一種具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖及其製備方法和應用的製作方法

2023-05-30 01:33:46

一種具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖及其製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其活性成分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多糖復配而成，所述各組分的質量份配比為靈芝多糖10~250、枸杞多糖1~50、黃精多糖2~10。該靈芝、枸杞及黃精複合多糖的純度及活性高，具有調節腫瘤微環境的功效。還公開了上述靈芝、枸杞及黃精複合多糖的製備方法，該製備方法工藝簡單、穩定高效，適合工業化生產，成本低，本發明還公開了上述靈芝、枸杞及黃精複合多糖在製備具有調節腫瘤微環境功效的保健食品中的應用。
【專利說明】一種具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多 糖及其製備方法和應用

【技術領域】
[0001] 本發明屬於多糖【技術領域】，具體涉及一種具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞 及黃精複合多糖及其製備方法和應用。

【背景技術】
[0002] 腫瘤復發和轉移是困擾臨床腫瘤治療的具有普遍意義的難題，究其原因，在於現 有治療的目標仍然集中在腫瘤細胞本身，而忽略了其微環境的重要性。腫瘤微環境與腫瘤 細胞之間是土壤與種子的關係，腫瘤惡變過程，就是腫瘤細胞與其微環境共進化的過程，其 結果就是休眠腫瘤細胞的甦醒，進入快速增殖，並發生轉移。因此，改善腫瘤微環境，維持腫 瘤細胞的休眠狀態，是目前研究的熱點和重點。近年來的研究發現，多糖就具有顯著地抗腫 瘤活性並且對人體的毒副作用相對較小，對多糖的生物活性研究在醫學領域已經成為國內 外專家學者研究的熱點。近年發現一些多糖及其複合物對多種疾病，如免疫紊亂、癌症、糖 尿病、高血壓、肝炎、血栓、肺炎、病毒等都具有顯著療效，並且參與細胞各種生命現象的調 節並具有調節腫瘤微環境的作用。
[0003] 靈芝原產於亞洲東部，中國分布最廣的在江西，靈芝作為擁有數千年藥用歷史的 中國傳統珍貴藥材，具備很高的藥用價值，經過科研機構數十年的現代藥理學研究證實，靈 芝對於增強人體免疫力，調節血糖，控制血壓，輔助腫瘤放化療，保肝護肝，促進睡眠等方面 均具有顯著療效。枸杞是名貴的藥材和滋補品，中醫很早就有"枸杞養生"的說法。《本草綱 目》記載："枸杞，補腎生精，養肝……明目安神，令人長壽。"，黃精是一種常用中藥，黃精以 根莖入藥。具有補氣養陰，健脾，潤肺，益腎功能，用於治療脾胃虛弱，體倦乏力，口乾食少， 肺虛燥咳，精血不足，內熱消渴等症。
[0004] 目前尚未有人以靈芝、枸杞和黃精為原料提取多糖並配製複合多糖，並用於輔助 抑制腫瘤保健食品方面的應用。


【發明內容】

[0005] 本發明所要解決的第一個技術問題在於提供一種具有調節腫瘤微環境功效的靈 芝、枸杞及黃精複合多糖，該複合多糖具有調節腫瘤微環境的功效。
[0006] 本發明所要解決的第二個技術問題在於提供上述具有調節腫瘤微環境功效的靈 芝、枸杞及黃精複合多糖的製備方法，該方法工藝簡單、穩定高效，適合工業化生產，成本 低。
[0007] 本發明所要解決的第三個技術問題在於提供上述具有調節腫瘤微環境功效的靈 芝、枸杞及黃精複合多糖在製備具有調節腫瘤微環境功效的保健食品中的應用。
[0008] 本發明所要解決的第一個技術問題是通過如下技術方案來實現的：一種具有調 節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其活性成分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精 多糖復配而成，所述各組分的質量份配配比為靈芝多糖ΚΓ250、枸杞多糖1~50、黃精多糖 2 ?10。
[0009] 本發明各原料的質量份配比進一步優選為：靈芝多糖5(Γ150、枸杞多糖2(Γ40、黃 精多糖4?8。
[0010] 本發明各原料的質量份配配比最佳為：所述各組分的質量份配比為靈芝多糖 125、枸杞多糖10、黃精多糖4。
[0011] 作為本發明的優選的一種實施方式，本發明所述的靈芝多糖、枸杞多糖或黃精多 糖通過以下方法製備獲得：選取靈芝、枸杞或黃精原料，採用沸水提取多次，合併提取液並 濃縮得濃縮液al，將濃縮液al採用透析袋進行透析得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃 縮液a2,在濃縮液a2中加入三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，取上清液進行中和、透 析處理得透析液b2,將透析液b2濃縮得濃縮液a3,在濃縮液a3中加入乙醇水溶液進行醇 沉處理，所得沉澱物經乾燥處理即為靈芝多糖、枸杞多糖或黃精多糖。
