測定試劑盒的製作方法
2023-06-26 23:50:06
專利名稱：測定試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明是關於在特異性結合蛋白存在的情況下用於測定未經萃取的血液中藥物含量的測定方法和測定試劑盒。該測定方法尤其適合於測定與親免疫因子結合藥物(如環孢多肽素、納巴黴素類或FK506類化合物)的血中濃度。
環孢多肽類包括一類結構上不同的環狀聚N-甲基化的十一肽，它們通常具有免疫抑制作用、抗炎作用、抗病毒作用和/或抗寄生蟲作用，其作用較大或較小。第一個被鑑定的環孢多肽類藥物是真菌代謝產物環孢多肽A(或稱為Ciclosporin)，其結構已在Merck Index，11版，Merck Co.，Inc.；Rahway，New Jersey，USA(1989)(在編號2759下給出)。後來被鑑定的環孢多肽有環孢多肽B、C、D和G，它們也列在Merck Index 2759中。大量合成的類似物也是已知的，具有代表性的實例已在EP296122、EP484281和GB2222770中公開。
納巴黴素是由吸水鏈黴菌產生的大環內酯免疫抑制劑，已發現它在藥學上有許多用途，尤其可作為免疫抑制劑，用於治療和預防器官移植排斥反應和自身免疫性疾病。納巴黴素的結構見Kesseler，H.，等1993；Helv.Chim.Acta；76117。已合成了大量的納巴黴素的衍生物，包括例如某些醯基和氨醯基-納巴黴素(見美國專利4316885、4650803和5151413)、27-脫甲基-納巴黴素(見WO92/14737)、26-二氫-納巴黴素(見美國專利5138051)、某些吡唑類衍生物(見美國專利5164399)、某些烷氧基酯衍生物(見美國專利5233036)和40-氧-烷基化的衍生物(WO94/09010)。納巴黴素及其結構類似物和衍生物在本申請說明書中總起來稱為「納巴黴素類」。
FK506是由津島鏈黴菌No9993產生的大環內酯免疫抑制劑。FK506的結構見Merck Index的附錄A5。保留有FK506的基本結構和免疫學性質的大量有相關化合物也是已知的。這些化合物在許多專利(例如EP184162、EP315973、EP323042、EP423714、EO427680、EP465426、EP474126、WO91/13889、WO91/19495、EP484936、EP532088、EP532089、WO93/5059等)中已經公開。這些化合物在本申請說明書中總起來稱為「FK506類化合物」由於它們十分有用的藥學特性，因此環孢多肽類(尤其是環孢多肽A和G)、納巴黴素類和FK506類化合物廣泛地用於例如防止移植排斥反應和治療自身免疫疾病。但是，在較大劑量下這些化合物有副作用，因此它們在血液中的濃度必須保持在某一治療的範圍內。由於生物利用度和代謝轉化速率對各個患者是特有的，所以給藥劑量對各個患者也應是特定的。因此每隔一定間隔監測上述免疫抑制劑在血液中的濃度是必須的。
雖然以高壓液相色譜法(HPLC)為基礎的某些測定方法已經被建立，但是都存在應用麻煩，或者沒有足夠專一性的缺點。對於環孢多肽和FK-506，已經製備出其特異性單克隆抗體，並已建立了以該抗體為基礎的測定方法。但是，至今提供的所有這些測定方法均需要首先對血液或血漿樣品用溶劑(如甲醇)進行萃取，然後用蒸發或稀釋法將溶劑除去。最後才能將抗體加到樣品中進行放射免疫測定(RIA)。雖然這種以特異性單克隆抗體為基礎的測定方法證明是很好的，但是它需要萃取步驟，下一步又要除去溶劑，如果不小心的話，將會導致測定變得不敏感和不精確。因此，該測定方法必須由熟練的技術人員操作，並且該方法很耗費時間。
