一種含抗體模擬物的新型抗生素及其製備方法與應用的製作方法
2023-06-15 04:26:21 1
專利名稱：一種含抗體模擬物的新型抗生素及其製備方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，特別涉及一種含抗體模擬物的新型抗生素及其製備方法與應用。
背景技術：
自1944年青黴素等抗生素投入使用以來，不僅僅是腦膜炎雙球菌，其它很多威脅生命的 致病菌，如金葡球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、結核桿菌都已對其產生了耐藥性。據美國疾 病控制中心(CDC)歷年發表的有關報告預測，再過10年至20年，這些抗生素將可能完全 失效。
目前常用的抗生素主要通過抑制細胞壁合成、抑制或幹擾細菌的核酸和蛋白質代謝與合 成途徑來達到抗菌目的。然而這些抗菌方式容易誘導細菌發生突變而產生耐藥性。因此人們 一直在致力於開發新型的抗生素。模仿同種異株細菌之間互相殺傷的工作方式來開發新型抗 生素是比較有前途的方向之一。自然界中有不少細菌毒素直接在細菌胞膜上形成離子通道來 殺死細菌。其模式標本就是大腸桿菌分泌的一種細菌毒素一大腸菌素。其中大腸菌素Ia自1952 年被Jacob發現之後，經過數代人的努力，1996年終於揭示了大腸菌素Ia在人工脂質雙分子 膜上所形成離子通道開放和關閉時的跨膜立體結構(Qiu et al， Major transmemebrane movement soociated with colicin la channel gating. J. Gen. Physiology, 107:313-328 (1996))，為在 分子水平上設計和製備新型的抗菌素奠定了理論基礎。
如上所述，大腸菌素是一種理想的離子通道抗生素原型，但野生型大腸菌素只能作用於 同種異株的大腸桿菌，因此必需改變它的耙向性，才能使大腸菌素轉而攻擊其它致病菌；膜 孔蛋白Porin是存在於細菌質膜的外膜、線粒體和葉綠體的外膜上的通道蛋白，它們允許較 大的分子通過，，具有較強的免疫原性，能在宿主體內誘導出特異性的高水平的單抗，如 能利用對抗細菌表面Porin蛋白的抗體作為原型，設計出具有更理想識別性能的抗體模擬物， 用這個模擬物來改變大腸菌素的靶向性，應該是一種理想的抗生素開發方向。
發明內容
本發明針對上述領域的空白，提供一種的新型抗生素，該抗生素的殺菌能力是常用抗生 素千倍以上，由於其作用機理特殊，因此致病菌很難產生耐藥性，殺菌過程中不會傷害人體 正常細胞。
一種含抗體模擬物的新型抗生素，由大腸菌素E1、 Ia、 Ib、 A、 B、 N或其水性孔道結構 域及共價連接在所述大腸菌素或其水性孔道結構域的肽鏈羧基端的抗體模擬物構成，所述抗體模擬物是由免疫球蛋白的VHCDR1的羧基端連接VHFR2的氨基端，VHFR2的羧基端再連
接VlCDR的氨基端構成；所述免疫球蛋白特異性識別細菌膜孔蛋白。
所述細菌指腦膜炎雙球菌，所述膜孔蛋白指腦膜炎雙球菌表面的膜孔蛋白PorA。 所述免疫球蛋白指在具有PUBMED登錄號為2MPAJH所記載的胺基酸序列的肽鏈與具
有登錄號為2MPA—L所記載的胺基酸序列的肽鏈共價結合而得的抗體蛋白。 所述大腸菌素為Ia。
一種肽鏈分子，其特徵在於由大腸菌素E1、 Ia、 Ib、 A、 B、 N或其水性孔道結構域的肽 鏈及共價結合在其羧基端的抗體模擬物肽鏈連接而成，所述抗體模擬物肽鏈由免疫球蛋白的 三個區域VhCDR1、 VhFR2、 VLCDR3的肽鏈順次以羧基端連接下一區域肽鏈的氨基端構成； 所述免疫球蛋白特異性識別細菌膜孔蛋白。
所述肽鏈分子，具有Seq ID No.6所示胺基酸序列。
編碼上述肽鏈分子的核苷酸序列。
所述核苷酸序列，如Seq ID No.5所示。
包含上述核苷酸序列的重組表達載體。
上述的新型抗生素的製備方法，指將上述的重組表達載體導入到表達系統中進行表達； 分離純化表達的多肽獲得抗生素。
所述的新型抗生素在製備抗細菌藥物中的應用。
所述抗細菌藥物指抗腦膜炎雙球菌、抗耐萬古黴素腸球菌、抗耐甲氧西林金葡菌或抗多 重耐藥綠膿桿菌的藥物。
本發明利用大腸菌素能在靶細菌膜上形成離子通道，使靶細胞內胞質洩漏而死，而本發 明中起靶向性作用的結構是對抗細菌表面膜孔蛋白即Porin蛋白的免疫球蛋白的部分區域被 重構後獲得的模擬抗體物，包含該免疫球蛋白的重鏈可變區的第一互補決定區VHCDR1、重 鏈可變區的第二骨架區VHFR2、輕鏈可變區的第三互補決定區VLCDR3，三個區域順次以羧 基端連結下一區域的氨基端構成VHCDR1-VHFR2-VLCDR3的線性分子眾所周知，免疫球蛋 白起識別作用的活性區域稱為互補決定區，互補決定區僅有幾個到十幾個胺基酸組成，與完 整的免疫球蛋白或者目前有報導的單鏈抗體seFv、 Fab等人工改造抗體相比，本發明的分子 量極小，組織透過性好，同時由於其結構簡單，去除了完整免疫球蛋白分子的大部分框架結 構及Fc段，使其對患者的免疫原性大大降低，非常利於帶領大腸菌素到達致病部位識別致病 菌。在治療中，大腸菌素被引向致病菌細胞膜表面，大腸菌素在靶細菌膜上形成離子通道， 使靶細胞內胞質洩漏而死，對於目前已經產生耐藥性的菌株也具有相同的殺菌能力。由於其 識別位點為細菌表面特有的抗原物質，人體組織細胞膜上不存在這樣的識別位點，因此其對
4於人體是安全的。相對於其他易於產生耐藥性的抗生素，本發明的抗生素，由於其起靶向作 用的抗體模擬物僅僅需將大腸菌素引向致病菌就完成了任務，我們並不需要通過膜孔蛋白位
點作用致死細菌，而是通過大腸菌素作用於細菌的生物膜，使生物膜產生離子通道導致細胞 洩漏而死，傳統的細菌耐藥性一般通過改變膜孔蛋白的結構對抗生素進入細菌細胞內造成障 礙而產生耐藥性，而本發明僅僅需要膜孔蛋白的抗體識別位點的活性即可到達殺菌的目的， 可以說，是一種聲東擊西的策略，即識別膜孔蛋白位點，但大腸菌素結合在細胞膜的另外一 個位點形離子通道致死細菌，真正的作用位點不在Porin蛋白，因此細菌很難通過變異、進 化而丟掉或改變膜孔蛋白這種生存必須的結構，因此細菌很難對本發明的抗生素產生耐藥性。 由於本發明根據不同細菌表面膜孔蛋白的多樣性及與其識別的免疫球蛋白的多樣性，根據本 發明這一設計構思獲得的新型抗生素也是多樣的。
由於腦膜炎雙球菌引起的腦膜炎對國內外的嬰兒以及青少年的健康造成了極大的威脅， 且其對目前常用藥的抗藥性表現非常明顯，為了有效抑制該菌而使藥劑量越來越高，這嚴重
危害患者健康，因此，發明人採用本發明的構思，針對腦膜炎雙球菌的膜孔蛋白PorinA的抗 體，其重鏈肽鏈的PUBMED登錄號為2MPAJL輕鏈肽鏈的PUBMED登錄號為2MPA—L， 進行重構獲得抗體模擬物，即如SeqlDNo,2所示的胺基酸序列；並可操作地連接在大腸菌素 Ia的肽鏈的羧基端，獲得具有如SeqlDNo.6所示的胺基酸序列的新型抗生素PMC-AMl。如 圖7所示，在腦膜炎雙球菌致死量感染小鼠的存活實驗中，注射本發明抗生素PMC-AM1的 小鼠的8天存活率為90%，說明本發明的抗生素比現用抗生素青黴素、慶大黴素等具有無法 比擬的抗菌活性和體內保護效果；同時，通過殺菌效果比較，如圖6A所示，比較本發明的 抗生素PMC-AM1與頭孢它啶、氨苄青黴素對腦膜炎雙球菌的最低抑菌濃度(MIC值)，實 驗結果顯示PMC-AM1的MIC 0.11 nMol,頭孢它啶的MIC 3.02 nMol, 氨苄青黴素的MIC 1.35nMol;說明其殺菌能力明顯高於目前常用於抑制腦膜炎雙球菌的抗生素。