[0012] 本發明靈芝多糖、枸杞多糖或黃精多糖的製備過程中： 採用沸水提取時，共提取Γ5次，每次提取時沸水的用量為靈芝、枸杞或黃精原料總質 量的ΚΓ20倍，每次提取時間為4?5h。
[0013] 所述的三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的體積百分含量為15?35%，其用量與濃縮液 a2的體積相同，進行蛋白沉澱時間為:T4h。
[0014] 所述的乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為7(Γ95%，乙醇水溶液的用量為濃縮液 a3總體積的2~4倍。
[0015] 優選將透析液bl濃縮至原體積的1/10左右得濃縮液a2,將透析液b2濃縮至原體 積的1/10左右得濃縮液a3。
[0016] 透析袋的截留分子量約為3500 Da。
[0017] 本發明所要解決的第二個技術問題是通過以下技術方案來實現的：上述具有調節 腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖的製備方法，包括以下步驟： (1) 選取靈芝、枸杞或黃精原料，採用沸水提取多次，合併提取液並濃縮得濃縮液al ; (2) 將濃縮液al採用透析袋透析得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃縮液a2 ; (3) 在濃縮液a2中加入三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，取上清液進行中和、透 析處理得透析液b2,將透析液b2濃縮得濃縮液a3 ; (4) 在濃縮液a3中加入乙醇水溶液進行醇沉處理，所得沉澱物經乾燥處理即為靈芝多 糖、枸杞多糖或黃精多糖； (5) 將靈芝多糖、枸杞及黃精多糖按照上述計量配比混勻，即製備獲得靈芝、枸杞及黃 精複合多糖。
[0018] 在該靈芝、枸杞及黃精複合多糖的製備方法中： 步驟（1)中採用沸水提取時共提取Γ5次，每次提取時沸水的用量優選為靈芝、枸杞或 黃精原料總質量的1(Γ20倍，每次提取時間優選為4?5h ;步驟（3)中所述三氯乙酸水溶液中 三氯乙酸的體積百分含量優選為15~35%，其用量優選與濃縮液a2的體積相同，進行蛋白沉 澱時間優選為3~4h ;步驟（4)中所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量優選為7(Γ95%，乙 醇水溶液的用量優選為濃縮液a3總體積的2~4倍。
[0019] 步驟（3)中優選將透析液bl濃縮至原體積的1/10左右得濃縮液a2,步驟（3)中 優選將透析液b2濃縮至原體積的1/10左右得濃縮液a3。
[0020] 步驟（2)和步驟（3)中透析袋的截留分子量約為3500 Da。
[0021] 本發明所要解決的第三個技術問題是通過以下技術方案來實現的：上述具有調節 腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖在製備具有調節腫瘤微環境功效的保健食品 中的應用 本發明所述保健食品的劑型可以為膠囊型、片劑、粉劑、顆粒劑或口服液等。
[0022] 與現有技術相比，本發明具有如下優點： (1) 本發明中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，可以通過抑制腫瘤新生血管生成、免疫抑 制及免疫負調控等多途徑調節腫瘤微環境，其具有良好的抗腫瘤活性，其可以直接口服，也 可以製成藥劑學上所說的多種劑型，如膠囊型、片劑、粉劑、顆粒劑或口服液等，食用後具有 調節腫瘤微環境以及輔助抑制腫瘤的功效； (2) 本發明中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖以富含活性多糖的中草藥為主料，利用各種 多糖成分合理組合、配合共用，通過多種途徑調節腫瘤微環境以及輔助抑制腫瘤，對亞健康 保健具有良好的效果； (3) 本發明中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖的製備方法，其工藝簡單、穩定高效，適合工 業化生產，成本低。

【具體實施方式】
[0023] 下面結合實施例對本發明做進一步說明，但不以任何形式限制本發明。
[0024] 以下實施例中採用的各原料，如無特殊說明，均為市售產品。
[0025] 第一部分靈芝、枸杞及黃精複合多糖及其製備方法 實施例1 本實施例中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其活性成分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多 糖復配而成，其中各組分質量份配比為靈芝多糖10、枸杞多糖50及黃精多糖2。