鑑於環孢多肽、納巴黴素和FK506類化合物作為藥物應用的重要性，因此需要建立一種簡單的、靈敏的檢測方法，用於測定它們在血液中的濃度。
因此，本發明提供了一種檢測血液中與親免疫因子結合的藥物濃度的測定方法，該方法包括加入結合競爭劑，從血液中的免疫抑制劑-親免疫因子複合物中置換出該藥物；再加入一個能與該藥物結合但與結合競爭劑不明顯結合的受體；然後從樣品中分離出受體-藥物複合物；測定該藥物的量。
現已發現，在血液中，環孢多肽、納巴黴素或FK506化合物的一部分是以藥物-親免疫因子複合物的形式存在。如果用結合競爭劑從上述複合物中置換出藥物，那麼就不需要用甲醇萃取血樣，這樣就消除了由於甲醇萃取和除去甲醇而造成的不利影響。據此原理而設計的檢測方法能給出準確的結果，並且方法簡單，因此對環孢多肽、納巴黴素或FK506類化合物的檢測本方法是一個驚人的突破。例如，本發明測定方法可檢測低至0.7ng(環孢多肽A)/ml(全血)的濃度，並且變異係數小於30％。與目前市場上提供的環孢多肽A檢測方法相比，本發明方法好得多。
親免疫因子是一類能與環孢多肽、納巴黴素或FK506類化合物結合的細胞內結合蛋白質。現已知道存在兩類不同的親免疫因子；能與環孢多肽類結合的為環親合因子(cyclophilin)，以及能與納巴黴素和FK506類化合物結合的巨親合因子(macrophilin)。某些親免疫因子的結構已由Walkinshaw等敘述(Transpl antation Proceedings，24，4(2)，8-13，(1992))。具體的實例是環親合因子A和巨親合因子-12(通常稱為FKBP-12)。
用於從親免疫因子-藥物複合物中置換出藥物的結合競爭劑的用量可能隨藥物不同而改變，也可能隨結合競爭劑不同而不同。但是在所有情況下。若同時以幾個藥物濃度(包括空白)和以幾個結合競爭劑濃度進行檢測，可以容易地確定結合競爭劑的最佳用量範圍。然後將樣品稀釋2-3倍，並在每一稀釋濃度下再次進行測定。比較各次測定的靈敏度，並將使測定靈敏度降低的結合競爭劑的那些濃度排除。
識別並與藥物結合的受體可以是用於常規測定中的任何一種可特異性結合的化合物，例如多克隆、單克隆或重組的抗體、抗體片段或分子印跡聚合物(例如由Vlatakis等所述(Nature，361645，(1993))，其中最好是單克隆抗體。
一旦藥物從藥物-親免疫因子複合物中釋放出來，與受體結合的藥物量就可以用任何一種測定方法來檢測，最好是用基於單克隆抗體的測定方法，例如用測定藥物競爭性與抗體或受體結合能力的競爭性檢測法，或者是非競爭性檢測法進行測定。最好採用競爭性檢測法，例如在有或沒有待測樣品的情況下，以一個標記的藥物(示蹤體)作為抗體的競爭劑。示蹤體可以用能夠提供適當示值讀數(例如放射性的、螢光的、發光的或比色示值讀數)的標記物作為常規技術進行標記。另外，受體的競爭劑可以是包被在測定室表面的未標記的藥物(為用於產生抗體的任選的藥物-蛋白免疫原結合物)，例如在酶聯免疫吸附測定法(ELISA)中或者在一個其藥物抗體本身被標記的系統中。抗體或受體在測定溶液中可能是游離的，或者被包被在測定室壁的表面上，這取決於所用的檢測系統。在競爭性測定中，示值讀數(例如，結合於抗體或受體的示蹤物的量)與待測樣品中藥物的量成反比。含有已知濃度藥物的標準溶液可以象常規一樣用來使測定標準化。
