4－溴或4－碘苯基氨基苯氧肟酸衍生物及其作為mek抑制劑的用途的製作方法

2023-06-04 09:44:06

專利名稱：4－溴或4－碘苯基氨基苯氧肟酸衍生物及其作為mek抑制劑的用途的製作方法
技術領域：
本發明提供一些鄰氨基苯甲酸化合物的異羥肟酸衍生物，這些化合物可抑制某些參與增殖性疾病如癌症和再狹窄的雙重特異性激酶。
背景技術：
增殖性疾病是由細胞內信號傳導系統或某些蛋白質的信號傳導機制的缺陷引起的。例如，癌症通常是由這些信號蛋白的一系列缺陷引起的，而這些缺陷是由於這些蛋白的內在活性或其細胞濃度的改變所引起的。細胞可以產生與其自身受體結合的生長因子，導致形成自分泌環路，連續地刺激增殖。細胞內信號蛋白的突變或過度表達可導致在細胞內產生假的有絲分裂信號。最常見的突變發生在編碼被稱為Ras的蛋白質的基因上，該蛋白是一種G-蛋白，當其與GTP結合時被激活，當與GDP結合時則失活。
上述的生長因子受體以及許多其它致有絲分裂的受體，當被激活時，可導致Ras從GDP-結合狀態轉變成GTP-結合狀態。該信號對於大部分細胞類型的增殖是絕對必要的。該信號系統中的缺陷、特別是Ras.GTP複合物滅活的缺陷在癌症中很常見，該缺陷導致Ras下的信號級聯長期被激活。
激活的Ras可引起絲氨酸/蘇氨酸激酶級聯的激活。已知在其自身的激活中需要活性Ras.GTP的一組激酶之一是Raf家族。這些激酶可激活MEK，MEK又可激活MAP激酶。MAP激酶被促分裂原激活似乎是增殖所必需的，該激酶的組成性激活足以引起細胞轉化。下遊Ras信號傳導的阻斷，例如通過使用顯性失活的Raf-1蛋白質引起的，可以完全抑制有絲分裂作用，無論該有絲分裂作用是由細胞表面受體引起的還是由致癌的Ras突變體引起的。雖然Ras本身不是蛋白質激酶，但其參與Raf和其它激酶的激活，最為可能的是通過磷酸化作用機制。一旦被激活，Raf和其它激酶便可將MEK在兩個緊鄰的絲氨酸殘基(對於MEK-1是S218和S222)磷酸化，這對於MEK這種激酶的激活是必需的。MEK接著又可以將MAP激酶在酪氨酸(Y185)和蘇氨酸(T183)殘基上磷酸化，所述酪氨酸(Y185)和蘇氨酸(T183)間只隔一個胺基酸。該雙重磷酸化作用可使MAP激酶的活性增強至少100倍，此時該激酶可以催化大量蛋白質、包括多種轉錄因子和其它激酶的磷酸化。在這些MAP激酶磷酸化作用中，有許多是對靶蛋白的促分裂性激活，無論該靶蛋白是另一種激酶、是轉錄因子還是其它細胞蛋白。MEK還可以被除Raf-1之外的許多其它激酶激活，包括MEKK，其本身似乎是一個信號整合激酶。就目前所知，MEK對MAP激酶的磷酸化是高度特異性的。事實上，目前還沒有發現除MAP激酶之外的其它MEK的底物，並且MEK不會磷酸化基於MAP激酶磷酸化序列的肽，甚至不會磷酸化變性的MAP激酶。此外，似乎MEK在磷酸化MAP激酶之前與其緊密結合，表明MEK對MAP激酶的磷酸化作用可能事先需要兩種蛋白之間強有力的相互作用。這種要求以及MEK的不尋常的特異性均表明在其作用機制上與其它蛋白激酶有很大的差異，因此可能發現特異性的MEK抑制劑，該抑制劑可能通過變構機制而不是通過常見的阻斷ATP結合位點來起作用。
本發明提供了作為MEK激酶活性的高度特異性抑制劑的化合物。在酶試驗以及完整細胞中，這些化合物均可抑制MEK對MAP激酶的磷酸化作用，從而在Ras級聯已被激活的細胞內阻止了MAP激酶的激活。該酶抑制作用的結果包括某些細胞類型的已轉化表型的逆轉，這是通過轉化了的細胞以不依賴於貼壁的方式生長的能力以及某些轉化了的細胞系不依賴於外部促分裂劑增殖的能力測得的。
本發明的化合物是苯基氨基苯氧肟酸衍生物，其中的苯環在4-位被溴或碘取代。美國專利5,155,110公開了多種用作抗炎劑的滅酸衍生物，包括某些苯基氨基苯氧肟酸衍生物。該文獻沒有記載本發明的化合物或其激酶抑制活性。
發明概述本發明提供4-溴和4-碘苯基氨基苯氧肟酸衍生物，這些化合物是激酶抑制劑，因此可用於治療增殖性疾病如癌症、牛皮癬和再狹窄。該化合物如式I所定義
其中R1是氫、羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、滷素、三氟甲基或CN；R2是氫；R3、R4和R5彼此獨立地是氫、羥基、滷素、三氟甲基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、硝基、CN或(O或NH)m-(CH2)n-R9，其中R9是氫、羥基、CO2H或NR10R11；n是0-4；m是0或1；R10和R11彼此獨立地是氫或C1-C8烷基，或與它們所連接的氮合在一起形成3-10元的環，所述環選擇性地含有一個、兩個或三個選自O、S、NH或N-C1-C8烷基的其它雜原子；R6是氫、C1-C8烷基、C(＝O)-C1-C8烷基、芳基、芳烷基或C3-C10環烷基；R7是氫、C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8鏈炔基、C3-C10(環烷基或選擇性含有選自O、S或NR9的雜原子的環烷基)；或者R6和R7與它們所連接的N-O合在一起形成5-10元的環，環中選擇性地含有一個、兩個或三個選自O、S或NR10R11的其它雜原子；其中，前述的烷基、鏈烯基和鏈炔基均可以是未取代的或被環烷基(或選擇性含有選自O、S或NR9的雜原子的環烷基)、芳基、芳氧基、雜芳基或雜芳氧基所取代。
優選的化合物具有式II的結構
其中R1、R3、R4、R5、R6和R7如上所定義。特別優選其中R1是甲基或滷素、R3、R4和R5是滷素如氟或溴的化合物。
另一組優選的化合物具有式III的結構
其中R1、R3、R4、R5和R7如上所定義。
首選的化合物是其中R1是甲基或滷素如F、Br、Cl和I，R3是氫或滷素如氟，R4是滷素如氟，R5是氫或滷素如氟或溴的化合物。所述化合物具有下式的結構
本發明所提供的具體化合物包括3，4，5-三氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-氯-3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯甲醯胺；3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；5-氯-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-硝基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4，5-三氟-N-羥基-苯甲醯胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-甲基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4，5-三氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-5-氯-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-硝基-苯甲醯胺；4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；
N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-氯-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-氯-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-4-硝基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲醯胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-乙氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-乙氧基-4-硝基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-5-氯-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-4-硝基-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-4-氟苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-4-氟苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲醯胺；4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-異丙基苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲基-苯甲醯胺；4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-5-硝基-苯甲醯胺；
2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-硝基-苯甲醯胺；3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羥基-苯甲醯胺(HCl鹽)；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-(四氫-吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丁基甲氧基-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(2-二甲基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-苯甲醯胺一鹽酸鹽；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；5-溴-N-環己基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-N-環戊基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺；和5-溴-N-環丁基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺。
本發明還提供含有式I化合物以及可藥用賦形劑、稀釋劑或載體的藥物製劑。優選的製劑含有前述的優選化合物以及賦形劑、稀釋劑或載體。