[0026] 上述靈芝、枸杞及黃精複合多糖通過以下方法製備獲得： (1) 製備靈芝多糖：選取靈芝藥材3kg，加入水30L，加熱煮沸提取，共提取3次，每次提 取5小時，合併提取液並濃縮至約5L得濃縮液al，將濃縮液al採用透析袋(截留分子量為 3500 Da，同下）和對流水進行透析大約2天後得透析液bl，將透析液bl濃縮至原體積的 1/10得濃縮液a2,在濃縮液a2中加入等體積的三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，其中 三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的體積百分含量為30%，溫度為4°C，去蛋白時間約為：T4h，除 去蛋白沉澱取上清液採用氫氧化鈉水溶液(其中氫氧化鈉的質量百分含量約為10%)中和至 中性得中性上清液，將中性上清液進行透析(截留分子量為3500 Da，同下)大約2天後得透 析液b2,將透析液b2濃縮至大約3L得濃縮液a3,在濃縮液a3中邊攪拌邊加入乙醇水溶液 進行醇沉處理，其中乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為85%，用量約為濃縮液a3的3倍， 靜置過夜，離心收集沉澱，沉澱分別用無水乙醇脫水1次，丙酮脫水2次，40°C真空乾燥，所 得沉澱物即為靈芝多糖； (2) 製備枸杞多糖及黃精多糖，製備方法同靈芝多糖； (3) 將靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多糖按照靈芝多糖10、枸杞多糖50及黃精多糖2的 質量份配比混勻，即製備獲得靈芝、枸杞及黃精複合多糖。
[0027] 實施例2 本實施例中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其活性成分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多 糖復配而成，其中各組分質量份配比為靈芝多糖250、枸杞多糖1及黃精多糖5。
[0028] 上述靈芝、枸杞及黃精複合多糖通過以下方法製備獲得： (1) 製備靈芝多糖：選取靈芝藥材3kg，加入水60L，加熱煮沸提取，共提取3次，每次提 取4小時，合併提取液並濃縮至約5L得濃縮液al，將濃縮液al採用透析袋)和對流水進行 透析大約2天後得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃縮液a2,在濃縮液a2中加入等體積 的三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的體積百分含量 為15%，溫度為4°C，去蛋白時間約為：T4h，除去蛋白沉澱取上清液採用氫氧化鈉水溶液(其 中氫氧化鈉的質量百分含量約為10%)中和至中性得中性上清液，將中性上清液進行透析大 約2天後得透析液b2,將透析液b2濃縮至大約3L得濃縮液a3,在濃縮液a3中邊攪拌邊加 入乙醇水溶液進行醇沉處理，其中乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為70%，用量約為濃縮 液a3的3倍，靜置過夜，離心收集沉澱，沉澱分別用無水乙醇脫水1次，丙酮脫水2次，40°C 真空乾燥，所得沉澱物即為靈芝多糖； (2) 製備枸杞多糖及黃精多糖，製備方法同靈芝多糖； (3) 將靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多糖按照靈芝多糖250、枸杞多糖1及黃精多糖5的 質量份配比混勻，即製備獲得靈芝、枸杞及黃精複合多糖。
[0029] 實施例3 本實施例中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其活性成分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多 糖復配而成，其中各組分的質量份配比為靈芝多糖100、枸杞多糖20、枸杞多糖4。
