一種乳糖誘導型表達載體及其轉化的粘質沙雷氏菌的製作方法

2023-06-09 00:48:51

專利名稱：一種乳糖誘導型表達載體及其轉化的粘質沙雷氏菌的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種乳糖誘導型表達載體，其轉化的粘質沙雷氏菌及應用。
技術背景2,3-丁二醇是一種重要的化工原料，用於製備樹脂、化妝品、油墨、香料、炸藥及 醫藥中間體，廣泛用於化工、食品、燃料以及航空航天等多個領域。例如，2,3-丁二醇 可用於白酒工業中作為風味添加劑及用來製備香料3 —羥基一2—丁酮。目前國內2,3-丁二醇市場價為10萬元/噸，而內消旋2，3-丁二醇的價格是該價格的兩倍左右。由於 化學方法合成2，3-丁二醇較為困難，至今尚未實現工業化生產，因此利用生物發酵方法 生產2,3-丁二醇是未來的發展方向。生物發酵方法生產2，3-丁二醇，涉及許多技術環節，包括轉化過程中菌種的選擇及 其改造、發酵底物的選擇、發酵條件及產量、產物的分離提純方法等。正確的選擇技術 路線，改進工藝方法，能夠提高產率，降低生產成本，解決日益嚴重的能源危機和環境 汙染等問題。粘質沙雷氏菌(Sen"flria mflrc^ce似)能產生多種具工業應用潛力的物質，如殼貭酶、 蛋白酶、脂酶、核酸酶、抗生素、表面活性劑等，也是丙酮酸、琥珀酸、內消旋2，3-丁 二醇等重要化工原料的有潛力的生產菌種。粘質沙雷氏菌可利用碳源廣，如單糖、蔗糖、甘油、纖維二糖等；而且由於粘質沙 雷氏菌是兼性厭氧菌，在厭氧條件下，作為發酵工業菌株具有節能優勢。但是由於沙雷 氏菌遺傳特性的限制，單純優化發酵條件難以大幅度提高代謝產物產率。隨著有機體越來越多的生物合成途徑被人們所認識， 一些微生物基因組全序列的測 定及多基因之間的協同作用和代謝網絡的剛柔兼性研究、代謝工程和生物信息學研究的 興起，基因、宿主有機體、載體系統和分子生物學工具的發展，通過DNA重組技術合 理設計細胞代謝途徑及遺傳修飾，改良菌株，不僅可以提高細胞己有的化學物質產量或 產生宿主細胞本身不能合成的新物質，而且可以擴展細胞的底物使用範圍，形成降解毒 性物質新的催化活性，提高一些有重要經濟價值的初級代謝產物和次生代謝產物。如何 通過DNA重組技術改造粘質沙雷氏菌，提高用粘質沙雷氏菌發酵生產2,3-丁二醇的產率，是本領域迫切需要解決的問題。 發明內容本發明的目的之一是提供一種乳糖誘導型表達載體，可用於轉化粘質沙雷氏菌。本發明的另一目的是提供一種基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，該轉化菌在野生型粘 質沙雷氏菌中導入外源內消旋-2,3-丁二醇脫氫酶(meso-2，3-BDH)基因，用於改變內消旋 -2,3-丁二醇的代謝途徑。本發明的再一目的是提供一種生產內消旋-2，3-丁二醇的方法，以克服現有技術中內 消旋-2,3-丁二醇難於大規模生產的問題。本發明的技術構思是這樣的2,3-丁二醇是微生物的次生代謝物，其代謝途徑中，內消旋-2，3-丁二醇脫氫酶 (meso-2，3-BDH)是由聯乙醯(2， 3-丁二酮)合成乙偶姻(3-羥基-2-丁酮)的關鍵酶，乙 偶姻是合成內消旋2，3-丁二醇的前體。因此，在粘質沙雷氏菌中過量表達該酶在理論上 可以直接提高乙偶姻和間接提高內消旋-2，3-丁二醇的產量。外源基因在宿主菌中的表達可以分為誘導型表達和組成型表達。很多外源基因都是 在可操控的誘導啟動子的作用下進行表達的，未誘導的時候該基因不表達或者極少量表 達，需要時則可改變條件(加入某種化學物質、改變溫度等)誘導該基因的高效表達， 這樣避免了其對宿主生長發育的不利影響，又可高效利用該基因表達的酶。本發明的第一方面，提供了一種乳糖誘導型表達載體，該載體以pUC18/19為基礎 質粒，可操作的插入含有乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒。在一個優選的方案中，含有乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒插入到pUC18/19的 I位點(AATAATT)，含有乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒為以pET28aW為模 板，用上遊引物 (5'-ACACCATCGAATGGCGCAA-3，) 和下遊引物 (5'-TCACTGCCCGCTTTCCAGT-3')組成的引物對擴增獲得的基因片段。