在我們提到與藥物結合但與結合競爭劑不明顯結合的受體時，我們意指在藥物和結合競爭劑之間的受體交叉反應性的程度不足以明顯地影響本測定的靈敏度。對結合競爭劑與藥物(和/或在競爭性測定中是結合競爭劑與示蹤體)之間的可以容許的交叉反應性的精確量當然可以在某種程度上隨結合競爭劑對免疫親合因子的相對親合性(與對藥物的親合性相比較)而改變親合性越高，置換藥物所需要的結合競爭劑的濃度越低，因此可以容許的不影響該測定方法準確度的受體交叉反應性也越大。實際上，交叉反應性的顯著性最好用不同量的結合競爭劑通過比較標準曲線來進行測定。一旦得到置換藥物的結合競爭劑的最小濃度，由於結合競爭劑濃度已增加到預期用於本測定的最高水平，因此標準曲線將不會顯著地變化，由此可證明，在本測定中與抗體的任何交叉反應性是不顯著的(如果有與抗體的交叉反應性，那麼存在的高濃度結合競爭劑就會使藥物含量的觀察測量值升高，因為該檢測法測定的是藥物加結合競爭劑)。在存在和不存在結合競爭劑的情況下，各標準曲線之間的任何差異的顯著性可以用標準的統計學方法(例如t-測驗)進行評估。但是，由於與待測樣品中的藥物相比較，結合競爭劑通常是以更高濃度存在，因此作為一個準則，當以緩衝液中的競爭性檢測法測定時，在藥物和結合競爭劑之間的受體交叉反應性應低於例如1％，最好低於0.1％。
本發明的一個方面，所述藥物為環孢多肽，而結合競爭劑是能與親免疫因子結合的環孢多肽類似物。最好的結合競爭劑是在EP296122中敘述的[Thr2，Leu5，D-Hiv8，Leu10]-環孢多肽A，它能競爭性與親環合因子(cyclopilin)A結合。最好的受體是特異性的環孢多肽單克隆抗體，如在WO86/2080中敘述。環孢多肽類的實例是在EP484281中描述的免疫抑制劑環孢多肽A和環孢多肽G，以及抗HIV複製化合物[MeIle4]-環孢多肽A。
如果競爭性檢測法被用來測定環孢多肽，那麼受體競爭劑可以是結合在測定板孔表面的環孢多肽(例如在WO86/2080中敘述的環孢多肽-蛋白質結合物)，或者是標記的環孢多肽(示蹤體)，例如(i)放射性標記的環孢多肽如氚化的二氫環孢多肽A，或(ii)標記的[Thr2]-環孢多肽A，[(D)Lys8]-環孢多肽A，或[氧-2-羥乙基(D)Ser8]-環孢多肽A衍生物，例如具有能提供螢光、發光或比色信號標記的衍生物，如丹醯基或生物素基衍生物，例如[ε-N-生物素基(D)Lys8]-環孢多肽A，或[氧-(2-生物素醯氧基乙基)Thr2]-環孢多肽A。這些標記的環孢多肽一般可以按WO86/2080中敘述的方法製備，或用市場上有出售的許多用於標記化合物的試劑盒(例如Sigma或Amersham產品)。