[0030] 上述靈芝、枸杞及黃精複合多糖通過以下方法製備獲得： (1) 製備靈芝多糖：選取靈芝藥材3kg，加入水30L，加熱煮沸提取，共提取3次，每次提 取5小時，合併提取液並濃縮至約5L得濃縮液al，將濃縮液al採用透析袋和對流水進行透 析大約2天後得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃縮液a2,在濃縮液a2中加入等體積的 三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的體積百分含量為 35%，溫度為4°C，去蛋白時間約為：T4h，除去蛋白沉澱取上清液採用氫氧化鈉水溶液(其中 氫氧化鈉的質量百分含量約為10%)中和至中性得中性上清液，將中性上清液進行透析大約 2天後得透析液b2,將透析液b2濃縮至大約3L得濃縮液a3,在濃縮液a3中邊攪拌邊加入 乙醇水溶液進行醇沉處理，其中乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為80%，用量約為濃縮液 a3的3倍，靜置過夜，離心收集沉澱，沉澱分別用無水乙醇脫水1次，丙酮脫水2次，40°C真 空乾燥，所得沉澱物即為靈芝多糖； (2) 製備枸杞多糖及黃精多糖，製備方法同靈芝多糖； (3) 將靈芝多糖、枸杞多糖及枸杞多糖按照靈芝多糖100、枸杞多糖20及黃精多糖6的 質量份配比混勻，即製備獲得靈芝、枸杞及黃精複合多糖。
[0031] 實施例4 本實施例中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其活性成分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多 糖復配而成，其中各組分質量份配比為靈芝多糖150、枸杞多糖40及黃精多糖6。
[0032] 上述靈芝、枸杞及黃精複合多糖通過以下方法製備獲得： (1)製備靈芝多糖：選取靈芝藥材3kg，加入水60L，加熱煮沸提取，共提取5次，每次提 取4小時，合併提取液並濃縮至約5L得濃縮液al，將濃縮液al採用透析袋和對流水進行透 析大約2天後得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃縮液a2,在濃縮液a2中加入等體積的 三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的體積百分含量為 20%，溫度為4°C，去蛋白時間約為：T4h，除去蛋白沉澱取上清液採用氫氧化鈉水溶液(其中 氫氧化鈉的質量百分含量約為10%)中和至中性得中性上清液，將中性上清液進行透析(截 留大約2天後得透析液b2,將透析液b2濃縮至大約3L得濃縮液a3,在濃縮液a3中邊攪拌 邊加入乙醇水溶液進行醇沉處理，其中乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為80%，用量約為 濃縮液a3的4倍，靜置過夜，離心收集沉澱，沉澱分別用無水乙醇脫水1次，丙酮脫水2次， 40°C真空乾燥，所得沉澱物即為靈芝多糖； (2) 製備枸杞多糖及黃精多糖，製備方法同靈芝多糖； (3) 將靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多糖按照靈芝多糖150、枸杞多糖40及黃精多糖6的 質量份配比混勻，即製備獲得靈芝、枸杞及黃精複合多糖。
[0033] 實施例5 本實施例中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其活性成分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多 糖復配而成，其中各組分質量份配比為靈芝多糖100、枸杞多糖30、黃精多糖8。
[0034] 上述靈芝、枸杞及黃精複合多糖通過以下方法製備獲得： (1) 製備靈芝多糖：選取靈芝藥材3kg，加入水40L，加熱煮沸提取，共提取5次，每次提 取5小時，合併提取液並濃縮至約5L得濃縮液al，將濃縮液al採用透析袋和對流水進行透 析大約2天後得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃縮液a2,在濃縮液a2中加入等體積的 三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的體積百分含量為 35%，溫度為4°C，去蛋白時間約為：T4h，除去蛋白沉澱取上清液採用氫氧化鈉水溶液(其中 氫氧化鈉的質量百分含量約為10%)中和至中性得中性上清液，將中性上清液進行透析大約 2天後得透析液b2,將透析液b2濃縮至大約3L得濃縮液a3,在濃縮液a3中邊攪拌邊加入 乙醇水溶液進行醇沉處理，其中乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為95%，用量約為濃縮液 a3的3倍，靜置過夜，離心收集沉澱，沉澱分別用無水乙醇脫水1次，丙酮脫水2次，40°C真 空乾燥，所得沉澱物即為靈芝多糖； (2) 製備枸杞多糖及黃精多糖，製備方法同靈芝多糖； (3) 將靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多糖按照靈芝多糖100、枸杞多糖30及黃精多糖8的 質量份配比混勻，即製備獲得靈芝、枸杞及黃精複合多糖。