式I化合物是強的並且是選擇性的激酶抑制劑，特別是MEK1和MEK2的選擇性抑制劑。因此，它們可用於治療患有癌症和其它增殖性疾病如牛皮癬、再狹窄、自身免疫疾病和動脈粥樣硬化的患者。該化合物特別適用於治療癌症如乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、皮膚癌和胰腺癌。該化合物還可用於治療中風、糖尿病、肝腫大、心臟肥大、早老性痴呆、膽囊纖維化和病毒性疾病。本發明提供了抑制MEK酶和前述疾病的方法，該方法包括向患者施用有效量的式I化合物。
發明詳述本文所用術語「芳基」是指含有5-12個碳原子的單環、二環或三環芳香環狀部分。代表性的芳基的例子包括苯基、萘基和芴基。該芳基可以被一個、兩個或三個選自氟、氯、溴、碘、烷基、羥基、烷氧基、硝基或氨基的基團所取代。代表性的取代芳基包括3-氟苯基、3，5-二甲氧基苯基、4-硝基萘基、2-甲基-4-氯-7-氨基芴基等。
術語「芳氧基」是指通過氧原子結合的芳基，例如苯氧基、3-溴苯氧基、萘氧基和4-甲基-1-芴氧基。
「雜芳基」是指含有4-11個碳原子和一個、兩個或三個選自O、S或N的雜原子的單環、二環或三環芳香環狀部分。其例子包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、三唑基、噻唑基、呫噸基、吡喃基、吲哚基、嘧啶基、1，5-二氮雜萘基、吡啶基和三嗪基。雜芳基可以被一個、兩個或三個選自氟、氯、溴、碘、烷基、羥基、烷氧基、硝基或氨基的基團所取代。取代的雜芳基的例子包括氯代吡喃基、甲基噻吩基、氟代吡啶基、氨基-1，4-苯並異噁嗪基、硝基異喹啉基和羥基吲哚基。
雜芳基可以通過氧結合而形成雜芳氧基，例如噻吩氧基、異噻唑基氧基、苯並呋喃基氧基、吡啶氧基和4-甲基異喹啉基氧基。
術語「C1-C8烷基」是指含有1-8個碳原子的直鏈或支鏈脂族基團。代表性的C1-C8烷基包括甲基、乙基、異丙基、叔丁基、2，3-二甲基己基和1，1-二甲基戊基。該烷基可以是未取代的或被環烷基、含有選自O、S或NR9的雜原子的環烷基、以上所定義的芳基、芳氧基、雜芳基或雜芳氧基所取代。芳基和芳氧基取代的烷基的例子苯基甲基、2-苯基乙基、3-氯苯基甲基、1，1-二甲基-3-(2-硝基苯氧基)丁基和3，4，5-三氟萘基甲基。被雜芳基或雜芳氧基取代的烷基的例子噻吩基甲基、2-呋喃基乙基、6-呋喃氧基辛基、4-甲基喹啉氧基甲基和6-異噻唑基己基。環烷基取代的烷基包括環丙基甲基、2-環戊基乙基、2-哌啶-1-基乙基、3-(四氫吡喃-2-基)丙基和環丁基甲基。
「C2-C8鏈烯基」是指含有一個或多個雙鍵的直鏈或支鏈碳鏈。其例子包括丁-2-烯基、2-甲基-丙-2-烯基、1，1-二甲基-己-4-烯基、3-乙基-4-甲基-戊-2-烯基和3-異丙基-戊-4-烯基。該鏈烯基可以被芳基、芳氧基、雜芳基或雜芳氧基所取代，例如3-苯基丙-2-烯基、6-噻吩基-己-2-烯基、2-呋喃氧基-丁-2-烯基和4-萘氧基-己-2-烯基。
「C2-C8鏈炔基」是指含有2-8個碳原子和至少一個叄鍵的直鏈或支鏈碳鏈。代表性的鏈炔基包括丙-2-炔基、2-甲基-己-5-炔基、3，4-二甲基-己-5-炔基和2-乙基-丁-3-炔基。該鏈炔基可以被芳基、芳氧基、雜芳基或雜芳氧基所取代，例如4-(2-氟苯基)-丁-3-炔基、3-甲基-5-噻吩基戊-4-炔基、3-苯氧基-己-4-炔基和2-呋喃氧基-3-甲基-己-4-炔基。
鏈烯基和鏈炔基可以分別含有一個或多個雙鍵或叄鍵，或同時含有雙鍵和叄鍵。例如，同時含有雙鍵和叄鍵的代表性的基團包括己-2-烯-4-炔基、3-甲基-5-苯基戊-2-烯-4-炔基和3-噻吩氧基-己-3-烯-5-炔基。
術語「C3-C10環烷基」是指含有3-10個碳原子的非芳香環或稠合的環。其例子包括環丙基、環丁基、環戊基、環辛基、二環庚基、金剛烷基和環己基。該環可選擇性地含有一個選自O、S或NR9的雜原子。所述基團包括四氫呋喃基、四氫吡咯基、八氫苯並呋喃基、八氫吲哚基和八氫苯並噻吩基。
R3、R4和R5可以包括式(O或NH)m-(CH2)n-R9定義的基團。所述基團的是氨基甲基、2-氨基乙基、2-氨基乙基氨基、3-氨基丙氧基、N，N-二乙基氨基、3-(N-甲基-N-異丙基氨基)-丙基氨基、2-(N-乙醯基氨基)-乙氧基、4-(N-二甲基氨基羰基氨基)-丁氧基和3-(N-環丙基氨基)-丙氧基。
式I的4-溴和4-碘苯基氨基苯氧肟酸可以從可購買到的原料用有機化學領域技術人員熟知的合成方法製備。典型的合成方法是將4-溴或4-碘苯胺與在2-位帶有離去基團的苯甲酸反應得到苯基氨基苯甲酸，然後將苯甲酸苯基氨基衍生物與羥胺衍生物反應。該過程如反應方案1所示。
反應方案1
其中L是離去基團，例如滷素如氟、氯、溴或碘，或活化的羥基如二乙基磷酸酯、三甲基甲矽烷氧基、對硝基苯氧基或苯基磺醯氧基。
苯胺衍生物與苯甲酸衍生物的反應通常通過將苯甲酸與等摩爾量或過量的苯胺在惰性有機溶劑如四氫呋喃或甲苯中，在鹼如二異丙氨基鋰、正丁基鋰、氫化鈉和氨基鈉的存在下混合來完成。該反應通常在約-78℃至約25℃的溫度下進行，通常在約2小時到約4天內完成。產物可以通過例如減壓蒸發除去溶劑進行分離，如需要，可通過常規方法如層析法、重結晶或蒸餾進一步純化。
然後將苯基氨基苯甲酸與羥胺衍生物HNR6OR7在肽偶聯劑的存在下反應。可以使用的羥胺衍生物包括甲氧基胺、N-乙基-異丙氧基胺、和四氫噁嗪。典型的偶聯劑包括2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉(EEDQ)、1，3-二環己基碳二亞胺(DCC)、溴-三(吡咯烷基)-鏻六氟磷酸鹽(pyBrOP)和(苯並三唑基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(pyBOP)。通常將苯基氨基苯甲酸和羥基氨基衍生物以約等摩爾量在惰性有機溶劑如二氯甲烷、四氫呋喃、氯仿或二甲苯中混合，並加入等摩爾量的偶聯劑。如需要，可加入鹼如三乙胺或二異丙基乙基胺作為酸清除劑。偶聯反應通常在約10分鐘至2小時後完成，產物很容易通過例如減壓蒸除反應溶劑進行分離，並通過常規方法如層析法或用溶劑如丙酮、乙醚或乙醇結晶純化產物。
另一種製備本發明化合物的方法包括，首先將苯甲酸轉變成異羥肟酸衍生物，然後將異羥肟酸衍生物與苯胺反應。該合成過程如反應方案2所示。
反應方案2
其中L是離去基團。兩步反應的反應條件與反應方案1中描述的相同。
製備本發明化合物的又一種方法包括，將苯基氨基苯氧肟酸與酯形成基團反應，如反應方案3所示。
反應方案3
其中L是離去基團如滷素，鹼是三乙胺或二異丙基胺。
通過以下實施例進一步說明本發明式I化合物的合成。
實施例14-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺(a)4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酸的製備-78℃下、向攪拌中的3.16g(0.0133mol)2-氨基-5-碘甲苯的5mL四氫呋喃溶液中加入10mL(0.020mol)2.0M二異丙氨基鋰的四氫呋喃/庚烷/乙基苯(Aldrich)溶液。將形成的綠色懸浮液劇烈攪拌15分鐘，然後加入1.00g(0.00632mol)2，4-二氟苯甲酸的10mL四氫呋喃溶液。將反應液的溫度緩慢升溫至室溫，將混合物在該溫度下攪拌2天。減壓蒸除溶劑將反應混合物濃縮。向濃縮物中加入鹽酸(10％)，將溶液用二氯甲烷萃取。將有機相干燥(硫酸鎂)，然後在蒸汽浴上濃縮至小體積(10mL)並冷卻至室溫。通過真空過濾收集所形成的米黃色纖維，用己烷衝洗，然後在真空烤箱(76℃；約10mm Hg)中乾燥得到1.10g(47％)所需物質；mp 224-229.5℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.72(s，1H)，7.97(dd，1H，J＝7.0，8.7Hz)，7.70(d，1H，J＝1.5Hz)，7.57(dd，1H，J＝8.4，1.9Hz)，7.17(d，1H，J＝8.2Hz)，6.61-6.53(m，2H)，2.18(s，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ169.87，166.36(d，JC-F＝249.4Hz)，150.11(d，JC-F＝11.4Hz)，139.83，138.49，136.07，135.26(d，JC-F＝11.5Hz)，135.07，125.60，109.32，104.98(d，JC-F＝21.1Hz)，99.54(d，JC-F＝26.0Hz)，89.43，17.52；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-104.00 to-104.07(m)；IR(KBr)1670(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝372.元素分析，計算值C14H11FINO2C，45.31；H，2.99；N，3.77。實測值C，45.21；R，2.77；N，3.64。(b)4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺的製備向攪拌中的4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酸(0.6495g，0.001750mol)、O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.2590g，0.002211mol)和二異丙基乙基胺(0.40mL，0.0023mol)的在31mL等體積四氫呋喃-二氯甲烷中的溶液中直接加入1.18g(0.00227mol)固體PyBOP([苯並三唑基氧基]三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽，Advanced ChemTech)。將反應混合物攪拌30分鐘，然後真空濃縮。將棕色的油用10％鹽酸處理。將懸浮液用乙醚萃取。將有機萃取液用10％氫氧化鈉洗滌，然後用10％鹽酸洗滌，乾燥(硫酸鎂)並濃縮得到淺棕色泡沫。將該中間體溶於25mL氯化氫的乙醇溶液，將溶液室溫放置15分鐘。將反應混合物真空濃縮得到棕色油，將其通過快速矽膠層析純化。用二氯甲烷→二氯甲烷-甲醇(166∶1)洗脫得到0.2284g淺棕色粘稠的油。用戊烷-己烷刮擦並高真空乾燥得到0.1541g(23％)米黃色泡沫；mp61-75℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.34(s，1H)，9.68(s，1H)，9.18(s，1H)，7.65(d，1H，J＝1.5Hz)，7.58(dd，1H，J＝8.7，6.8Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.4，1.9Hz)，7.15(d，1H，J＝8.4Hz)，6.74(dd，1H，J＝11.8，2.4Hz)，6.62(ddd，1H，J＝8.4，8.4，2.7Hz)，2.18(s，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ165.91，164.36(d，JC-F＝247.1Hz)，146.78，139.18，138.77，135.43，132.64，130.60(d，JC-F＝11.5Hz)，122.23，112.52，104.72(d，J＝22.1Hz)，100.45(d，JC-F＝25.2Hz)，86.77，17.03；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-107.20 to -107.27(m)；IR(KBr)3307(寬，O-H拉伸)，1636(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝387.元素分析，計算值C14H12FIN2O2C，43.54；H，3.13；N，7.25。實測值C，43.62；H，3.24；N，6.98。