本發明具體公開的一種乳糖誘導型表達載體命名為pLHZH。它是雙鏈環狀DNA， 長度為3.8kb。該載體含有編碼lacl阻遏蛋白的laciq基因，氨節青黴素抗性基因(Amp『)， oriC01El複製起點，lac啟動子，lac操縱子，lac操縱子位於多克隆位點之前。本發明公開的乳糖誘導型表達載體pLHZH，用如下方法製備以質粒表達載體pET28aW為模板，用上遊引物(5'-ACACCATCGAATGGCGCAA-3') 和下遊引物(5，-TCACTGCCCGCTTTCCAGT-3，)組成的引物對和高保真p/w polymerase進行PCR擴增，獲得包含laciq基因平末端DNA片段，序列見序列 表；將克隆載體pUC18/19用限制性核酸內切酶S印I進行平末端酶切，然後用T4 DNA 連接酶將平末端laciq基因片段與內切酶消化過的pUC18/19進行連接，得到誘導型表達載體。本發明的第二方面，還提供了經基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌(&rmria mwr"ce"力，通過內消旋-2,3-丁二醇脫氫酶(meso-2,3-BDH)基因轉化野生型粘質沙雷氏 菌得到，可高水平表達內消旋-2,3-丁二醇脫氫酶。在一個優選的方案中，內消旋-2，3-丁二醇脫氫酶(meso-2，3-BDH)基因插入到乳糖誘 導型載體pLHZH，用於轉化粘質沙雷氏菌。重組表達載體pLHZH-BDH載體是雙鏈環 狀DNA，長度為4.6kb， meso-2,3-BDH編碼基因插入多克隆位點AwiH I和So/1之間， 物理圖譜如圖2所示。在一個優選的方案中，編碼meso-2，3-BDH的基因是以克雷伯氏菌(幻e&sie/Zfl ; "eM附om'"e) 基 因 組 DNA 為 模 板， 以 弓l 物 3: 5，-CGCgQM￡￡ATGAAAAAAGTCGCACTTGTTACCG-3， 和 弓| 物 4: 5'-ACGCOie0^eTTAGTTAAATACCATCCCGCCGTC-3'為引物對，進行PCR擴增得到 的DNA片段，序列見序列表。在一個優選的方案中，粘質沙雷氏菌優選6"e/rafj'a /rarce"朋s B17。本發明的第三方面，還提供了一種大規模生產內消旋-2，3-丁二醇的方法，通過發酵 培養meso-2,3-BDH基因轉化的粘質沙雷氏菌生產內消旋-2,3-丁二醇。在一個優選的方案中，可用乳糖作為誘導劑誘導內消旋-2，3-丁二醇脫氫酵的表達， 提高內消旋-2，3-丁二醇的產率。本發明以克隆載體pUC18/19為基礎質粒，通過在適當位點插入乳糖操縱子的lac" 調節基因，將其改造成誘導表達載體。在本發明的實施例中，該載體可在宿主菌(粘質 沙雷氏菌&/rfl//fl(B17 )中誘導表達內消旋-2,3- 丁 二醇脫氫酶 (meso-2，3-BDH)。不僅常用的誘導劑異丙基硫代-卩-D-半乳糖苷(IPTG)可實現高水平誘導表達，而且用廉價的乳糖替代IPTG作為誘導劑也可以實現高水平表達。本發明公開的 誘導表達載體不僅簡便易得，而且在在大規模工業發酵中具有廣泛的實用價值。另一方面，本發明提供了一種利用基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，通過導入外 源性內消旋-2，3-丁二醇脫氫斷meso-2，3-BDH)基因，該菌株高水平表達內消旋-2，3-丁二 醇脫氫酶。內消旋-2,3-丁二醇脫氫酶是內消旋-2,3-丁二醇代謝途徑中的關鍵酶，該酶表 達量的提高，直接提高了宿主菌次生代謝物內消旋-2,3-丁二醇的產生和積累。其優勢體 現在(1) 克服了沙雷氏菌遺傳特性的限制，提高了內消旋-2,3-丁二醇的產生和積累；(2) 而且對宿主菌的生長沒有明顯不良影響，所使用的發酵培養基、發酵條件與 野生型宿主菌相同；(3) 可利用廉價乳糖方便的進行誘導誘導表達。因而，本發明改造的粘質沙雷氏菌用於大規模發酵生產內消旋-2，3-丁二醇，具有 巨大的應用價值。


