體進行檢測。
[0025]根據本發明的實施例，該試劑盒可以進一步包括:適於進行ELISA檢測的試劑。由此，可以通過ELISA檢測方法，利用根據本發明的多肽對樣品中的IGF2BP1自身抗體進行檢測，從而可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1自身抗體的效率。[0026]根據本發明的實施例，所述多肽設置於96孔板中。由此，可以方便地高通量地進行檢測。可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1自身抗體的效率。
[0027]根據本發明的實施例，所述樣品為來自肺癌或疑似肺癌患者以及健康志願者的血液樣品。
[0028]本發明的附加方面和優點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發明的實踐了解到。
【具體實施方式】
[0029]下面詳細描述本發明的實施例，所述實施例旨在用於解釋本發明，而不能理解為對本發明的限制。
[0030]IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽
[0031]根據本發明的一個方面，本發明提出了一種IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽。根據本發明的實施例，其多肽活性片段為下列至少之一:
[0032]I) SEQ ID No:1 所示序列:MNKLYIGNLNESVTPADLEK ；
[0033]2) SEQ ID No: 2 所示序列:IAPPETPDSKVRMVIITGPP ;
[0034]3) SEQ ID No: 3 所示序列:RVIGKGGKTVNELQNLTAAE ；
[0035]4) SEQ ID No: 1_3所示胺基酸序列經胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的胺基酸衍生序列。
`[0036]根據本發明的實施例，優選地，本發明的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽具有如RVIGKGGKTVNELQNLTAAE (SEQ ID NO:3)所示的胺基酸序列。由此，可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1自身抗體的效率。
[0037]在本發明的再一方面，本發明提出了一種分離的多肽。根據本發明的實施例，該多肽具有如SEQ ID NO:1-3所示胺基酸序列至少之一。即，多肽具有如下列所示胺基酸序列之一:
[0038]MNKLYIGNLNESVTPADLEK (SEQ ID NO:1);
[0039]IAPPETPDSKVRMVIITGPP (SEQ ID NO:2);
[0040]RVIGKGGKTVNELQNLTAAE (SEQ ID NO:3)。
[0041]需要說明的是，上述多肽均來自於IGF2BP1的全長序列所對應的(IGF2BP1的全長序列見NCBI NP_006537)。另外，在本文中所使用的術語「多肽」是指至少兩個胺基酸通過肽鍵連接而得到的寡聚物，其中，多肽中所包含的胺基酸殘基的數目並不受特別限制。根據本發明的實施例，多肽可以含有20個胺基酸。當然，本領域技術人員可以理解的是，還可以對上述多肽進行化學修飾，以便增加多肽的抗原性，有助於多肽包被到ELISA板底。根據本發明的實施例，利用具有上述胺基酸序列的多肽，能夠有效地檢測樣品，例如肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品(例如血清樣品)中的IGF2BP1自身抗體。發明人發現從IGF2BP1完整序列得到的上述多肽可以作為IGF2BP1的抗原表位，能夠與血液樣本中IGF2BP1自身抗體特異性的反應，因而，可以有效地用於檢測對象血液樣本中的IGF2BP1自身抗體，由此，可以有效地用於篩查肺癌疑似患者血清，為肺癌的診斷提供了一個新的檢驗指標。
[0042]根據本發明的實施例，優選地所述多肽具有如SFFFLSH1ISNLQFNSSLED (SEQ IDNO:1)所示的胺基酸序列。由此，可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1自身抗體的效率。
[0043]本領域技術人員可以理解的是，可以有效地通過常規合成方法，合成上述多肽，從而代替重組表達的生物合成方式。
[0044]IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽的應用及試劑盒