實施例25-溴-3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺(a)5-溴-1，3，4-三氟苯甲酸的製備向冷卻至-78℃的、攪拌中的1-溴-2，3，4-三氟苯(Aldrich，99％；5.30g，0.0249mol)的95mL無水四氫呋喃溶液中緩慢加入12.5mL 2.0M二異丙基氨基鋰的庚烷/四氫呋喃/乙基苯溶液(Aldrich)。將該混合物攪拌1小時，然後通過套管轉移到700mL冷卻至-78℃的、攪拌中的飽和二氧化碳乙醚溶液中。移走冷卻浴，將反應混合物室溫攪拌18小時。向反應混合物中倒入稀鹽酸(10％，約500mL)，然後將該混合物在旋轉蒸發儀上濃縮得到固體粗品。將固體產物在乙醚(150mL)和鹽酸(330mL，pH0)之間分配。將水相用第二部分(100mL)乙醚萃取，然後將合併的乙醚萃取液用5％氫氧化鈉水溶液(200mL)和水(100mL，pH12)洗滌。將合併的鹼性水萃取液用濃鹽酸酸化至pH0。將形成的懸浮液用乙醚(2×200mL)萃取。將合併的有機萃取液乾燥(硫酸鎂)、真空濃縮，然後抽高真空直至質量恆定，得到5.60g(88％收率)米黃色粉末；mp139-142.5℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ13.97(寬s，1H，8.00-7.96(m，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ162.96，129.34，118.47，104.54(d，JC-F＝22.9Hz)；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-120.20至-120.31(m)，-131.75 to -131.86(m)，-154.95至-155.07(m)；IR(KBr)1696(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝255.元素分析計算值，C74H21BrF3O2C，32.97；H，0.79；N，0.00；Br，31.34；F，22.35。實測值C，33.18；H，0.64；N，0.01；Br，30.14；F，22.75。(b)5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酸的製備-78℃下，向攪拌中的1.88g(0.00791mol)2-氨基-5-碘甲苯的10mL四氫呋喃溶液中加入6mL(0.012mol)2.0M二異丙基氨基鋰的四氫呋喃/庚烷/乙基苯(Aldrich)溶液。將形成的綠色懸浮液劇烈攪拌10分鐘，然後加入1.00g(0.00392mol)5-溴-2，3，4-三氟苯甲酸的15mL四氫呋喃溶液。然後移走冷卻浴，將反應混合物攪拌18小時。將混合物濃縮，將濃縮液用100mL稀(10％)鹽酸處理。將形成的懸浮液用乙醚(2×150mL)萃取，將合併的有機萃取液乾燥(硫酸鎂)並真空濃縮得到橙色固體。將固體用沸騰的二氯甲烷研製，冷卻至室溫，然後過濾收集。將固體用二氯甲烷衝洗，在真空烤箱(80℃)中乾燥得到1.39g(76％)黃綠色粉末；mp259.5-262℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.03(s，1H)，7.99(dd，1H，J＝7.5，1.9Hz)，7.57(dd，1H，J＝1.5Hz)，7.42(dd，1H，J＝8.4，1.9Hz)，6.70(dd，1H，J＝8.4，6.0Hz)，2.24(s，3H)；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-123.40至-123.47(m)；-139.00至-139.14(m)；IR(KBr)1667(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝469.元素分析計算值C14H9BrF2INO2C，35.93；H，1.94；N，2.99；Br，17.07；F，8.12；I，27.11。實測值C，36.15；H，1.91；N，2.70；Br，16.40；F，8.46；1，26.05。(c)5-溴-3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺的製備向攪拌中的5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酸(0.51g，0.0011mol)、O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥胺(0.15g，0.0013mol)和二異丙基乙基胺(0.25mL，0.0014mol)在20mL等體積四氫呋喃-二氯甲烷中的溶液中直接加入0.6794g(0.001306mol)固體pyBOP(Advanced ChemTech)。將反應混合物於24℃攪拌10分鐘，然後真空濃縮至幹。將濃縮物懸浮在100mL 10％鹽酸中。將懸浮液用125mL乙醚萃取。分出醚層，用75ml 10％氫氧化鈉水溶液洗滌，然後用100mL稀酸洗滌。將醚溶液乾燥(硫酸鎂)並真空濃縮得到0.62g(100％)米黃色泡沫。將泡沫溶於約15mL氯化氫的甲醇溶液。5分鐘後，將溶液真空濃縮得到油，將該油通過快速矽膠層析純化。用二氯甲烷→二氯甲烷-甲醇(99∶1)洗脫得到0.2233g(42％)黃色粉末。將粉末溶於乙醚並用稀鹽酸洗滌。將有機相干燥(硫酸鎂)並真空濃縮得到0.200g泡沫。將該產物用戊烷研製得到0.1525g粉末並將該粉末通過快速矽膠層析再純化。用二氯甲烷洗脫得到0.0783g(15％)分析純的標題化合物，mp80-90℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.53(s，1H)，9.38(s，1H)，8.82(s，1H)，7.70(dd，1H，J＝7.0，1.9Hz)，7.53(s，1H)，7.37(dd，1H，J＝8.4，1.9Hz)，6.55(dd，1H，J＝8.2，6.5Hz)，2.22(s，3H)；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-126.24至-126.29(m)，-137.71至-137.77(m)；IR(KBr)3346(寬，O-H拉伸)，1651(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝484.元素分析計算值C14H10BrF2IN2O2C，34.81；H，2.09；N，5.80。實測值C，34，53；H，1.73；N，5.52。
下表中的實施例3-12和78-102按照實施例1和2的一般方法製備。
實施例13-77實施例13-77用組合合成方法通過將適宜取代的苯基氨基苯甲酸(例如反應方案1所示)與羥胺(例如HN(-R6)-O-R7)反應製備。以下給出一般方法向金屬模塊中的0.8mL自動進樣器小瓶中加入40μL 0.5M酸的DMF溶液和40μL羥胺(在DMF中的2M Hunig′s鹼和1M胺溶液)。向自動進樣器的小瓶中加入50μL 0.5M新製備的PyBrop溶液。將反應液放置24小時。
將反應混合物轉移至2打蘭的小瓶中並用2mL乙酸乙酯稀釋。將有機層用3mL蒸餾水洗滌並將水層再次用2mL乙酸乙酯洗滌。將合併的有機層在開放的通風櫥內蒸發至幹。
將殘餘物加入2mL 50％乙腈的水溶液中並注射在半製備性反向柱上(10mm×25cm，5μM球形二氧化矽，孔徑115A，用C-18衍生化，將樣品以4.7mL/分鐘洗脫，洗脫劑在8.5分鐘內線性變化至100％乙腈。繼續用100％乙腈洗脫8分鐘)。通過在214nM下監測收集流份。將所需流份用Zymark Turbovap蒸發。將產物溶於氯仿並轉移至預先稱重的小瓶內，蒸發，再次稱重以確定收率。通過質譜證實結構。
實施例3-102實施 化合物 熔點 MS例號(℃)(M-H+)3 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-4-氟-N-羥基-56-57523苯甲醯胺 分解4 5-氯-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯 65甲醯胺 分解5 5-氯-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-62-67N-甲基-苯甲醯胺6 5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氫105-108吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺實施 化合物 熔點MS例號 (℃) (M-H+)7 5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲氧基 64-68苯甲醯胺8 4-氟-N-羥基-2-(4-氟-2-甲基-苯基氨基)-119-135苯甲醯胺9 4-氟-N-羥基-2-(2-甲基苯基氨基)-苯甲醯101-103胺10 4-氟-2-(4-氟-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氫142-146吡喃-2-基氧基)苯甲醯胺11 4-氟-N-羥基-2-(4-氟-2-甲基苯基氨基)-苯 133.5-135甲醯胺12 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲 107-109.5氧基-苯甲醯胺13 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲氧基 