一種含丹參素的藥物組合物及其製備方法

2023-05-30 04:46:51 5

專利名稱：一種含丹參素的藥物組合物及其製備方法
技術領域：
本發明屬於中藥製藥技術領域，具體涉及一種含丹參素的藥物組合物及其製備方法。
背景技術：
丹參(Radix Salviae Miltiorrhiza Bge)為唇形科(Labiatae)鼠尾草屬植物，又名紫丹參、紅根、血參、大紅袍等。味苦，性微寒。具有活血調經、祛瘀生新、鎮靜安神、涼血消癰、消腫止痛等功能。用於治療月經不調、痛經、產後瘀阻腹痛、關節酸痛、神經衰弱失眠、心悸、癰腫瘡毒等症。近代醫學臨床證明，丹參有擴張血管與增進冠狀動脈血流量的作用，用來治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、心動過速等症，有顯著的療效。丹參主要成分為脂溶性成分和水溶性成分，先前丹參的化學工作集中於脂溶性成分，從中分離出丹參酮為代表的一系列二萜化合物，經藥理實驗證實具有一定的生理活性，但大量的藥理和臨床研究結果表明丹參的水溶性成分的活性強於脂溶性成分，丹參水溶性成分為丹參酸A、B、C，丹參酸A又稱丹參素，其結構為D(+)-β-(3，4-二羥基苯基)乳酸，丹參酸B是由3分子的丹參素和1分子的咖啡酸縮合形成的，就是丹參酚酸B，該物質不穩定，在一定條件下轉化成丹參素；丹參酸C是2分子丹參素的縮合物；丹參藥材中丹參素的含量0.02％，丹參酚酸B的含量為3-9％，而其市場提取物中丹參素的含量5-8％，丹參酚酸B的檢測幾乎為陰性，以上數據說明在一定條件下，丹參總酚酸可以轉化為丹參素。
丹參素的具有很好的藥理作用。(1)對心血管系統的作用經藥理試驗證明，丹參素能顯著增加離體豚鼠的冠脈血流量；舒張離體豬冠狀動脈；對抗嗎啡及心得安的縮血管作用；對抗或顯著保護由垂體後葉素引起的大鼠S-T段缺血性心電變化；明顯縮小狗心肌梗塞的範圍和改善左心室功能；促進缺血性心肌損傷細胞的修復；為丹參水溶性部分中抗心肌缺血的主要成分；並具有改善心臟及外周微循環障礙等作用。(2)對血液系統的作用丹參素可抑制ADP誘導的兔血小板聚集；使血小板粘附降低；明顯降低血液粘度；抑制血小板的合成；對抗血栓形成和抗凝血作用；並可激活纖溶，促進纖維蛋白(原)降解；尚具鈣拮抗作用，能抑制由氯化鉀激發的紅細胞的鈣內流，穩定紅細胞膜，從而產生抗溶血作用。
專利(申請號01126883)採用離子交換樹脂或者大孔吸附樹脂純化丹參得到丹參素，該方法對丹參素的含量未作任何描述，只是從形式上說明該方法可行，是否能夠工業化、產業化也未描述，經過分析該發明屬於實驗室小實驗得到的結論；查閱專利文獻，沒有一種方法可以使丹參素含量達到80％以上。

發明內容
基於上述原因，本發明採用超聲水提法進行提取，提取液醇沉除去一部分雜質，將上清液進行鹼化、酸化處理，得到的溶液在用極性大孔樹脂進行洗脫，洗脫液用醋酸乙脂萃取得到丹參素含量不低於80％的有效部位，與藥用輔料混合製備成注射製劑，藥理實驗表明，本發明的各組製劑具有更好的藥理作用。
本發明通過以下技術方案實現的。
一.工藝製法(1)取丹參藥材、切碎，置超聲提取罐中，加6-10倍的水進行超聲提取，時間為20-50分鐘，振蕩頻率為20-100KHz，控制溫度為室溫，提取2-4次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.05-1.15(50℃)，加乙醇使含醇量達50％-70％，於0℃-10℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為9-11，煮沸0.5-3小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為2-3，得到溶液；(2)將上述溶液上大孔吸附樹脂柱，先用3-6倍水洗，洗脫液棄去，再用6-10倍1-3mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用0.5-3倍的醋酸乙酯萃取3-9次