發明人用本發明的新型抗生素PMC-AM1對其他目前產生耐藥性嚴重的致病菌進行試探 性實驗，發現PMC-AM1還對多重耐藥綠膿桿菌、耐萬古黴素腸球菌、耐甲氧西林金葡菌有 極強的抗菌效力，如圖5所示，PMC-AM1對多重耐藥綠膿桿菌的殺菌效果比頭孢它啶、左 氧氟沙星、慶大黴素等現用抗菌素強127 3800倍以上；PMC-AM1對耐萬古黴素腸球菌、 耐甲氧西林金葡菌有明顯的抑制效果，如圖6B、 C所示。
本發明的抗生素可用於製備抗菌藥物，特別是在製備抗腦膜炎雙球菌、抗綠膿桿菌、抗 耐萬古黴素腸球菌及抗耐甲氧西林金葡菌的藥物中的應用。
可將編碼本發明抗生素的核苷酸克隆到表達載體中構建重組表達載體，這些載體可在宿 主中表達融合蛋白，分離融合蛋白獲得本發明的抗生素蛋白。
5根據密碼子的兼併性，編碼本發明的抗生素或者抗體模擬物的核苷酸序列是可調整的， 可根據宿主細胞對密碼子的偏好性調整核苷酸序列，只要編碼的胺基酸不變，都屬於本發明 要求保護的範圍。
圖1含抗體模擬物和大腸菌素Ia的重組質粒pBHC-PorAl的結構
其中抗體模擬物的肽鏈連接在la的肽鏈羧基端，抗體模擬物的胺基酸序列如Seq ID No.2所示。
圖2含抗體模擬物肽鏈和大腸菌素Ia的重組質粒pBHC-PorA2的結構
其中抗體模擬物肽鏈連接在la的羧基端，抗體模擬物肽鏈是重鏈可變區的第一互補 決定區的羧基端連結重鏈第二骨架區，輕鏈可變區的第三互補決定區的肽鏈羧基端胺基酸 連結在重鏈第二骨架區的羧基端胺基酸上，如SeqlDNo.4所示。 圖3本發明新型抗生素的結構
其中T和R是大腸菌素Ia位於氨基端的兩個信號識別結構域；channel-forming是大腸菌 素Ia位於羧基端的形成離子通道結構域；AM是抗體模擬物。 圖4為本發明新型抗生素PMC-AMI對腦膜炎雙球菌的抑制實驗
圖中曲線從左到右依次為對照，5嗎/ml氨苄青黴素，5 ng/ml PMC-AM2, 5 pg/ml PMC-AMI, 10嗎/ml PMC-AMI 。
本圖橫座標為細菌生長時間，單位為小時；縱座標為培養液600 nm光密度，顯示細菌 生長數量。
圖5.瓊脂二倍稀釋法測定新型抗生素的最低抑菌濃度(MIC)
平皿顯示(Con),空白對照，(A)，頭孢它啶為16 pg/ml、 (B)，左氧氟沙星為8 pg/ml、 (C)，慶大黴素大於512嗎/ml、 (D)，新型抗生素(PMC-AMI)對多重耐藥綠膿桿菌的最低 抑菌濃度為8ng/ml。
圖6.本發明新型抗生素與常用抗菌素對耐甲氧西林金葡菌(ATCC BAA-42)、耐萬古黴素腸 球菌(ATCC 700802)、多重耐藥綠膿桿菌(華西醫院臨床分離株13578)和腦膜炎雙球菌 (中國菌種保存中心29332)最小抑菌濃度的比較實驗 縱座標為最小抑菌濃度(nMol); 其中A圖為腦膜炎雙球菌，(1) PMC-AMI， MIC = 0.11 nMol， (2)頭孢它啶，MIC = 3.02 nMol, (3)氨苄青黴素，MIC = 1.35 nMol; B圖為耐萬古黴素腸球菌，(l)PMC-AMl，MIC = 0.23nMol,(2)萬古黴素，MIC = 21.54nMol,
6(3)氨苄青黴素，MIC = 10.78 nMol; C圖為耐甲氧西林金葡菌，(1) PMC-AMI, MIC - 0.06 nMol, (2)氨苄青黴素，MIC = 21.55
nMol, (3)苯唑西林，MIC = 14.1 nMol; D圖為多重耐藥綠膿桿菌，(1)PMC-AM1，MIC = 0.91 nMo1，(2)左氧氟沙星，MIC = 43.2 nMol,
(3)頭孢它啶，MIC = 29.3 nMol, (4)慶大黴素，MIC > 889.4 nMol。 圖7.本發明新型抗生素與野生型大腸菌素、抗金葡菌多肽(ZL01128836.1)對耐甲氧西林金 葡菌(ATCCBAA-42)、耐萬古黴素腸球菌(ATCC 700802)、多重耐藥綠膿桿菌(華西醫院 臨床分離株13578)抑制作用的比較之生存曲線
縱座標為最小抑菌濃度(nMol); 其中A圖為耐萬古黴素腸球菌，(1)抗金葡菌多肽，MIC = 0.91 nMol, (2)野生型大腸菌素
la, MIC = 0.91 nMol, (3) PMC-AMI ， MIC = 0.23 nMol; B圖為耐甲氧西林金葡菌，(1)抗金葡菌多肽，MIC = 0.06 nMol, (2)野生型大腸菌素la, MIC
=0.23 nMol, (3) PMC-AMI ， MIC = 0.06 nMol; C圖為多重耐藥綠膿桿菌，(1)抗金葡菌多肽，MIC = 0.91 nMol， (2)野生型大腸菌素Ia， MIC
=0.91 nMol, (3) PMC-AMI ， MIC = 0.23 nMol。 圖8本發明新型抗生素對腦膜炎雙球菌感染動物的體內保護試驗之生存曲線 橫座標為鼠存活時間，單位為天；縱座標為動物存活數，單位為每隻鼠 l)PMC-AMl，本發明新型抗生素；2) Gen，慶大黴素；3)PEN，青黴素；4)Con,，
對照；
所有藥物注射濃度均為1.5mg/kg。
具體實施例方式
結合附圖，通過本發明較佳實施例的描述具體說明本發明。實施例1表達新型抗生素的質粒的構建和新型抗生素製備
原始質粒為裝載了大腸菌素和immunity蛋白基因的pSELECTTM-l質粒(8.3 kb)。經雙鏈 寡聚核苷酸點突變技術(QuickChange Kit, Strategene公司)將編碼抗體模擬物基因，如 Seq ID No.l和Seq ID No.3所述的核苷酸序列分別插入到大腸菌素變構多肽基因的626位點 上，製備了新型抗生素的突變質粒pBHC-PorAl、 pBHC-PorA2 (如圖l一圖2所示)。突變質 粒轉染入￡.co// BL-21工程菌裡製備新型抗生素。
突變程序按Strategene QuickChange SiteDirected Mutagenesis Kit (catalog #200518)藥箱手
冊進行即l.準備點突變反應物 5 ull OX buffer
2ul(10ng)裝載了大腸菌素變構多肽和immunity蛋白基因的原始質粒 1.25 ul(125ng)設計的5'—3'寡聚核苷酸引物(見所列引物序列) 1.25 ul(125ng)設計的3' — 5'寡聚核苷酸引物(見所列引物序列) 1 ul dNTP 雙蒸水50 ul 1 ul pfu
(除質粒、引物和雙蒸水外，均為藥箱所備試劑)
2. 進行PCR擴增，擴增條件變性95。C,35秒，退火53。C,70秒，延伸68。C，17分，共20 個循環；
3. 加入Dpn 1內切酶1 ul消化母體DNA鏈後(37°C, 1小時)，取1 ul反應物與XL1-Blue感 受態細胞50ul冰孵30分鐘，熱衝擊42。C, 45秒，再置入冰中2分鐘；
4. 加入NZY培基0.5 ml, 220 rpm, 37 °C搖菌1小時，取50—100 ul反應物鋪板(LB培基加1 %瓊脂，加50ug/ml氨苄青黴素，37°(:過夜)；
5.18小時後挑菌，提取質粒後測序確定突變成功；
