人尿激肽原酶在製備治療糖尿病腎病藥物中的應用的製作方法

2023-06-07 09:21:56

專利名稱：人尿激肽原酶在製備治療糖尿病腎病藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物化學領域。具體而言，本發明涉及人尿激肽原酶的新醫藥用途，即 人尿激肽原酶在製備治療糖尿病腎病藥物中的應用。
背景技術：
人尿激肽原酶(Human Urinary Kallidinogenase)，是從健康男性人尿中提取精 制的糖蛋白，分子量約54000道爾頓，具有激活人血漿激肽原轉化為激肽，擴張血管增加血 流量，改善血液循環的作用，並且還有增加紅細胞的變形性和抑制血小板聚集，延長再鈣化 時間改善血液粘稠的作用。本申請人的在先專利申請「200610127956. 3人尿激肽原酶在制 備治療糖尿病合併腦梗死藥物中的應用」公開了它的一種醫藥用途，發現人尿激肽原酶對 合併有糖尿病的腦梗死患者有良好的治療作用。本發明人經過認真研究和動物試驗證明， 人尿激肽原酶對糖尿病腎病也有明顯的治療作用。糖尿病腎病(DN)是糖尿病的常見慢性併發症之一，由糖尿病微血管病變引起。本 病確切的發病機制尚未闡明，腎血流動力學紊亂可能是DN發生發展的直接原因，而腎血流 量減少，主要與一些血管活性物質如Ν0、ΕΤ等因子失衡有關。炎症是DN腎小球硬化和腎間 質纖維化病理機制的中心，並且可加快DN的進展。激肽原酶-激肽系統對血管功能具有多 方面的調節作用。有研究表明，糖尿病形成8周時，激肽原酶的活性無明顯改變，而至18周 時，激肽原酶活性明顯降低，僅為正常對照組的20 25%，嚴重影響它對血管的調節功能。人尿激肽原酶是在腎小球遠曲小管和血管極的上皮細胞產生的一種內源性血管 活性物質，對調節腎血流動力學發揮重要作用，此外，人尿激肽原酶還具有一定的抗炎抗氧 化等腎臟保護作用。