399-苯甲醯胺14 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲 417氧基-苯甲醯胺15 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-甲 369氧基-苯甲醯胺16 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-乙氧基-3，4- 342*二氟-苯甲醯胺(M-EtO)17 5-溴-N-乙氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基- 509苯基氨基)-苯甲醯胺18 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-異 445丙氧基-苯甲醯胺19 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-異 397丙氧基-苯甲醯胺實施 化合物 熔點 MS例號 (℃)(M-H+)20 4-氟-N-(呋喃-3-基甲氧基)-2-(4-碘-2-甲 465基-苯基氨基)-苯甲醯胺21 3，4-二氟-N-(呋喃-3-基甲氧基)-2-(4-碘-2- 483甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺22 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(呋 435喃-3-基甲氧基)-苯甲醯胺23 5-溴-3，4-二氟-N-(呋喃-3-基甲氧基)-2-(4- 561碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺24 5-溴-N-(丁-2-烯氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2- 536甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺25 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2- 423炔氧基)-苯甲醯胺26 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙 441-2-炔氧基)-苯甲醯胺27 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(1- 455甲基-丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺28 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(1- 407甲基-丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺29 N-(丁-3-炔氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 455-苯基氨基)-苯甲醯胺30 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-3-炔氧 407基)-3，4-二氟-苯甲醯胺31 5-溴-N-(丁-3-炔氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2- 533甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺32 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3- 517苯基-丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺實施化合物 熔點 MS例號 (℃)(M-H+)33 3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-469苯基-丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺34 3，4-二氟-N-[3-(3-氟-苯基)-丙-2-炔氧基]-5352-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺35 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N- 487[3-(3-氟-苯基)-丙-2-炔氧基]-苯甲醯胺36 3，4-二氟-N-[3-(2-氟-苯基)-丙-2-炔氧基]-5352-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺37 5-溴-3，4-二氟-N-[3-(2-氟-苯基)-丙-2-炔 613氧基]-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺39 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(3-510甲基-5-苯基-戊-2-烯-4-炔氧基)-苯甲醯胺40 N-乙氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨 431基)-苯甲醯胺41 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-乙氧基-3，4- 383二氟-苯甲醯胺42 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-丙氧基 427-苯甲醯胺43 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-丙 445氧基-苯甲醯胺44 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-丙 397氧基-苯甲醯胺45 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-523N-丙氧基-苯甲醯胺實施化合物 熔點MS例號 (℃)(M-H+)46 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-異丙氧 427基-苯甲醯胺47 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-異 445丙氧基-苯甲醯胺48 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-異 397丙氧基-苯甲醯胺49 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)- 523N-異丙氧基-苯甲醯胺50 N-環丁氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯 457基氨基)-苯甲醯胺51 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-環丁氧基-4093，4-二氟-苯甲醯胺52 N-環戊氧基-4-氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨453基)-苯甲醯胺53 N-環戊氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯 471基氨基)-苯甲醯胺54 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-環戊氧基-4233，4-二氟-苯甲醯胺55 N-環丙基甲氧基-4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯 439基氨基)-苯甲醯胺56 N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 457-苯基氨基)-苯甲醯胺57 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-環丙基甲氧 409基-3，4-二氟-苯甲醯胺58 5-溴-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘- 4352-甲基-苯基氨基)實施 化合物 熔點 MS例號 (℃)(M-H+)59 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-苯 505氧基-乙氧基)-苯甲醯胺60 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2- 523苯氧基-乙氧基)-苯甲醯胺61 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(2- 475苯氧基-乙氧基)-苯甲醯胺62 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(噻吩- 4812-基甲氧基)-苯甲醯胺63 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(噻 499吩-2-基甲氧基)-苯甲醯胺64 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(噻 451吩-2-基甲氧基)苯甲醯胺65 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-甲 439基-烯丙氧基)-苯甲醯胺66 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2- 457甲基-烯丙氧基)-苯甲醯胺67 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(2- 410甲基-烯丙氧基)-苯甲醯胺68 N-(丁-2-烯氧基)-4-氟-2-(4-碘-2-甲基苯 439基氨基)-苯甲醯胺69 N-(丁-2-烯氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 457-苯基氨基)-苯甲醯胺70 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧 410基)-3，4-二氟-苯甲醯胺71 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙 441-2-炔氧基)-苯甲醯胺實施 化合物熔點 MS例號(℃)(M-H+)72 N-(丁-3-炔氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 455-苯基氨基)-苯甲醯胺73 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(4，4-二甲基 449-戊-2-炔氧基)-3，4-二氟-苯甲醯胺74 N-(丁-2-烯氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 457-苯基氨基)-苯甲醯胺75 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧410基)-3，4-二氟-苯甲醯胺76 N-(3-叔丁基-丙炔-2-基)氧基-4-氟-2-(4-479碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺77 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲 577*氧基-苯甲醯胺*CI78 4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-N- 油異丙基-苯甲醯胺79 N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲125-127基-苯基氨基)-苯甲醯胺80 4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-N- 44-55甲基-苯甲醯胺81 4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-5- 208-209硝基-苯甲醯胺(玻璃)82 2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-硝基- 199-200苯甲醯胺83 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四163-165氫-吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺84 3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨 65-75基)-苯甲醯胺實施 化合物 熔點MS例號 (℃)(M-H+)85 3，4-二氟-5-溴-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-95N-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苯甲醯胺86 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)- 167-169N-(四氫-吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺87 2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羥基-苯 165-169甲醯胺(HCl鹽)88 2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-(四氫-吡 166-167.5喃-2-基氧基)-苯甲醯胺89 3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丁173-174基甲氧基-苯甲醯胺90 3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(四氫 121-122-吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺91 5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(2-二甲 206-211.5基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-苯甲醯胺一鹽 分解酸鹽92 5-溴-N-(2-二甲基氨基-丙氧基)-3，4-二氟-95-1052-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)苯甲醯胺93 5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N- 266-280羥基-苯甲醯胺 分解94 5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N- 167.5-169.5(四氫-吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺95 3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙172.5-173.5基甲氧基-苯甲醯胺96 5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲 171-172.5氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺97 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-173.5-175N-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯甲醯胺實施 化合物 熔點 MS例號 (℃)(M-H+)98 5-溴-N-(2-二乙基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-81(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺分解99 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-126-128N-異丁氧基-苯甲醯胺100 5-溴-N-環己基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘- 139-1422-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺101 5-溴-N-環戊基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘- 113-1152-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺102 5-溴-N-環丁基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘- 138-1392-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺由於本發明的化合物對雙重特異性蛋白激酶MEK1和MEK2的選擇性抑制作用，該化合物可用於治療癌症和其它增殖性疾病。在大量通常用於確立蛋白質和激酶的抑制作用和測定對所述抑制的致分裂和變形應答的生物學試驗中評估了本發明化合物。酶試驗對MAP激酶途徑抑制劑的級聯試驗在含有p44MAP激酶的穀胱甘肽S-轉移酶融合蛋白(GST-MAPK)和含有p45MEK的穀胱甘肽S-轉移酶融合蛋白(GST-MEK)的存在下分析在髓磷脂鹼性蛋白(MBP)中32P的摻入。分析溶液含有20mMHEPES，pH7.4，10mM MgCl2，1mM MnCl2，1mM EGTA，50μM[γ-32P]ATP，10μg GST-MEK，0.5μg GST-MAPK和40μg MBP，最終體積為100μL。20分鐘後，加入三氯乙酸停止反應並用GF/C過濾墊過濾。用1205 Betaplate測定保留在濾紙上的32P。以10μM的濃度測定化合物抑制32P摻入的能力。
為了確定化合物是否可以抑制GST-MEK或GST MAPK，採用兩種方案。在第一種方案中，將化合物加入到含有GST-MEK的試管中，隨後加入GST-MAPK、MBP和[γ-32P]ATP。在第二方案中，將化合物加入同時含有GST-MEK和GST-MAPK的試管中，隨後加入MBP和[γ-32P]ATP。在兩種方案中均表現出活性的化合物被歸為MAPK抑制劑，而僅在第一種方案中顯示活性的化合物被歸為MEK抑制劑。體外MAP激酶試驗還在直接的試驗中證實了抑制活性。對於MAP激酶，將1μgGST-MAPK和40μg MBP一起在30℃下保溫15分鐘，最終體積為50μL，其中含有50mM Tris(pH7.5)、10μM MgCl2、2μM EGTA和10μM[γ-32P]ATP。加入Laemmli SDS樣品緩衝液停止反應並通過在10％聚丙烯醯胺凝膠上電泳分離出磷酸化的MBP。通過放射自顯影法，切下條帶並進行閃爍計數測定出摻入MBP中的放射性。體外MEK試驗為了評估直接MEK活性，將10μg GST-MEK1和5μg含有在71位有賴氨酸向丙氨酸突變的p44MAP激酶的穀胱甘肽S-轉移酶融合蛋白(GST-MAPK-KA)一起保溫。該突變消除了MAPK的激酶活性，因此僅保留了加入的MEK所具有的活性。以50μL的最終體積在30℃保溫15分鐘，其中含有50mM Tris(pH7.5)、10μM MgCl2、2μM EGTA和10μM[γ-32P]ATP。加入Laemmli SDS樣品緩衝液停止反應並通過在10％聚丙烯醯胺凝膠上電泳分離出磷酸化的GST-MAPK-KA。通過放射自顯影法，切下條帶並進行閃爍計數測定摻入GST-MAPK-KA中的放射性。此外，還使用了含有在218和222位從絲氨酸向穀氨酸的突變的人工激活的MEK(GST-MEK-2E)。當這些位點被磷酸化後，MEK的活性增加。這些位點的磷酸化可以通過絲氨酸殘基向穀氨酸的突變來模仿。對於該試驗，將5μg GST-MEK-2E與5μg GST-MAPK-KA一起在與上述相同的反應緩衝液中於30℃保溫15分鐘。如上所述終止反應並進行分析。完整細胞的MAP激酶試驗為了測定化合物是否可以在完整的細胞內阻斷MAP激酶的激活，採用如下方案將細胞置於多孔板內並生長至匯合。然後將細胞無血清培養過夜。將細胞與所需濃度的化合物或載體(DMSO)接觸30分鐘，然後加入生長因子，例如PDGF(100ng/mL)。用生長因子處理5分鐘後，將細胞用PBS洗滌，然後在由70mM NaCl、10mMHEPES(pH7.4)、50mM磷酸甘油酯和1％Triton X-100組成的緩衝液中溶解。以13,000xg離心10分鐘使溶胞產物澄清。