6. 將突變質粒100ng與製備的BL-21工程菌感受態細胞40ul冰孵5分鐘，熱衝擊42。C， 30 秒，再置入冰中2分鐘，加入SOC培基160 ul， 220 rpm, 37°C搖菌1小時後鋪板(LB培基 加1%瓊脂，加50ug/ml氨苄青黴素，37°<:過夜)，挑取單克隆菌落大量增菌；
7. 大量增菌，8 — 10升FB培基，250 rpm, 30°C, 3—4小時；升溫至42 °C, 250 rpm生長0.5 小時；降溫至37。C,250rpm生長1.5小時；4°C， 6000g， 20分鐘離心沉澱菌體，取4。C， 50 mM硼酸緩衝液(pH 9.0， 2 mMEDTA) 80-100 ml懸浮菌體，加入PMSF 50 ug後超聲 破碎菌體(4°C， 400W, l分鐘，重複4一5次，間歇2—3分鐘確保菌液溫度)，高速離心 沉澱破碎的菌體(4。C， 75,000g， 90分鐘)，取上清加入硫酸鏈黴素500萬單位沉澱DNA(4 。C攪拌l小時)，10,000g,4。C， 10分鐘離心沉澱後，取上清裝入分子量15,000透析袋於4 。C， 50mM硼酸緩衝液10升透析過夜後，再次10,000g,4°C, 10分鐘離心沉澱，取上清上 樣於CM離子交換柱，充分衝洗後，0.3MNaCl + 50mM硼酸緩衝液洗脫即可得到所製備 的新型抗生素。對應於以上2種質粒，可分別獲得PMC-AM1和PMC-AM2兩種抗生素， 其胺基酸序列分別如Seq ID No.6 、 SeqlDNo.8所示。
其中AMI是重鏈可變區的第一互補決定區、重鏈第二骨架區、輕鏈可變區第三互補決 定區，三個區域順次以羧基端連結下一區域的氨基端，胺基酸序列如Seq ID No,2所示；AM2是重鏈可變區的第一互補決定區的羧基端連結重鏈第二骨架區，輕鏈可變區的第三互 補決定區的肽鏈羧基端胺基酸連結在重鏈第二骨架區的羧基端胺基酸上，胺基酸序列如Seq IDNo.4所示。
將PMC-AM2作為PMC-AM1的對照，驗證本發明設計的抗體模擬物的胺基酸區段之 間在不同連接方式下產生的抗生素的功能。
上述製備質粒中所設計的寡聚核苷酸引物序列如下 5, —3' ( SEQIDN0.9)
gcg aat aag ttc tgg ggt att rC71 7^7 7UG CTO C4T TGG ^r7M^ CJG taa ata aaa tat aag aca ggc
3' — 5， ( SEQIDNO.10) 5' — 3， ( SEQIDNO.ll)
tgg ctg cat tgg att aaa cag (XT GGr C4G GG^ CJU TGG AIC taa ata aaa tat aag aca ggc
3'—5， ( SEQIDN0.12)
5' — 3， ( SEQIDN0.13)
ggt cag gga ctg tgg ate gga rCT C4G 7UC爿CG C471 G71(7 CCG 爿CC taa ata aaa tat aag aca ggc
3, —5， ( SEQIDN0.14)
gec tgt ctt ata ttt tat tta GGr 7tT CGG CMC肌COT tec gat cca cag tec ctg
acc
pBHC-PorA2
5'—3， ( SEQIDN0.15)
gcg aat aag ttc tgg ggt att 7TT Z4r TGG C7U TUG J7T廁taa ata aaa tat aag aca ggc
3， —5， ( SEQIDN0.16)
gec tgt ctt ata ttt tat tta CTG T7TA471 CC4 乂7U C4G CG4 乂rj aat acc cca gaa ctt att cgc 5,—3， ( SEQIDN0.17)
tgg ctg cat tgg att aaa cag CCr GGr C4G C7T 7UG X7U GC^ taa ata aaa tat aag aca ggc3， —5， ( SEQIDN0.18)
gcc tgt ctt ata ttt tat tta 7~CC G^r CC4 C4G TCC CrG爿CC爿GG rC71 ctg ttt aat cca atg cag cca 5' — 3， ( SEQIDNO.19)
ggt cag gga ctg tgg ate gga JCCJGJ CCG GTO C47爿CG TCC C4G taa ata aaa tat aag aca ggc
3' — 5' ( SEQIDNO.20)
gcc tgt ctt ata ttt tat tta ^GL4 C7U GGJ CGr C4C CGG 7CT GGr tcc gat cca cag tcc ctg acc
實施例2新型抗生素對腦膜炎雙球菌的抑制作用
細菌為中國菌種保存中心29332腦膜炎雙球菌株，菌液2微升(105CFU/ml)加入兔 血巧克力培養液IO毫升(牛肉浸膏50mg、胰蛋白腖100mg、KH2PO4 30mg、NaC150mg、 脫纖維兔血0.5-0.8 ml)中，共準備5組，第一組加入0.3 M NaCl + 50 mM硼酸緩衝液(即 新型抗生素的空白保存液，量與實驗組中加入的新型抗生素液體量相同)作為對照，第二 組加入5昭/ml氨苄青黴素，第三組加入5昭/ml PMC-AM1,第四組加入5 ng/ml PMC-AM2，第五組加入10嗎/ml PMC-AM1 。
上述各組液體分別置於100毫升三角燒瓶中，200卬m，37。C生長，每小時採樣100微 升加入96孔酶錶板中經分光光度計(A595nm)比色測試細菌生長濁度，畫出細菌生長曲 線來比較新型抗生素的抑菌效力，結果如圖4所示，顯示所試腦膜炎雙球菌只能被 PMC-AM1所抑制。
實施例3新型抗生素對多重耐藥綠膿桿菌的最低抑菌濃度與現用抗菌素的最低抑菌濃 度之比較。
採用瓊脂二倍稀釋法測定新型抗生素的最低抑菌濃度(MIC)。用多點接種儀(Deneley A400)將細菌接種於含不同藥物濃度的瓊脂平皿表面，每點含菌量為105CFU/ml, 37'C孵育 18-24小時觀察結果，以無細菌生長平皿培養基中所含藥物的最低濃度為藥物對該菌的最低抑 菌濃度(MIC值)。
所用菌種為多重耐藥綠膿桿菌(華西醫院臨床分離株13578)，培養基為MH培養基(每 百毫升牛肉浸膏500mg、酪蛋白酸水解物1.75 g、可溶性澱粉150mg、瓊脂1.7g)。
