一種高純度爵床定B的製備工藝的製作方法

2023-06-22 04:13:11

本發明涉及一種高純度爵床定b的製備工藝，具體屬於中藥材提取
技術領域：
。
背景技術：
：爵床justiciaprocumbensl.系爵床科草本植物，主要分布於秦嶺以南至西南地區，貴州全省各地均產，資源十分豐富，該品種自東漢以前便收載於《神農本草經》，具有清熱解毒、活血的功效，主要用於治療感冒發熱、咳嗽、咽痛、瘧疾、腎盂腎炎、乳糜尿、肝硬化腹水、疳積等症，外用治療癰瘡癤腫、跌打損傷。大量研究表明：該藥材在抗腫瘤、抗病毒及抗血小板凝集等方面具有較為顯著的生物活性，其主要活性物質便是以爵床定b(justicidinb)、6′-羥基-爵床定b(6'-hydroxyjusticidinb)等木脂素類成分為主的代謝組分。在醫藥領域，它們即可作為單體進行化學藥物開發，也可作為指標性成分監測爵床藥材的質量，實現經濟與社會雙重效益。zl201410266261.8(一種從爵床草中提取爵床定a的方法)中公開的是爵床定a提取方法。爵床定a和爵床定b兩者結構不同，所採用的提取工藝也不同。目前，國內外從爵床中提取爵床定b主要使用經典化學提取、分離方法，但這些方法難以實現經濟、快速、準確分離和高純度製備；2015年寧波大學駱其軍研究員在molecules雜誌20卷7048-7058頁發表利用hsssc製備爵床定b，但該方法需要定製特有儀器設備，費用較高，普通技術人員在不藉助該儀器時無法實現。現有技術從爵床植物中提取爵床定b分離步驟多，不易製備，需要藉助大型儀器設備才能提純，因此研究一種步驟簡單，能夠得到高純度爵定床b的製備工藝，顯得尤為必要。技術實現要素：為解決現有技術的不足，本發明的目的在於提供一種高純度爵床定b的製備工藝，簡單易操作，能夠得到高純度的爵床定b。為了實現上述目標，本發明採用如下的技術方案：一種高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮；(2)萃取；(3)柱層析；(4)重結晶。進一步地，前述高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮：取爵床藥材全草粉碎，加入三氯甲烷或二氯甲烷，浸泡，過濾，收集濾液；藥渣重複浸提2次，濾過，收集濾液，合併3次濾液，減壓濃縮回收溶劑，得爵床浸膏；(2)萃取：取步驟(1)所得爵床浸膏先加入蒸餾水完全溶解，隨後加入石油醚和三氯甲烷或二氯甲烷的混合溶劑，搖勻，萃取，減壓濃縮回收溶劑後，取下層萃取物；(3)柱層析：取步驟(2)所得下層萃取物加入甲醇溶解，以微孔樹脂進行柱層析，純甲醇洗脫去除葉綠素後，減壓濃縮回收溶劑，備用；再以矽膠進行柱層析，採用石油醚和乙酸乙酯或丙酮的混合溶液進行等度洗脫，收集樣品，tlc檢測不到所需組分為止，合併，減壓濃縮回收溶劑，得爵床定b粗品；(4)重結晶：取步驟(3)所得爵床定b粗品，用甲醇和三氯甲烷或二氯甲烷的混合溶劑進行重結晶，過濾即得爵床定b純品。優選地，前述高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮：取爵床藥材全草粉碎，加入其體積3～5倍量的三氯甲烷或二氯甲烷，浸泡24h～48h，過濾，收集濾液；藥渣重複浸提2次，濾過，收集濾液，合併3次濾液，減壓濃縮回收溶劑，得爵床浸膏；(2)萃取：取步驟(1)所得爵床浸膏，先加入爵床浸膏體積3～5倍量的蒸餾水完全溶解，隨後加入爵床浸膏體積4～6倍量的三氯甲烷或二氯甲烷和爵床浸膏體積1倍量的石油醚，搖勻，萃取，減壓濃縮回收溶劑後，取下層萃取物；(3)柱層析：取步驟(2)所得下層萃取物加入其體積2-3倍量的甲醇溶解，以微孔樹脂進行柱層析，採用純甲醇洗脫去除葉綠素後，減壓濃縮回收溶劑，備用；再以矽膠進行柱層析，採用石油醚和乙酸乙酯或丙酮的混合溶液進行等度洗脫，洗脫量達到進行柱層析萃取物體積的50-60倍量時開始收集樣品，tlc檢測不到所需組分為止，合併，減壓濃縮回收溶劑，得爵床定b粗品；(4)重結晶：取步驟(3)所得爵床定b粗品，用甲醇和三氯甲烷或二氯甲烷的混合溶劑進行重結晶，過濾即得爵床定b純品。