一個測定環孢多肽A含量特別好的方法包括用環孢多肽A-特異性單克隆抗體包被檢測板(如微量滴定板)孔的表面(例如先用山羊抗小鼠抗體包被該檢測板，然後使環孢多肽A-特異性單克隆抗體的Fc區域與山羊抗小鼠抗體結合，這樣環孢多肽A抗體的結合區域是游離的)。然後將待測樣品(例如患者的血液)、結合競爭劑(例如[Thr2、Leu5、D-Hiv8、Leu10]-環孢多肽A)和標記的(例如生物素標記的)環孢多肽示蹤體(例如[氧-(2-生物素醯氧基乙基)Thr2]-環孢多肽A)在檢測板孔中合併，並保溫-恆定的時間。保溫時間是足以使抗體與藥物和示蹤體結合的時間，例如至少1小時，最好至少2小時。然後清洗檢測板孔。結合的示蹤體的量可根據所用標記的類型用常規的方法進行測定，例如生物素標記可以用市場上提供的帶有酶鏈親合素(一種與生物素具有高度親合力的細菌蛋白)的檢測試劑來識別，因為該親合素連接了一個能分解底物給出螢光、發光或比色示值讀數的酶(辣根過氧化物酶)。
本發明的第二方面是，藥物為FK506類化合物，例如FK506，結合競爭劑是能與巨親合因子12結合的化合物。任何合適的結合巨親合因子12，並能置換FK506的化合物都可以應用。納巴黴素與FK506競爭結合巨親合因子-12，可首選用作為結合競爭劑。合適的FK506化合物抗體也可用於測定；最好是特異性抗體如在EP-A023892中所述的。如果應用競爭性檢測法，那麼抗體的競爭劑可以是結合於測定板上的FK506化合物，或者最好是FK506的標記衍生物，例如放射性標記的衍生物(如氚標記的FK506)，或其他標記的衍生物，如POD-FK506(在EP-A0293892中敘述的是POD-標記的FR-900506)。
本發明的第三方面是，藥物為納巴黴素，例如納巴黴素或40-氧-羥乙基納巴黴素(WO94/09010)。結合競爭劑是能與巨親合因子12結合的化合物。可以應用任一合適的結合巨親合因子12的，並能夠取代納巴黴素的化合物。FK506與納巴黴素競爭結合巨親合因子-12，因此可首選用作結合競爭劑。受體最好是納巴黴素特異性單克隆抗體[注納巴黴素選擇性單克隆抗體在文獻中未見敘述。但是我們已應用標準的Khler-Milstein技術製得具有高選擇性的抗體，其中所用抗原是納巴黴素的免疫原結合物，例如通過納巴黴素上的一個羥基，將納巴黴素連接到一個免疫原蛋白上，最好是通過位於納巴黴素的環己基位置(納巴黴素的40位)上的羥基，或相應於納巴黴素28位上的羥基。使納巴黴素連接到蛋白質上的方法是，首先通過製備帶有活性偶合基團的納巴黴素，然後使活化的納巴黴素偶合到蛋白質上。活性偶合基團是能夠與蛋白質直接反應形成共價連接而無需應用使之能夠、影響或促進與蛋白質反應的偶合劑(如碳二亞胺類試劑)的基團。例如40-氧-活化的納巴黴素是用琥珀酸酐在DMAP和吡啶存在下氧-醯基化的，結果形成納巴黴素半琥珀酸酯(40-氧-(3-羧基)丙醯基納巴黴素)然後用N-羥基琥珀醯亞胺於EDC、Et2N和CH2Cl2存在下使其活化，形成琥珀醯亞胺基氧琥珀醯納巴黴素(40-氧-(3-羧基)丙醯基納巴黴素N-羥基琥珀醯亞胺酯)。通過在40-羥基上優先保護，同樣可製備28-氧-活化的納巴黴素，然後連接到蛋白質上，製得28-氧-連接的免疫原結合物，此結合物可用於製備用40-氧-連接的結合物得到的具有不同特異性的抗體，例如在納巴黴素不同的環己基位置有高度敏感性]。如果應用競爭性測定法，那麼對抗體的競爭劑可以是結合於測定板的納巴黴素，或者最好是標記的納巴黴素，例如螢光標記的納巴黴素，例如可通過如上所述，使活化的納巴黴素與標記的基團(如生物素或丹醯基)反應來製備，或通過放射性標記(如氚標記)的納巴黴素來製備。
本發明的測定方法具有許多優點，它可以應用標準的生物分析儀器迅速、簡便地完成，得到精確和具有重現性的結果。此外，本方法可以應用全面而無需萃取。