結果如圖5所示，新型抗生素(D) (PMC-AM1)對多重耐藥綠膿桿菌的最低抑菌濃度為 8ng/ml、頭孢它啶(A)為16pg/ml、左氧氟沙星(B)為8 ng/ml、慶大黴素(C)大於512pg/ml。若以分子量標化，PMC-AM1對多重耐藥綠膿桿菌的最低抑菌濃度為0.23 nMoI、頭孢它啶為 29.3 nMol、左氧氟沙星為43.2 nMol、慶大黴素大於890 nMol; 即，PMC-AM1對多重耐藥 綠膿桿菌的抗菌效力強過頭孢它啶、左氧氟沙星、慶大黴素等現用抗菌素127—3800餘倍。實施例4新型抗生素的體外抗菌活性與現用抗菌素的比較採用瓊脂二倍稀釋法測定新型抗生素的最低抑菌濃度(MIC)。用多點接種儀(Deneley A400)將細菌接種於含不同藥物濃度的瓊脂平皿表面，每點含菌量為105CFU/ml， 37。C孵育 18-24小時觀察結果，以無細菌生長平皿培養基中所含藥物的最低濃度為藥物對該菌的最低抑 菌濃度(MIC值)。所用菌種為多重耐藥綠膿桿菌(華西醫院臨床分離株13578)， MH培養基(每百毫升含牛 肉浸膏500 mg、酪蛋白酸水解物1.75 g、可溶性澱粉150 mg、瓊脂1.7 g);耐甲氧西林金 葡菌(ATCCBAA-42) ， BM培養基(每百毫升含胰蛋白腖1 g、酵母0.5 g、葡萄糖0.1 g、 NaCl 1 g、 KH2PO4100mg、瓊脂1 g);耐萬古黴素腸球菌(ATCC 700802)， MH培養基； 腦膜炎雙球菌(中國菌種保存中心29332)，培基同實施例2(另加哥倫比亞血瓊脂基礎3.9 g)。 結果如圖6所示，A圖為腦膜炎雙球菌，(1) PMC-AM1 ， MIC = 0.11 nMol, (2)頭孢它啶, MIC = 3.02 nMol, (3)氨苄青黴素，MIC = 1.35 nMol; B圖為耐萬古黴素腸球菌，(1) PMC-AMI ， MIC = 0.23 nMol, (2)萬古黴素，MIC = 21.54 nMol, (3)氮節青黴素，MIC = 10.78 nMol; C圖為耐甲氧西林金葡菌，(1) PMC-AMI ， MIC = 0.06 nMol， (2)氨節青黴素，MIC = 21.55 nMol, (3)苯唑西林，MIC = 14.1 nMol; D圖為多重耐藥綠膿桿菌，(1) PMC-AMI， MIC = 0.91 nMol, (2)左氧氟沙星，MIC = 43.2 nMol， (3)頭孢它啶，MIC = 29.3 nMol， (4)慶 大黴素，MIC 〉 889.4 nMol。實施例5新型抗生素的體外抗菌活性與抗金葡菌多肽和野生型大腸菌素la的比較採用瓊脂二倍稀釋法測定新型抗生素的最低抑菌濃度(MIC)。以無細菌生長平皿培養基 中所含藥物的最低濃度為藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC值)。所用菌種為多重耐藥綠膿桿菌(華西醫院臨床分離株13578)，耐甲氧西林金葡菌(ATCC BAA-42),耐萬古黴素腸球菌(ATCC 700802)， MH培養基；腦膜炎雙球菌(中國菌種保存 中心29332)，培基同實施例4。結果如圖7所示，A圖為耐萬古黴素腸球菌，(1)抗金葡菌多肽，MIC = 0.91 nMol, (2) 野生型大腸菌素la, MIC = 0.91 nMol, (3) PMC-AMI ， MIC = 0.23 nMol; B圖為耐甲氧西林金 葡菌，(1)抗金葡菌多肽，MIC = 0.06 nMol, (2)野生型大腸菌素la, MIC = 0.23 nMol, (3) PMC-AMI， MIC = 0.06 nMol; C圖為多重耐藥綠膿桿菌，(1 )抗金葡菌多肽，MIC = 0.91 nMol,(2)野生型大腸菌素la, MIC = 0.91 nMol， (3) PMC-AMI ， MIC = 0.23 nMol。實施例6新型抗生素的腦膜炎雙球菌感染動物的體內保護試驗一、 實驗材料(1) 藥物PMC-AMI、慶大黴素、青黴素。(2) 細菌腦膜炎雙球菌(中國菌種中心(北京天壇國家藥監局中檢所)29332)。二、 實驗方法如圖7所示，實驗組共40隻昆明小鼠，分為4個實驗組，每組10隻。腹腔注射葡萄糖 亞鐵溶液(20mg/kg) 1個小時後，再注射0.5 ml菌液。該菌液由1份腦膜炎雙球菌培養液 (CFU為2.36x 109)比1.5份滅活5%乾酵母溶液組成。腹腔注射致死劑量的細菌1小時 後，尾靜脈注射藥物以及對照生理鹽水(所有藥物注射濃度均為1.5mg/kg)，每2小時觀 察結果，連續8天，以小鼠死亡為陽性結果。如圖7所示1 PMC-AM1,本發明新型抗生素；2 Gen，慶大黴素;3 PEN,青黴素； 4Con.,對照。三、 結果如圖7所示小鼠生存曲線，腹腔注射致死劑量腦膜炎雙球菌後，1)，對照組在2天內全 部死亡，2)，青黴素組在2天內全部死亡，3)，慶大黴素組8天存活率為50%, 4)，本 發明新型抗生素的8天存活率為90%。結果顯示，對腦膜炎雙球菌致死性感染，本發明的新型抗生素PMC-AM1表現出了所試 現用抗生素無法比擬的抗菌活性。12附錄SEQUENCE LISTING 畿晉慶三聯(北京)生物技術有限公司 —種含抗體模擬物的新型抗生素及其製備方法與應用 P09326/JJQ 20 Patentln version 3.3 1 81 DNA抗體模擬物AM1的核苷酸序列 1tcttattggc tgcattggat taaacagaga cctggtcagg gactgtggat cggatctcag 60 tccacgcatg tgccgagaac c 81 2 27 PRT抗體模擬物AMI的胺基酸序列 2Ser Tyr Trp Leu His Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Trp lie Gly Ser Gin Ser Thr His Val Pro Arg Thr 3 81 DNA抗體模擬物AM2核苷酸序列 3tcttattggc tgcattggat taaacagaga cctggtcagg gactgtggat cggaaccaga 60 ccggtgcata cgtcccagtc t 81 4 27 PRT抗體模擬物AM2的胺基酸序列 <400〉 4Ser Tyr Trp Leu His Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Trp lie Gly Thr Arg Pro Val His Thr Ser Gin Ser 5 1959 DNA<213〉 抗生素PMC-AMI的基因序列 <400〉 5atgtctgacc ctgtacgtat tacaaatccc ggtgcagaat cgctggggta tgattcagat 60 ggccatgaaa ttatggccgt tgatatttat gtaaaccctc cacgtgtcga tgtctttcat 120 ggtaccccgc ctgcatggag ttccttcggg aacaaaacca tctggggcgg aaacgagtgg 180 gttgatgatt ccccaacccg aagtgatatc gaaaaaaggg acaaggaaat cacagcgtac 240 aaaaacacgc tcagcgcgca gcagaaagag aatgagaata agcgtactga agccgg肌aa 300 cgcctctctg cggcgattgc tgcaagggaa aaagatgaaa acacactgaa aacactccgt 360 gccggaaacg cagatgccgc tgatattaca cgacaggagt tcagactcct gcaggcagag 420 ctgagagaat acggattccg tactgaaate gccggatatg acgccctccg gctgcataca 480 gagagccgga tgctgtttgc tgatgctgat tctcttogta tatctccccg ggaggccagg 540 tcgttaatcg aacaggctga aaaacggcag