前述高純度爵床定b的製備工藝，步驟(3)中，微孔樹脂的加入量為下層萃取物重量的50～100倍。前述高純度爵床定b的製備工藝，步驟(3)中，矽膠的加入量為去除葉綠素後的下層萃取物重量的50～100倍。前述高純度爵床定b的製備工藝，步驟(3)中，石油醚和乙酸乙酯或丙酮的混合溶液中，石油醚與乙酯乙酯或丙酮的體積比為：10～15︰1。前述高純度爵床定b的製備工藝，步驟(3)中，以矽膠進行柱層析時，柱直徑與長度比例為3:40。採用該比例，分離效果好，雜質少。前述高純度爵床定b的製備工藝，步驟(4)中，甲醇和三氯甲烷或二氯甲烷的混合溶劑中，三氯甲烷或二氯甲烷與甲醇的體積比為：150～200︰1。選擇單一溶劑進行重結晶存在結晶效果不好，結晶速度慢或者結晶不成功的問題。採用本發明的混合溶劑作為重結晶溶劑，結晶速度快，晶型完整，純度高。圖1是本發明一種實施方式的製備工藝流程圖。對採用發明製備工藝得到產物進行了esi-ms、1hnmr和13c-nmr測試。結果如下：esi-ms:m/z387.09[m+na]+；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.71(1h,s),7.26(1h,d,j＝0.6hz),7.11(1h,s),6.97(1h,d,j＝7.9hz),6.86(1h,dd,j＝1.1,0.5hz),6.85(1h,s),6.10(1h,dd,j＝1.4,0.5hz),6.05(1h,dd,j＝1.3,0.5hz),5.38(2h,s),4.05(3h,s),3.82(3h,s)；13c-nmr(100mhz,cdcl3)δ(ppm)：170.0(c-11),151.8(c-7),150.1(c-6),147.5(c-4'),147.5(c-3'),139.5(c-1),139.5(c-3),133.1(c-10),128.8(c-9),128.4(c-1'),123.5(c-6'),118.3(c-2),118.3(c-4),110.6(c-2'),108.2(c-8),106.0(c-5),105.8(c-5'),101.2(3'-och2o-4'),68.0(c-12),56.1(6-och3),55.8(7-och3)。如圖2和圖3所示。表明通過本發明方法製備得到爵床定b。採用高效hplc檢測分析本發明製備工藝所得的爵床定b的純度。高效hplc色譜條件：thermohypersilgoldc18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為乙腈-水，體積比45︰55；體積流量：1ml/min；柱溫：25℃；檢測波長：262nm；進樣量：10μl。結果見下表1。現有技術中，製備得到的爵床定b純度為95％，而通過本發明的製備工藝得到的爵定床b純度達到98％以上。表1組別純度(％)實施例199.0％實施例299.1％實施例399.2％實施例499.0％實施例599.1％實施例699.1％本發明的有益之處在於：本發明提供了一種高純度爵床定b的製備工藝，該工藝步驟簡單，操作容易，條件溫和易於控制。採用本發明的製備工藝分離度高，所得產物雜質少。本發明的製備工藝在不利用貴重儀器的條件下，利用普通技術手段便可經濟、快速、準確分離和大量製備高純度爵床定b。本發明製備工藝克服了傳統製備方法中分離步驟多，不易製備，需要藉助大型儀器設備才能提純等問題。通過本發明製備工藝製備得到的爵床定b純度大於98％。附圖說明圖1是本發明一種實施方式的製備工藝流程圖；圖2是本發明高純度爵床定b的1hnmr圖；圖3是本發明高純度爵床定b的13c-nmr圖。具體實施方式以下結合具體實施例對本發明作進一步的介紹。