圖1為誘導型質粒表達載體pLHZH的物理圖譜。 圖2為重組質粒pLHZH-Bdh的物理圖譜。 圖3為重組質粒pLHZH-Bdh雙酶切鑑定的瓊脂糖電泳圖。 圖4為基因工程菌誘導表達後的全菌體SDS-PAGE電泳圖。 泳道1為標準蛋白分子量(分別為97.2，66.4，44.3，29kD)，泳道2、3為轉化的Se/rflrif/ /mwce5re"s B17/pLHZH-Bdh，泳道4、 5為空白的Se/ra"or marrceycem1 B17。
具體實施方式
本發明使用的縮寫中，iaciq指乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因(或稱為調節基因)，meso-2，3-BDH指內消旋-2，3-丁二醇脫氫酶，pLHZH指laciq基因可操作的插入pUC18/19 質粒sspl限制性內切酶位點得到的乳糖誘導性表達質粒，pLHZH-BDH指meso-2，3-BDH 基因可操作的插入pLHZH質粒多克隆位點得到的表達質粒。誘導表達本發明構建的pLHZH-BDH表達載體，帶有編碼乳糖操縱子阻遏蛋白的 基因(lacl"和編碼內消旋-2，3-丁二醉脫氫酶的基因(meso-2，3-BDH)。轉化宿主菌粘質沙雷氏菌後，可組成型表達的乳糖操縱子阻遏蛋白。在缺乏乳糖的環境中，阻遏蛋白 與控制內消旋-2，3-丁二醇脫氮酶基因表達的操縱基因結合，阻止了內消旋-2，3-丁二醇脫 氫酶的表達；培養基中加入適當濃度的乳糖或異丙基硫代-P-D-半乳糖苷(IPTG)等乳 糖類似物後，乳糖與阻遏蛋白結合，引起阻遏蛋白構象改變，脫離控制內消旋-2，3-丁二 醇脫氫酶的基因表達的操縱基因，使得內消旋-2,3-丁二醇脫氫酶得以表達。本發明所說的"可操作的連接"指這樣一種狀況，即線性DNA序列的某些部分能夠 影響同一線性DNA序列其他部分的活性。例如，如果啟動子控制序列的轉錄，那麼它 是可操作地連於編碼序列；如果核糖體結合位點被置於能翻譯的位置時，那麼它是可操 作地連於編碼序列。本發明用於合成乳糖操縱子阻遏蛋白的基因和內消旋-2,3-丁二醇脫氛酶的基因的 PCR引物由上海生物工程有限公司合成。質粒pUC18/19購於上海碩盟生物科技有限公 司，質粒pET32a(+)購於Invitrogen公司。wwcescens B17來自上海市工業微生 物研究所，克雷伯氏菌(《&^//0戸e謂om'ae)購於中國農業微生物菌種保藏中心(ACCC 10082)，所用酶如無特別說明均為TaKaRa公司產品。下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規方法，下面結合實施例，對本發明做 進一步地說明，其目的僅在於更好的理解本發明而絕非限制本發明的保護範圍，本領域 技術人員可以根據本發明作出各種改變和變形，只要不脫離本發明的精神，均應屬於本 發明的權利要求所定義的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常 規條件，例如Sambrook等人，《分子克隆實驗室手冊》(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。實施例1、誘導型表達載體pLHZH的構建以表達質粒pET28a(+)(Kanf, iaciq，購自Invi加gen)為模板，以引物1和引物2為引 物對進行PCR擴增。其中，引物1: 5，-ACACCATCGAATGGCGCAA-3，；引物2: 5，-TCACTGCCCGCTTTCCAGT-3，。在一滅菌的0.2mL PCR薄壁管中，依次加入20jiL 無菌水、5pL的10xPCR緩衝液、lnL的dNTP (lOmM， TaKaRa)、 lpL的引物1 (終 濃度50pmol)、 lpL的引物2 (終濃度50pmol)、 0.5^L的質粒pET28a(+)溶液(濃度 50ng/pL)、 0.5^L的p/w DNA聚合酶(5U/pL， TaKaRa)，用無菌水補足至總體積50pL, 將PCR管置於PCR循環儀中。在PCR反應中，PCR反應的溫度變化過程為先升溫至94。C，保持5分鐘，接著按以下的溫度變化程序循環29次升溫至94。C，保持30 秒，降溫至56'C，保持30秒，升溫至72。C，保持2分鐘；最後於72。C保持10分鐘， 結束擴增反應，獲得平末端laciq基因片段。將pUC18質粒用限制性內切酶&pI酶切， 用T4 DNA連接酶將lacr"基因片段和線性pUC18質粒連接成為環狀質粒。