aaggatgcgc agaacgcaga caagaaggcc 600 gctgatatgc ttgctgaata cgagcgcaga aaaggtatto tggacacccg gttgtcagag 660 ctggaaaaaa atggcggggc agcccttgcc gttcttgatg cacaacaggc ccgtctgctc 720 gggcagcaga cacggaatga cagggccatt tcagaggccc ggaataaact cagttcagtg 780 acggaatcgc ttaacacggc ccgtaatgca ttaaccagag ctgaacaaca gctgacgcaa 840 cagaaaaaca cgcctgacgg caaaacgata gtttcccctg aaaaattccc ggggcgttca 900 tcaacaaatc attctattgt tgtgagcggt gatccgagat ttgccggtac gataaaaatc 960 acaaccagcg cagtoatcga taaccgtgca aacctgaatt atcttctgag ccattccggt1020 ctggactata aacgcaatat tctgaatgac cggaatccgg tggtgacaga ggatgtggaa 1080 ggtgacaaga aaatttataa tgctgaagtt gctgaatggg ataagttacg gcaaagattg1140 cttgatgcca gaaataaaat cacctctgct gaatctgcgg taaattcggc gagaaataac 1200 ctcagtgcca gaacaaatga gcaaaagcat gcaaatgacg ctcttaatgc cctgttgaag 1260 gaaaaagaga atatacgtaa ccagctttcc ggcatcaatc agaagatagc ggaagagaaa 1320agaaaacagg atgaactgaa ggcaacgaaa gacgcaatta atttcacaac agagttcctg1380 aaatcagttt cagaaaaata tggtgcaaaa gctgagcagt tagccagaga gatggccggg 1440 caggctaaag ggaagaaaat acgtaatgtt gaagaggcat taaaaacgta tgaaaagtac1500 cgggctgaca ttaacaaaaa aattaatgca aaagatcgtg cagcgattgc cgcagccctt 1560 gagtctgtga agctgtctga tatatcgtct aatctgaaca gattcagtcg gggactggga1620 tatgcaggaa aatttacaag tcttgctgac tggatcactg agtttggtaa ggctgtccgg 1680 acagagaact ggcgtcctct ttttgttaaa acagaaacca tcatagcagg caatgccgca1740 acggctcttg tggcactggt cttcagtatt cttaccggaa gcgctttagg cattatcggg1800 tatggtttac tgatggctgt caccggtgcg ctgattgatg aatcgcttgt ggaaaaagcg1860 aataagttct ggggtatttc ttattggctg cattggatta aacagagacc tggtcaggga 1920 ctgtggatcg gatctcagtc cacgcatgtg ccgagaacc 1959 6 <211〉 651 PRT抗生素PMC-AMI的胺基酸序列 6Ser Asp Pro Val Arg lie Thr Asn Pro Gly Ala Glu Ser Leu Gly Tyr Asp Ser Asp Gly His Glu He Met Ala Val Asp lie Tyr Val Asn Pro Pro Arg Val Asp Val Phe His Gly Thr Pro Pro Ala Trp Ser Ser Phe Gly Asn Lys Thr lie Trp Gly Gly Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro Thr Arg Ser Asp He Glu Lys Arg Asp Lys Glu He Thr Ala Tyr Lys Asn Thr Leu Ser Ala Gin Gin Lys Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala lie Ala Ala Arg Ghi Lys Asp Glu Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp lie Thr Arg Gin Glu Phe Arg Leu Leu Gin Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly Phe Arg Thr Glu He Ala Gly Tyr Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala Asp Ser Leu Arg lie Ser Pro Arg Glu Ala Arg Ser Leu He Glu Gin Ala Glu Lys Arg Gin Lys Asp Ala Gin Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg Arg Lys Gly lie Leu Asp Thr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Gin Gin Ala Arg Leu Leu GlyGin Gin Thr Arg Asn Asp Arg Ala lie Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg Ala Glu Gin Gin Leu Thr Gin Gin Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr He Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser He Val Val Ser Gly Asp Pro Arg Phe Ala Gly Thr He Lys lie Thr Thr Ser Ala Val lie Asp Asn Arg Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg Asn lie Leu Asn Asp Arg Asn Pro Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly Asp Lys Lys He Tyr Asn Ala