丹參酮ⅱa靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應用的製作方法

2023-06-04 01:04:36

專利名稱：：丹參酮ⅱa靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及丹參酮IIA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應用，屬醫藥領域。
背景技術：
：乃參酮IIA(tanshinoneIIA)是中藥丹參(SalviamiltiorrhizaBunge)的主要有效成分，也是中國藥典2005年版一部收載的丹參藥材的指標成分。丹參酮IIA具有廣泛的藥理活性，如保護內皮細胞、抗心肌缺血、改善血液代謝、抗氧化、降低自由基水平、抗動脈粥樣硬化、預防心絞痛與心肌梗塞等，近年來研究發現丹參酮nA還具有保護神經細胞與抗腫瘤作用。丹參酮IIA為脂溶性成分，水中難溶，因此難以將其直接製備成可供臨床使用的注射液。20世紀70年代末錢名堃等人將其化學結構改造成水溶性的丹參酮nA磺酸鈉(圖1)，解決了其水中難溶的問題。此後上海製藥-廠將其研製成注射液，臨床上用於冠心病、心絞痛的輔助治療已近30年，與複方丹參注射液療效相似。在2002年丹參酮IIA磺酸鈉注射液i地標升為國家標準，2005年收入全國醫保目錄乙類(命名為丹參酮IIA注射劑，實應為丹參酮IIA磺酸鈉注射液)，至今仍在應用。顯而易見，丹參酮IIA磺酸鈉的臨床療效源自丹參酮IIA所具有的藥理活性。O丹參酮IIA:R=H丹參酮IIA磺酸鈉R=S03Na圖1丹參酮IIA與丹參酮I1A磺酸鈉的化學結構式然而丹參酮IIA磺酸鈉注射液的穩定性較差，熱壓滅菌後降解產物明顯增加，易導致不良反應的發生，嚴重影響了該藥品使用的安全性和有效性。另一方面，特別應值得注意的是丹參酮IIA磺酸鈉在化學結構上並非丹參酮IIA的鹽形式。發明人經研究發現，丹參酮IIA分子化學耦聯磺酸基團改造成丹參酮IIA磺酸鈉後，由於磺酸基團具有強吸電子性，不但嚴重影響了乃參酮IIA分子自身原有的抗氧化能力，從而顯著減弱了丹參酮IIA的藥理活性；而且丹參酮IIA磺酸鈉的極性較丹參酮IIA相比顯著增大，難以透過血腦屏障(BBB)，使其在腦部疾病的治療應用方面受到限制。由此可見，丹參酮IIA磺酸鈉並非丹參酮IIA最理想的給藥形式。發明人經研究發現，丹參酮IIA口服吸收差、首過效應嚴重、生物利用度極低(23%);結合其適用於腦缺血等急症治療的實際及其脂溶性特點，將其溶解於注射用油中，經磷脂乳化分散.製備成亞微乳注射液，不僅可解決其水中難溶與靜脈注射的可行性問題，而且可直接地利用丹參酮IIA的藥理活性充分發揮療效。據此，發明人優選了丹參酮IIA靜脈乳劑的處方與製備工藝，於本發明前申請了藥用組合物專利(申請號CN200610005271.1)。本發明是在上述發明的基礎上，通過動物體內分布及藥效學研究，發現與丹參酮IIA磺酸鈉注射液相比，丹參酮IIA靜脈乳劑極易透過血腦屏障，可在更低劑量下達到治療腦部疾病的效果。
發明內容本發明涉及丹參酮IIA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應用。所述的腦部疾病包括缺血性腦血管疾病、出血性腦血管疾病、腦腫瘤。發明人經研究發現在體內分布研究中，丹參酮IIA靜脈乳劑極易透過血腦屏障進入腦組織，具有腦趨向分布特性；在藥效學研究中，丹參酮IIA靜脈乳劑對缺rfll性腦損傷、出血性腦損傷均具有顯著的治療作用；在細胞培養實驗中，丹參酮IIA靜脈乳劑對腦腫瘤細胞株具有明顯的抑制和殺傷作用。丹參酮1IA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的藥效明顯優於同劑量(摩爾量)的丹參酮IIA磺酸鈉注射液。參照《中藥藥理實驗方法》(陳奇主編，人民衛生出版社出版)一書中第205頁所載"實驗動物與人用藥量的換算"及靜脈脂肪乳劑的常規用量，發明人根據動物i式驗結果推算出了丹參酮IIA靜脈乳劑的臨床人用劑量，並將其作為權利要求的一部分。