本發明還提供了一套適合於檢測血中親免疫因子結合藥物量的測定試劑盒，該試劑盒包括一個結合競爭劑，用於從血液中置換藥物-親免疫因子複合物中的藥物；一個抗體，它能與藥物結合但不明顯地與結合競爭劑結合。
抗體最好是對藥物具有特異性的單克隆抗體。
如果藥物是環孢多肽，那麼結合競爭劑可以是能與環親合因子結合的環孢多肽類似物。優選的結合競爭劑是[Thr3，Leu5，D-Hiv8，Leu10]-環孢多肽A。優選的抗體是WO86/2080中敘述的環孢多肽A-特異性單克隆抗體。
如果藥物是FK506化合物或納巴黴素，那麼結合競爭劑可以分別是納巴黴素或FK506，或為其能與巨親合因子12結合的類似物。可以應用任何對FK506化合物或納巴黴素合適的抗體；最好是特異性抗體例如上述用於納巴黴素製備的抗體或如EP-A0293892中所述製備的抗體。
本試劑盒還可進一步包括一個合適的標記示蹤體、一個標準品以及應用指南。示蹤體的標記可以用任一合適的標記，例如放射性、螢光或比色標記。如果方便，試劑盒中的成分可以為冷凍乾燥的形式。
最後，在進一步的實施方案中，本發明還提供了以一種親免疫因子結合的化合物作為親免疫因子結合的競爭劑，在用於測定另一種親免疫因子結合的化合物血液含量的檢測試劑盒或方法中新的用途，例如在測定環孢多肽血液含量的試劑盒或方法中應用[Thr2，Leu5，D-Hiv8，Leu10]-環孢多肽A在測定FK506化合物血液含量的試劑盒或方法中應用納巴黴素在測定納巴黴素血液含量的試劑盒或方法中應用FK506。
下面通過實施例的方式敘述本發明，但不限制本發明。很顯然，對於熟悉本技術領域的專業人員，試劑的精確濃度和反應的條件是容許改變的，只要該改變對每次測定是恆定的。應用結合競爭劑以便從親免疫因子-藥物複合物中釋放藥物的其他測定系統被認為是屬於本發明的範圍；一旦藥物從親免疫因子-藥物結合複合物中釋放，當然可以用任一常用的方法測定它。實施例1-環孢多肽A測定法標定樣品向1ml 70％v/v乙醇水溶液中加入16μg環孢多肽A並於4℃貯藏。取50μl環孢多肽A溶液置於1ml人血(從Blutspendezentrum Basel得到)中稀釋，得到濃度為800ng/ml的環孢多肽A。然後將500μl環孢多肽A溶液於1ml人血中經連續稀釋製備濃度為400ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml、25ng/ml、12.5ng/ml、6.2ng/ml、3.1ng/ml、1.6ng/ml、0.8ng/ml、和0.4ng/ml的標定樣品。另製備一個不含環孢多肽A的血樣作為空白對照。
條件化的微量滴定板將100μl山羊抗小鼠抗體(未結合的GaMIgG Fc，Pierce 31170)用磷酸鹽緩衝液(PBS)稀釋至10μg/ml，包被幾塊96孔微量滴定板的每個孔。將微量滴定板於4℃保溫過夜。山羊抗小鼠抗體被棄去，並向各個孔內加入200μl封閉溶液(2g牛血清白蛋白溶於100ml PBS中)。微量滴定板於37℃保溫2小時，然後在培養板洗滌器上用3×300μl PBS/吐溫20溶液(0.5g吐溫20於1L PBS中)洗滌。將此條件化的微量滴定板於4℃貯藏。