Glu Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg Gin Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn Lys lie Thr Ser Ala Glu Ser Ala Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gin Lys His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn lie Arg Asn Gin Leu Ser Gly He Asn Gin Lys lie Ala Glu Glu Lys Arg Lys Gin Asp Glu Leu Lys Ala Thr Lys Asp Ala lie Asn Phe Thr Thr Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gin Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gin Ala Lys Gly Lys Lys lie Arg Asn Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr Glu Lys Tyr Arg Ala Asp lie Asn Lys Lys lie Asn Ala Lys Asp Arg Ala Ala lie Ala Ala Ala Leu Glu Ser Val Lys Leu Ser Asp He Ser Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe Thr Ser Leu Ala Asp Trp lie Thr Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val Lys Thr Glu Thr lie lie Ala Gly Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Phe Ser lie Leu Thr Gly Ser Ala Leu Gly lie lie Gly Tyr Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly Ala Leu lie Asp Glu Ser Leu Val Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly lie Ser Tyr Trp Leu His Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Trp lie Gly Ser Gin Ser Thr His Val Pro Arg<210〉 7 1959<212〉 DNA編碼新型抗生素PMC-SA2的核苷酸序列 7
atgtctgacc ctgtacgtat tacaaatccc ggtgcagaat cgctggggta tgattcagat 60 ggccatgaaa ttatggccgt tgatatttat gtaaaccctc cacgtgtcga tgtctttcat 120 ggtaccccgc ctgcatggag ttccttcggg aacaaaacca tctggggcgg aaacgagtgg 180 gttgatgatt ccccaacccg aagtgatatc gaaaaaaggg acaaggaaat cacagcgtac 240 aaaaacacgc tcagcgcgca gcagaaagag aatgagaata agcgtactga agccggaaaa 300 cgcctctctg cggcgattgc tgcaagggaa aaagatgaaa acacactgaa aacactccgt 360 gccggaaacg cagatgccgc tgatattaca cgacaggagt tcagactcct gcaggcagag 420 ctgagagaat acggattccg tactgaaatc gccggatatg acgccctecg gctgcataca 480 gagagccgga tgctgtttgc tgatgctgat tctcttcgta tatctccccg ggaggccagg 540 tcgttaatcg aacaggctga aaaacggcag a鄉atgcgc agaacgcaga caagaaggcc 600 gctgatatgc ttgctgaata cgagcgcaga aaaggtattc tggacacccg gttgtcagag 660 ctggaaaaaa atggcggggc agcccttgcc gttcttgatg cac朋caggc ccgtctgctc 720 gggcagcaga cacggaatga cagggccatt tcagaggccc ggaataaact cagttcagtg 780 acggsatcgc ttaacacggc ccgtaatgca ttaaccagag ctgaacaaca gctgacgcaa 840 cagaaaaaca cgcctgacgg caaaacgata gtttcccctg aaaaattccc ggggcgttca 900 tcaacaaatc attctattgt tgtgagcggt gatccgagat ttgccggtac gataaaaatc 960 acaaccagcg cagtcatcga taaccgtgca aacctgaatt atcttctgag ccattccggt 1020 ctggaetata aacgcaatat tctgaatgac cggaatccgg tggtgacaga ggatgtggaa1080 ggtgacaaga aaatttataa tgctgaagtt gctgaatggg ataagttacg gcaaagattg1140 cttgatgcca gaaataaaat cacctctgct gaatctgcgg taaattcggc gagaaataac 1200 ctcagtgcca gaacaaatga gcaaaagcat gcaaatgacg ctcttaatgc cctgttgaag 1260 gaaaaagaga atatacgtaa ccagctttcc ggcatcaatc agaagatagc ggaagagaaa 1320 agaaaacagg atgaactgaa ggcaacgaaa gacgcaatta atttcacaac agagttcctg1380 謹tcagttt cagaaaaata tggtgcaaaa gctgagcagt tagccagaga gatggccggg 1440 caggctaaag ggaagaaaat acgtaatgtt gaagaggcat taaaaacgta tgaaaagtac 1500 c鵬ctgaca ttaacaaaaa aattaatgca aaagatcgtg cagcgattgc cgcagccctt 1560 gagtctgtga agctgtctga tatatcgtct aatctgaaca gattcagtcg gggactggga 1620 tatgcaggaa aatttacaag tcttgctgac tggatcactg agtttggtaa ggctgtccgg 1680 acagagaact ggcgtcctct ttttgttaaa acagaaacca tcatagcagg caatgccgca1740 aeggctcttg tggcactggt cttcagtatt cttaccggaa gcgctttagg cattatcggg 1800