[0045]由此，在本發明的又一方面，本發明還提出了前面所述多肽在檢測樣品中IGF2BP1自身抗體的用途。根據本發明的實施例，可以用上述多肽進行檢測的樣品的類型並不受特別限制。根據本發明的實施例，優選的樣品為來自肺癌或疑似肺癌患者的血液樣本。由此，可以利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣本中的IGF2BP1自身抗體，由此可以確定患者是否患有惡性腫瘤，為惡性腫瘤檢測提供輔助手段，或者提供惡性腫瘤例如肺癌的早期篩查。另外，還可以通過檢測對象血液中IGF2BP1自身抗體的存在，而對患者進行預後預測分析。
[0046]利用本發明的多肽檢測樣品中IGF2BP1自身抗體的方法並不受特別限制。根據本發明的實施例，可以通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法，藉助本發明的多肽檢測樣品中的IGF2BP1自身抗體。由此，可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1自身抗體的效率。作為示例，可以採用下列方法利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1抗體:
[0047]首先，用ρΗ9.6 的碳酸鹽緩衝液(NaCO30.159g, NaHCO30.293g，加水至 100ml，pH 值為9.6)稀釋多肽至I μ g/ml,以100 μ I/孔的量加入到96孔酶標板的孔中，封板膜密封后4°C過夜。
[0048]接下來，棄去孔中的液體，0.P/oTBS-T洗滌緩衝液(B卩含0.l%Tween-20的TBS-T溶液，其配製方法為:NaC18.7g，Trisl.21g，加去離子水至1000ml，pH7.5，再加入Tween-20 lml)洗漆酶標板5次,每次3min。
[0049]接著，向孔中添加5%BSA/0.05%TBS_T封閉緩衝液(其配製方法為:NaC10.87g，Tris0.121g，加去離子水至 100ml, ρΗ7.5，再加入 Tween-200.5ml, BSA5g)，每孔 300 μ 1，封板膜密封后37°C孵育Ih。
[0050]接著，添加待測樣品。用5%BSA/0.05%TBS-T封閉緩衝液稀釋血清，稀釋比例為1:100，完全棄去孔中液體，每孔加血清稀釋液100 μ 1，每例血清樣本3個復孔，每板設立2個陽性對照孔，加入已知陽性血清，每板設立2個空白對照孔，加入0.P/oTBS-T洗滌緩衝液。封板膜密封后37°C孵育2h。棄去孔中液體，洗滌酶標板5次，每次3min。
[0051]接著，進行第二抗體免疫反應。利用5%BSA/0.05%TBS-T封閉緩衝液稀釋辣根過氧化物酶標記的山羊抗人IgG，稀釋比例1:5000，每孔加100μ 1，封板膜密封后37°C孵育lh。棄去孔中液體，洗滌酶標板5次，每次3min。
[0052]接著，加底物顯色。按照常規ELISA試劑盒說明書(例如康為世紀TMB顯色試劑盒)，加入顯色底物，每孔加入100 μ 1，室溫避光條件下顯色lOmin，每孔加入50μ 12M H2SO4終止反應。
[0053]接著，酶標儀492nm波長條件下測定光密度OD值。
[0054]最後，基於所得到的光密度OD值與預定的參考值的區別，確定待測樣品是否來自於患有肺癌患者。根據本發明的實施例，可以利用確診癌症患者和健康人(健康志願者)的血液樣品進行平行試驗所得到的數值作為預定的參考值。
[0055]例如，用ELISA方法檢測血液樣本中的抗IGF2BP1的自身抗體水平。如果待測樣本中的酶底物顯色反應的光密度值高於X+2SD，則待測血清為肺癌疑似患者血清，其中，在X+2SD中，X為健康人血清中的酶底物顯色反應的光密度平均值，2SD為健康人血清中的酶底物顯色反應的光密度值的二倍標準差。具體地，根據本發明的實施例，本發明所採用的X+2SD值是通過下列方法獲得的:按照前述利用本發明的多肽檢測樣品中IGF2BP1自身抗體的方法，採用89例健康對照血液樣本，測定其酶底物顯色反應的OD值，將測得的OD值以單樣本K-S檢驗分析符合正態分布(p>0.05)後，計算獲得各OD值的平均值(X=0.17)及標準差(SD=0.09)，則以X+2SD (0.35)為正常值的上限。
[0056]根據本發明的另一方面，本發明還提出了前面所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽在製備檢測腫瘤血清IGF2BP1抗體試劑盒中的用途。尤其是，該試劑盒可以用於檢測的腫瘤為肺癌。另外,利用該試劑盒還可以通過檢測對象血液中IGF2BP1自身抗體的存在，而對患者對治療方法例如放射療法的反應進行預後。