抗體板將1ml PBS/吐溫20溶液加到裝有冷凍乾燥的環孢多肽A特異性單克隆抗體的小試管中。該抗體已在WO86/2080中敘述，並成為市場上提供的Sandimmun試劑盒的一部分。然後抗體溶液用PBS/吐溫20溶液按1∶10稀釋，吸取100μl加到條件化的微量滴定板選定的幾個孔內。吸取100μl PBS/吐溫20溶液至其餘的孔內。微量滴定板於4℃保溫過夜。
環孢多肽示蹤體從市場上提供的Sandimmun試劑盒中可得到含1ml放射性二氫化環孢多肽A的96％v/v乙醇水溶液的小試管。
競爭劑溶液將4.2mg[Thr2，Leu5，D-Hiv8，Leu10]-環孢多肽A(按EP296,122所述方法製備)溶於1ml甲醇中，於4℃貯藏。
吸取125μl各個標定樣品(包括空白)至未條件化的微量滴定板的孔內。吸取125μl待測血樣至其餘的各個孔內。將100μl PBS/吐溫20溶液和25μl環孢多肽示蹤體加到各孔中。微量滴定板振搖5分鐘，然後於室溫保溫15分鐘。向各孔中加入3μl競爭劑溶液，微量滴定板振搖5分鐘，並將這些經處理的標定樣品和經處理的血樣於4℃保溫過夜。
將一塊抗體板用PBS/吐溫20溶液洗滌3次，每次300μl，向各孔中加入100μl經處理的標定樣品或經處理的血樣。將此微量滴定板於4℃保溫3小時，然後用PBS/吐溫20溶液洗滌3次，每次300μ將100μl 1g十二烷基硫酸鈉的100ml水溶液加到各孔中，微量滴定板於室溫振搖5分鐘，然後於37℃保溫15分鐘。再從各孔中吸100μl溶液用Packard 2000CA液體閃爍分析儀分析。
用從標定樣品獲得的結果製作校準曲線。該曲線表示以結合的示蹤體抗體與空白比較的百分數對環孢多肽A濃度的對數作圖。
在0.7ng環孢多肽A/ml血液～400ng環孢多肽A/ml血液的測定範圍內結果的偏差係數小於30％。該工作範圍表明，即使在很低濃度下仍可獲得非常好的準確度。
通過重複試驗證實所述測定方法具有一致性。100ng和400ng環孢多肽A分別重新置於1ml人血中以得到100ng/ml和400ng/ml的濃度每個樣品用實施例1所述方法分析4次，以測定其濃度。結果列於表1中。
表1準確度
對於100ng/ml濃度，總的測定平均值為97.6ng/ml，平均偏差為2.4％，對於400ng/ml，總的測定平均值為417.6ng/ml，平均偏差為4.4％。
結果表明，可穩定地得到高準確度的結果。實施例2-FK506測定法微量滴定板的製備用含100μg/ml山羊抗兔抗體的磷酸鹽緩衝液(PBS)包被各個孔。微量滴定板於4℃保溫過夜。山羊抗兔抗體被棄去，將200μl封閉溶液(2g牛血清白蛋白溶於100ml PBS中)加到各孔中。微量滴定板於37℃保溫2小時，然後在培養板洗滌器上用3×30μl PBS/吐溫20溶液(0.59吐溫20於1L PBS中)洗滌。微量滴定板於4℃貯藏。
將用PBS/吐溫20溶液稀釋1000倍的兔抗-FK506抗體100μl加到各孔中。微量滴定板於4℃保溫過夜。
標定樣品FK506或用人全血稀釋，或用PBS/吐溫20稀釋成200ng/ml、20ng/ml和2ng/ml。製備不含FK506的血樣作為空白。
競爭劑溶液將用氚標記的FK506稀釋，以獲得10000cpm/25ml。