17tatggtttac tgatggctgt caccggtgcg ctgattgatg aatcgcttgt ggaaaaagcg aataagttct ggggtatttc ttattggctg cattggatta aacagagacc tggtcaggga ctgtggatcg gaaccagacc ggtgcatacg tcccagtct 8 651 PRT
抗生素PMC-SA2的胺基酸序列 8
Ser Asp Pro Val Arg lie Thr Asn Pro Gly Ala Glu Ser Leu Gly Tyr Asp Ser Asp Gly His Glu lie Met Ala Val Asp lie Tyr Val Asn Pro Pro Arg Val Asp Val Phe His Gly Thr Pro Pro Ala Tip Ser Ser Phe Gly Asn Lys Thr lie Trp Gly Gly Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro Thr Arg Ser Asp lie Glu Lys Arg Asp Lys Glu lie Thr Ala Tyr Lys Asn Thr Leu Ser Ala Gin Gin Lys Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala lie Ala Ala Arg Glu Lys Asp Glu Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp lie Thr Arg Gin Glu Phe Arg Leu Leu Gin Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly Phe Arg Thr Glu lie Ala Gly Tyr Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala Asp Ser Leu Arg lie Ser Pro Arg Glu Ala Arg Ser Leu He Glu Gin Ala Glu Lys Arg Gin Lys Asp Ala Gin Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg Arg Lys Gly lie Leu Asp Thr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Gin Gin Ala Arg Leu Leu Gly Gin Gin Thr Arg Asn Asp Arg Ala lie Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg Ala Glu Gin Gin Leu Thr Gin Gin Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr lie Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser lie Val Val Ser Gly Asp Pro Arg Phe Ala Gly Thr lie Lys He Thr Thr Ser Ala Val lie Asp Asn Arg Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg Asn lie Leu Asn Asp Arg Asn Pro Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly Asp Lys Lys lie Tyr Asn Ala Glu
1860 1920 1959Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg Gin Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn Lys lie Thr Ser Ala Glu Ser Ala Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gin Lys His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn lie Arg Asn Gin Leu Ser Gly lie Asn Gin Lys lie Ala Glu Glu Lys Arg Lys Gin Asp Glu Leu Lys Ala Thr Lys Asp Ala lie Asn Phe Thr Thr Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gin Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gin Ala Lys Gly Lys Lys He Arg Asn Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr Glu Lys Tyr Arg Ala Asp lie Asn Lys Lys lie Asn Ala Lys Asp Arg Ala Ala lie Ala Ala Ala Leu Glu Ser Val Lys Leu Ser Asp lie Ser Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe Thr Ser Leu Ala Asp Trp lie Thr Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val Lys Thr Glu Thr lie lie Ala Gly Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Phe Ser He Leu Thr Gly Ser Ala Leu Gly lie He Gly Tyr Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly Ala Leu lie Asp Glu Ser Leu Val Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly lie Ser Tyr Trp Leu His Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Trp He Gly Thr Arg Pro Val His Thr Ser Gin 9 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorAl的人工序列5'-3' 9