以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進步的詳細說明。但不應將其理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實施例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。其中試驗例2和實施例14所述的丹參酮IIA靜脈乳劑均為試驗例1所製得。試驗例1丹參酮IIA靜脈乳劑的製備將12g注射用磷脂、3g帕洛沙姆188及22g注射用甘油溶解分散於700ml預熱至80°C的注射用水中，製備成均勻分散的水相；另取1000mg丹參酮IIA及300rng油酸加入200g預熱至8(TC的注射用油中，溶解完全後得油相；將油相緩慢加入高速攪拌(IOOOO轉/分鐘)的水相中，保持攪拌10分鐘，製備得橙黃色初乳；將初乳加注射用水至l(XX)ml，置高壓乳勻機內勻化3次(5O150MPa)，充氮灌裝，滅菌，即得丹參酮IIA靜脈乳劑。試驗例2丹參酮IIA靜脈乳劑與丹參酮IIA磺酸鈉注射液在動物體內的分布研究昆明種小鼠84隻(體重1822g，雌雄各半)，隨機分為2組丹參酮nA靜脈乳劑組、丹參酮nA磺酸鈉注射液組(經適當稀釋後給藥，上海第一生化藥業有限公司牛產，下同)。按組別尾靜脈注射給藥，分別於給藥後5、15、30、60、120、240、480分鐘每組各取6隻，取血、處死、取腦稱重，加等量生理鹽水勻漿，HPLC法測定血中及腦組織中藥物含量，結果見表1。表1丹參酮IIA靜脈乳劑與丹參酮IIA磺酸鈉注射液在小鼠體內的分布tableseeoriginaldocumentpage5—:未檢出與丹參酮IIA磺酸鈉組比較"<0.05"P<0.01結果表明在本實驗條件下，丹參酮IIA靜脈乳劑的生物利用度和腦靶向性明顯優於同劑量(摩爾量)的丹參酮IIA磺酸鈉注射液。實施例1丹參酮IIA靜脈乳劑對大鼠腦缺血/再灌注損傷的治療作用SD大鼠24隻(體重190230g，雌雄各半)，隨機分為4組(偽手術組、模型組、丹參酮IIA靜脈乳劑組、丹參酮IIA磺酸鈉注射液組)，參照Longa法製作右側大腦中動脈栓塞(MiddleCerebralArteryOcclusion,MCAO)模型。缺血2小時後，將尼龍線輕輕拔出並縫合皮下筋膜及皮膚，即為再灌注模型，再灌注時間為24小時。偽手術組除不插尼龍線阻塞血管外，其他操作與其他三組相同。缺血1小時後，按組別尾靜脈注射給藥一次，之後每隔12小時再給藥一次，共給藥3次。末次給藥30分鐘後觀察大鼠神經行為並參考文獻進行評分無異常0分；豎毛、輕度運動低下0.5分；前肢屈曲、運動障礙l分；運動不協調、旋轉運動2分；偏癱、不能站立和行走3分；痙攣、昏睡4分；死亡5分。再灌注24小時後斷頭取腦，將腦組織沿冠狀面切成厚度基本相同的5片，固定、染色，用Premier3.1MEGAPIXELSTS-3給每個組的腦片照相，再通過Imagepro-plus4.5軟體測量梗死面積，按下式計算梗死百分比，結果見表2。蒼白區面積梗死百分比(％)蒼白區面積+非蒼白區面積5:100%表2丹參酮IlA靜脈乳劑對大鼠腦缺血/再灌注的保護作用組別給藥量神經行為分值梗死百分比(％)偽手術組模型組丹參酮IIA靜脈乳劑組丹參酮IIA磺酸鈉組1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(1.0mg/kg)1.0ml/kg(1.4mg/kg)O.OO士O.OO2.67±0.370.38±0.342.43±0.805.88±1.9219.43±5.357.6U3.8918.65±5.56與偽手術組比較"P〈0.01與模型組比較*<0.01與丹參酮IIA磺酸鈉組比較"P〈0.01結果表明在本實驗中，丹參酮IlA靜脈乳劑對大鼠腦缺血/再灌注損傷具有明顯的治療作用，且明顯優於同劑量(摩爾量)的丹參酮IIA磺酸鈉注射液。