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位；(3)取丹參有效部位80-100重量份，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑；(4)取丹參有效部位160-200重量份，藥用輔料200-240重量份，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑；(5))取丹參有效部位80-100重量份，藥用輔料100-120重量份，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑。
輸液劑的藥用輔料為氯化鈉、葡萄糖的一種。
粉針製劑的製備中賦形劑為甘露醇、蔗糖、乳糖中的一種或幾種。
大孔吸附樹脂為極性大孔吸附樹脂。
二.檢測分析丹參有效部位丹參素含量檢測分析1.儀器與試藥 高效液相色譜儀包括LC-10ATvp型溶劑輸送泵，SPD-10ATvp型紫外可見檢測器(日本島津公司)；N2000色譜工作站(浙江大學智能信息工程研究所)；KQ3200型超聲波清洗儀(崑山市超聲儀器有限公司)，TGL-16G高速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)。色譜純甲醇(北京化學試劑有效公司)；水為三蒸水(自製)；其它試劑均為分析純。丹參素對照品(中國藥品生物製品檢定所)。
2.色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱迪馬公司C18柱(5μm，150mm×4.6mm，I.D)；流動相甲醇-5％乙酸(25∶75)；流速1.0ml/min；檢測波長280nm。理論板數按丹參素峰記算應不低於3000。
3.對照品溶液製備 精密稱取丹參素對照品5.0mg，置入10ml量瓶中，加入甲醇，超聲使溶解，再加甲醇至刻度，搖勻，即得。
4.標準曲線製備 分別精密吸取上述對照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl，在上述測定條件下進樣測定，結果丹參素在0.5μg～6.0μg範圍內呈良好線性關係，回歸方程為Y＝9726483X+3989，r＝0.9997。
5.供試品溶液的製備 精密稱定本發明丹參有效部位約10mg，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液離心(12000rpm)10min，上清液作為供試品溶液。
6.測定法 精密吸取供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，用標準曲線計算含量。
上述實驗進行三次。結果見表1。
表1丹參有效部位丹參素含量丹參有效部位丹參素含量平均含量組別(％) (％)183.2282.5 82.9382.9結論通過以上檢測分析實驗，我們可以分析到，採用本發明的工藝得到的丹參有效部位中丹參素含量大於80％，符合國家藥監局對中藥創新藥5類的要求，充分說明本發明具有實際意義。
三.藥理實施例實施例1對小鼠缺氧耐力的影響實驗實驗藥物本發明各組製劑(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)丹參注射液(浙江天瑞藥業有限公司)生理鹽水(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)實驗方法取健康昆明種小鼠50隻，體重20～24g。每組10隻，雌雄各半，分籠飼養。以人常規治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量＝已知動物給藥量×待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給生理鹽水，1次/d，連續7d。於末次給藥後1h，將小鼠分別置於體積為150ml磨口瓶中，內放15g鈉石灰，密閉觀察其存活時間。結果見表2.