發明內容
本發明的目的是提供人尿激肽原酶用於治療糖尿病腎病的用途，即用於製備治療 糖尿病腎病藥物的用途。本發明的另一目的是提供一種用於治療糖尿病腎病的含有人尿激 肽原酶的藥物組合物。本發明的人尿激肽原酶對糖尿病腎病有明顯的治療作用，一般以藥物組合物的形 式使用，這種組合物含有治療有效量的作為活性成分的人尿激肽原酶和可藥用輔料，其每 計量單位中含有15 25 μ g的人尿激肽原酶和10 50mg的可藥用輔料，主要劑型包括凍 乾粉針劑和注射液劑，通常以靜脈注射途徑給藥。經靜脈注射給藥的人尿激肽原酶組合物，一般是固體的滅菌組合物形式，即凍幹 粉針劑型，這些組合物含有的可藥用輔料是甘露醇、右旋糖苷、水解明膠、檸檬酸鈉、甘氨酸 等中的一種或多種。在使用時溶解於滅菌注射用水或其它注射用滅菌介質中。經靜脈注射給藥的人尿激肽原酶組合物也可以是水溶液形式，即注射液劑，這些 組合物含有的可藥用輔料是甘露醇、氯化鈉、葡萄糖等中的一種或多種。人尿激肽原酶組合物治療糖尿病腎病的劑量根據病情的嚴重程度、治療時間而定，一般靜脈注射給藥每次0. 1-0. 2PNA單位，每天給藥1-2次。通過我們的研究發現，人尿激肽原酶能夠減輕糖尿病腎病導致的腎功能損傷，減 少尿蛋白的排洩，其機制與人尿激肽原酶能調節腎血流動力學，增加腎臟血流，改善腎臟微 循環有關。同時人尿激肽原酶還能夠抑制腎組織內氧化應激和炎症反應，減輕腎組織損傷 重要的病理生理過程，對糖尿病腎病起到良好的治療作用。
具體實施例方式以下通過具體實施例對本發明作進一步說明。實施例1製備人尿激肽原酶乾粉針取過濾滅菌的人尿激肽原酶150PNA單位，加7. 5克甘露醇、2克右旋糖酐40、5克 檸檬酸鈉溶解，調節PH至中性，加注射用水至500毫升，無菌過濾，分裝1000個安瓿中，無 菌條件下冷凍乾燥，即得。實施例2製備人尿激肽原酶注射液取過濾滅菌的人尿激肽原酶水溶150PNA單位，調節PH至中性，加注射用水至500 毫升，加氯化鈉調節等滲，無菌過濾，分裝1000個安瓿中，即得。實施例3人尿激肽原酶對糖尿病腎病大鼠的治療作用實驗方法採用單側腎切除加腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)致糖尿病腎病大鼠動物模型。選 用180 220g SD大鼠60隻，雌雄不限，隨機分為5組假手術組；DN模型組；人尿激肽 原酶I組(3. 85X I(T3PNAu)；人尿激肽原酶II組(8. 75X I(T3PNAu)；人尿激肽原酶III組 (17. 5X IO-3PNAu)，各治療組大鼠在造模後尾靜脈注射人尿激肽原酶，每日一次，連續4周。 假手術組和DN模型組尾靜脈給予相同體積的生理鹽水。觀察指標4周後收集各組大鼠24h尿液，置-20°C冷藏待測24h尿蛋白。留尿後大鼠用4% 水合氯醛腹腔注射麻醉，採用雷射都卜勒血流儀測定造模後及治療後雙側腎臟血流量，取 平均值作為單只動物腎血流量；眶後靜脈採血，採用自動分析儀測定血糖、血肌酐(Scr)、 血尿素氮(BUN)；取腎製備腎組織切片，SABC法測定腎組織中MCP-I的表達；製備10%腎皮 質勻漿，測定腎皮質MDA和SOD含量。實驗結果1.人尿激肽原酶可增加糖尿病腎病大鼠腎血流量
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*p < 0. 05vs糖尿病腎病模型組2.人尿激肽原酶對糖尿病腎病大鼠腎功能具保護作用模型組大鼠較假手術組大鼠24小時尿蛋白量顯著升高，達到113. 83士31. 04mg ； 中、高劑量人尿激肽原酶組大鼠24小時尿蛋白量顯著低於模型組(ρ < 0. 05)，三個藥物治 療組對大鼠24小時尿蛋白量的減少具有劑量依賴性，說明人尿激肽原酶能改善糖尿病腎 病所致的腎小球血管調節功能障礙，減少蛋白的排出。模型組大鼠靜脈給予生理鹽水治療後，血清BUN為(22. 47士2. 35)mmol/L, Cre為 (153. 72士20. 13)umol/L，明顯高於假手術組，說明模型組動物腎功能損害嚴重。中、高劑量 人尿激肽原酶能劑量依賴性地改善糖尿病腎病大鼠的腎功能(P 0.05)。見表1。表1各試驗組大鼠腎功能指標比較 *p < 0. 05vs糖尿病腎病模型組3.人尿激肽原酶能抑制糖尿病腎病大鼠腎組織氧化應激和炎性反應糖尿病腎病大鼠腎皮質勻漿中MDA含量為(12. 94士2. 68)nmol/ml,明顯高於假手 術組，說明模型組動物腎皮質氧自由基損傷嚴重。中、高劑量人尿激肽原酶能劑量依賴性地 減輕氧化應激(P < 0. 05)。糖尿病腎病大鼠腎皮質勻漿中SOD含量為(92. 17士 18. 92)NU/ ml,明顯低於假手術組，說明模型組動物腎皮質內源性抗氧化因子減少。中、高劑量人尿激 肽原酶能劑量依賴性地增強抗氧化損傷作用(P < 0. 05)。糖尿病腎病模型組大鼠腎小球中MCP-I陽性細胞明顯多於假手術組(ρ < 0. 05)，中、高劑量人尿激肽原酶能劑量依賴性地減 少MCP-I的表達(ρ < 0. 05)，從而減少糖尿病腎病時單核巨噬細胞在腎組織中的浸潤，減輕 炎性反應。見表2。表2各試驗組大鼠氧自由基損傷和炎症反應指標比較 *p < 0. 05vs糖尿病腎病模型組討論糖尿病腎病(DN)是糖尿病的常見慢性併發症之一，由糖尿病微血管病變引起。本 病確切的發病機制尚未闡明，可能是多因素共同作用的結果。炎症和氧化應激是DN腎小球 硬化和腎間質纖維化病理機制的中心，並且可加快DN的進展。人尿激肽原酶能劑量依賴性 地減少尿蛋白量，改善腎功能指標，說明人尿激肽原酶可通過調節腎小球微循環功能，增加 腎血流量，對糖尿病大鼠具有治療作用。氧化應激和炎症反應是DN腎組織損傷的重要病理過程，且相互影響。MDA是氧自 由基與生物膜多聚不飽和脂肪酸發生脂質過氧化的產物，其產量與氧自由基的量相平行， 因此測定MDA可反映氧自由基的水平，間接反映細胞損傷的程度。而超氧化物歧化酶(SOD) 是重要的抗氧自由基損傷的物質。單核趨化蛋白-I(MCP-I)是CC家族中一種特異的趨化 因子，能夠促使單核細胞由外周循環遷移到炎症部位聚集並激活，損傷腎臟組織。MCP-I在 炎症參與DN的發生發展中起重要的介導作用。在本實驗中，人尿激肽原酶能抑制DN大鼠 腎組織的氧自由基損傷和炎症反應，是人尿激肽原酶能夠改善DN大鼠腎功能指標的重要 原因。
權利要求
人尿激肽原酶在製備治療糖尿病腎病藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的用途，其中所述藥物的給藥量是每天給藥1-3次，每次給藥 0. 01 0. 2PNA單位/支(瓶)。
3.根據權利要求2所述的用途，其中所述藥物是凍乾粉針劑。
4.根據權利要求2所述的用途，其中所述藥物是注射液。
5.根據權利要求3所述的用途，其中所述的藥物還含有選自甘露醇、右旋糖苷、水解明 膠、檸檬酸鈉或甘氨酸的添加劑。
6.根據權利要求4所述的用途，其中所述的藥物還含有選自甘露醇、氯化鈉或葡萄糖 的添加劑。
全文摘要
本發明涉及人尿激肽原酶的新醫藥用途，即人尿激肽原酶在製備治療糖尿病腎病藥物中的應用。
文檔編號A61P3/10GK101879310SQ201010200140
公開日2010年11月10日 申請日期2010年6月13日 優先權日2010年6月13日
發明者傅和亮, 吳蓉蓉, 孫莉, 孫鐵, 鄒春芽 申請人:廣東天普生化醫藥股份有限公司