實施例2丹參酮IIA靜脈乳劑對大鼠缺血性腦損傷的保護作用Wistar大鼠40隻(體重220280g，雌雄各半)，隨機分為四組(偽手術組、模型組、丹參酮IIA靜脈乳劑組、丹參酮IIA磺酸鈉注射液組)，按組別每天尾靜脈注射給藥一次，連續3天，第3次給藥30min後造模，大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，剝離雙側頸總動脈，置手術線，尾靜脈注射伊文思蘭50mg/kg，除偽手術組外其他大鼠均於5分鐘後結紮雙側頸總動脈，結紮3小時後斷頭取腦，稱重，浸泡於10毫升甲醯胺中，於45'C恆溫箱中溫育72小時，取溫育液，用分光光度計於620納米處測定吸收度，根據標準曲線計算腦內伊文思蘭含量，結果見表3。表3丹參酮IIA靜脈乳劑對腦缺血大鼠腦血管通透性的影響組別腦組織伊文思蘭含量(嗎/g)偽手術組模型組丹參酮IIA靜脈乳劑組丹參酮IIA磺酸鈉組1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(1.0mg/kg)1.0ml/kg(1.4mg/kg)3.47±1.015.67±0.86A3.66±0.97*.5.54±1.05與偽手術組比較^<0.05與模型組比較<100/體重)。然後在110。C烤箱中烤至恆重，稱幹腦重，按下式計算腦含水量，結果見表4。腦含水量(％)=溼腦重7=腦重x100%溼腦重表4丹參酮IIA靜脈乳劑對腦缺血大鼠腦指數及腦含水量的影響組別腦指數腦含水量(％)偽手術組模型組丹參酮IIA靜脈乳劑組丹參酮IIA磺酸鈉組1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(1.0mg/kg)1.0ml/kg(1.4mg/kg)0.6722±0.04990.7879±0.0777A0.6792±0.0471*'0.7775±0.060972.70±3.2478.34±1.95A73.71士2.8"77.92±2.87與偽手術組比較Ap〈0.05與模型組比較*<100%A對照組表6丹參酮IIA靜脈乳劑對U251細胞增殖的抑制作用抑制率(％)給藥量-24小時48小時72小時0.5mg/L8.3±1.622.4±4.237.5±8.22.0mg/L16.4±3.539.2±8.443.1±8.68.0mg/L30.3±6.45.9±10.065.9±13.4結果表明在本實驗中，丹參酮IIA靜脈乳劑能明顯抑制人膠質瘤細胞U251的增殖，並在一定範圍內呈現劑量依賴關係。權利要求1.丹參酮IIA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應用，其特徵在於所述的腦部疾病包括缺血性腦血管疾病、出血性腦血管疾病、腦腫瘤；所述的丹參酮IIA靜脈乳劑是以式1所示的丹參酮IIA為有效成分，包含注射用油、乳化劑、注射用水及其它藥學上可接受的輔料所製成的供靜脈直接注射或經其它注射液稀釋後經靜脈輸注的乳劑。式12.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於治療所述的缺血性腦血管疾病、出血性腦血管疾病的臨床用藥劑量為成人0.12毫克/公斤體重/天。3.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於治療所述的腦腫瘤的臨床用藥劑量為成人0.58毫克/公斤體重/天。全文摘要本發明涉及丹參酮IIA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應用。將丹參酮IIA靜脈乳劑直接靜脈注射或經其它注射液稀釋後經靜脈輸注至患者體內，能迅速透過血腦屏障，可用於治療缺血性腦血管疾病、出血性腦血管疾病、腦腫瘤。文檔編號A61K31/34GK101428013SQ200710050459公開日2009年5月13日申請日期2007年11月9日優先權日2007年11月9日發明者婷儲,宇吳,臻梁,毛聲俊,輝金申請人:四川思達康藥業有限公司