將連接產物 用CaCl2法轉化大腸桿菌DH5a(Invitrogen)感受態細胞，在含有100ng/mL氨苄青黴素 的LB固體培養基上培養16hr後，挑取若千個菌落於液體LB培養基中培養過夜，收集 菌體進行菌落PCR鑑定，陽性克隆再提取質粒進行二次PCR鑑定。經過1.0%瓊脂糖凝 膠電泳檢測，證明所得質粒為攜帶lad阻遏蛋白的質粒載體pLHZH (其物理圖譜如圖1 所示)。實施例2、 meso-2，3-BDH基因的克隆以克雷伯氏菌(尺/efc/e/to ; "ewwo附'ae)基因組DNA為模板，以引物3和引物4為引 物 對 進 行 PCR 擴 增。 其 中， 引 物 3: 5'-CGCGGATCCATGAAAAAAGTCGCACTTGTTACCG-3，(帶下劃線的鹼基為5a加H I 識別位點)；引物4: 5，-ACGCGTCGACTTAGTTAAATACCATCCCGCCGTC-3，(帶下劃線 的鹼基為S"/1識別位點)。在一滅菌的0.2mL PCR薄壁管中，依次加入5pL無菌水、2.5pL 的10xPCR緩衝液、lpL的dNTP(10mM， TaKaRa)、 ljtL的引物1 (終濃度50pmo1)、 lpL 的引物2 (終濃度50pmol)、0.5pL的基因組DNA溶液(濃度50ng^L)、0.5pL的pfo DNA 聚合酶(5U/pL， Qiagen),用無菌水補足至總體積25pL，將PCR管置於PCR循環儀中。 在PCR反應中，PCR反應的溫度變化過程為先升溫至94'C，保持5分鐘，接著按以 下的溫度變化程序循環29次升溫至94'C，保持30秒，降溫至58'C，保持30秒，升 溫至72'C，保持1.5分鐘；最後於72'C保持10分鐘，結束擴增反應。經PCR擴增，得 到帶有BamH I和1酶切位點的meso-2，3-BDH基因，並將得到的meso-2，3-BDH基因 用5a附H I和1進行雙酶切，並與同樣用BawH I和&/I雙酶切的表達質粒pLHZH 用T4 DNA連接酶進行連接，將連接產物用CaCl2法轉化大腸桿菌DH5a (Invitrogen)感 受態細胞，在含有10(^g/mL氨苄青黴素的LB固體培養基上培養16hr後，挑取若干個 菌落於液體LB培養基中培養過夜，收集菌體並提取質粒，經B"/wH I和SWI雙酶切後， 用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(圖3)，得到3.8kb和0.7kb的條帶，表明得到帶有 meso-2,3-BDH基因的重組質粒pLHZH-Bdh(其物理圖譜如圖2所示)。實施例3、 meso-2,3-BDH基因的表達將重組質粒pLHZH-Bdh用改良氯化鈣法轉化宿主細胞Se/r如a /m^c^ce;w B17，得 到基因工程菌Se/r""fl附a/r^cew B17/pLHZH-Bdh。將基因工程菌接種於添加適當抗生 素的LB液體培養基中(LB培養基組成為酵母粉0.5%、胰蛋白腖l%、NaCl l%，pH7.0)， 30'C搖床培養過夜；再以5%的接種量轉接到裝有30mL LB培養基的250 mL搖瓶中， 30。C搖床培養5小時，加入0.5mL 120%乳糖溶液(終濃度2%),然後繼續培養6小時後， 離心收集菌體。將收集的菌體進行全菌SDS-PAGE電泳，結果如圖4所示。圖中泳道l 為標準蛋白分子量(分別為97.2,66.4,44.3，29kD)，泳道2、3為轉化的Swfl^加arcercew B17/pLHZH-Bdh，泳道4、 5為空白的Serra"amarcesce附B17。從圖4可以看出，轉化 菌在29kD分子量標準條帶附近有一條增加的表達條帶，分子量約為31kD，與 meso-2，3-BDH預期的分子量一致，說明meso-2，3-BDH在基因工程轉化菌中成功表達。