[0057]為此，根據本發明的再一方面，本發明提出了一種用於檢測樣品中IGF2BP1抗體的試劑盒。根據本發明的實施例，該試劑盒包括:前面所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽。具體地，根據本發明的實施例，該試劑盒可以包括:96孔板，所述96孔板的孔中包被前面所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽。進一步，該試劑盒可以進一步包括:陰性對照樣品，所述陰性對照樣品為IGF2BP1抗體為陰性的血清，或者/額外地可以進一步包括:標準樣品，所述標準樣品為IGF2BP1抗體濃度分別為lU/ml，5U/ml，10U/ml, 15U/ml的血清。根據本發明的實施例，IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽的濃度可以為，每個反應孔Iyg/ml。根據本發明的實施例，尤其是，該試劑盒可以用於檢測的腫瘤為肺癌。在本發明的再一方面，本發明提出了前面所述多肽在製備試劑盒中的用途，所述試劑盒用於檢測樣品中的IGF2BP1自身抗體。根據本發明的實施例，所述樣品為來自肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品。由此，可以利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1自身抗體，由此可以確定患者是否患有惡性腫瘤，為惡性腫瘤檢測提供輔助手段，或者監控惡性腫瘤例如肺癌的進展。另外，利用該試劑盒還可以`通過檢測對象血液中IGF2BP1自身抗體的存在，而對患者對治療方法例如放射療法的反應進行預後。
[0058]在本發明的又一方面，本發明提出了一種用於檢測樣品中IGF2BP1自身抗體的試劑盒。根據本發明的實施例，該試劑盒包括:前面所述的多肽。由此，利用根據本發明的實施例，可以有效地藉助根據本發明的多肽對樣品中的IGF2BP1抗體進行檢測。根據本發明的實施例，該試劑盒可以進一步包括:適於進行ELISA檢測的試劑。由此，可以通過ELISA檢測方法，利用根據本發明的多肽對樣品中的IGF2BP1抗體進行檢測，從而可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1抗體的效率。根據本發明的實施例，所述多肽設置於96孔板中，例如可以包被96孔板的孔，例如可以通過常規處理如藉助包被液和阻滯液進行。由此，可以方便地高通量地進行檢測。可以進一步提高利用多肽檢測肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品中的IGF2BP1抗體的效率。試劑盒中還可以包含其他試劑，例如衝洗緩衝液，樣品稀釋緩衝液，TMB底物溶液，反應終止液，辣根酶標記的二抗，陰性對照樣品，標準樣品。其中，陰性對照樣品為IGF2BP1抗體為陰性的血清，標準樣品為IGF2BP1 抗體濃度分別為 lU/ml，5U/ml，10U/ml，15U/ml 的血清。[0059]根據本發明的實施例，所述樣品為來自肺癌或疑似肺癌患者的血液樣品。
[0060]另外，利用該試劑盒還可以通過檢測對象血液中IGF2BP1自身抗體的存在，而對患者對治療方法例如放射療法的反應進行預後。
[0061]需要說明的是，在本文中，有時也將「IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽」簡稱為「多肽」，將「IGF2BP1自身抗體」簡稱為「IGF2BP1抗體」。
[0062]下面通過具體實施例，對本發明進行解釋。需要說明的是，下列實施例僅僅是說明性的，並不以任何方式限制本發明。另外，下列實施例中所採用的所有儀器、材料等均為市售可得的，如在下列實施例中沒有明確指出的操作，可以通過本領域技術人員常規的操作方法進行。
[0063]實施例1多肽的製備
[0064]1.1 一般方法
[0065]依據IGF2BP1蛋白的全長胺基酸殘基序列(NP_006537)，採用原位合成技術在活化纖維素膜表面合成長度為18~20的多肽的多肽晶片(Piptide Array)，每個多肽直接順
序重疊10個胺基酸殘基。
[0066]1.2原位合成製備多肽晶片(Piptide Array)
[0067]根據蛋白及多肽胺基酸殘基長度、重疊序列長度進行多肽合成儀ASP SL (德國，intavis公司)MutilPep合成 控制程序設定,依據程序控制在每個合成周期添加一種特定胺基酸到活化的硝酸纖維素膜表面合成位點，並催化胺基酸之間肽鍵形成。合成肽鏈長度為20個胺基酸殘基，需進行20個周期的反應，按照ASP SL多肽合成儀的操作流程，將20種FMOC-基團保護的天然胺基酸溶液放到機器上對應的位置。每個周期之間胺基酸要經過帽化，FMOC-基團脫保護等一系列的過程才能與下一個胺基酸結合，最後一個周期結束時，要將胺基酸的側鏈保護基團脫掉。其步驟為:多肽合成儀ASP SL將指定的胺基酸滴加到硝酸纖維素膜上特定的位置，2%的乙酸酐溶液洗膜5分鐘，二甲基甲醯胺洗膜5次，每次2分鐘。20%的哌啶溶液洗膜10分鐘脫去FMOC-保護基團，二甲基甲醯胺洗膜5次，每次2分鐘。乙醇洗膜2次，每次2分鐘，晾乾。重複上述操作，直到完成20個周期，最後一個周期結束時20%的哌啶溶液洗膜2次，每次10分鐘。二甲基甲醯胺洗膜5次，每次2分鐘。乙醇洗膜2次後晾乾過夜。最後，IOml三氟乙酸,300 μ I 二氯甲烷,200 μ I水充分混合,用混合液洗膜I小時，脫去側鏈保護基團，二氯甲烷洗膜5次，每次2分鐘。二甲基甲醯胺洗膜5次，每次2分鐘。乙醇洗膜2次後晾乾。多肽晶片合成後在一 20°C密封保存備用。