將5μg得到的上清液和10μg與蛋白-2結合的微管(Map2)一起於30℃保溫15分鐘，最終體積為25μL，其中含有50mM Tris(pH7.4)、10mM MgCl2、2mM EGTA和30μM[γ-32P]ATP。加入Laemmli樣品緩衝液終止反應。在7.5％丙烯醯胺凝膠上分離磷酸化的Map2，通過放射自顯影法，隨後切下條帶並進行閃爍計數測定摻入的放射性。免疫沉澱和抗磷酸酪氨酸免疫印跡為了測定細胞MAP激酶的酪氨酸磷酸化的狀態，將內源性MAP激酶用特異性抗體進行免疫沉澱，然後按照如下方法分析所形成的免疫沉澱中存在的磷酸酪氨酸將融合的細胞無血清培養過夜，然後按照以上描述用化合物和生長因子處理。然後將細胞破碎並以13,000xg離心2分鐘。將形成的細胞沉積物重新懸浮並溶解在100μL含有1mM NaVO4的1％SDS中。交替進行煮沸和渦流振蕩使細胞蛋白變性，然後加入900μL RIPA緩衝液(50mM Tris(pH7.4)、150mM NaCl、1％Triton X-100、0.1％脫氧膽酸鹽和10mMEDTA)。向該混合物中加入60μL與兔免疫球蛋白G偶聯的瓊脂糖小珠和60μL Pansorbin細胞以澄清非特異性結合蛋白的細胞溶解產物。將該混合物於4℃保溫15分鐘，然後以13,000xg離心10分鐘。將形成的上清液轉移到新的試管中並與10μL針對MAP激酶片段產生的多克隆抗血清一起於4℃保溫至少1小時。加入70μL與蛋白G和蛋白A偶聯的瓊脂糖小珠的漿液並於4℃繼續保溫30分鐘。以13,000xg離心5分鐘使小珠沉積並用1mL RIPA緩衝液洗滌3次。向最終的小珠沉積物中加入Laemmli樣品緩衝液。將混合物煮沸5分鐘，然後在10％丙烯醯胺凝膠上分離。將凝膠上的蛋白質轉移到硝酸纖維素膜上，膜上的非特異性結合位點已經通過與1％卵白蛋白和1％牛血清白蛋白一起在TBST(150mM NaCl、10mM Tris(pH7.4)和0.05％Tween20)中保溫被封阻。然後將膜與市售的針對磷酸酪氨酸的抗體一起保溫。通過與125I-蛋白A一起保溫並隨後進行放射自顯影法檢測結合在膜上的抗體。細胞生長試驗3H-胸苷摻入將細胞置於多孔板內並生長至接近匯合。然後除去培養液並用含有1％牛血清白蛋白的生長培養液代替。無血清培養24小時後，加入化合物和特異性生長因子並繼續保溫24小時。在最後的2小時內，向培養液中加入3H-胸苷。為了終止培養，除去培養液並將細胞層用冰冷的磷酸緩衝鹽水洗滌2次。最後一次洗滌後，加入冰冷的5％三氯乙酸並將細胞室溫保溫15分鐘。然後除去三氯乙酸溶液並將細胞層用蒸餾水洗滌3次。最後一次洗滌後，加入2％十二烷基硫酸鈉使細胞層溶解。通過閃爍計數測定該溶液的放射性。
在3T3-L1脂肪細胞中，其中抑制作用可以阻斷胰島素對MAPK的激活(IC50為3μM)，而該化合物在10μM的濃度下對胰島素刺激的放射標記的2-去氧葡糖的攝取或胰島素刺激的類脂或糖原的合成均沒有影響。這表明了該抑制劑對於胰島素的致分裂作用和代謝作用之間具有選擇性，並且表明了該抑制劑的毒性將低於不具有這種選擇性的其它抑制劑。單層生長將細胞以10至20,000細胞/mL置於多孔板內。接種48小時後，向細胞生長培養液中加入化合物並繼續保溫2天。然後通過與胰蛋白酶一起保溫從孔中取出細胞並用Coulter計數器計數。在軟瓊脂中生長將細胞用含有0.3％瓊脂的生長培養基以5至10,000細胞/盤接種在35mm的盤上。冷卻使瓊脂固化後，將細胞轉移至37℃保溫箱中。7-10天的生長後，藉助解剖顯微鏡人工計數可見菌落。
加入順序實驗證實了本發明的化合物可以抑制MEK而不抑制MAP激酶。研究MAP激酶的激酶缺陷突變體作為底物(從而沒有會使解釋複雜化的MAP激酶的自身磷酸化作用)的磷酸化作用的實驗表明，該抑制劑抑制MEK的IC50與級聯試驗中測得的基本相同。
動力學分析表明，本發明的化合物不與ATP競爭。因此，它們不會結合在酶的ATP結合位點上，這也許可以解釋為什麼這些化合物沒有對於大部分激酶抑制劑所常見的非特異性激酶抑制活性，後者的確可與ATP結合位點結合併且是ATP競爭性的。
表1列出了在以上試驗中多種代表性式I化合物的體外和體內生物學活性。還列出了多種已知化合物的數據。
表1下列實施例 體外 體內IC50(μM) (細胞培養)的化合物IC50(μM)10.0070.0520.0030.0330.072340.023150.566 ～3060.345 ～3070.221 ＜3087.13 390.4091110.3340.5120.826130.243140.061＞2170.014200.0420.17210.014220.137230.016240.0210.12250.102270.026280.728290.0760.73300.971310.045320.017330.374340.1131.5
表1(續)下列實施例體外體內IC50(μM) (細胞培養)的化合物IC50(μM)36 0.0560.0737 0.00238 0.0770.06539 0.14740 0.0280.12541 0.23642 0.08743 0.0400.10044 0.47545 0.12647 0.0870.1349 0.08550 0.0430.2253 0.14055 0.04756 0.01457 0.18158 0.0180.01459 0.25962 0.08663 0.01964 0.27965 0.05766 0.0160.1368 0.11969 0.01670 0.22471 0.0150.3974 0.035
表1(續)下列實施例 體外體內IC50(μM) (細胞培養)的化合物IC50(μM)77 0.2878 0.08079 0.00880 0.08081 0.01782 0.003 0.0483 0.03184 0.001 0.00585 0.02486 0.04787 ＜0.00188 0.06989 0.005 0.3090 0.05591 0.02092 0.03393 0.010 0.0594 0.03895 0.00196 ＜0.01097 0.01598 0.02599 0.018 0.501000.026 ＞11010.008 ＞11020.004 0.20在前述試驗中還評估了以下公開於美國專利5,155,110中的化合物，這些化合物均表現出抑制活性很弱或沒有抑制活性。
R6R7體外抑制％H H9，1μM-3，10μMH CH3-8，1μM8，10μMCH3H-5，1μM19，10μMiPrH17，1μM9，10μMCH2-PhH-4，1μM18，10μM
R6R7體外抑制％H H6，1μM-4，10μMH CH3-6，1μM12，10μMCH3H13，1μM19，10μMiPrH-11，1μM7，10μM
實施例103將實施例95的化合物，2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲醯胺在植入了鼠結腸腫瘤C26/克隆10的動物中進行評估。在第0天，在雄性CD2F1小鼠(NCICharles River，Kingston)的右腋窩區域皮下植入腫瘤碎片(約30mg)。在植入後的第1-14天，將實施例95的化合物腹膜內(IP)或口服(PO)給藥，共給藥14天(每組6隻小鼠)。用於測試化合物和對照動物的載體是10％乙醇/10％Cremophor-EL(Sigma)/80％H2O，pH5.0。每周3次，通過測量各腫瘤的長度和寬度、記錄腫瘤的體積並根據公式(a×b2)/2計算出質量(mg)，其中a和b是腫瘤的長度和寬度。在特定的測量天數，在治療腫瘤的平均腫瘤體積比對照動物的平均腫瘤體積之比的基礎上計算治療/對照(T/C)百分比。
在實施例95的化合物腹膜內給藥的試驗中，劑量為200、124、77和48mg/kg/天。在第15天進行評估時，本發明的化合物抑制腫瘤生長達59％至100％。在第15天，對照腫瘤的平均大小為1594mg。表2給出了各治療組中動物的死亡數、體重的變化、治療組平均腫瘤體積與對照組相比的百分比以及抑制百分比。
表2劑量 非特異性死亡 體重變化％T/C％(克) (第15天) 抑制2001/6 +2 0 1001241/6 +3 4 96772/5 +2 2 98480/6 +3 41 59在實施例95的化合物口服給藥的試驗中，劑量為300、186、115和71mg/kg/天。在第17天進行評估時，本發明的化合物抑制腫瘤生長達64％至83％。在第17天，對照腫瘤的平均大小為1664mg。表3給出了各治療組中動物的死亡數、體重的變化、治療組平均腫瘤體積與對照組相比的百分比以及抑制百分比。
表3劑量 非特異性死亡 體重變化％T/C ％(克) (第17天) 抑制3000/6 +217 831860/6 +225 751151/6 +221 79710/6 +236 64以上試驗表明，式I的本發明化合物特別適用於治療癌症如結腸癌。這些化合物特別適用於與放射療法聯合來治療和控制癌症。
本發明的化合物可用於對患有癌症和其它增殖性疾病並需要治療的患者進行治療。該化合物可用於治療牛皮癬、再狹窄、自身免疫疾病和動脈粥樣硬化。該化合物通常以藥物製劑的形式使用，在所述藥物製劑中，式I化合物的含量為約5％至約95％(重量)。可將化合物配製成用於常規的口服、胃腸外、局部、直腸等給藥途徑的形式。可將化合物用藥物中常用的稀釋劑、賦形劑和載體配製，例如多元醇如甘油、乙二醇、山梨醇70；乙二醇的單-和二脂肪酸酯。澱粉和糖如玉米澱粉、蔗糖、乳糖等可用於固體製劑。所述固體製劑可以是片劑、錠劑、丸劑、膠囊等形式。還可摻入矯味劑如薄荷、冬青油等。
活性化合物的一般劑量為可在患病的哺乳動物中有效治療癌症或其它增殖性疾病的量。劑量通常為約0.1mg/kg體重至約500mg/kg體重。所述劑量可以每天1至約4次給藥，或者根據需要進行給藥，以有效地治療癌症、牛皮癬、再狹窄或其它增殖性疾病。
本發明化合物的優選給藥方法是通過片劑、膠囊、溶液劑或糖漿口服給藥。另一方法是胃腸外給藥，特別是通過靜脈內輸注苯並吡喃在等滲鹽水或5％葡萄糖水溶液中的溶液進行給藥。
以下是本發明的代表性製劑。
實施例10450mg片劑的製備每片 每10,000片0.050g 4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯500g胺0.080g 乳糖 800g0.010g 玉米澱粉(用於混合) 100g0.008g 玉米澱粉(用於成糊) 80g0.002g 硬脂酸鎂(1％) 20g0.150g 1500g將苯氧肟酸、乳糖和玉米澱粉(用於混合的)混合至均勻。將玉米澱粉(用於成糊的)懸浮在600mL水中並在攪拌下加熱形成糊。將該糊用於使混合的粉末成粒。將顆粒通過8號篩並於120°F下乾燥。將乾燥的顆粒通過16號篩。將混合物用1％硬脂酸鎂潤滑並壓製成片。該片劑用於對哺乳動物進行給藥以抑制MEK酶並治療再狹窄、動脈粥樣硬化和牛皮癬。