序列表<110〉華東理工大學 —種乳糖誘導性表達載體及其轉化的粘質沙雷氏菌 2 Patentln version 3.1 1 1160 DNA 大腸桿菌(Esr/ier!'c/H'fl co//) 1acaccatcgaatggcgcaaaacctttcgcggtatggcatgatagcgcccggaagagagtc60aattcagggtggtgaatgtgaaaccagtaacgttatacgatgtcgcagagtatgccggtg120tctcttatcagaccgtttcccgcgtggtgaaxcaggccagccacgtttctgcgaaaacgc180gggaeiaasgtggaagcggcgatggcggagctgaattacattcccaaccgcgtggcacaac240aactggcgggcaaacagtcgttgctgattggcgttgccacctccagtctggccctgcacg300cgccgtcgcaaattgtcgcggcgattaaatctcgcgccgatcaactgggtgccagcgtgg360tggtgtcgatggtagaacgaagcggcgtcgaagcctgtaasgcggcggtgcacaatcttc420tcgcgcaacgCgtC3gtgggctgatcattaactatccgctggatgaccagg"gccattg480ctgtggaagctgcctgcactaatgttccggcgttatttcttgatgtctctgaccagacac540ccatcaacagtattattttctcccatgaagacggtacgcgactgggcgtggagcatctgg600tcgcattgggtcaccagcaaatcgcgctgtUgcgggcccattaagttctgtctcggcgc660gtctgcgtctggctggctggcataaatatctcactcgcaatcaaattcagCCg"3gCgg720aacgggaaggcgactggagtgccatgtccggttttcwcaaaccatgcaaatgctgaatg780agggcatcgttcccactgcgatgctggUgccaacgatcagatggcgctgggcgcaatgc840gcgccattaccgagtccgggctgcgcgttggtgcgg"atctcggtagtgggatacgacg900ataccgaagacagctcatgttatatcccgcCgttB3CC8Ccatcaaacaggattttcgcc960tgCtggggCJlaaccagcgtggaccgcttgctgcaactctctcagggccjiggcggtgaagg1020gcaatcagctgttgcccgtctC3Ctggtg3caccctggcgcccaatacgc1080aaaccgcctc tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca gctggcacga caggtttccc 1140 gactggaaag cgggcagtga 1160 2 771 DNA 克雷伯氏菌(尺/efe/e/Za / "ewwomae) 閱讀框 (1)-(771) 2"gaaaaaagtcgcacttgtUccggcgccggccaggggattggtaaagctatcgccctt60cgtctggtgaaggatggatttgccgtggccattgccgattataacgacgcCBCcgccMa120gcggtcgcctcggaaatcaaCC3ggCCggCggacacgccgtggcggtgaa agtggatgtc180tccgaccgcgatcaggtatttgccgccgttgeiacaggcgcgcaaaacgctgggcggcttc240gacgtcatcgtcaataacgccggtgtggcaccgtctacgccgatcgagtccattaccccg300gagattgtcgacaaagtctacaacatcaacgtcaaaggggtgatctggggtattcaggcg360gcggtcgaggccttUagaaagaggggcacggcggg磁atcatcaacgcctgttcccag420gccggccacgtcggcaacccggagctggcggtgtatagctccagtaaattcgcggtacgc480ggcttaacccagaccgccgctcgcgacctcgcgccgctgg gcatcacggtcsacggctac540tgcccggggattgtcaaaacgccaatgtgggccgaaattgaccgccaggtgtccgaagcc600gccggtaaaccgctgggctacggtaccgccgagttcgcca aacgcatcaictctcggtcgt660ctgtccgagccggaagatgtcgccgcctgcgtctcctatcttgccagcccggattctgat720tacatgaccggtcagtcgttgctgatcgacggcgggatggtatttaacta77權利要求