[0068]實施例2篩選與肺癌相關的多肽
[0069]2.1多肽晶片的水化
[0070]首先，將實施例1所製備的多肽晶片浸入40mll00%乙醇中，搖床上搖5分鐘。然後，將該多肽晶片浸入40ml75%乙醇中，搖床上搖5分鐘。接下來，將多肽晶片浸入40ml50%乙醇中，搖床上搖5分鐘。接著，加入150ml PBS浸泡30分鐘(以膜上的白點完全退色為準)。最後，將將多肽晶片浸入40ml5%脫脂奶粉/PBS-T溶液中，室溫下孵育3小時進行封閉。
[0071]2.2多肽陣列與血清反應
[0072]將10例肺癌患者血清等量混合，製備肺癌血清池，用5%脫脂奶粉/PBS-T溶液I: 1000稀釋製備成免疫反應液，將多肽晶片放入雜交袋內，按0.lml/cm2加反應液，去除袋內所有氣泡，封膜機封口，4°C輕輕振蕩過夜。
[0073]將10例健康對照血清混合，製備健康對照血清池，用5%脫脂奶粉/PBS-T溶液I: 1000稀釋製備成免疫反應液，將多肽晶片放入雜交袋內，按0.lml/cm2加反應液，去除袋內所有氣泡，封膜機封口，4°C輕輕振蕩過夜。
[0074]血清免疫反應結束後，剪開雜交袋，棄去反應液，PBS_T40ml洗多肽晶片6次，每次10分鐘，將多肽晶片放入雜交袋內，加1:10000稀釋的山羊抗人IgG溶液，按0.lml/cm2加二抗反應液，封好雜交袋，室溫下輕輕振蕩2小時，40ml PBS-T洗膜3次，每次10分鐘，40mlPBS洗膜3次，每次10分鐘。
[0075]接下來，進行ECL顯影，曝光，將膠片進行掃描，用AlphaView軟體系統分析圖像。
[0076]2.3 篩選
[0077]根據上述Piptide Array免疫反應結果,挑選與肺癌患者血清反應陽性而與健康對照組血清反應陰性的差異多肽點(序列見表1 )，組成多肽原位Dot-Blot膜，按照實施例1中所述製備方法，製備包含這5條多肽及對照在內的多肽晶片，通過與29例肺癌患者血清進行免疫反應計算各點陽性頻度值，確定特異性序列(見下表1)。如表1所示，其中，敏感性最高的是 RVIGKGGKTVNELQNLTAAE (SEQ ID NO:3)。
[0078]表1
【權利要求】
1.一種IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽，其特徵在於，其多肽活性片段為下列至少之一:
1)SEQ ID No:1 所示序列:MNKLYIGNLNESVTPADLEK ；
2)SEQ ID No: 2 所示序列:IAPPETPDSKVRMVIITGPP ；
3)SEQ ID No: 3 所示序列:RVIGKGGKTVNELQNLTAAE ； 4)SEQ ID No: 1-3所示胺基酸序列經胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的胺基酸衍生序列。
2.根據權利要求1所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽，其特徵在於，所述多肽具有如 RVIGKGGKTVNELQNLTAAE (SEQ ID NO:3)所示的胺基酸序列。
3.權利要求1或2所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽在製備檢測腫瘤血清IGF2BP1自身抗體試劑盒中的用途。
4.根據權利要求3所述的用途，其特徵在於，所述腫瘤為肺癌。
5.一種用於檢測樣品中IGF2BP1抗體的試劑盒，其特徵在於，包括: 權利要求1或2所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特徵在於，包括: 96孔板，所述96孔板的孔中包被權利要求1或2所述的IGF2BP1自身抗體識別的抗原·多肽。
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特徵在於，進一步包括:陰性對照樣品，所述陰性對照樣品為IGF2BP1抗體為陰性的血清。
8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特徵在於，進一步包括:標準樣品，所述標準樣品為IGF2BP1抗體濃度分別為lU/ml，5U/ml，10U/ml, 15U/ml的血清。
9.根據權利要求6所述的試劑盒，其特徵在於，所述IGF2BP1自身抗體識別的抗原多肽的濃度為，每個反應孔I μ g/ml。
10.根據權利要求5所述的試劑盒，其特徵在於，所述樣品為腫瘤血清，任選地，所述腫瘤為肺癌。
【文檔編號】G01N33/574GK103848889SQ201210506722
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年11月30日 優先權日:2012年11月30日
【發明者】嶽文濤, 張麗娜, 王玥, 趙曉婷, 顧勐 申請人:北京市結核病胸部腫瘤研究所