[0035] 實施例6 本實施例中的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其活性成分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多 糖復配而成，其中各組分質量份配比為靈芝多糖200、枸杞多糖25、黃精多糖5。
[0036] 上述靈芝、枸杞及黃精複合多糖通過以下方法製備獲得： (1)製備靈芝多糖：選取靈芝藥材3kg，加入水50L，加熱煮沸提取，共提取5次，每次提 取4小時，合併提取液並濃縮至約5L得濃縮液al，將濃縮液al採用透析袋和對流水進行透 析大約2天後得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃縮液a2,在濃縮液a2中加入等體積的 三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的體積百分含量為 20%，溫度為4°C，去蛋白時間約為：T4h，除去蛋白沉澱取上清液採用氫氧化鈉水溶液(其中 氫氧化鈉的質量百分含量約為10%)中和至中性得中性上清液，將中性上清液進行透析大約 2天後得透析液b2,將透析液b2濃縮至大約3L得濃縮液a3,在濃縮液a3中邊攪拌邊加入 乙醇水溶液進行醇沉處理，其中乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為80%，用量約為濃縮液 a3的3倍，靜置過夜，離心收集沉澱，沉澱分別用無水乙醇脫水1次，丙酮脫水2次，40°C真 空乾燥，所得沉澱物即為靈芝多糖； (2) 製備枸杞多糖及黃精多糖，製備方法同靈芝多糖； (3) 將靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多糖按照靈芝多糖200、枸杞多糖25及黃精多糖5的 質量份配比混勻，即製備獲得靈芝、枸杞及黃精複合多糖。
[0037] 實施例7 靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多糖的製備方法同實施例10,分別取靈芝多糖55g、枸杞多 糖5 g及黃精多糖lg混合均勻，得複合多糖組分P1。
[0038] 實施例8 靈芝多糖和枸杞多糖的製備方法同實施例1，分別取靈芝多糖l〇〇g、枸杞多糖15 g及 黃精多糖1 g混合均勻，得複合多糖組分P2。
[0039] 實施例9 靈芝多糖和枸杞多糖的製備方法同實施例1，分別取靈芝多糖125g、枸杞多糖10 g及 黃精多糖4 g混合均勻，得複合多糖組分P3。
[0040] 實施例10 以上述實施例1-9中提供的複合多糖為主要功效成分製備保健食品，通過常規工藝， 可以製成藥劑學上所說的多種劑型，如膠囊劑、片劑、粉劑、顆粒或口服液等。
[0041] 第二部分複合多糖及複合多糖輔助抑制腫瘤活性實驗 實施例11複合多糖可抑制BMP2誘導的帶有BRE報告基因的螢光素酶的活性 C2C12細胞株購自中科院細胞庫，C2C12- pGFl-BRE細胞株由中國科學院上海藥物研 究所丁侃實驗室構建，保存於液氮中。C2C12- pGFl-BRE細胞用含10 % Gibco胎牛血清 DMEM培養基培養，置於37°C飽和溼度、含5% C02的恆溫箱中培養，以1 X 104細胞/孔的密 度接種於96孔板內，每孔100 μ L。貼壁24 h後吸去60 μ L培養基，加配置好相應濃度 的多糖樣品（？1、？2、？3)50以1^，終濃度分別為0.5 11^/1^、0.111^/1^、0.02 11^/1^，10 4 1^ ΒΜΡ2調整至終濃度200 ng/mL。同時設空白組和ΒΜΡ2組對照。給藥16 h後吸去培養基， 加20 μ L Reporter Lysis IX Buffer,將溶解的細胞裂解液20 μ L轉移至白板，加入40 μ Lluciferase底物，於3分鐘內讀板，讀取RLU值。採用SPSS統計軟體進行統計學處理。 數據均以均數土標準差（.Z ±s)表示，兩組間比較採用獨立樣本?檢驗，多組間比較採 用單因素方差分析。
[0042] 實施例12複合多糖對NF- κ Β報告基因的螢光素酶的活性 ΤΗΡ-1細胞株購自中科院細胞庫，THP-l/pGFl-NF-κΒ細胞株由中國科學院上海藥 物研究所丁侃實驗室構建，保存於液氮中。THP-l/pGFl-NF-κΒ細胞用含10%胎牛血清 RPMI-1640培養基培養。置於37 °C飽和溼度、含5% 0)2的恆溫箱中培養，以5Χ104細胞/ 孔的密度接種於96孔板內，每孔50 yL容積。加入受試樣品50 111^(?1、？2、？3)，終濃度 分別為0· 5 mg/mL、0· 1 mg/mL、0· 02 mg/mL，同時設立空白組和LPS對照組。加入LPS溶液 10 yL，終濃度為1 yg/mL，置於37 °C飽和溼度、含5%C02的恆溫箱中培養過夜。培養過 夜後，每空加入100 yLBright-Glo? Luciferase Assay System底物，於酶標儀讀板，讀取 RLU 值。