實施例105口服混懸液的製備成分 含量5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(甲氧基)-苯甲醯胺 500mg山梨醇溶液(70％NF)40mL苯甲酸鈉 150mg糖精 10mg紅染料10mg櫻桃香精 50mg蒸餾水適量至 100mL
將山梨醇溶液加入到40mL蒸餾水中並將苯氧肟酸衍生物懸浮在其中。加入糖精、苯甲酸鈉、矯味劑和染料並溶解。用蒸餾水將體積調至100mL。每毫升糖漿含有5mg本發明的化合物。可將該糖漿對哺乳動物給藥用於治療增殖性疾病，特別是乳腺癌和皮膚癌。
實施例106胃腸外溶液的製備在700mL丙二醇和200mL注射用水中加入20.0g 4-氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(羥基)-苯甲醯胺。加入注射用水將溶液的體積調至1000mL。將製劑加熱滅菌，裝到50mL安瓿內，每個安瓿內含2.0mL(40mg 4-氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(羥基)-苯甲醯胺)，然後在氮氣下密封。
可將由此配製的本發明化合物以對治療疾病有效的頻率和劑量對需要治療的哺乳動物進行給藥，以治療增殖性疾病如癌症、牛皮癬、再狹窄、動脈粥樣硬化和自身免疫疾病。本發明化合物的「抗增殖量」為化合物抑制或降低靶細胞增殖速率的量。可以根據本發明進行治療的典型的癌症包括乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、皮膚癌等。該化合物特別適用於治療牛皮癬、再狹窄和動脈粥樣硬化；抑制MEK酶、特別是MEK1和MEK2的活性。所需要的只是向哺乳動物施用MEK抑制量的本發明化合物。本發明化合物「MEK抑制量」是指當向哺乳動物給藥時可以引起可測量到的MEK酶抑制作用的量。典型的MEK抑制量為約0.1μg至約500mg活性化合物/kg體重。為了治療上述的增殖性疾病，典型的劑量為約0.1至約50mg/kg，通常每天1至約4次給藥。
權利要求
1.式I化合物
其中R1是氫、羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、滷素、三氟甲基或CN；R2是氫；R3、R4和R5彼此獨立地是氫、羥基、滷素、三氟甲基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、硝基、CN或(O或NH)m-(CH2)n-R9，其中R9是氫、羥基、CO2H或NR10R11；n是0-4；m是0或1；R10和R11彼此獨立地是氫或C1-C8烷基，或與它們所連接的氮合在一起形成3-10元的環，所述環選擇性地含有一個、兩個或三個選自O、S、NH或N-C1-C8烷基的其它雜原子；R6是氫、C1-C8烷基、C(＝O)-C1-C8烷基、芳基、芳烷基或C3-C10環烷基；R7是氫、C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8鏈炔基、C3-C10(環烷基或選擇性含有選自O、S或NR9的雜原子的環烷基)；其中，前述的烷基、鏈烯基和鏈炔基均可以是未取代的或被環烷基(或選擇性含有選自O、S或NR9的雜原子的環烷基)、芳基、芳氧基、雜芳基或雜芳氧基所取代；或者R6和R7與它們所連接的N-O合在一起形成5-10元的環，環中選擇性地含有一個、兩個或三個選自O、S或NR10R11的其它雜原子。
2.權利要求1的化合物，其中R1是C1-C8烷基或滷素。
3.權利要求2的化合物，其中R6是氫。
4.權利要求3的化合物，其中R1是是甲基。
5.權利要求4的化合物，具有下式的結構
6.權利要求5的化合物，其中R4是氟，R3和R5是氫。
7.權利要求6的化合物，所述化合物是4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(甲氧基)苯甲醯胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-苯氧基乙氧基)-苯甲醯胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-噻吩基甲氧基)-苯甲醯胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2-烯氧基)-苯甲醯胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(環丙基甲氧基)-苯甲醯胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(環戊氧基)-苯甲醯胺；4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-異丙基-苯甲醯胺；和4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲基-苯甲醯胺。
8.權利要求5的化合物，其中R3和R4是氟，R5是氫。
9.權利要求8的化合物，所述化合物選自3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-呋喃基甲氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-乙氧基苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(環丙基甲氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(1-甲基丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-苯基丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-甲基-5-苯基戊-2-烯-4-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(環丁氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-噻吩基甲氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-甲基-丙-2-烯氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-苯氧基乙氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-3-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(環戊氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-(2-氟苯基)-丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丁基甲氧基-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；和3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-苯甲醯胺。
10.權利要求5的化合物，其中R3和R4是氟，R5是溴。
11.權利要求10的化合物，所述化合物是5-溴-3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(正丙氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-N-(呋喃-3-基甲氧基)-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-N-(丁-2烯氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-N-丁氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-甲基-丁-2-烯氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-甲基-戊-2-烯-4-炔氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苄基)-N-[5-(3-甲氧基-苯基)-3-甲基-戊-2-烯-4-炔氧基]-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-[3-(3-甲氧基-苯基)-丙-2-炔氧基]-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(噻吩-2-基甲氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-(2-氟苯基)-丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(乙氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(環丙基甲氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(異丙氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-3-炔氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯甲醯胺；5-溴-N-(2-二乙基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-異丁氧基-苯甲醯胺；5-溴-N-環己基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-N-環戊基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-N-環丁基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(2-二甲基氨基乙氧基)-3，4-二氟-苯甲醯胺一鹽酸鹽；5-溴-N-(2-二甲基氨基-丙氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；和5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺。
12.權利要求5的化合物，其中R3和R4是氫，R5是滷素。