實施例1一種高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮：取爵床藥材全草粉碎，加入其體積3倍量的二氯甲烷，浸泡24h，過濾，收集濾液；藥渣重複浸提2次，濾過，收集濾液，合併3次濾液，減壓濃縮回收溶劑，得爵床浸膏；(2)萃取：取步驟(1)所得爵床浸膏，先加入爵床浸膏體積3倍量的蒸餾水完全溶解，隨後加入爵床浸膏體積4倍量的二氯甲烷和爵床浸膏體積1倍量的石油醚，搖勻，萃取，減壓濃縮回收溶劑後，取下層萃取物；(3)柱層析：取步驟(2)所得下層萃取物加入其體積2倍量的甲醇溶解，以微孔樹脂進行柱層析，微孔樹脂的加入量為下層萃取物重量的50倍，採用純甲醇洗脫去除葉綠素後，減壓濃縮回收溶劑，備用；再以矽膠進行柱層析，矽膠的加入量為去除葉綠素後的下層萃取物重量的50倍，柱直徑與長度比例為3:40，採用石油醚和丙酮的混合溶液進行等度洗脫，石油醚和丙酮混合溶液中，石油醚與丙酮的體積比為：10︰1，洗脫量達到進行柱層析萃取物體積的50倍量時開始收集樣品，tlc檢測不到所需組分為止，合併，減壓濃縮回收溶劑，得爵床定b粗品；(4)重結晶：取步驟(3)所得爵床定b粗品，用二氯甲烷和甲醇混合溶劑進行重結晶，二氯甲烷和甲醇混合溶劑中二氯甲烷與甲醇的體積比為：150︰1，過濾即得爵床定b純品。經hplc檢測，爵床定b純度為99.0％。實施例2一種高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮：取爵床藥材全草粉碎，加入其體積5倍量的二氯甲烷，浸泡48h，過濾，收集濾液；藥渣重複浸提2次，濾過，收集濾液，合併3次濾液，減壓濃縮回收溶劑，得爵床浸膏；(2)萃取：取步驟(1)所得爵床浸膏，先加入爵床浸膏體積5倍量的蒸餾水完全溶解，隨後加入爵床浸膏體積6倍量的三氯甲烷和爵床浸膏體積1倍量的石油醚，搖勻，萃取，減壓濃縮回收溶劑後，取下層萃取物；(3)柱層析：取步驟(2)所得下層萃取物加入其體積3倍量的甲醇溶解，以微孔樹脂進行柱層析，微孔樹脂的加入量為下層萃取物重量的100倍，採用純甲醇洗脫去除葉綠素後，減壓濃縮回收溶劑，備用；再以矽膠進行柱層析，矽膠的加入量為去除葉綠素後的下層萃取物重量的100倍，柱直徑與長度比例為3:40，採用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液進行等度洗脫，石油醚和乙酸乙酯的混合溶液中，石油醚與乙酯乙酯的體積比為：15︰1，洗脫量達到進行柱層析萃取物體積的60倍量時開始收集樣品，tlc檢測不到所需組分為止，合併，減壓濃縮回收溶劑，得爵床定b粗品；(4)重結晶：取步驟(3)所得爵床定b粗品，用二氯甲烷和甲醇混合溶劑進行重結晶，二氯甲烷和甲醇混合溶劑中二氯甲烷與甲醇的體積比為：150︰1，過濾即得爵床定b純品。經hplc檢測，爵床定b純度為99.1％。實施例3一種高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮：取爵床藥材全草粉碎，加入其體積4倍量的二氯甲烷，浸泡36h，過濾，收集濾液；藥渣重複浸提2次，濾過，收集濾液，合併3次濾液，減壓濃縮回收溶劑，得爵床浸膏；(2)萃取：取步驟(1)所得爵床浸膏，先加入爵床浸膏體積4倍量的蒸餾水完全溶解，隨後加入爵床浸膏體積5倍量的二氯甲烷和爵床浸膏體積1倍量的石油醚，搖勻，萃取，減壓濃縮回收溶劑後，取下層萃取物；(3)柱層析：取步驟(2)所得下層萃取物加入其體積2.5倍量的甲醇溶解，以微孔樹脂進行柱層析，微孔樹脂的加入量為下層萃取物重量的75倍，採用純甲醇洗脫去除葉綠素後，減壓濃縮回收溶劑，備用；再以矽膠進行柱層析，矽膠的加入量為去除葉綠素後的下層萃取物重量的70倍，柱直徑與長度比例為3:40，採用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液進行等度洗脫，石油醚和乙酸乙酯混合溶液中，石油醚與乙酯乙酯的體積比為：12︰1，洗脫量達到進行柱層析萃取物體積的55倍量時開始收集樣品，tlc檢測不到所需組分為止，合併，減壓濃縮回收溶劑，得爵床定b粗品；(4)重結晶：取步驟(3)所得爵床定b粗品，用二氯甲烷和甲醇混合溶劑進行重結晶，二氯甲烷和甲醇混合溶劑中二氯甲烷與甲醇的體積比為：150︰1，過濾即得爵床定b純品。經hplc檢測，爵床定b純度為99.2％。