測定加入125μl全血或緩衝液的標定樣品，並與含50、10、1和0μg/ml納巴黴素的100μl PBS/吐溫20混合。將25μl競爭劑溶液加到各孔中。微量滴定板於4℃保溫3小時，然後用300μlPBS/吐溫20洗滌3次。將100μl 1g十二烷基硫酸鈉的100ml水溶液加到各孔中，微量滴定板振搖5分鐘，然後於37℃振搖15分鐘。從各孔中取100μl溶液用Packard 2000CA液體閃爍分析儀分析。
結果用在緩衝液中的樣品進行測定，得到與用不同濃度納巴黴素作為置換劑時類似的標準曲線。該結果表明，兔抗-FK506抗體與納巴黴素不發生交叉反應。
當不用納巴黴素作為置換劑時，因為FK506與含在全血中的結合蛋白結合，並且不能與抗體反應，因此用在全血中的樣品進行測定得到十分低的信號。當加入納巴黴素作為巨親合因子的結合競爭劑時，得到的標準曲線與在緩衝液中獲得的曲線類似。
權利要求
1.測定血液中與親免疫因子結合的藥物濃度的測定方法；該方法包括加入從血液中免疫抑制劑-親免疫因子複合物中置換出藥物的結合競爭劑；加入能與藥物結合但與結合競爭劑不明顯結合的受體；從樣品中分離出受體-藥物複合物；測定該藥物的含量。
2.權利要求1所述的測定方法，其中親免疫因子結合的藥物是環孢多肽A，結合競爭劑是[Thr2，Leu5，D-Hiv8，Leu10]-環孢多肽A，並且受體是單克隆抗體。
3.權利要求1所述的測定方法，其中親免疫因子結合的藥物是FK506；結合競爭劑是納巴黴素；並且受體是單克隆抗體。
4.權利要求1所述的測定方法，其中親免疫因子結合的藥物是納巴黴素或40-羥乙基納巴黴素，結合競爭劑是FK506，並且受體是單克隆抗體。
5.適用於測定血液中與親免疫因子結合的藥物含量的測定試劑盒，該試劑盒包括從血液中藥物-親免疫因子複合物中置換出藥物的結合競爭劑；能與藥物結合但與結合競爭劑不明顯結合的受體。
6.權利要求5所述的測定試劑盒，其中親免疫因子結合的藥物是環孢多肽A，結合競爭劑是[Thr2，Leu5，D-Hiv8，Leu10]-環孢多肽A，並且受體是單克隆抗體。
7.權利要求5所述的測定試劑盒，其中親免疫因子結合的藥物是FK506，結合競爭劑是納巴黴素，並且受體是單克隆抗體。
8.權利要求5所述的測定試劑盒，其中親免疫因子結合的藥物是納巴黴素或40-羥乙基納巴黴素，結合競爭劑是FK506，並且受體是單克隆抗體。
9.在測定試劑盒或方法中應用親免疫因子結合的化合物作為親免疫因子結合的競爭劑，以測定另一親免疫因子結合的化合物的血液含量。
10.按照權利要求9，在測定試劑盒或方法中應用[Thr2，Leu5，D-Hiv8，Leu10]-環孢多肽A，以測定環孢多肽的血液含量。
11.按照權利要求9，在測定試劑盒或方法中應用納巴黴素，以測定FK506化合物和血液含量。
12.按照權利要求9，在測定試劑盒或方法中應用FK506，以測定納巴黴素的血液含量。
全文摘要
本發明提供了測定親免疫因子結合的藥物(如環孢多肽類、納巴黴素類和FK506類化合物)其血液含量的新方法，該方法包括通過應用結合競爭劑從親免疫因子結合的藥物中置換出藥物的新步驟。因此不需要萃取步驟並提高了測定的簡化程度和準確度。測定試劑盒包括結合競爭劑和受體(即單克隆抗體)，受體能與藥物結合但與結合競爭劑不明顯地結合，在所述測定中提供了親免疫因子結合的化合物作為結合競爭劑的新用途。
文檔編號G01N33/577GK1130425SQ94193303
公開日1996年9月4日 申請日期1994年9月7日 優先權日1993年9月8日
發明者F·勒蓋, R·文格 申請人:山道士有限公司