1. 一種乳糖誘導表達載體，其特徵在於，該載體以含有lac啟動子和操縱子的克隆質粒為出發載體，可操作的插入含有乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒。
2、 根據權利要求1所述的誘導型表達載體，其特徵在於，出發載體為pUC18/19，含 有乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒可操作的插入pUC18/19質粒的5^/7 I位點。
3、 根據權利要求1所述的誘導型表達載體，其特徵在於，其中所述的含有乳糖操 縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒為-以pET28aW質粒為模板上遊引物5' -ACACCATCGAATGGCGCAA-3，下遊引物5' -TCACTGCCCGCTTTCCAGT-3'經PCR擴增所獲得的片段。
4、 根據權利要求1 3中的任一項所述的誘導型表達載體，其特徵在於，該載體稱 為pLHZH，含有lac啟動子和操縱子、編碼lacl阻遏蛋白的lacr基因以及oriC0El復 制起點。
5、 一種基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，其特徵在於，用內消旋-2,3-丁二醇脫 氫酶(meso-2， 3-BDH)基因轉化粘質沙雷氏菌。
6、 根據權利要求5所述的改造的粘質沙雷氏菌，其特徵在於，內消旋-2,3-丁二醇 脫氫酶(meso-2,3-BDH)基因可操作的插入誘導表達載體pLHZH，得到重組表達載體 pLHZH-BDH，再用重組表達載體pLHZH-BDH轉化野生型粘質沙雷氏菌得到的轉化菌。
7、 根據權利要求6所述的基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，其特徵在於，所述 的meso-2，3-BDH基因來自克雷伯氏菌(X/efe/e/to/7"ew附om'ae)。
8、 根據權利要求6所述的基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，其特徵在於，所述 的野生型粘質沙雷氏菌為5"em^'a mmrescms B17。
9、 一種生產內消旋-2,3-丁二醇的方法，其特徵在於，用權利要求6 8中的任一項 所述的基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌發酵生產內消旋-2, 3-丁二醇。
10、 根據權利要求10所述的方法，其特徵在於，可用乳糖作為誘導劑發酵生產內消旋-2, 3-丁二醇c
全文摘要
本發明公開了一種乳糖誘導型表達載體，可用廉價的乳糖替代昂貴的異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)作為誘導劑，可廣泛應用於外源基因的表達以及粘質沙雷氏菌代謝途徑的改造，例如用於將內消旋-2，3-丁二醇脫氫酶(meso-2，3-BDH)基因導入粘質沙雷氏菌。本發明還公開了一種用基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，通過導入外源內消旋-2，3-丁二醇脫氫酶(meso-2，3-BDH)基因，改變菌中天然的內消旋-2，3-丁二醇的代謝途徑。本發明提供的基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，以期高水平表達內消旋-2，3-丁二醇脫氫酶，提高內消旋-2，3-丁二醇在宿主菌中的產生和積累，提高粘質沙雷氏菌內消旋-2，3-丁二醇的產率。
文檔編號C12P7/02GK101235383SQ20071003698
公開日2008年8月6日 申請日期2007年1月30日 優先權日2007年1月30日
發明者周文瑜, 學 曹, 虎 朱, 沈亞領, 魏東芝 申請人:華東理工大學