gcgaataagt tctggggtat ttcttattgg ctgcattgga ttaaacagta aataaaatat 60
aagacaggc 10
69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorAl的人工序列3'-5' 10
gcctgtctta tattttattt actgtttaat ecaatgcagc caataagaaa taccccagaa 60 cttattcgc 69 11 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorAl的人工序列5'-3' 11
tggctgcatt ggattaaaca gagacctggt cagggactgt ggatcggata aataaaatat 60 aagacaggc 69 12 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorAl的人工序列3'-5' 12
gcctgtctta tattttattt atccgatcca cagtccctga ccaggtctct gtttaatcca 60 atgcagcca 69 13 69 DNA
<213〉構建突變質粒pBHC-PorAl的人工序列5'-3' 13
ggtcagggac tgtggatcgg atctcagtcc acgcatgtgc cgagaaccta aataaaatat 60 aagacaggc 69
14 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorAl的人工序列3'-5' 14
gcctgtctta tattttattt aggttctcgg cacatgcgtg gactgagatc cgatccaeag 60 tccctgacc 69 15 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorA2的人工序列5'-3' 15
gcgaataagt tctggggtat ttcttattgg ctgcattgga ttaaacagta aataaaatat 60 aagacaggc 69 16 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorA2的人工序列3'-5' 16
gcctgtctta tattttattt actgtttaat ccaatgcagc caataagaaa taccccagaa 60 cttattcgc 69 17 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorA2的人工序列5'-3' 17
tggctgcatt ggattaaaca gagacctggt cagggactgt ggatcggata aataaaatat 60 aagacaggc 69 18 69 DNA
<213〉構建突變質粒pBHC-PorA2的人工序列3'-5' 18
gcctgtctta tattttattt atccgatcca cagtccctga ccaggtctct gtttaatcea 60 atgcagcca 69 19 <211〉 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorA2的人工序列5'-3' 19ggtcagggac tgtggatcgg aaccagaccg gtgcatacgt cccagtctta aataaaatat 60 aagacaggc 69 20 69 DNA
構建突變質粒pBHC-PorA2的人工序列3'-5' 20
gcctgtctta tattttattt aagactggga cgtatgcacc ggtctggttc cgatccacag 60 tccctgacc 69
權利要求
1.一種含抗體模擬物的新型抗生素，由大腸菌素E1、Ia、Ib、A、B、N或其水性孔道結構域及共價連接在所述大腸菌素或其水性孔道結構域的肽鏈羧基端的抗體模擬物構成，所述抗體模擬物是由免疫球蛋白的VHCDR1的羧基端連接VHFR2的氨基端，VHFR2的羧基端再連接VLCDR的氨基端構成；所述免疫球蛋白特異性識別細菌膜孔蛋白。
2. 根據權利要求1所述的新型抗生素，所述細菌指腦膜炎雙球菌，所述膜孔蛋白指腦膜炎雙 球菌表面的膜孔蛋白PorA。
3. 根據權利要求2所述的新型抗生素，所述免疫球蛋白指在具有PUBMED登錄號為 2MPA一H所記載的胺基酸序列的肽鏈與具有登錄號為2MPA一L所記載的胺基酸序列的肽 鏈共價結合而得的抗體蛋白。
4. 根據權利要求1或2或3所述的新型抗生素，所述大腸菌素為Ia。
5. —種肽鏈分子，其特徵在於由大腸菌素El、 Ia、 Ib、 A、 B、 N或其水性孔道結構域的肽 鏈及共價結合在其羧基端的抗體模擬物肽鏈連接而成，所述抗體模擬物肽鏈由免疫球蛋 白的三個區域VHCDR1、 VhFR2、 V《DR3的肽鏈順次以羧基端連接下一區域肽鏈的氨基 端構成；所述免疫球蛋白特異性識別細菌膜孔蛋白。
6. 根據權利要求5所述肽鏈分子，具有SeqlDNo.6所示胺基酸序列。
7. 編碼權利要求5或6所述肽鏈分子的核苷酸序列。
8. 根據權利要求7所述核苷酸序列，如Seq ID No.5所示。
9. 包含權利要求7或8所述核苷酸序列的重組表達載體。
10. 權利要求1至4任一所述的新型抗生素的製備方法，指將權利要求9所述的重組表達載 體導入到表達系統中進行表達；分離純化表達的多肽獲得抗生素。
11. 權利要求1至4任一所述的新型抗生素在製備抗細菌藥物中的應用。
12. 根據權利要求11所述的應用，所述抗細菌藥物指抗腦膜炎雙球菌、抗耐萬古黴素腸球菌、 抗耐甲氧西林金葡菌或抗多重耐藥綠膿桿菌的藥物。
全文摘要
本發明屬於生物醫藥領域，特別是涉及「一種含抗體模擬物的新型抗生素及其製備方法與應用」，一種含抗體模擬物的新型抗生素，由大腸菌素E1、Ia、Ib、A、B、N或其水性孔道結構域及抗體模擬物構成，所述抗體模擬物是由免疫球蛋白的VHCDR1的羧基端連接VHFR2的氨基端，VHFR2的羧基端再連接VLCDR的氨基端構成；所述免疫球蛋白特異性識別細菌膜孔蛋白。該抗生素的殺菌能力是常用抗生素千倍以上，由於其作用機理特殊，因此致病菌很難產生耐藥性，殺菌過程中不會傷害人體正常細胞；可用於製備抗抗腦膜炎雙球菌、抗耐萬古黴素腸球菌、抗耐甲氧西林金葡菌或抗多重耐藥綠膿桿菌的藥物中。
文檔編號C07K19/00GK101633699SQ200910092128
公開日2010年1月27日 申請日期2009年9月2日 優先權日2009年9月2日
發明者丘小慶 申請人:畿晉慶三聯(北京)生物技術有限公司