【權利要求】
1. 一種具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其特徵是：其活性成 分由靈芝多糖、枸杞多糖及黃精多糖復配而成，所述各組分的質量份配比為靈芝多糖10 ?250、枸杞多糖50、黃精多糖2 ~10。
2. 根據權利要求1所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其 特徵是：所述各組分的質量份配比為靈芝多糖50~150、枸杞多糖20?40、黃精多糖4?8。
3. 根據權利要求2所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其 特徵是：所述各組分的質量份配比為靈芝多糖125、枸杞多糖10、黃精多糖4。
4. 根據權利要求1、2或3所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多 糖，其特徵是：所述的靈芝多糖、枸杞多糖或黃精多糖通過以下方法製備獲得：選取靈芝、 枸杞或黃精原料，採用沸水提取多次，合併提取液並濃縮得濃縮液al，將濃縮液al採用透 析袋進行透析得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃縮液a2,在濃縮液a2中加入三氯乙酸 水溶液進行蛋白沉澱後離心，取上清液進行中和、透析處理得透析液b2,將透析液b2濃縮 得濃縮液a3,在濃縮液a3中加入乙醇水溶液進行醇沉處理，所得沉澱物經乾燥處理即為靈 芝多糖、枸杞多糖或黃精多糖。
5. 根據權利要求4所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其 特徵是：採用沸水提取時，共提取Γ5次，每次提取時沸水的用量為靈芝、枸杞或黃精原料 總質量的ΚΓ20倍，每次提取時間為4~5h。
6. 根據權利要求4所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其 特徵是：所述的三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的體積百分含量為15?35%，其用量與濃縮液a2 的體積相同，進行蛋白沉澱的時間為:T4h。
7. 根據權利要求4所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖，其 特徵是：所述的乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為7(Γ95%，乙醇水溶液的用量為濃縮液 a3總體積的2~4倍。
8. 權利要求1、2或3所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖的 製備方法，其特徵是包括以下步驟： (1) 選取靈芝、枸杞或黃精原料，採用沸水提取多次，合併提取液並濃縮得濃縮液al ; (2) 將濃縮液al採用透析袋透析得透析液bl，將透析液bl濃縮後得濃縮液a2 ; (3) 在濃縮液a2中加入三氯乙酸水溶液進行蛋白沉澱後離心，取上清液進行中和、透 析處理得透析液b2,將透析液b2濃縮得濃縮液a3 ; (4) 在濃縮液a3中加入乙醇水溶液進行醇沉處理，所得沉澱物經乾燥處理即為靈芝多 糖、枸杞多糖或黃精多糖； (5) 將靈芝多糖、枸杞及黃精多糖按照上述計量比混勻，即製得靈芝、枸杞及黃精複合 多糖。
9. 根據權利要求8所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖的制 備方法，其特徵是：步驟（1)中採用沸水提取時共提取Γ5次，每次提取時沸水的用量為靈 芝、枸杞或黃精原料總質量的ΚΓ20倍，每次提取時間為4?5h ;步驟（3)中所述三氯乙酸水 溶液中三氯乙酸的體積百分含量為15~35%，其用量與濃縮液a2的體積相同，進行蛋白沉澱 時間為3~4h ;步驟（4)中所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為7(Γ95%，乙醇水溶液的 用量為濃縮液a3總體積的2~4倍。
10.權利要求1、2或3所述的具有調節腫瘤微環境功效的靈芝、枸杞及黃精複合多糖在 製備具有調節腫瘤微環境功效的保健食品中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK104116755SQ201410273728
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年6月19日 優先權日:2014年6月19日
【發明者】胡明華, 馬方勵, 王培培, 梁明 申請人:無限極（中國）有限公司