表2對小鼠常壓缺氧的影響(X±SD)鼠數 平均存活時間組別(只) (min)生理鹽水 1015.81±2.91丹參注射液 1020.12±3.62**本發明水針劑1031.98±4.68**[*]本發明輸液劑1032.41±4.15**[*]本發明粉針劑1032.06±4.23**[*]注**P＜0.01，與陽性對照組比較[*]P＜0.05實施例2對小鼠心肌缺氧的保護作用實驗實驗藥物本發明各組製劑(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)丹參注射液(浙江天瑞藥業有限公司)生理鹽水(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)實驗方法取健康昆明種小鼠50隻，體重18～22g，隨機分成5組。每組雌雄各半，分籠飼養。以人常規治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量＝已知動物給藥量×待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給生理鹽水。給藥方法1次/d，連續6d。於末次給藥後1h用烏拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分離氣管，以動脈夾夾閉氣管，用心電儀觀察心電，並用秒表記下小鼠夾閉氣管後至心電消失的時間。結果見表3。
表3對小鼠心肌缺氧的影響(X±SD)鼠數 平均存活時間組別(只) (min)生理鹽水 10 5.01±0.28丹參注射液10 9.81±0.77**本發明水針劑 1014.12±1.34**[*]本發明輸液劑 1014.01±1.29**[*]本發明粉針劑 1014.56±1.38**[*]注**P＜0.01，與陽性對照組比較[*]P＜0.05結論通過以上藥理實驗表明，本發明的各組製劑具有更好的藥理作用。
四.製備實施例實施例1(1)取丹參藥材4000克、切碎，置超聲提取罐中，加6倍的水進行超聲提取，時間為20分鐘，振蕩頻率為20KHz，控制溫度為室溫，提取2次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.05(50℃)，加乙醇使含醇量達50％，於0℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為9，煮沸0.5小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為2，得到溶液；(2)將上述溶液上極性大孔吸附樹脂柱，先用3倍水洗，洗脫液棄去，再用6倍1mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用0.5倍的醋酸乙酯萃取3次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位；(經過檢測分析實驗，丹參素含量83.1％)(3)取丹參有效部位80克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑1000支；(4)取丹參有效部位160克，藥用輔料葡萄糖240克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑1000瓶；(5)取丹參有效部位80克，藥用輔料甘露醇120克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑1000瓶。
實施例2(1)取丹參藥材4000克、切碎，置超聲提取罐中，加10倍的水進行超聲提取，時間為50分鐘，振蕩頻率為100KHz，控制溫度為室溫，提取4次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.15(50℃)，加乙醇使含醇量達70％，於10℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為11，煮沸3小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為3，得到溶液；(2)將上述溶液上極性大孔吸附樹脂柱，先用6倍水洗，洗脫液棄去，再用10倍3mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用3倍的醋酸乙酯萃取9次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位；(經過檢測分析實驗，丹參素含量83.6％)(3)取丹參有效部位100克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑1000支；(4)取丹參有效部位200克，藥用輔料氯化鈉200克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑1000瓶；(5)取丹參有效部位100克，藥用輔料蔗糖100克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑1000瓶。
實施例3(1)取丹參藥材4000克、切碎，置超聲提取罐中，加7倍的水進行超聲提取，時間為25分鐘，振蕩頻率為30KHz，控制溫度為室溫，提取3次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.08(50℃)，加乙醇使含醇量達55％，於2℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為9.5，煮沸1小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為2.5，得到溶液；
(2)將上述溶液上極性大孔吸附樹脂柱，先用4倍水洗，洗脫液棄去，再用7倍1.5mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用1倍的醋酸乙酯萃取4次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位；(經過檢測分析實驗，丹參素含量82.9％)(3)取丹參有效部位85克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑1000支；(4)取丹參有效部位170克，藥用輔料葡萄糖230克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑1000瓶；(5)取丹參有效部位85克，藥用輔料乳糖115克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑1000瓶。
實施例4(1)取丹參藥材4000克、切碎，置超聲提取罐中，加8倍的水進行超聲提取，時間為30分鐘，振蕩頻率為40KHz，控制溫度為室溫，提取3次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.10(50℃)，加乙醇使含醇量達60％，於0℃-10℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為10，煮沸1.5小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為2.5，得到溶液；(2)將上述溶液上極性大孔吸附樹脂柱，先用5倍水洗，洗脫液棄去，再用8倍2mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用2倍的醋酸乙酯萃取5次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位；(經過檢測分析實驗，丹參素含量83.4％)(3)取丹參有效部位90克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑1000支；(4)取丹參有效部位180克，藥用輔料氯化鈉220克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑1000瓶；(5)取丹參有效部位90克，藥用輔料甘露醇、蔗糖110克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑1000瓶。。