13.權利要求12的化合物，所述化合物是5-氯-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲氧基苯甲醯胺；4-溴-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲氧基苯甲醯胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲氧基苯甲醯胺；5-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-碘-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲氧基苯甲醯胺；和5-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺。
14.權利要求4的化合物，具有下式的結構
15.權利要求14的化合物，其中R3和R4是氟，R5是氫。
16.權利要求15的化合物，所述化合物是3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-苯基丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-呋喃基甲氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-噻吩基甲氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-3-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-甲基-丙-2-烯氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(甲氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(乙氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(環丁氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(異丙氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-苯氧基乙氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(環丙基-甲氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(正丙氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(1-甲基-丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-(3-氟苯基)-丙-2-炔氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(4，4-二甲基戊-2-炔氧基)-苯甲醯胺；和3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(環戊氧基)-苯甲醯胺。
17.權利要求1的化合物，所述化合物是3，4，5-三氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-氯-3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯甲醯胺；3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；5-氯-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-硝基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4，5-三氟-N-羥基-苯甲醯胺；4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-5-硝基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-硝基-苯甲醯胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-甲基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4，5-三氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-5-氯-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-硝基-苯甲醯胺；4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羥基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲醯胺；5-氯-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲醯胺；5-氯-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-4-硝基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲醯胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-乙氧基-3，4-二氟苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-乙氧基-4-硝基-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-5-氯-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-4-硝基-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-4-氟-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-4-氟-苯甲醯胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；N-環丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；4-氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-5-硝基-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羥基-4-硝基-苯甲醯胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；3，4-二氟-N-羥基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羥基-苯甲醯胺(鹽酸鹽)；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丁基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(2-二甲基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-苯甲醯胺一鹽酸鹽；5-溴-N-(2-二甲基氨基-丙氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羥基-苯甲醯胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(四氫吡喃-2-基氧基)-苯甲醯胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺；和5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-環丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲醯胺。
18.含有權利要求1的化合物與可藥用賦形劑、稀釋劑或載體的混合物的藥物製劑。
19.權利要求18的製劑，含有下式化合物
20.權利要求18的製劑，含有下式化合物
21.在哺乳動物中抑制MEK酶的方法，該方法包括施用MEK抑制量的權利要求1的化合物。
22.對患有增殖性疾病並且需要治療的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括施用抗增殖量的權利要求1的化合物。
23.權利要求21的方法，其中的增殖性疾病是牛皮癬、再狹窄、自身免疫疾病或動脈粥樣硬化。
24.權利要求21的方法，其中的增殖性疾病是癌症。
25.對患有中風並且需要治療的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括施用有效量的權利要求1的化合物。
26.對患有心力衰竭並且需要治療的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括施用有效量的權利要求1的化合物。
27.對患有肝腫大並且需要治療的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括施用有效量的權利要求1的化合物。
28.對患有心肥大並且需要治療的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括施用有效量的權利要求1的化合物。
29.對患有糖尿病並且需要治療的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括施用有效量的權利要求1的化合物。
30.對患有早老性痴呆並且需要治療的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括施用有效量的權利要求1的化合物。
31.對患有癌症的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括與常規的放射療法相結合施用有效量權利要求1的化合物。
32.對患有膽囊纖維化並且需要治療的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括施用有效量的權利要求1的化合物。
全文摘要
本發明公開了式(Ⅰ)的苯基氨基苯氧肟酸衍生物,其中R
文檔編號A61P9/10GK1261877SQ98806750
公開日2000年8月2日 申請日期1998年6月24日 優先權日1997年7月1日
發明者S·D·巴瑞特, A·J·布裡德吉斯, A·M·多赫提, D·T·杜德萊, A·R·薩爾提爾, H·泰克勒 申請人:沃尼爾·朗伯公司