實施例4一種高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮：取爵床藥材全草粉碎，加入其體積3.5倍量的三氯甲烷，浸泡30h，過濾，收集濾液；藥渣重複浸提2次，濾過，收集濾液，合併3次濾液，減壓濃縮回收溶劑，得爵床浸膏；(2)萃取：取步驟(1)所得爵床浸膏，先加入爵床浸膏體積4倍量的蒸餾水完全溶解，隨後加入爵床浸膏體積4.5倍量的三氯甲烷和爵床浸膏體積1倍量的石油醚，搖勻，萃取，減壓濃縮回收溶劑後，取下層萃取物；(3)柱層析：取步驟(2)所得下層萃取物加入其體積2.2倍量的甲醇溶解，以微孔樹脂進行柱層析，微孔樹脂的加入量為下層萃取物重量的80倍，採用純甲醇洗脫去除葉綠素後，減壓濃縮回收溶劑，備用；再以矽膠進行柱層析，矽膠的加入量為去除葉綠素後的下層萃取物重量的60倍，柱直徑與長度比例為3:40，採用石油醚和丙酮的混合溶液進行等度洗脫，石油醚和丙酮的混合溶液中，石油醚與丙酮的體積比為：11︰1，洗脫量達到進行柱層析萃取物體積的53倍量時開始收集樣品，tlc檢測不到所需組分為止，合併，減壓濃縮回收溶劑，得爵床定b粗品；(4)重結晶：取步驟(3)所得爵床定b粗品，用三氯甲烷和甲醇的混合溶劑進行重結晶，三氯甲烷和甲醇的混合溶劑中，三氯甲烷與甲醇的體積比為：150︰1，過濾即得爵床定b純品。經hplc檢測，爵床定b純度為99.0％。實施例5一種高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮：取爵床藥材全草粉碎，加入其體積4.5倍量的三氯甲烷，浸泡42h，過濾，收集濾液；藥渣重複浸提2次，濾過，收集濾液，合併3次濾液，減壓濃縮回收溶劑，得爵床浸膏；(2)萃取：取步驟(1)所得爵床浸膏，先加入爵床浸膏體積3.5倍量的蒸餾水完全溶解，隨後加入爵床浸膏體積5.5倍量的二氯甲烷和爵床浸膏體積1倍量的石油醚，搖勻，萃取，減壓濃縮回收溶劑後，取下層萃取物；(3)柱層析：取步驟(2)所得下層萃取物加入其體積2.8倍量的甲醇溶解，以微孔樹脂進行柱層析，微孔樹脂的加入量為下層萃取物重量的60倍，採用純甲醇洗脫去除葉綠素後，減壓濃縮回收溶劑，備用；再以矽膠進行柱層析，矽膠的加入量為去除葉綠素後的下層萃取物重量的75倍，柱直徑與長度比例為3:40，採用石油醚和丙酮的混合溶液進行等度洗脫，石油醚和丙酮的混合溶液中，石油醚與丙酮的體積比為：13︰1，洗脫量達到進行柱層析萃取物體積的57倍量時開始收集樣品，tlc檢測不到所需組分為止，合併，減壓濃縮回收溶劑，得爵床定b粗品；(4)重結晶：取步驟(3)所得爵床定b粗品，用三氯甲烷和甲醇的混合溶劑進行重結晶，三氯甲烷和甲醇的混合溶劑中，三氯甲烷與甲醇的體積比為：150︰1，過濾即得爵床定b純品。經hplc檢測，爵床定b純度為99.1％。實施例6一種高純度爵床定b的製備工藝，包括以下步驟：(1)爵床藥材的浸提、濃縮：取爵床藥材全草粉碎，加入其體積4倍量的三氯甲烷，浸泡28h，過濾，收集濾液；藥渣重複浸提2次，濾過，收集濾液，合併3次濾液，減壓濃縮回收溶劑，得爵床浸膏；(2)萃取：取步驟(1)所得爵床浸膏，先加入爵床浸膏體積4.5倍量的蒸餾水完全溶解，隨後加入爵床浸膏體積4.5倍量的三氯甲烷和爵床浸膏體積1倍量的石油醚，搖勻，萃取，減壓濃縮回收溶劑後，取下層萃取物；(3)柱層析：取步驟(2)所得下層萃取物加入其體積2.6倍量的甲醇溶解，以微孔樹脂進行柱層析，微孔樹脂的加入量為下層萃取物重量的65倍，採用純甲醇洗脫去除葉綠素後，減壓濃縮回收溶劑，備用；再以矽膠進行柱層析，矽膠的加入量為去除葉綠素後的下層萃取物重量的85倍，柱直徑與長度比例為3:40，採用石油醚和乙酸乙酯混合溶液進行等度洗脫，石油醚和乙酸乙酯混合溶液中石油醚與乙酯乙酯的體積比為：14︰1，洗脫量達到進行柱層析萃取物體積的56倍量時開始收集樣品，tlc檢測不到所需組分為止，合併，減壓濃縮回收溶劑，得爵床定b粗品；(4)重結晶：取步驟(3)所得爵床定b粗品，用三氯甲烷和甲醇的混合溶劑進行重結晶，三氯甲烷和甲醇的混合溶劑中，三氯甲烷與甲醇的體積比為：150︰1，過濾即得爵床定b純品。經hplc檢測，爵床定b純度為99.1％。當前第1頁12