實施例5(1)取丹參藥材4000克、切碎，置超聲提取罐中，加9倍的水進行超聲提取，時間為35分鐘，振蕩頻率為60KHz，控制溫度為室溫，提取3次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.12(50℃)，加乙醇使含醇量達65％，於6℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為10，煮沸2小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為2.5，得到溶液；(2)將上述溶液上極性大孔吸附樹脂柱，先用5倍水洗，洗脫液棄去，再用9倍3mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用2.5倍的醋酸乙酯萃取8次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位；(經過檢測分析實驗，丹參素含量82.8％)(3)取有丹參效部位95克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑1000支；(4)取丹參有效部位190克，藥用輔料210克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑1000瓶；(5)取丹參有效部位95克，藥用輔料甘露醇、乳糖105克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑1000瓶。
實施例6(1)取丹參藥材4000克、切碎，置超聲提取罐中，加8倍的水進行超聲提取，時間為45分鐘，振蕩頻率為85KHz，控制溫度為室溫，提取3次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.14(50℃)，加乙醇使含醇量達65％，於7℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為10，煮沸2小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為3，得到溶液；(2)將上述溶液上極性大孔吸附樹脂柱，先用4倍水洗，洗脫液棄去，再用7倍2mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用2倍的醋酸乙酯萃取7次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位；(經過檢測分析實驗，丹參素含量83.5％)(3)取丹參有效部位98克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑1000支；(4)取丹參有效部位196克，藥用輔料氯化鈉204克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑1000瓶；(5)取丹參有效部位98克，藥用輔料蔗糖、乳糖102克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑1000瓶。
實施例7(1)取丹參藥材40000克、切碎，置超聲提取罐中，加8倍的水進行超聲提取，時間為40分鐘，振蕩頻率為60KHz，控制溫度為室溫，提取3次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.10(50℃)，加乙醇使含醇量達60％，於4℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為10，煮沸2小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為2，得到溶液；(2)將上述溶液上極性大孔吸附樹脂柱，先用4倍水洗，洗脫液棄去，再用8倍2mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用2倍的醋酸乙酯萃取6次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位；(經過檢測分析實驗，丹參素含量82.9％)(3)取丹參有效部位1000克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑10000支；(4)取丹參有效部位2000克，藥用輔料葡萄糖2000克，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑10000瓶；(5)取丹參有效部位1000克，藥用輔料甘露醇、蔗糖、乳糖1000克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑10000瓶。
權利要求
1.一種丹參素的藥物組合物，其特徵在於它是由下述方法製備而成的(1)取丹參藥材、切碎，置超聲提取罐中，加6-10倍的水進行超聲提取，時間為20-50分鐘，振蕩頻率為20-100KHz，控制溫度為室溫，提取2-4次，合併提取液過濾，濾液60℃濃縮至相對密度為1.05-1.15(50℃)，加乙醇使含醇量達50％-70％，於0℃-10℃靜置24小時，過濾，濾液濃縮至相對對密度為1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小時，過濾，濾液加入鹼液調PH值為9-11，煮沸0.5-3小時，放冷，4℃冷藏24小時，過濾，濾液用鹽酸調節pH值為2-3，得到溶液；(2)將上述溶液上大孔吸附樹脂柱，先用3-6倍水洗，洗脫液棄去，再用6-10倍1-3mol/l的氯化鈉洗脫，洗脫液用0.5-3倍的醋酸乙酯萃取3-9次，合併醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至盡，60℃以下真空乾燥得以丹參素有效部位，其中丹參有效部位丹參素的含量不低於80％。
2.根據權利要求1所述的大孔吸附樹脂為極性大孔吸附樹脂。
3.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特徵將上述丹參有效部位製備成水針劑、輸液劑、粉針劑(1)取丹參有效部位80-100重量份，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到水針劑；(2)取丹參有效部位160-200重量份，藥用輔料200-240重量份，加注射用水溶解完全，用葡甲胺調PH值為5-8，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液進行灌裝，檢驗，得到輸液劑；(3)取丹參有效部位80-100重量份，藥用輔料100-120重量份加注射用水溶解完全，用0.22um微孔濾膜過濾，濾液灌裝乾燥，得到粉針劑。
全文摘要
本發明公開了一種含丹參素的藥物組合物及其製備方法，其特徵在於從中藥丹參中得到丹參素，使其含量不低於80％，與藥用輔料混合，製備成注射製劑，藥理實驗表明，本發明的各組製劑具有更好的藥理作用。
文檔編號A61K9/14GK1628649SQ200410074650
公開日2005年6月22日 申請日期2004年9月10日 優先權日2004年9月10日
發明者張平 申請人:張平